Metabolismo y Medio de Cultivo Bacteriano

CRECIMIENTO,
NUTRICIÓN Y
METABOLISMO
BACTERIANO
Introducción
 ¿Qué utilidad tiene conocer las condiciones que un
microorganismos requiere para crecer?
# Obtenerlo en el laboratorio Cultivo
# Combatirlo o
evitar su proliferación
Introducción
 80 % de agua
 20 % de peso seco:
 Proteínas
 Ácidos Nucleicos
 Polisacáridos
 Lípidos
 Peptidoglucano
 Otros compuestos de peso molecular mas bajo
Introducción
Biosíntesis: Ingreso de substancias para transformarse

en compuestos estructurales
Nutrientes
 Substancias necesarias para
asegurar supervivencia.
 Proveen energía y elementos
necesarios para síntesis de
estructuras celulares.
 Ingreso por absorción.
 Viabilidad: capacidad de
reproducción.
Nutrientes esenciales o Básicos
 Asimilables por simple difusión o por transporte
activo
 Agua
 Fuentes de Carbono
 Compuestos de nitrógeno
 Fósforo (fosfatos inorgánicos)
Otros nutrientes
 Iones potasio
 Iones Magnesio
 Factores de Crecimiento u orgánicos
 Vitaminas
 Aminoácidos
 Oligoelementos
 Hierro
 Cobre
 Cobalto
Factores Estimulantes
 Influyen en el proceso de crecimiento.
 No son imprescindibles.
 En presencia de factores estimulantes crecen mas
rápido y mejor.
Categorías Nutritivas
 Fuente de Carbono
 Carbono inorgánico: dióxido de carbono autótrofas o
litótrofas
 Carbono orgánico: Heterótrofas u organótrofas
 Fuente de Energía
 Fotótrofas
 Quimiótrofas: energía suministrada por ATP
Crecimiento Bacteriano
 Aumento de número (no
de tamaño)
 Multiplicación bacteriana:
fisión simple o binaria
 Elongación
 Auto duplicación de ADN
cromosómico
 Tabicado central
 Invaginación membrana
celular
 Síntesis de pared
Tiempo de generación
 Tiempo necesario para la duplicación celular
 Distintiva de cada especie
 Puede influirse por factores estimulantes
 Varían de 20 minutos (Escherichia coli) hasta 24
horas
Curva de Crecimiento Bacteriano
Bacteria en medio adecuado

