PRACTICAS DE LABORATORIO

INTEGRANTES:
ROCELI GUERRERO CHAVEZ
JUBERT NEISER WEEPIU
SAMEKASH
 Metabolismo bacteriano

Es el conjunto de procesos químicos que las bacterias utilizan para obtener energía y materia necesarios
para su crecimiento y reproducción. A lo largo de millones de años de evolución, las bacterias han
desarrollado diversas estrategias para obtener energía y nutrientes de su entorno.

Las bacterias utilizan oxígeno como

aceptor final de electrones en la cadena de
1.METABOLISMO transporte de electrones, produciendo
energía (ATP) de manera eficiente a través
AERÓBICO de la respiración celular.

Las bacterias generan energía sin la presencia

de oxígeno. Pueden usar otros aceptores de
electrones inorgánicos, como nitratos o
2. METABOLISMO sulfatos, en la respiración anaeróbica, o llevar a
ANAERÓBICO cabo la fermentación para convertir glucosa en
productos como ácido láctico o etanol,
produciendo.
 CARACTERISTICAS
VELOCIDAD ADAPTADA VERSATILIDAD NUTRICIONAL
El metabolismo bacteriano Las bacterias pueden utilizar
ocurre entre 10 y 100 una amplia variedad de
veces más rápido que en nutrientes para obtener
las células humanas. Esto energía. No están limitadas
les permite crecer y al uso exclusivo de oxigeno
reproducirse como oxidante.
eficientemente.

CLASIFICACION SEGÚN SU FUENTE DE ENERGIA Y CARBONO

Fotótrofos: Utilizan Quimiótrofos:

la luz como fuente Obtienen energía de
de energía. reacciones químicas.
Autótrofos: HETEROTROFOS:
Sintetizan sus Obtienen su
propias moléculas alimento de fuentes
orgánicas. externas.
 DEGRADACIÓN DE ALMIDON
El almidón es un polisacárido ampliamente presente en la naturaleza,
siendo una de las formas principales en las que las plantas almacenan
energía.
Esta macromolécula está compuesta por cadenas largas de glucosa,
dispuestas en dos formas predominantes: la amilosa, una estructura
lineal, y la amilopectina, una estructura ramificada. Cuando los
organismos, como los humanos, consumen alimentos ricos en almidón,
como los cereales y las raíces, su degradación es esencial para liberar la
energía almacenada en estas reservas. Este proceso de degradación se
lleva a cabo principalmente en dos etapas principales: hidrólisis y
glucólisis. En la hidrólisis, las enzimas como la amilasa comienzan a
descomponer las largas cadenas de almidón en fragmentos más
pequeños llamados dextrinas y maltosas. Estas moléculas más simples
son entonces sometidas a una serie de reacciones enzimáticas en la
glucólisis, donde se convierten finalmente en glucosa, que es la forma
de azúcar utilizada por las células para producir energía.
La degradación del almidón es, por lo tanto, un proceso vital que
permite a los organismos obtener la energía necesaria para sus funciones
metabólicas y biológicas. Sin este proceso, la energía almacenada en el
almidón sería inaccesible y no podría ser utilizada de manera eficiente
por los organismos consumidores.
 AGAR ALMIDON
En microbiología, el almidón se emplea en la prueba de hidrólisis de almidón
para detectar la presencia y actividad de la enzima amilasa. Esta prueba es
útil para identificar bacterias y hongos capaces de producir amilasa, una
enzima que descompone el almidón en azúcares más simples. En la prueba
de hidrólisis de almidón, se siembra el microorganismo en un medio de
cultivo que contiene almidón como única fuente de carbono. Después de un
período de incubación, el medio se trata con una solución de yodo, como el
Lugol. El Lugol se une al almidón no hidrolizado, produciendo un color azul
oscuro característico. Si el microorganismo produce amilasa y es capaz de
hidrolizar el almidón, se observará un halo claro alrededor de la colonia en el
medio de cultivo. Este halo claro indica que el almidón circundante ha sido
degradado en azúcares más simples, dejando el almidón sin tratar ausente y,
por lo tanto, sin coloración con el yodo. La formación de este halo claro es
un indicador positivo de la actividad de la amilasa en el microorganismo en
estudio. Este resultado ayuda en la identificación y caracterización de
microorganismos en el laboratorio microbiológico.
 DEGRADACIÓN DE GLOBULOS ROJOS

