Diagnostico Hiv

HIV
VIRUS DE LA INMUNODEFISICIENCIA
HUMANA
Lic. Manuel Ferreyra Hurtado

HIV
VIRUS DE LA INMUNODEFICIENCIA HUMANA
• CARACTERISTICAS ESTRUCTURALES DEL HIV

• El HIV 1 tiene forma esférica de 100-120 nm de
diámetro. Posee una envoltura que consiste en una
bicapa lipídica de fosfolípidos, donde se insertan unas
espículas formadas por las glicoproteínas 120 y 41.
• el nucleoide o nucleocápside parte central del virus de
forma tubular proteica que alberga la información
mediante 2 estructuras de ARN idénticas
• El material genético viral consta de 3 genes
estructurales (pol, gag, env) y 6 genes reguladores (nef,
tat, net, vpr, vif, vpu).
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• CICLO BIOLOGICO DEL VIH

• No poseen capacidad replicativa propia por carecer de ADN y de
organelas necesarias para realizarlo necesitan de un huésped. Invade
células eucariotas que posean los receptores CD4 y correceptores
CCR5 y CXCR4.
• las células dendríticas Presentan en su superficie las lectinas DC-
SIGNyL-SIGN ,que unen de forma inespecífica virus entre los que
se incluyen el VIH y el virus de la hepatitis C.
• El ciclo biológico se divide en 2 partes:

• La primera etapa comprende desde el reconocimiento celular hasta
la integración del ADN viral al ADN del huésped.
• La segunda etapa comprende desde la biosíntesis de los
componentes virales hasta la salida de los viriones
HIV
• DIAGNOSTICO DE LABORATORIO
• El diagnostico definitivo de la infección por HIV solo se
realiza mediante el laboratorio.
• Los métodos directos detectan al propio virus o algún
componente viral como proteínas o acido nucleico.
• Los métodos indirectos reconocen los anticuerpos
específicos producidos por el sistema inmunitario como
respuesta a la infección.
• Las pruebas de diagnostico están indicados para
adolescentes o adultos de 13 a 64 años, que tienen
actividad sexual sin protección con pareja no estable,
personas con antecedentes de infecciones de transmisión
sexual, tatuajes o pircing, usuarios de drogas
intravenosas, contactos de un caso positivo, solicitud
voluntaria de la prueba, personas de otras edades
expuestas a factores de riesgo. Mujeres embarazadas
como parte del estudio prenatal, para niños de madre
positiva.
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• METODOS INDIRECTOS:
• PRUEBAS PARA LA DETECCION DE
ANTICUERPOS
• La detección de anticuerpos ocurre después de un
periodo inicial de intensa replicación viral, con niveles
altos de P24 y ARN.
• Como en cualquier infección viral primero aparece la
IgM luego la IgG.
• Los métodos se dividen en prueba de screening,
diseñadas con el máximo de sensibilidad para detectar
todas las muestras positivas.
• Pruebas confirmatorias caracterizadas por su
especificidad y que permiten asegurar la positividad de
una prueba previamente reactiva mediante una de
screening.
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• PRUEBAS DE SCREENING:
• Se usan técnicas inmunoenzimaticas (EIA).
• Ensayos de primera generación: se basaron en
utilización de lisados víricos. Muchos falsos positivos.
• Ensayos de segunda generación: utilizan antígenos mas
específicos obtenidos por recombinación genética o
mediante síntesis, péptidos sintéticos o ambos a la vez.
Problemas de sensibilidad en fase aguda de la
enfermedad, detectan la seroconversión de 6 a12
semanas después postinfeccion.
• Ensayos de tercera generación: utilizan proteínas
recombinantes o péptidos sintéticos específicos de HIV-
1 (asociado aveces a VIH-2), esta técnica permite
detectar anticuerpos de clase (IgG, IgM, IgA),
reduciendo en periodo de ventana a 3 semanas.
• Ensayos de cuarta generación: la detección simultanea
de anticuerpos y antígenos, reducen a 2 semanas en
periodo de ventana
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• PRUEBAS DE SCREENING:
• Estas técnicas se han modificado utilizando sustratos

fluorescentes (ELFA) o formatos de quimioluminiscencia, lo que
permite la automatización, el procesamiento de un gran número
de muestras, la reducción de manipulación y de los costes.
• Las técnicas de cuarta generación que permiten la detección

simultánea de anticuerpos y antígeno p24, reduciéndose el
período ventana a 13-15 días, es decir, se aproxima casi a la
detección de ARN-VIH.
• Con estas técnicas la sensibilidad se incrementa hasta un 99,9% y

la especificidad se sitúa entre el 99,5% y 99,9%
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• PRUEBA RAPIDAS PARA LA DETECCION

