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    Dosage multi-rsidu de pesticides organochlors , pyrethrinoides

    organophosphors et PCB (Polychlorobiph2nyls) dans les aliments


    dorigine animale comme( le lait
    entier liquide , les ufs et les poissons ). Par LC-MS/MS et GC/MS

    Avertissement et prcautions de scurit :


    Les vapeurs de certains solvants volatils sont trs toxiques. Beaucoup de ces derniers
    pntrent
    par la peau. Utiliser un dispositif daspiration de fume efficace pour liminer les vapeurs
    ds leur
    dgagement.
    La prparation des solutions de travail contenant des pesticides ncessite la manipulation
    de
    substances actives pures ou trs concentres. Eviter tout contact avec la peau et le
    risque
    dinhalation de particules par le port de blouse, de gants, de lunettes et/ou dun masque .

    Objet et domaine dapplication :


    Cette procdure dcrit lanalyse quantitative des organochlors , organophosphors,
    pyrethrinoides et PCB (Polychlorobiph2nyls) dans les aliments dorigine animale
    comme( le lait entier liquide , les ufs , les poissons , et autres denrs alimentaires
    grasses ). Par LC-MS/MS et GC/MS . La mthode dcrite permet le dosage de pesticides

    organophosphors dans le lait entier cru ou


    pasteuris, lhuile de beurre et dans la graisse danimaux de boucherie, et de certains
    pesticides organochlors dont la polarit se rapproche de celle des pesticides
    organophosphors. Les pesticides pour lesquels la mthode a t teste sont :
    Tableau 1 : liste des pesticides entrant dans le champ dapplication de la mthode
    Pesticides organophosphors

    Phorate
    Chlorpyriphos ethyl
    Phorate oxon
    Chlorpyriphos methyl
    Phorate sulfone
    Diazinon
    Disulfoton
    Disulfoton sulfone
    Pirimiphos methyl
    Triazophos
    Methidathion

    Pesticides organochlors

    Chlorothalonil
    Beta endosulfan
    Endosulfan sulfate

    Pesticides organochlors

    Polychlorobiphnyls

    Pyrthrinodes

    HCB
    HCH
    HCH
    HCH
    Heptachlore
    Dicofol op
    Aldrine
    Heptachlore-epoxy
    Oxychlordane
    Chlordane
    DDE op
    Endosulfan (1)
    Chlordane
    DDE pp
    Dieldrine
    Endrine
    TDE op

    PCB congnres
    28
    52
    101
    118
    153
    138
    180

    Cyalothrine
    Permethrine
    Cyfluthrine
    Cypermethrine
    Fenvalerate
    Deltamethrine

    TDE PP
    DDT pp
    Dicofol

    Principe de la mthode :
    Cette mthode comprend des techniques dextraction de la matire grasse (extraction
    par centrifugation cryognique) ,dextraction des pesticides , des PCB et des
    pyrthrinoides ainsi que des techniques de purification pour le lait liquide . cest une
    chromatographie solide-liquide sur cartouche prte lemploi (SPE extraction par phase
    solide ) .deux types de phases sont utiliss successivement : C18 puis Florisil

    Ractifs et produits

    Solutions dtalonnage
    Solution standard de 24 pesticides de concetration 20 ppb
    un mlange de PCB 10 ppb
    un mlange de six pyrthrinoides (delthamthrine, prmthrine , cypermthrine
    ,fervalrate, cyfluthrine , cyhalothrine.
    Etalon interne
    Les solvants utiliss de qualit HPLC :
    Actone
    Dithyl ther
    Ether de ptrole
    n-hexane
    Actonitrile
    Mthanol

    Dichloromthane
    Dodcane comme rtenteur des rsidus lors des vaporation
    Les cartouches apolaires dextraction en phase solide( C18 de 1g)
    Les cartouches polaires dextraction en phase solide( Florisil de 1g)
    Laine de verre
    Sable marin
    Sulfate de sodium anhydre
    Filtres papier

