D 1.

1 Replicación del ADN

Nivel Medio y Nivel Superior: 2 horas
Temas adicionales del Nivel Superior: 2 horas

La información genética en el ADN se puede copiar de forma precisa y

se puede traducir para sintetizar las proteínas necesarias para la
célula

Preguntas de orientación
• ¿Cómo se produce ADN nuevo?

• ¿Cómo ha permitido el conocimiento de la replicación del ADN las

aplicaciones en biotecnología?
D1.1.1 La replicación del ADN como producción de copias exactas de ADN con idénticas secuencias de
bases
El alumnado debe saber que la replicación del ADN se precisa para la reproducción, el crecimiento y la
renovación de tejidos en los organismos multicelulares.
D1.1.2 Naturaleza semiconservativa de la replicación del ADN y función del apareamiento de bases
complementarias
El alumnado debe comprender cómo estos procesos permiten un alto grado de precisión para copiar
secuencias de bases.
D1.1.3 Función de la helicasa y la ADN polimerasa en la replicación del ADN
Se debe limitar a la función de la helicasa para desenrollar y romper los enlaces de hidrógeno entre las
cadenas de ADN, y a la función general de la ADN polimerasa.
D1.1.4 Reacción en cadena de la polimerasa y electroforesis en gel como herramientas para amplificar y
separar el ADN
El alumnado debe comprender el uso de cebadores, los cambios de temperatura y la Taq polimerasa en la
reacción en cadena de la polimerasa y la base de la separación de fragmentos de ADN en la electroforesis
en gel.
D1.1.5 Aplicaciones de la reacción en cadena de la polimerasa y de la electroforesis en gel
El alumnado debe saber sobre el amplio espectro de aplicaciones, incluyendo el análisis de ADN para
investigaciones forenses y pruebas de paternidad. Naturaleza de la ciencia: La fiabilidad mejora al
aumentar el numero de mediciones en un experimento o una prueba. En el análisis de ADN, el aumento
del numero de marcadores utilizados reduce la probabilidad de una coincidencia falsa
Temas adicionales del Nivel Superior

D1.1.6 Direccionalidad de las ADN polimerasas

El alumnado debe comprender la diferencia entre los terminales 5' y 3' de las cadenas de nucleótidos y
que las ADN polimerasas añaden el extremo 5' de un nucleótido de ADN al extremo 3' de una cadena de
nucleótidos.

D1.1.7 Diferencias entre la replicación en la cadena conductora y en la cadena discontinua

Se abordan los términos continua, discontinua y fragmentos de Okazaki. El alumnado debe saber que la
replicación debe iniciarse con el cebador de ARN solo una vez en la cadena conductora, pero de forma
repetida en la cadena discontinua.

D1.1.8 Funciones de la ADN primasa, la ADN polimerasa I, la ADN polimerasa III y la ADN ligasa en la
replicación
Se debe limitar al sistema procariótico.

D1.1.9 Corrección de errores en el ADN

Se debe limitar a la acción de la ADN polimerasa III para eliminar cualquier nucleótido del terminal 3' con
una base no coincidente, seguida de la sustitución por un nucleótido correctamente emparejado.
Figura1

Figura 2
D1.1.1 La replicación del ADN como producción de copias exactas de ADN con idénticas secuencias
de
La bases
replicación del ADN es el proceso mediante
el cual cada molécula de ADN se duplica y
forma una copia idéntica y ocurre durante la
fase S de la interfase, antes de la mitosis.

La replicación del ADN es necesaria para dos

procesos biológicos:
• Reproducción: los hijos necesitan copias
del ADN de los progenitores.

• Crecimiento y sustitución de células y

tejidos en organismos pluricelulares: la
división celular es necesaria para el
crecimiento y para reemplazar las células
viejas en los tejidos.
D1.1.2 Naturaleza semiconservativa de la replicación del ADN y función del apareamiento de bases
complementarias

Watson y Crick, propusieron que la replicación es de tipo

semiconservativo, es decir, las cadenas se separan y cada una sirve de
molde para que se sintetice una nueva cadena complementaria.
Una hélice original con dos cadenas, debe generar dos hélices hijas con
cuatro cadenas. Las dos hélices hijas se separarán en el transcurso de la
división celular.

