Tema 5 Cultivo de Microorganismos

CULTIVO DE
MICROORGANISMOS
Requerimientos nutritivos de los

microorganismos
Macronutrientes
Oligoelementos
Factores de crecimiento
La nutrición microbiana consiste en aportar a las células los ingredientes
químicos que necesitan para la síntesis de monómeros, que son los componentes
de las macromoléculas, que a su vez construyen las estructuras celulares.
Monómeros Macromoléculas Estructuras

celulares
Monosacáridos Polisacáridos Pared celular
Glicocàlix
Aminoácidos Proteínas Membrana

Ribosomas
Flagelo
Pelos y fimbrias
Enzimas
Ácidos grasos Lípidos Membranas
Bases nitrogenadas Ácidos nucleicos Cromosoma

Ribosomas
Plásmidos
Nutrición microbiana
macronutrientes
12% de su peso seco

N En una bacteria típica, alrededor del
es N.
Forma parte de las proteínas, ácidos nucleicos y otros

constituyentes celulares.
En la naturaleza, se encuentra en forma orgánica e inorgánica.

Pero la mayor parte del N natural se encuentra en forma
inorgánica ( NH3, NO3- o N2 ).
La mayoría de las bacterias son capaces de utilizar NH3 como

única fuente de N, y otras muchas pueden utilizar NO3- .
El N2 puede ser usado como fuente de nitrógeno por algunas

bacterias, las bacterias fijadoras de nitrógeno.
FUENTES DE ELEMENTOS
• C: CO2, COMPUESTOS ORGÁNICOS
• H: AGUA, COMPUESTOS ORGÁNICOS
• O: AGUA, OXÍGENO GASEOSO
• N: NH3, NO3
• P: COMPUESTOS ORGÁNICOS (AA)
• S: SH2, COMPUESTOS ORGÁNICOS
• K, Mg, Ca, Na, Fe: IONES
Macronutrientes OLIGOELEMTOS
P El P se presenta en la naturaleza en forma de fosfatos orgánicos e

inorgánicos.
La célula necesita P para la síntesis de ácidos nucleicos y
fosfolípidos.
El S es un componente de los aminoácidos cis y met y se

S encuentra en algunas vitaminas, como tiamina, biotina, ácido
lipoico y Coenzima A.
La mayoría del S celular procede de fuentes inorgánicas, ya sean
sulfatos o sulfuros.
K El K es necesario para todos los organismos. Es cofactor de

muchas enzimas.
Mg El Mg funciona como estabilizador de los ribosomas, las

membranas celulares y los ácidos nucleicos. También se necesita
para la actividad de muchas enzimas.
Ca El Ca ayuda a estabilizar la pared celular bacteriana y tiene una

función importante en la termorresistencia de las endoesporas.
El Na es requerido por algunos microorganismos (halófilos),

Na
Micronutrientes (elementos traza)
Co, Cu, Mn, Mo, Ni, Se, W, V, Zn
Se requieren en muy pequeñas cantidades.
Son tan importantes para el funcionamiento celular como los macronutrientes.
Muchos son metales que actúan como cofactores de enzimas.
A menudo no es necesario añadirlos a los medios de cultivo.
Si el agua utilizada para elaborar el medio es ultrapura se añade al medio una

pequeña cantidad de una solución de metales traza.
Factores de crecimiento
Los factores de crecimiento son compuestos orgánicos que se necesitan en

muy pequeñas cantidades y sólo por algunas células.
Los factores de crecimiento son vitaminas, aminoácidos, purinas y

pirimidinas.
La mayoría de los microorganismos son capaces de sintetizar estos compuestos,
pero en algunos casos es necesario añadirlos al medio.
Las vitaminas son los factores de crecimiento que se necesitan con mayor
frecuencia, funcionan formando parte de coenzimas.
Las principales vitaminas requeridas por los microorganismos son:

tiamina (vitamina B1)
biotina,
piridoxina (vitamina B6) y
covalamina (vitamina B12)
CULTIVO DE
MICROORGANISMOS
• PROVEER UN MEDIO ADECUADO PARA
EL CRECIMIENTO
• OBTENER UN CULTIVO PURO
El medio de cultivo químicamente definido se prepara añadiendo cantidades precisas
de compuestos orgánicos e inorgánicos puros a un volumen conocido de agua destilada.
Se conoce su composición exacta.
Medio definido para Escherichia coli
K2HPO4 7g
KH2PO4 2g
(NH4)2SO4 1g
MgSO4 0,1 g
CaCl2 0,02 g
Glucosa 4-10 g
Elementos traza 2-10 g
(Fe, Co, Mn, Zn,
Cu, Ni, Mo)
Agua destilada 1000 ml
pH7
Para elaborar el medio complejo se utilizan hidrolizados de proteínas y otras
sustancias muy nutritivas pero no definidas químicamente que se pesan y se añaden a un
volumen conocido de agua.
No se conoce la composición exacta del medio complejo.
Medio complejo
para Escherichia coli
y Leuconostoc mesenteroides
Glucosa 15 g
Extracto de levadura 5 g
Peptona 5g
KH2PO4 2g
Agua destilada 1000 ml
pH7
Tipos de medios de cultivo
Medios sólidos y líquidos
Los medios sólidos se preparan como los medios líquidos y se les añade agar (1.5%) como agente gelificante.
El agar es un polímero sulfatado compuesto por D-galactosa, 3,6-anhidro-L-galactosa y ácido glucurónico.
El agar se funde a 80-90ºC y se puede enfriar hasta una temperatura de 40 a 42 ºC sin endurecerse.
La mayoría de los microorganismos no pueden degradarlo.
El agar se funde durante el proceso de esterilización, el medio fundido se vierte sobre placas Petri y se deja solidificar
antes de su uso.
Los medios sólidos inmovilizan a las células, permitiéndolas crecer y formar masas aisladas visibles llamadas
colonias.
Medios generales
Los medios generales mantienen el crecimiento de muchos microorganismos. Ej., el caldo y agar nutritivo
Medios enriquecidos
Medios generales a los que se añaden nutrientes especiales para mantener el crecimiento de microorganismos
heterótrofos exigentes. Ej., el agar sangre
Medios selectivos
Favorecen el crecimiento de microorganismos particulares. Ej.,agar Levine (eosina-azul de metileno) y Agar
MacConkey se emplean para detectar enterobacterias. Contienen colorantes y sales biliares que inhiben el
crecimiento de las bacterias Gram positivas.
Otros medios selectivos contienen nutrientes que pueden utilizar algunas bacterias de forma específica. Ej., el agar
celulosa se usa para aislar bacterias que digieren la celulosa.
Medios diferenciales
Medios que diferencian entre grupos distintos de bacterias e incluso permiten una identificación tentativa de los
microorganismos según sus características biológicas.
El agar MacConkey es tanto selectivo como diferencial. Como contiene lactosa y colorante rojo neutro, las colonias
fermentadoras de lactosa (Escherichia coli) aparecen de color rosa o rojo y se distinguen fácilmente de las colonias no
fermentadoras.
PLACA DE PETRI
SIEMBRA POR ESTRÍA
EFECTO DE FACTORES
AMBIENTALES
• TEMPERATURA
• ACIDEZ Y ALCALINIDAD (pH)
• NECESIDADES DE OXÍGENO
• PRESIÓN OSMÓTICA
TEMPERATURA
• INFLUENCIA VELOCIDAD DE
REACCIONES ENZIMÁTICAS
• TEMPERATURAS “CARDINALES”
• MÍNIMA, ÓPTIMA, MÁXIMA
CLASIFICACIÓN
• PSICRÓFILOS (0º - 15º - 20º)
• PSICRÓFILOS FACULTATIVOS:
CRECEN A 0º, MÁXIMA ENTRE 20-30º Y
RESISTEN HASTA 40ºC
• RESPONSABLES DE PUTREFACCIÓN
DE ALIMENTOS REFRIGERADOS
CLASIFICACIÓN
• MESÓFILOS: RANGO ENTRE 15 Y 45ºC
(MAYORÍA DE PATÓGENOS DE
ANIMALES Y HOMBRE)
• TERMÓFILOS: ÓPTIMA POR ENCIMA
DE 45ºC Y MÁXIMA SUPERIOR A 65ºC
ESTUFA DE CULTIVO
ACIDEZ Y ALCALINIDAD
• MAYORÍA ENTRE pH 4 y 9 (ÓPTIMO 7)

