Tema 9

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TEMA 9: BIOTECNOLOGÍA

APLICADA A LA RESISTENCIA A
ESTRESES ABIÓTICOS
1. ESTRESES ABIÓTICOS
2. TOLERANCIA A ESTRÉS ABIÓTICO
2.1 Percepción y transducción de la señal
2.2 Regulación de la expresión de genes tardíos
2.3 Ajuste osmótico

2. BIOTECNOLOGÍA APLICADA AL ESTRÉS ABIÓTICO


1. Estreses abióticos

• Las plantas están sometidas frecuentemente a estreses,


condiciones externas que afectan negativamente a su desarrollo y/o
productividad.
• Los estreses abióticos son causados por condiciones desfavorables
en el ambiente físico o químico.
• La tolerancia o sensibilidad a los estreses depende de las
especies, del genotipo y del estadío de desarrollo de la planta.
• Los estreses disparan un amplio rango de respuestas en la planta,
desde alteraciones en la expresión génica y el metabolismo celular,
a cambios en la tasa de crecimiento y rendimientos de los cultivos.
Diferentes factores ambientales que resultan en estreses
abióticos

Calor
Frío
Sequía

ESTRÉS ABIÓTICO

Heladas
Inundación

Salinidad Acidez del suelo

La mayoría de estos factores ambientales induce estrés osmótico


Rendimientos y pérdidas promedio de los principales
cultivos

La diferencia entre ambos parámetros se debe


al impactos de las condiciones desfavorables
Adaptado de: Buchanan, Gruissem and Jones. Biochemistry and Molecular Biology of Plants, 2000.
Las aplicaciones biotecnológicas podrían contribuir a
la recuperación de suelos

Las aplicaciones biotecnológicas, especialmente el uso de


plantas transgénicas, prometen incrementar la producción
agrícola con una disminución en los costos de producción. El uso
de plantas resistentes a estreses abióticos podría permitir el
uso y la recuperación de tierras afectadas por salinidad,
acidez, sequía, etc.
Respuestas a estreses abióticos

Los estreses ambientales provocan en las plantas respuestas complejas tanto a nivel celular
como del conjunto de los tejidos. Los estreses constituyen señales ambientales que son
percibidas y reconocidas por las plantas. Las señales son transducidas en las células y
transmitidas a través de la planta. Típicamente, la transducción de señales a nivel celular
resulta en la alteración de la expresión génica, lo que a su vez influye sobre el metabolismo
y el desarrollo de la planta.
Complejidad de la respuesta a estreses abióticos

Vinocur and Altman, 2005 (Curr Opin Biotech)


2. Tolerancia al estrés abiótico

2.1 PERCEPCIÓN Y TRANSDUCCIÓN SEÑAL

2.2 REGULACIÓN DE LA EXPRESIÓN DE GENES TARDÍOS

2.3 AJUSTE OSMÓTICO


2.1 PERCEPCIÓN Y TRANSDUCCIÓN SEÑAL

MPK, MPKK, MPKKK, : MAP quinasa, MAPK quinasa y MAPKK quinasa, respectivamente; CaM: Calmodulina; CDPK: proteína
quinasa dependiente de calcio; SOS3, SOS2: proteína quinasas (Salt overly sensitive); LEA: proteínas abundantes en la
embriogénesis tardía; Hsfs: factores de choque térmico; GPCR: receptor acoplado a proteína G; RLKs: quinasas de tipo receptor
Control transcripcional de las respuestas a estrés
2.2 REGULACIÓN DE LA EXPRESIÓN DE GENES TARDÍOS

Genes y proteínas asociadas a estrés osmótico

Chaperonas, Transporte de agua e iones: Detoxificación y


proteínas LEA, H+-ATPasa, acuaporinas, respuesta ROS: SOD,
dehidrinas bombas de Na+ catalasa, glutatión-S-
trasferasa

TOLERANCIA ADQUIRIDA A ESTRÉS

Genes implicados en la síntesis de solutos


compatibles: P5CS, betaína aldehído DH

Estrategias para desarrollar plantas resistentes al estrés


mediante ingeniería genética
Respuestas de tolerancia al estrés hídrico

 Aumentar la actividad de bombas Na2+/H+ en las


membranas plasmáticas de células de raíz y en los
tonoplastos del mesófilo y de otros tejidos (exportación y
compartimentación de sodio)
 Controlar la expresión, actividad y propiedades de los
sistemas de transporte de potasio y la actividad de las
acuoporinas
 Controlar el flujo de agua y el nivel de turgencia
incrementando la producción de solutos compatibles
(ajuste osmótico)
 Proteger las enzimas, complejos proteicos y estructuras
de membrana incrementando la capacidad de
detoxificación de radicales hidroxilos y la producción de
osmoprotectores.
2.3 AJUSTE OSMÓTICO

Estrés salino Estrés hídrico Estrés bajas


temperaturas

AJUSTE
OSMÓTICO

Incremento neto de la
Ayuda a mantener el
concentración de solutos en
balance hídrico
la célula
Para mantener su potencial hídrico por debajo del potencial
hídrico del suelo las células pueden realizar un ajuste osmótico
Ajuste osmótico de una célula del mesófilo sometida a
exceso de sal