•
•Gráfico de coordenadas:
número de bacterias
(logaritmo) versus lapso de
tiempo.
Distinta para cada bacteria
•
En todas se identifican
•
cuatro etapas
Fase de Latencia
 El número de microorganismos no varía
 Adaptación al medio, producción de enzimas
 Tiempo variable: entre una hora a días.
 Tamaño relativo aumentado por división
Fase exponencial o de crecimiento
logarítmico
 Relación casi lineal entre el tiempo
y el número de elementos.
 Actividad metabólica incrementada
 Depende del tiempo de generación
de cada bacteria
 Los antimicrobianos son mas activos
 Puede haber variaciones entre el
crecimiento in vitro e in vivo.
Fase Estacionaria
 En determinado punto el crecimiento disminuye
 La población no aumenta
 Células nuevas reemplazan a las células muertas
 Actividad metabólica mas lenta
 Células en animación suspendida
 Producción de metabolitos secundarios
 Antibioticos
 Toxinas
 Fase de Esporogenesis para las especies productoras de
esporas
Fase de declinación o muerte
 Recuento de células disminuye sensiblemente
 El numero de células muertas supera al número de
células vivas
 Acumulación de productos tóxicos
 Disminución de nutrientes
 Aparición rápida : autolimitar diseminación
infecciones
Técnicas para determinar el número y
viabilidad de las células
 Contar al microscopio el
número de células en un
volumen conocido
 Establecer el número de células
por turbidimetria
 Recuento de elementos viables
por cultivo (Unidad Formadora
de Colonias o UFC)
Efecto de la Temperatura
 Temperatura mínima de crecimiento
 Temperatura óptima de crecimiento
 Temperatura máxima de crecimiento
Sicrófilos
 Requieren bajas temperaturas
 15 – 20 ºC
 La mínima puede ser muy baja
 Bacterias en el fondo del mar y en los polos
Mesófilos
 Rango de temperaturas: 25 – 40 ºC
 Temperatura óptima: 37 ºC ± 1 ºC
 Agentes que afectan al hombre y los animales
Termófilos
 Toleran altas temperaturas
 Temperatura óptima: 55 ºC
 Temperatura máxima: 80 ºC o mas.
Condiciones de pH
 pH : Potencial Hidrógeno. Va desde 0 a 14.
 pH < 6,5 ácido
 pH > 7,5 básico o alcalino
 pH 6,5 – 7,5 neutro Mas adecuado para crecimiento
bacteriano
 Bacterias que crecen hasta pH 4 Acidófilas (Por
ejemplo: Lactobacillus)
 Vibrio cholerae : medio alcalino
Presión Osmótica
 Los solutos (sales y azúcares) disueltos se
desplazan a zonas de menor concentración. El agua
se desplaza a zonas de mayor concentración de
solutos
 Una presión osmótica alta causa pérdida de agua y
plasmólisis de la célula
 Halófilas: bacterias que toleran altas
concentraciones salinas
 Halófilas facultativas : toleran hasta un 2 % de
sales
Condiciones atmósféricas
 Potencial de óxido-reducción o Redox (Eh)
 Respiración bacteriana : reacciones de óxido-
reducción, en cadena
 El aceptor final de electrones o hidrogeniones es
variable
Aerobios
 Requieren oxígeno, aceptor final de hidrógeno
 Formación de H2O y CO2
 Producción de enzima Catalasa : desdoblamiento
del Peróxido de hidrógeno (H2O2) en H2O y
oxígeno
 Prueba de Catalasa para diferenciar
microroganismos (Staphylococcus de
Streptococcus)
Anaerobios
 Viven en ausencia de oxígeno atmosférico
 Aceptor final de hidrógeno : compuesto inorgánico
(NO3 o SO4)
 Fermentación: la fuente de carbono provee energía,
el donador de hidrógeno y el aceptor final (un
compuesto orgánico como ácidos o alcoholes)
 Muy frecuente en microorganismos orales
Anaerobios
 Anaerobios obligados: no utilizan O2
 Anaerobios moderados: toleran de un 2 a un 8 %
de O2
 Anaerobios aerotolerantes: sobreviven un tiempo
en presencia de O2
 Anaerobios facultativos: aceptan indistintintamente
una situación u otra
Microaerófilos
 Requieren bajas concentraciones de O2 para crecer
 Utilizan el O2 como fuente de energía pero a
concentraciones < 15 %
 Susceptibles a radicales superóxido
 Enzima Superóxido Dismutasa (SOD) : transforma
radicales superóxido en H2O2
 Capnofilas: desarrollan mejor con concentraciones de
CO2 elevadas
 La cavidad oral presenta todas estas variantes
 Las especies capnófilas aumentan en personas con
alteraciones periodontales
Control de Microorganismos
 Muchos factores estimulantes del desarrollo
bacteriano se usan para preservar alimentos:
 Baja temperatura
 Salmueras
 Dulces
 Salados
 Ahumados
Metabolismo Bacteriano
 Conjunto de reacciones o transformaciones
quimicas que tienen lugar en un microorganismo
para mantener su viabilidad
 Procesos o reacciones Catabólicas
 Degradan nutrientes
 Liberan energía
 Procesos o reacciones Anabólicas
 Tienden a unir moléculas
 Reacciones de síntesis que consumen energía
Enzimas
 Catalizadores orgánicos que aceleran las
reacciones químicas por su presencia, controlados
geneticamente
 Actúan sobre un sustrato
 Reciben su nombre por el sustrato sobre el que
actúan (Lipasa = actúa sobre lípidos)
 Enzimas de la respiración : deshidrogenasas y
oxidasas
 Proteínas de gran tamaño
 Proteínas mas fracción no proteica (cofactor)
Medios de Cultivo
 Substancias nutritivas que permiten el desarrollo de
microorganismos en el laboratorio
 Cultivo: brindar condiciones óptimas de crecimiento
 Fáciles de preparar
 Baratos
 Permitir el desarrollo de gran variedad de gérmenes
 Aportar nutrientes adecuados (aminoacidos,
nucleótidos, factores de crecimiento, glucosa, iones
inorganicos)
Medios de Cultivo
 Optimo contenido de H2O y correcto pH
 Requerimientos de O2
 Estéril, evitar contaminaciones
 Incubación: temperatura óptima en estufas
Clasificación de los medios de cultivo
 Naturales: solo usados para enriquecer
medios (leche, suero, papa)
 Artificiales se preparan en el laboratorio
 Líquidos: caldos
 Sólidos: caldos adicionados de substancias
capaces de solidificar (Agar-agar)
 Medios Complejos: extractos de carne,
levadura, peptonas.
 Medios Enriquecidos: agregado de suero o
sangre
Clasificación de los medios de cultivo
 Medios selectivos: permiten crecer un solo tipo de
microorganismo (substancias inhibidoras)
 Medios diferenciales o indicadores: evidencia
alguna actividad metabólica por cambio de estado o
color propia de un tipo determinado de
microorganismo
 Medios de Transporte: traslado de muestras
biológicas manteniendo las bacterias viables

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Biosíntesis: Ingreso de substancias para transformarse

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