Las nuevas moléculas de ADN contienen, cada una, una cadena

parental original y una cadena nueva copiada (complementaria)

Desempaquetado y Replicación Nuevas cadenas

desenrollado Cadena original

Cadena nueva

Cadena nueva
ADN original
Cadena original
 El emparejamiento de bases complementarias asegura copias idénticas de ADN.
Las cadenas parentales actúan como
Adenina se empareja sólo con Timina
moldes para las nuevas cadenas
Citosina se empareja sólo con Guanina
complementarias.
Esto asegura que las nuevas moléculas de ADN sean
idénticas a la original – sin errores – de forma que la
secuencia de nucleótidos se conserva.
Esto es importante ya que la secuencia de bases del
ADN contiene la información genética del organismo.
Un error en el orden de las bases puede producir un
error en la expresión genética (síntesis de proteínas),
que podría ser perjudicial (incluso fatal) para la célula
o el organismo.

http://learn.genetics.utah.edu/content/molecules/builddna/

http://www.hhmi.org/biointeractive/dna-rep
lication-advanced-detail
 Existen tres posibles modelos de replicación del ADN:

Replicación Replicación Replicación

conservativa dispersiva semiconservativa

ADN original

Primera
replicación

Segunda
replicación

ADN original
ADN nuevo
Matthew Meselson y Franklin Stahl, 1958
 D1.1.3 Función de la helicasa y la ADN polimerasa en la replicación del ADN
La helicasa desenrolla la doble hélice y separa las dos cadenas mediante la ruptura de los puentes de
hidrógeno.
Antes de que la replicación del ADN ocurra, las cadenas se deben separar. Este proceso lo realiza la
enzima helicasa y requiere ATP. La helicasa está formada por seis subunidades que forman un anillo
que se acopla y se desliza a lo largo de la molécula de ADN rompiendo los puentes de hidrógeno
entre las bases y haciendo que el ADN pierda su forma de doble hélice.
Helicasa 3’
Cadena original

ATP

Bases expuestas

ATP
Cadena original
Al avanzar la helicasa se rompen los puentes de 5’
hidrógeno y las hebras del ADN se separan (esta
especie de cremallera que avanza se denomina
horquilla de replicación)
 ADN polimerasa

La ADN polimerasa une entre sí los nucleótidos para formar una nueva cadena, usando para ello la cadena
preexistente como una plantilla.

ADN polimerasa
(dos subunidades
enlazadas) Cadena original (molde)
3’
5’
Nuevas cadenas
complementarias

3’
5’
Cadena original (molde)

nucleótidos libres
Los nucleótidos libres son recogidos por la ADN polimerasa y enlazados covalentemente a la nueva cadena
por el emparejamiento de bases complementarias. Frente a un nucleótido con A coloca uno con T; frente a
un nucleótido con C coloca uno con G; y viceversa. A continuación se forma un enlace fosfodiéster entre el
fosfato 5’ del nuevo nucleótido con el carbono 3’ de la desoxirribosa del nucleótido anterior.
D1.1.6 Direccionalidad de las ADN polimerasas
La ADN polimerasa solo puede unir nucleótidos al extremo 3´.
Va sintetizando la nueva cadena en sentido 5´→3´
(=la nueva cadena va creciendo en sentido 5´→3´)
Velocidad de replicación: Replicación en procariotas
• La replicación del ADN puede durar unas pocas de
horas y en consecuencia limita la duración del ciclo
celular.
• Las bacterias pueden replicarlo rápidamente porque
contienen una pequeña cantidad de ADN circular.
• Los organismos eucariotas aceleran la replicación
del ADN al tener miles de horquillas de replicación a
lo largo de la molécula. http://goo.gl/7bA6F