• HONGOS: 4,5 – 6
• BACTERIAS ACIDÓFILAS (Thiobacillus) y
ALCALÓFILAS (Bacillus)
• REGULACIÓN CON BUFFERS EN
MEDIOS DE CULTIVO
RELACIÓN CON EL O2
• AEROBIO ESTRICTO: DEPENDE POR
COMPLETO DEL O2 ATMOSFÉRICO
• MICROAERÓFILO: REQUIERE MENOR
CONCENTRACIÓN DE O2 (<21%)
• ANAEROBIO ESTRICTO: NO TOLERAN
PRESENCIA DE O2
RELACIÓN CON EL O2
• ANAEROBIOS FACULTATIVOS
• ANAEROBIOS AEROTOLERANTES
• CRECIMIENTO EN EL LABORATORIO
(CULTIVOS AIREADOS, JARRA DE
ANAEROBIOS, etc.)
JARRA DE ANAEROBIOS
SOLUTOS Y PRESIÓN OSMÓTICA
• AMBIENTES DILUIDOS
• ALTA CONCENTRACIÓN DE SOLUTOS:
PLASMÓLISIS (MÉTODO DE
CONSERVACIÓN DE ALIMENTOS)
• ORGANISMOS HALÓFILOS
Transferencia aséptica
Consiste en una serie de procedimientos que evitan la contaminación durante la

manipulación de los cultivos y de los medios de cultivo estériles.
Es uno de los primeros métodos que tiene que dominar un microbiólogo.
a.Se calienta el asa de siembra hasta incandescencia y se deja enfriar

b. El tubo se destapa
c. Se pasa el extremo del tubo por la llama
d. Se extrae la muestra con el asa esterilizada
e. Se vuelve a flamear la boca del tubo y la muestra se deposita en un medio estéril
f. Se vuelve a tapar el tubo y se calienta el asa de nuevo al final
Obtención de cultivos puros
2. Siembra en estrías
Se esteriliza el asa
y luego se toma una Crecimiento de colonias confluentes
muestra del tubo al comienzo de la siembra por estría
Colonias aisladas
al final
de la siembra por
estría
1. Dilución y siembra por

extensión en superficie
Se realiza una siembra

por estría en una placa de
agar con medio estéril.
Después de una estría inicail
Se hacen estrías en ángulo
3. Dilución y siembra
en profundidad
Morfología y crecimiento de las colonias
Las colonias son masas visibles de células que se forman por división de una o varias células.
El desarrollo de colonias sobre superficies de agar permite al microbiólogo identificar las bacterias porque las
especies forman a menudo colonias con una forma y aspecto característico.
El tamaño, forma, textura y color de una colonia es propio de cada organismo.
La morfología de la colonia de una bacteria puede variar según el medio en que crezca la bacteria.
Colonias de bacterias
Serratia marcescens
Cultivada en Agar
MaConkey
Pseudomonas aeruginosa
Cultivada en
Agar Tripticasa-soja
Shigella flexneri
Cultivada en
Agar MacConkey
Colonias de Bacillus subtilis que han crecido en

medios con pocos nutrientes

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Requerimientos nutritivos de los

Monómeros Macromoléculas Estructuras

Aminoácidos Proteínas Membrana

Ácidos grasos Lípidos Membranas

Bases nitrogenadas Ácidos nucleicos Cromosoma

12% de su peso seco

Forma parte de las proteínas, ácidos nucleicos y otros

En la naturaleza, se encuentra en forma orgánica e inorgánica.

La mayoría de las bacterias son capaces de utilizar NH3 como

El N2 puede ser usado como fuente de nitrógeno por algunas

P El P se presenta en la naturaleza en forma de fosfatos orgánicos e

El S es un componente de los aminoácidos cis y met y se

K El K es necesario para todos los organismos. Es cofactor de

Mg El Mg funciona como estabilizador de los ribosomas, las

Ca El Ca ayuda a estabilizar la pared celular bacteriana y tiene una

El Na es requerido por algunos microorganismos (halófilos),

Co, Cu, Mn, Mo, Ni, Se, W, V, Zn

Se requieren en muy pequeñas cantidades.

Son tan importantes para el funcionamiento celular como los macronutrientes.

Muchos son metales que actúan como cofactores de enzimas.

A menudo no es necesario añadirlos a los medios de cultivo.

Si el agua utilizada para elaborar el medio es ultrapura se añade al medio una

Los factores de crecimiento son compuestos orgánicos que se necesitan en

Los factores de crecimiento son vitaminas, aminoácidos, purinas y

Las principales vitaminas requeridas por los microorganismos son:

Medio definido para Escherichia coli

• MAYORÍA ENTRE pH 4 y 9 (ÓPTIMO 7)

Consiste en una serie de procedimientos que evitan la contaminación durante la

a.Se calienta el asa de siembra hasta incandescencia y se deja enfriar

1. Dilución y siembra por

Se realiza una siembra

Colonias de Bacillus subtilis que han crecido en

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