La degradación de glóbulos rojos, o hemólisis, puede ser el resultado de la acción de microorganismos como
bacterias, hongos o parásitos. Estos microorganismos pueden producir enzimas o toxinas que dañan la membrana
de los glóbulos rojos, provocando su ruptura y liberación de hemoglobina. Este proceso puede ser parte de la
patogénesis de diversas enfermedades infecciosas, como la malaria, la septicemia bacteriana o las infecciones por
hongos. Los microbiólogos estudian estos mecanismos para entender mejor la fisiopatología de las enfermedades y
desarrollar estrategias de diagnóstico y tratamiento más efectivas.
 AGAR SANGRE
• El agar sangre es un tipo de medio de cultivo utilizado en
microbiología para el aislamiento y la identificación de bacterias,
especialmente aquellas que requieren nutrientes adicionales para su
crecimiento o que necesitan un entorno similar al de los tejidos
animales.
• Este medio de cultivo se prepara añadiendo sangre, típicamente
sangre de oveja o caballo, al agar base. La sangre proporciona
factores de crecimiento, como factores vitamínicos, factores X y V, y
otros nutrientes esenciales para el desarrollo de ciertos
microorganismos.
• Es diferencial porque permite distinguir entre diferentes tipos de
bacterias en función de cómo interactúan con la sangre. Por ejemplo,
algunas bacterias producen enzimas que digieren los glóbulos rojos
(hemólisis), lo que se manifiesta como claros alrededor de las
colonias en el medio de cultivo. Dependiendo del patrón de
hemólisis, las bacterias se pueden clasificar en alfa-hemolíticas
(producen una zona verde alrededor de las colonias), beta-
hemolíticas (producen una zona clara de hemólisis completa) o
gamma-hemolíticas (no producen hemólisis visible).
• También es útil para la identificación de bacterias en la investigación
científica y en la industria alimentaria para evaluar la calidad y
seguridad de los productos
 DEGRADACION DE CITRATO

La degradación del citrato se refiere al proceso mediante el

cual el citrato, un compuesto orgánico de tres átomos de
carbono comúnmente encontrado en células vegetales y
animales, se descompone en productos más simples. Este
proceso puede ocurrir en diferentes contextos biológicos,
como la respiración celular, la fermentación microbiana o la
síntesis de ciertos compuestos.
La degradación del citrato es catalizada por enzimas
específicas que rompen los enlaces químicos en el citrato,
liberando energía y generando metabolitos útiles para la
célula. Es un proceso fundamental en el metabolismo celular
y tiene implicaciones en áreas como la nutrición, la medicina
y la biotecnología.
 AGAR CITRATO
El agar citrato es un medio de cultivo selectivo y diferencial utilizado en microbiología para la
identificación de bacterias capaces de utilizar el citrato como su única fuente de carbono. Esta
técnica se basa en la capacidad de ciertas bacterias para transportar y metabolizar el citrato, lo
que conduce a un cambio de pH y, por lo tanto, a un cambio de color en el indicador presente
en el medio.
La formulación del agar citrato incluye citrato de sodio como única fuente de carbono, sales
inorgánicas, agua destilada y agar como gelificante. Además, se añade un indicador de pH,
como el azul de bromotimol, que inicialmente da un color verde al medio. Cuando una bacteria
es capaz de utilizar el citrato, produce enzimas como la citrato liasa, que desdoblan el citrato
en compuestos que aumentan el pH del medio.
Esto provoca un cambio de color del indicador de pH, de verde a azul alcalino, indicando un
resultado positivo. La fermentación del citrato es una característica clave para distinguir entre
diferentes especies bacterianas. Por ejemplo, bacterias como Escherichia coli no fermentan
citrato, mientras que otras, como Enterobacter aerogenes, son capaces de hacerlo. Por lo tanto,
cuando se siembran en el agar citrato, E. coli no producirá un cambio de color, mientras que E.
aerogenes sí lo hará, lo que permite una rápida diferenciación entre las dos especies.
El agar citrato es especialmente útil en el diagnóstico microbiológico de infecciones
bacterianas entéricas, ya que permite identificar rápidamente ciertas cepas patógenas. Además,
su uso es común en entornos clínicos y de investigación para la caracterización de bacterias de
interés médico y ambiental
 RESULTADOS
Para observar los resultados se le agrega
Yodo sobre la placa de agar almidón y agar
sangre
Agar Agar Agar
almido sangre citrato
n
Microorganism Amilas Hemólisi Citrato
o a s

Bacillus sp + α α

Klepsiella - γ γ

Aeroproginasa - α α

Salmonella - γ γ

E.Coli - α γ

Sthophilococos - γ α
 DEGRADACION OX-FER

Medio

• Medio de agar que contiene un sustrato específico, como glucosa o lactosa, y un indicador de pH
que cambia de color dependiendo de la producción de ácidos o gases. Además, puede contener
sales de hierro que reaccionan con ácidos para formar sales insolubles de color verde.