Replicación en eucariotas

ADN
Horquillas de replicación
bidireccionales
http://click4biology.info/c4b/3/Chem3.4.htm
http://www.hhmi.org/biointeractive/media/DNAi_replication_vo1-lg.mov
• Síntesis de ADN: La ADN polimerasa necesita la presencia de
desoxirribonucleótidos-5’-trifosfato de adenina, timina, guanina
y citosina, iones Mg2+ y un fragmento de ADN del que se le ha
retirado un sector de una de las dos cadenas; la enzima es capaz
de, partiendo del extremo 3’ de la cadena interrumpida, unir
nucleótidos complementarios a la cadena que está entera. Puede
unir unos 1000 nucleótidos por minuto y permite la síntesis in
vitro de ADN a partir de otro ADN. Sin embargo, la ADN
polimerasa es incapaz de iniciar una cadena de novo; sólo
puede añadir nucleótidos al extremo 3’ de una cadena
preexistente, el llamado “cebador”.
Los nucleótidos que añade son complementarios a la otra cadena
(la hebra “patrón” o “molde”) sobre la que se desplaza en sentido
3’  5’ de ésta.
Como la ADN polimerasa actúa añadiendo nucleótidos a un
extremo 3’ libre, la cadena de ADN sólo puede crecer en sentido
5’  3’. Debido a ello, en una cadena de ADN, el nucleótido que
tiene el carbono 5’ libre se considera el primer nucleótido de la
misma, y el que tiene el carbono 3’ es el último nucleótido
añadido y al cual se le puede añadir otro.
En resumen, la ADN polimerasa “lee” la hebra molde en sentido 3’  5’ y sintetiza
la cadena complementaria en sentido 5’  3’. La nueva hebra sintetizada es así
antiparalela con respecto a la hebra patrón.

• Sin embargo, quedaban incógnitas por resolver:

• ¿Cómo podía la ADN polimerasa sintetizar la nueva molécula sin que, aparentemente, hubiera
cebador?
• ¿Cómo podían crecer en paralelo las dos hebras de una horquilla? Si una crecía en sentido 5’
 3’, la otra debía hacerlo en sentido 3’  5’, y la ADN polimerasa no actuaba en ese sentido.

• La explicación tuvo lugar en 1968, cuando Reiji Okazaki descubrió unos fragmentos constituidos
por unos 50 nucleótidos de ARN y unos 1000 nucleótidos de ADN, que se denominaron
fragmentos de Okazaki. Estos fragmentos son sintetizados al principio por la ARN polimerasa y,
posteriormente, son continuados por la ADN polimerasa, en sentido 5’  3’ sobre diferentes
regiones de la hebra patrón. Después, estos fragmentos pierden su porción de ARN, que se
sustituye por ADN y permanecen unidos entre sí constituyendo una única hebra de ADN que,
aparentemente, crece en sentido 3’  5’.
 D1.1.7 Diferencias entre la replicación en la cadena conductora y en la cadena discontinua
La replicación del ADN es continua en la cadena conductora o adelantada y discontinua en la cadena retardada.
Como las dos cadenas de la doble hélice del ADN están dispuestas de manera antiparalela (en sentidos opuestos) y las ADN
polimerasas sólo pueden añadir nucleótidos en un sentido, la síntesis tiene lugar de forma muy diferente en cada cadena:
• Una de las cadenas, la llamada cadena o hebra conductora o adelantada, se sintetiza de forma continua en el mismo
sentido en que se abre la horquilla de replicación y a medida que se va abriendo ésta, ya que el sentido en el que esta
cadena se está formando coincide con el sentido en el que las ADN polimerasas pueden añadir nucleótidos.
• La otra cadena, conocida como cadena o hebra discontinua o retardada, se sintetiza en fragmentos en sentido opuesto a la
horquilla: a medida que la horquilla de replicación va exponiendo más longitud de la cadena original, se van creando
nuevos fragmentos, que luego se unirán formando la cadena discontinua. Estos fragmentos se denominan fragmentos de
Okazaki.
La replicación comienza en sitios dentro de las moléculas de ADN llamados orígenes de replicación.
En los procariotas sólo hay un origen de replicación en la molécula de ADN mientras que en
eucariotas hay muchos orígenes en cada molécula de ADN.
La replicación se produce en ambos sentidos a partir de cada origen de replicación, formándose
una estructura que, al microscopio electrónico, aparece como una burbuja de replicación. La mitad
de cada burbuja de replicación se llama horquilla de replicación.
Durante la síntesis de ADN, en cada horquilla de replicación las ADN polimerasas añaden los
nuevos nucleótidos uniéndolos por el grupo fosfato al carbono 3’ del nucleótido que se encuentra
al final la cadena que se está formando. Por lo tanto, la replicación se produce en el sentido 5’ a 3’.
 La síntesis de ambas hebras, la conductora y la retardada, se produce de
manera simultánea hasta que se termina totalmente la duplicación. Dado
que esta duplicación es bidireccional, cada una de las nuevas hebras se
sintetiza, en parte, de manera continua; y en parte, lo hace de manera
discontinua.