DE ANTICUERPOS:
• Existen otras pruebas de screening caracterizadas por
la obtención de resultados en menos de 30 minutos,
aplicado en situaciones donde se requiera resultados
de forma inmediata como , accidentes laborales,
partos de embarazadas sin control, trasplantes, etc.
• Emplean el flujo lateral o capilar de la muestra a
traves de un soporte solido para permitir la
interacción con un antígeno incorporado y utilizan la
unión indirecta, el antígeno de captura, la
aglutinación, la cromatografía o tipo sándwich,
incluye controles para identificar reactividad
inespecífica.
• Su limitante es también el periodo de ventana.
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PRUEBAS CONFIRMATORIAS PARA HIV

estas pruebas están orientadas a confirmar la presencia de la
infección por el VIH en un paciente con una prueba presuntiva
doblemente reactiva, por lo que tienen una alta especificidad. Se
basan en la detección de anticuerpos contra el virus o sus
componentes.
Las técnicas confirmatorias que se utilizan más frecuentemente
son el Western Blot (WB) y el inmunoblot recombinante o
imunoensayo en línea (LIA) que tienen como mínimo la misma
sensibilidad que el ELISA y una especificidad superior. Ambas
técnicas pueden incorporar antígenos de envoltura de VIH-2 lo
que permite diagnosticar este tipo vírico.
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• WESTERN BLOT:
• El Western blot es la técnica más ampliamente utilizada y
consiste en que las proteínas constitutivas del virus se separan por
electroforesis y, luego, se transfieren a un papel de nitrocelulosa.
Estas proteínas fijadas son expuestas al suero del paciente, en el
cual los anticuerpos específicos se unen a las proteínas presentes
dando un patrón de bandas, cuya interpretación depende del
criterio que se adopte en el laboratorio de acuerdo con lo definido
por organismos internacionales.
• El resultado de la prueba de Western blot se informa como
negativo cuando hay ausencia total de bandas; como
indeterminado, cuando no cumple los criterios definidos y no es
negativo, y positivo cuando cumple los criterios, de acuerdo con
el que se haya adoptado
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• WESTERN BLOT
• Esta técnica permite Detecta anticuerpos frente a las
glicoproteínas de envoltura gp160, gp120 y gp41, las
codificadas por el gen gag p55, p24 y p17 y las proteínas .
• Enzimáticas p66, p51 y p31
• las causas del WB indeterminado son diversas y pueden

corresponder a fases tempranas o estadios avanzados de la
infección con deterioro inmunológico grave, y presencia de
inmunocomplejos que pueden reducir los anticuerpos
circulantes, recién nacidos de madre VIH positiva, a sueros
hemolizados, inactivados por calor, con factor reumatoide, o con
bilirrubina elevada, a reacciones cruzadas con otros retrovirus,
sueros de pacientes infectados por subtipo no B o con
hipergammaglobulinemia secundaria a la hiperestimulación
antigénica, multitrasfundidos, o a situaciones patológicas como
conectivopatía, gammapatía policlonal y lupus eritematoso
diseminado5 . La posibilidad de un WB indeterminado o incluso
negativo se incrementa cuando se realiza el screening con
técnicas de cuarta generación, debido a que las mismas detectan
antígeno y la positividad de de dicha técnica puede deberse casi
exclusivamente a antígeno p24 libre sérico.
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• INMUNOFLUORESCENCIA:
• La inmunofluorescencia indirecta se ha
utilizado ampliamente como prueba
confirmatoria para la infección por el VIH-1 y
lo siguen haciendo laboratorios con amplia
experiencia con la prueba. Su desempeño es
bueno pero requiere de personal debidamente
entrenado para su lectura y de microscopio de
fluorescencia.
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• PRUEBAS PARA DETECCIÓN DE ÁCIDOS

NUCLEICOS
• Las técnicas de detección de ácidos nucleicos se utilizan para
diagnóstico sólo en el caso de niños menores de 18 meses.
En algunos casos se han utilizado para aclarar resultados
indeterminados por los otros métodos. Su principal uso está
en el seguimiento de la infección y el de la terapia.
• Existen diferentes pruebas para detectar el ácido

ribonucleico (ARN) del virus, tales como la amplificación
por reacción en cadena de la polimerasa (PCR), la
amplificación basada en la secuencia de ácido nucleico
(NASBA), ahora disponible en tiempo real, y el ADN
ramificado (bDNA). Las diferentes técnicas disponibles
comercialmente y aprobadas por los organismos competentes
tienen un muy buen nivel de correlación.
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• CICLO BIOLOGICO DEL VIH

• El ciclo biológico se divide en 2 partes:

• Estas técnicas se han modificado utilizando sustratos

• Las técnicas de cuarta generación que permiten la detección

• Con estas técnicas la sensibilidad se incrementa hasta un 99,9% y

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