    Appareillage :
    Matriel courant de laboratoire en particulier :
    Pour lextraction de la matire grasse et des rsidus :
    Centrifugeuse rfrigre pouvant tourner 3000 tours par minute.
    Evaporateur rotatif avec dispositif de mise sous vide (pompe eau) et
    condenseur rfrigr
    (ventuellement).
    Ampoules dcanter, ballons, et verrerie usuelle de laboratoire
    Platine ou bain dvaporation sous azote.
    Pour la purification SPE :
    Cuve hermtique dextraction sous vide pour cartouche, munie dune fuite
    dair. Pompe vide. Un automate peut tre utilis.
    Pour le dosage par Chromatographie en Phase Gazeuse :
    Chromatographe en phase gazeuse quip dun injecteur appropri (avec
    ventuellement un
    systme dinjection automatique), dun four et dun dtecteur capture
    dlectrons.
    Les caractristiques de pr-colonne et de colonne sont prsentes titre
    dexemple dans le
    tableau 2.
    Tableau 2 : Caractristiques de pr-colonne et de colonne de chromatographie
    Pr-colonne
    Colonne capillaire
    Longueur en m
    50
    Diamtre interne en mm
    0.32
    Composition pr-colonne
    Composition du film
    Dimthyle-polysiloxane
    (100 %)
    Epaisseur du film en m
    0.25
    polarit
    100 % apolaire
    Conditions chromatographiques utilises

    1.5
    0.32
    Silice fondue dsactive

    Dtecteur
    Gaz vecteur
    Dbit en PSI
    Gaz additionnel dtecteur
    Colonne Cf
    Volume dinjection en l
    T C dtecteur
    Programmation injecteur
    T C initiale
    Pente en C / min
    T C seuil
    Dure en min
    Programmation du four
    T C initiale
    Plateau en min
    Pente en C / min
    T C seuil
    Pente en C / min
    T C seuil

    ECD
    Hlium
    23
    Azote
    tableau 2
    1
    320
    50
    150
    250
    52

    100
    2
    7
    220, 10 min
    3
    285, 5 min

    Les chromatogrammes sont enregistrs et traits par un logiciel dacquisition et de traitement


    des donnes .

    Mode operatoire :
    1-Extraction de la matire grasse (Lait entier- extraction de la crme)
    Si lchantillon est congel, le dcongeler temprature ambiante pendant quelques heures.

    Prlever 30 ml de lait dans un tube centrifuger. Centrifuger deux fois 10 minutes


    3000tpm.
    Rcuprer la crme aprs chaque centrifugation, y ajouter 10 g de sulfate de sodium
    anhydre.
    Extraire la crme avec 30 ml de n-hexane en mlangeant laide dune spatule.
    Rcuprer la phase organique et la filtrer sur sulfate de sodium dans un ballon prpes.
    Extraire nouveau la matire grasse avec 3 fois 10 ml de n-hexane, les filtrer sur le
    sulfate de sodium puis rincer celuici avec 10 ml de n-hexane. Evaporer lextrait sous
    vide 35 C environ, jusqu 1 ml et terminer sous azote. Peser lextrait. Prlever 500
    mg de graisse pour ltape de centrifugation cryognique.

    2- Extraction cryognique
    Procder la centrifugation cryognique dcrite en 6.4.1.2. de la norme NF EN 1528.

    3- Purification
    . Le choix entre les diffrents typesde cartouches apolaires dpend de la quantit de l'extrait
    dpose :

    - une cartouche de silice greffe de type C18 de 1g a une capacit spcifique de 50 mg ;


    - une cartouche polymre de 0.5g a une capacit spcifique de 100 mg.
    Le protocole de purification est identique quel que soit le type de cartouche utilis.
    Conditionnement :
    dposer successivement sur la cartouche et luer sans asschement entre
    chaque solvant : 5 ml de mthanol, 5 ml dactone, 5 ml de mlange
    actonitrile/dichloromthane
    (AN/DCM) 95/5 et luer jusquau mnisque. Reprendre l'extrait obtenu aprs extraction
    cryognique dans 1 ml d'un mlange AN/DCM 95/5. Le dposer sur la cartouche, luer
    jusquau mnisque, laisser en contact de 3 5 min. Eluer par 10 ml de mthanol, sec 1
    goutte/3 secondes environ. Aspirer pour rcuprer le volume retenu par la cartouche.
    Evaporer lluat 35C environ sous un lger courant dazote en prsence de 100 l de
    dodcane puis reprendre dans 1 ou 2 ml dhexane.
    9.4- Analyse par chromatographie en phase gazeuse
    Injecter 1 2 l de lextrait obtenu prcdemment en chromatographie en phase gazeuse
    quipe
    dun dtecteur spcifique du phosphore, PFPD, FPD ou NPD, en prsence dun talon
    interne
    (par exemple le malathion).
    10- EXPRESSION DES RESULTATS
    FORMULE DE CALCUL :
    Rendement de purification :

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