HEBRA RETARDADA

FRAGMENTOS DE OKAZAKI
Diferentes experimentos demostraron cómo es la síntesis de ADN: Síntesis de ADN in vivo.

• .
D1.1.8 Funciones de la ADN primasa, la ADN polimerasa I, la ADN polimerasa III y la ADN ligasa en
la replicación
En la replicación, intervienen una serie de proteínas, tanto enzimas como proteínas con diferentes funciones:
• La enzima helicasa desenrolla el ADN en la horquilla de replicación y la enzima topoisomerasa libera la tensión que se
crea por delante de la helicasa.
• Proteínas de unión a cadena simple (en inglés proteínas SSB) mantienen las cadenas separadas el tiempo suficiente
para que se pueda copiar la cadena original.
• El inicio de la replicación requiere un cebador de ARN, es decir, una molécula pequeña de ARN a partir de la cual se
empiecen a añadir desoxirribonucleótidos de ADN y pueda comenzar así la síntesis de ADN. En la cadena discontinua
hay varios cebadores, mientras que en la cadena conductora sólo hay uno. La enzima ADN primasa crea un cebador
(en inglés “primer”) de ARN en la cadena conductora y numerosos cebadores de ARN en la cadena discontinua. El
cebador de ARN es necesario para iniciar la actividad de la ADN polimerasa.
• La ADN polimerasa III es la principal polimerasa en la replicación, responsable de la unión covalente
de los nuevos desoxirribonucleótidos al extremo 3’ de la cadena que se está formando. Los
nucleótidos se ensamblan en dirección 5´-3´ .
• La ADN polimerasa I es una exonucleasa porque puede romper los enlaces entre los nucleótidos pero
también es una polimerasa porque puede unir nucleótidos. Esta ADN polimerasa I se mueve
eliminando los cebadores de ARN y sustituyéndolos por nucleótidos de ADN. Se separa cuando llega
al siguiente fragmento de Okazaki.
• La ADN ligasa forma enlaces para unir entre sí los fragmentos de la hebra discontinua.
Replicación del
cromosoma circular de
E.coli (MET, falso color)
D1.1.9 Corrección de errores en el ADN

Durante la replicación, se pueden producir errores incorporándose nucleótidos

que no tengan correctamente apareadas sus bases. Durante la propia replicación
se corrigen parte de estos errores: la ADN polimerasa es capaz de autocorregirse
en el último nucleótido.
Cuando los errores no están en el último nucleótido actúan las siguientes
enzimas correctoras:

- Una endonucleasa: detecta el error y rompe la cadena de ADN a ambos lados

del mismo.
- Una exonucleasa: elimina el fragmento en el que se encuentra el error y lo
separa del resto de la cadena.
- La ADN polimerasa I: rellena el hueco corrigiendo el error.
- La ADN ligasa: une el fragmento corregido con el resto de la cadena.