Objetivo

• El objetivo de la prueba es determinar si una bacteria es capaz de fermentar carbohidratos,

oxidarlos, o hacer ambos.

Sustrato

• Esto se puede hacer mediante la técnica de siembra por estrías o por punción, dependiendo del
tipo de medio y de la prueba específica.
• Incubación: El medio inoculado se

Incubación

• El sustrato más común utilizado en la prueba Ox-Fer es un carbohidrato, como la glucosa o la

lactosa
Inoculación

• El medio inoculado se incuba a una temperatura adecuada, generalmente a 35-37°C

Indicador

• Fenol rojo, que cambia de color en presencia de ácidos.

 INTERPRETACIO
N

Fermentación: Cambio de Oxidación: Poco o ningún

color del indicador a cambio de color del
amarillo (ácido) y posible indicador, y generalmente
formación de gas. no hay formación de gas.

Negativo: No hay cambio

de color del indicador ni
formación de gas, lo que
indica que la bacteria no
puede metabolizar el
sustrato proporcionado.
 DEGRADACION DE UREA
Objetivo:
Identificar bacterias que producen la enzima ureasa, la cual hidroliza la urea en amoníaco y dióxido de carbono.
Sustrato:
El sustrato principal es la urea, que se incluye en el medio de cultivo.
Inoculación:
Se inocula la bacteria en el medio de agar urea mediante la técnica de siembra por estrías o pinchazos.
Incubación:
El medio se incuba a 35-37°C durante 18-24 horas, aunque el tiempo puede variar según el protocolo.
Indicador:
El medio contiene un indicador de pH, como el fenol rojo, que cambia de color de rojo a rosa o rojo-anaranjado en presencia de amoníaco (pH
alcalino).
Interpretación:
La formación de un halo de color rosa o rojo-anaranjado alrededor de la colonia indica una prueba positiva para la ureasa, lo que significa que
la bacteria es capaz de hidrolizar urea.
La ausencia de cambio de color indica una prueba negativa.

Caldo Urea

Objetivo: Similar al agar urea, identifica la producción de ureasa.

Sustrato: El caldo contiene urea como sustrato principal.
Inoculación: Se inocula la bacteria en el caldo urea.
Incubación: Se incuba a 35-37°C durante 18-24 horas o más, dependiendo del protocolo.
Indicador: El caldo también contiene un indicador de pH, como el fenol rojo, que se tornará rosa o rojo-anaranjado si la urea se hidroliza y el
pH se vuelve alcalino.
Interpretación: Un cambio de color del indicador de amarillo a rosa o rojo-anaranjado indica una prueba positiva para la ureasa. La ausencia
de cambio de color después de un período de incubación adecuado indica una prueba negativa.
 LIA

Microorga Descarbo Desamin SH2

nismo xilación ación de
de lisina Lisina
(fondo) (superfici
e)
Staphylococ + - -
o

E.coli + - -

Descarboxilación de la lisina
Resultado Positivo: superficie alcalina / profundidad alcalina (pico violeta / fondo
violeta).
Resultado negativo: superficie alcalina /profundidad ácida (pico violeta / fondo
amarillo).
Desaminación de la lisina
Resultado positivo: superficie rojiza / profundidad ácida. Esto sucede con cepas
del género Proteus, Providencia y algunas de Morganella spp.
 Resultados: Citrato
TSI