Los iones sodio y cloruro, que pueden interrumpir el metabolismo en el citoplasma,


se concentran en la vacuola. Por el contrario, la concentración de solutos
compatibles (glicina-betaína, prolina, polioles, etc) es alta en el citoplasma, pero
baja en la vacuola.
Adaptado de: Buchanan, Gruissem and Jones. Biochemistry and Molecular Biology of Plants, 2000.
Funciones sugeridas de compuestos que se producen en
las plantas como respuesta al estrés hídrico

(late-embryogenesis abundant proteins )


Los solutos compatibles no alteran la capa de hidratación
de las macromoléculas
Estructuras químicas de solutos celulares compatibles
3. Biotecnología aplicada al estrés abiótico
Estrategias para desarrollar plantas resistentes al estrés
mediante ingeniería genética

• Uso de genómica funcional para la búsqueda de genes de


tolerancia a estreses abióticos

• Buscar organismos que vivan bajo condiciones medioambientales


extremas de estrés. Aislar y clonar aquellos genes que confieren la
tolerancia al estrés
Thellungiella halophila es una planta halófila modelo para
el estudio de la tolerancia a salinidad

La fotografía muestra plantas de T. halophila y A. thaliana cultivadas


durante 7 días en medio saturado con 0, 200 y 600 mM de NaCl.
Resistencia a estrés abiótico – Factores de transcripción

Sobreexpresión del gen DREB1A en plantas de Arabidopsis

Stress
inducible
promoter
Resistencia a estrés abiótico – Solutos compatibles
Prolina: Resistencia a la sequía y a la salinidad en arroz
transgénico que expresa el gen pirrolina-5-carboxilato
sintetasa (p5cs) de Vigna aconitifolia

Su and Wu, Plant Science 2004

Líneas transgénicas de plantas de arroz que expresan el gen


p5cs de Vigna aconitifolia (incremento en la acumulación de
prolina)
Glicina betaína: Transformación de Arabidopsis con el gen
colina oxidasa de Arthrobacter globiformis

(cloroplastos)
- Se transformaron plantas de A. thaliana con una construcción
que contiene el gen codA de la bacteria del suelo Arthrobacter
globiformis dirigido por el promotor 35S de CaMV. Se agregó una
señal de transporte a cloroplastos a la secuencia del transgén
para permitir la acumulación de la enzima en dicho orgánulo.

- El contenido de betaína en hojas de plantas transgénicas


aumentó respecto del control.

Hayashi et al., The Plant Journal, 1997.

- Las plantas transgénicas exhiben resistencia al estrés salino y a


altas y bajas temperaturas.
Con el gen colina oxidasa (codA) de Arthrobacter globiformis

Plantas crecidas
en 100 mM NaCl

Hayashi et al., The Plant Journal, 1997.


Resistencia a estrés abiótico – Proteínas LEA

Resistencia a la sequía en Leymus chinensis


transformada con el gen TaLEA3 de trigo

transgénica
35S TaLEA3 tnos

Contenido relativo de agua foliar

control

Wang et al., Biotechnol Lett (2009)


Foto tomada tras 6 semanas de sequía
Resistencia a estrés abiótico – Regulación de la
homeostasis de Na+ y K+ por la ruta SOS

El estrés por alta concentración de Na+ da lugar a una señal mediada por Ca2+ que activa el
complejo de kinasas SOS3-SOS2, el que a su vez estimula la actividad de intercambio Na+/H+
de SOS1 y regula la expresión de distintos genes a nivel transcripcional y post-transcripcional.
Resistencia a estrés salino en plantas de
Arabidopsis que sobreexpresan el gen NtSOS2
Zhu et al., 2021 Front. Plant Sci.| https://doi.org/10.3389/fpls.2021.716855

Plantas transgénicas (35S:NtSOS2) y control crecidas en


altas concentraciones de NaCl
Resistencia a estrés salino en plantas de arroz
que sobreexpresan el gen OsNHX1

Wild-type (no vectors and 97-1-29) and transgenic plants (95-3-2 and 95-4-12) were
grown in the presence of 0 (a), 0.05 (b) or 0.1 (c) M NaCl for 7 week

Plant and Cell Physiology, Volume 45, Issue 2, 15 February 2004, Pages 146–159, https://doi.org/10.1093/pcp/pch014
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Resistencia a estrés abiótico – Otros genes

Cambios en las propiedades de las


membranas en respuesta al frío

Los saturados (no dobles enlaces)


solidifican a temperaturas más altas que
los insaturados (por encima de 0º C)
Resistencia a frío en plantas de tabaco transformadas
con una desaturasa de patata o de cianobacteria
Transformada con Transformada con
desaturasa de patata desaturasa de
control cianobacteria

Craig et al., Transgenic Res (2008)

Fotografía de las plantas tras 13 días de


crecimiento en las condiciones indicadas.
Resistencia a frío mediante el uso de
proteínas anticongelantes (AFPs)
Resistencia a frío en plantas de tabaco transformadas
con un gen AFP de insecto
higromicina AFP insecto

Wanf et al.,Plant Cell Rep. 2008

Cold treatment experiment on wild-type


tobacco (left) and transgenic tobacco (right)
at -1 ºC. A, before cold treatment (25–
28C), B, cold treatment for 1 day, C, cold
treatment for 2 days, D, cold treatment for
3 days, E recovery for 5 days at 25–28C

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