A veces queda algún error sin corregir. Estos errores (mutaciones) son una fuente
importante de variabilidad genética, necesaria para la evolución de las especies.
PREGUNTAS BASADAS EN DATOS: DESCUBRIMIENTO DE LOS FRAGMENTOS DE OKAZAKI
 D1.1.4 Reacción en cadena de la polimerasa y electroforesis en gel como herramientas para
amplificar y separar el ADN
La reacción en cadena de la polimerasa (PCR, “polymerase chain reaction”) o reacción de
amplificación del ADN es una técnica básica en biología molecular que permite duplicar en grandes
cantidades pequeños fragmentos aislados de ADN y obtener multitud de copias, con diversos fines:
 Identificación de virus o bacterias en una persona enferma.
 Diagnóstico de enfermedades hereditarias y mutaciones.
 Pruebas de paternidad.
 Termociclador
Pruebas forenses.
 Análisis de pruebas paleontológicas y evolutivas.
 Investigación científica y recombinación de ADN de distintas especies.

Amplificación mediante PCR

Ciclos 1 2 3 …
30
El proceso se hace automáticamente en un
termociclador, a la que hay que agregar 4
230 = ingredientes (muestra de ADN, cebadores,
1.073.741.824
copias de ADN nucleótidos libres y ADN polimerasa), que se
someten a cambios casi instantáneos de
temperatura (40  94), durante cortos periodos
21 = 2 copias 22 = 4 copias 23 = 8 copias de tiempo hasta 30 veces (30 ciclos).
Ciclo de amplificación de la PCR:
En cada ciclo de la reacción se duplica el número de
moléculas de ADN. En cada ciclo se producen tres pasos: Ingredientes: muestra de ADN,
1. Desnaturalización (alta temperatura). cebadores, nucleótidos libres y ADN
polimerasa Taq (la polimerasa Taq se
Se calienta la termocicladora a 95ºC Se desnaturaliza el
extrae de la bacteria termófila Thermus
fragmento de la muestra de ADN (se rompen los aquaticus cuya temperatura óptima es
puentes de H entre bases complementarias), de 72 y que puede resistir hasta 95
separándose sus dos cadenas. durante breves periodos de tiempo).
2. Acoplamiento de cebadores (baja temperatura).
La mezcla se enfría (a 45 C) y los cebadores o
iniciadores (pequeños polinucleótidos sintéticos) se
alinean sobre una secuencia específica del ADN donde
queremos que se inicie la replicación.
3. Síntesis o replicación del ADN (temperatura
intermedia).
Sube la temperatura a 72 y la ADN polimerasa Taq
replica el ADN a partir de donde esté situado el cebador.

El ciclo completo dura 1-2 minutos. Tras 20-30 ciclos se

obtienen miles de millones de copias del fragmento de http://www.mhhe.com/sem/Spanish_Animations/sp_polymerase_chn_reactn.swf

ADN.
Laboratorio virtual

Aprende la técnica de la PCR con este laboratorio virtual: http://learn.genetics.utah.edu/content/labs/pcr/

D1.1.5 Aplicaciones de la reacción en cadena de la polimerasa y de la electroforesis en gel
Perfil de ADN para pruebas de paternidad
En el análisis de ADN se usan repeticiones en tándem.
Preguntas transversales

• ¿Cómo se garantiza la continuidad genética entre generaciones?

1. Resume el concepto de selección natural estabilizadora (D 4.1.12)

2. Explique cómo la replicación semiconservativa asegura la continuidad (D1.1.2)

3. Resuma como la retroalimentación negativa regula la cantidad que se produce de un producto.

• ¿Qué mecanismos biológicos se basan en la direccionalidad?

1. Distinga entre la cadena conductora y la discontinua en la replicación del ADN (D1.1.7)

2. Resuma un ejemplo de migración animal (B 3.3.9)

3. Explique el proceso de translocación de azúcares (B 3.2.17)