Microorganis SUPERFI Gas Microorganis Crecimien Color

mo SH2 CIE\ mo to
Profundi Staphylococos - -
dad
E. coli - -
Staphylococos A/A + -
E. Coli K/A + -
Positivo: crecimiento bacteriano con un
intenso color azul en el pico de flauta.
Negativo: ausencia de crecimiento y
permanencia del color verde del medio de
cultivo.
 DEGRADACION DE PEROXIDO DE HIDROGENO ()
Objetivo
El objetivo principal de la degradación de H₂O₂ es eliminar este compuesto, que es un
subproducto tóxico del metabolismo celular. La eliminación de H₂O₂ es crucial para
prevenir daños oxidativos en células y tejidos, así como para mantener la homeostasis
redox.
Sustrato: En esta reacción es el propio peróxido de hidrógeno (H₂O₂). En las células, el
H₂O₂ se genera durante la respiración celular y otras reacciones metabólicas.
Inoculación : Se refiere a la introducción de catalizadores o enzimas específicas que
faciliten la degradación de H₂O₂. Las enzimas más comunes involucradas en este proceso
son la catalasa y la peroxidasa:
Catalasa: Una enzima que cataliza la descomposición del H₂O₂ en agua (H₂O) y oxígeno
(O₂). Se encuentra en casi todos los organismos aerobios.-
Peroxidasa: Enzimas que usan H₂O₂ para oxidar otros sustratos, convirtiéndolo en agua y
un compuesto oxidado.
Indicador
El indicador se utiliza para detectar la presencia y la cantidad de H₂O₂ en la muestra.
Algunos indicadores comunes incluyen:
• Papel de yodo: Cambia de color en presencia de H₂O₂.-
• Tiocianato de hierro: Produce un complejo de color rojo en presencia de H₂O₂.-
*Reacción con permanganato de potasio*: Donde el H₂O₂ reduce el permanganato,
causando un cambio de color.
Interpretación
La interpretación de los resultados implica evaluar la eficacia de la degradación de H₂O₂.
Esto se puede hacer observando el cambio en el indicador seleccionado:
Disminución de color: Indica la degradación de H₂O₂.
Formación de burbujas (con catalasa): La producción de oxígeno observable como
burbujas indica la actividad de la catalasa.- Cambios en absorbancia
(espectrofotometría): Mide la reducción de H₂O₂ de manera cuantitativa.
 resultados

Microorganismo Catalasa

Bacillus sp +

Klepsiella +

Aeroproginasa +

Salmonella -

E.Coli -

Sthophilococos +

Proteus sp -
 Crecimiento bacteriano
El crecimiento bacteriano se refiere al aumento en Fase de muerte: Las condiciones ambientales se
el número de células bacterianas, que ocurre a vuelven letales, y el número de bacterias que
través de la división celular. El ciclo de vida mueren supera al número de bacterias que se
bacteriano típico incluye las siguientes fases: dividen.

1.Fase lag: Después de ser inoculadas en un

nuevo medio, las bacterias se adaptan al entorno y
no crecen rápidamente.

2.Fase exponencial (logarítmica): Las bacterias se

dividen a un ritmo constante, y el número de
células aumenta exponencialmente.

3.Fase estacionaria: El crecimiento se detiene

debido a la disminución de nutrientes o la
acumulación de productos de desecho. El número
de bacterias que mueren es igual al número de
bacterias que se dividen.
 Acción de agentes físicos y químicos sobre microbios
Medio de Cultivo:
Un medio de cultivo es una sustancia o solución que proporciona los nutrientes necesarios
para el crecimiento de microorganismos. Ejemplos comunes incluyen el agar nutritivo, agar
sangre y caldo de cultivo.
Objetivo: El objetivo de usar agentes físicos y químicos es eliminar o inhibir el crecimiento
de bacterias para controlar infecciones o esterilizar materiales.
Sustrato: El sustrato se refiere a la superficie o sustancia sobre la que se cultivan las
bacterias, como placas de agar, tubos de ensayo con caldo de cultivo, o medios sólidos o
líquidos específicos.
Inoculación: La inoculación es el proceso de introducir bacterias en el medio de cultivo. Esto
se puede hacer mediante técnicas como el uso de un asa de inoculación estéril o pipetas para
transferir una muestra bacteriana.
Incubación: La incubación es mantener las bacterias inoculadas en condiciones controladas
de temperatura y humedad para permitir su crecimiento. Las condiciones comunes de
incubación suelen ser 37°C (temperatura corporal) para bacterias patógenas humanas durante
un periodo de 24 a 48 horas.
Indicador: Un indicador es una sustancia que se añade al medio de cultivo para mostrar
cambios en el crecimiento bacteriano o en el metabolismo. Ejemplos incluyen indicadores de
pH que cambian de color en respuesta a la fermentación de azúcares.
Interpretación:
Crecimiento visible: Indica que las bacterias están presentes y viables.
Cambio de color en el indicador: Puede indicar producción de ácido o gas, sugiriendo el
tipo de metabolismo bacteriano.
Ausencia de crecimiento: Puede indicar que los agentes físicos (como calor o radiación) o
químicos (como desinfectantes o antibióticos) han sido efectivos en inhibir o matar las
bacterias.