Resistencia A Estres Abiotico PDF
Resistencia A Estres Abiotico PDF
Resistencia A Estres Abiotico PDF
Curso 2011
Departamento de Fisiologa, Biologa Molecular y Celular Facultad de Ciencias Exactas y Naturales Universidad de Buenos Aires
Sumario
Estreses abiticos Problemas y prdidas producidas por estreses abiticos Respuestas a estreses abiticos Solutos compatibles Estrategias para aislar genes de tolerancia a estreses abiticos en plantas Uso de genmica funcional para la bsqueda de genes de tolerancia a estreses abiticos Bsqueda de genes regulados por factores de transcripcin inducibles por estreses abiticos Ejemplos de tolerancia frente a diferentes estreses abiticos:
Solutos compatibles Bomba de Na+/H+ Sobrexpresin de citoquininas Factores de transcripcin Protenas LEA Citrato sintetasa
Agrobiotecnologa
Tolerancia a estreses abiticos
Referencias
Estreses abiticos
Las plantas son frecuentemente sometidas a estreses, condiciones externas que adversamente afectan su crecimiento, desarrollo o productividad. Los estreses pueden ser biticos, provocados por otros organismos, o abiticos, causados por condiciones desfavorables en el ambiente fsico o qumico. Los estreses disparan un amplio rango de respuestas en la planta, desde alteraciones en la expresin gentica y el metabolismo celular, a cambios en la tasa de crecimiento y rendimientos de los cultivos. La tolerancia o sensibilidad a los estreses depende de las especies, del genotipo y del estado de desarrollo de la planta.
Agrobiotecnologa
Tolerancia a estreses abiticos
Se espera que la poblacin mundial duplique su nmero para el ao 2050. En ese momento, la poblacin mundial alcanzar los 11.000 millones de personas, de las cuales el 90% residir en pases en desarrollo. La produccin de alimento deber duplicarse o triplicarse para entonces. En Latinoamrica slo el 7% del total de tierra es cultivable. Los esfuerzos por satisfacer las demandas de una poblacin en aumento han conducido al cultivo de suelos de pastoreo y, en algunos casos, de tierras forestales, as como tambin de tierras marginales (suelos salinos, cidos, etc.).
Agrobiotecnologa
Tolerancia a estreses abiticos
Agrobiotecnologa
Tolerancia a estreses abiticos
Muchas tierras cultivables se pierden debido al exceso de uso o al mal manejo de los suelos
La produccin alimentaria en aumento es el principal factor de presin ejercido sobre los recursos de la tierra. Esto acenta la degradacin de los suelos y conduce a fenmenos de desertificacin y prdida de los mismos. Ms de 3.500 millones de ha (25% de la superficie total) estn afectadas por la desertificacin a nivel mundial. En Sudamrica, la desertificacin afecta unos 250 millones de ha. Las principales causas de desertificacin son la salinidad y la sequa.
Agrobiotecnologa
Tolerancia a estreses abiticos
El acceso a la alimentacin de ms de 900 millones de personas corre peligro debido a que las tierras de las que dependen estn amenazadas por este problema.
Para aumentar la produccin agrcola y preservar los suelos se requiere implementar polticas sociales y econmicas de largo plazo, introducir nuevas formas de manejo agronmico e incrementar la investigacin cientfica y tecnolgica. Las aplicaciones biotecnolgicas, en particular el uso de cultivos transgnicos, prometen incrementar la produccin agrcola disminuyendo los costos de produccin.
Agrobiotecnologa
Tolerancia a estreses abiticos
El uso de plantas tolerantes a estreses abiticos podra permitir el uso y la recuperacin de tierras afectadas por salinidad, acidez, sequa, etc.
Rendimiento promedio (Kg/Ha) 4.600 1.880 1.610 2.830 1.720 2.050 28.300 42.600
Prdidas promedio (Kg/Ha) Biticasa 1.952 726 666 1.051 924 765 17.775 17.100 Abiticasb 12.700 11.900 5.120 16.200 7.960 8.590 50.900 61.300
Prdidas abiticas (% rend. max.) 65,8 82,1 69,3 80,6 75,1 75,4 54,1 50,7
Adaptado de: Buchanan, Gruissem and Jones. Biochemistry and Molecular Biology of Plants, 2000.
Los factores abiticos ambientales incluyen, pero no se limitan a, sequa, salinidad, inundacin, y altas y bajas temperaturas.
La incidencia de los factores ambientales sobre los rendimientos es mayor en las zonas tropicales
Tomado de: Chispeels y Sadava, Plants, Genes and Crop Biotechnology, 2003..
Rendimiento clima templado (Tm/ha) a Cultivo Papa Batata Arroz Maz Trigo Promedio 18,1 13,6 4,1 4,0 3,0 Rcord 126.0 (USA) 65,0 (USA) 10,5 (Japn) 22,2 (USA) 14,1 (USA)
Rendimiento clima tropical (Tm/ha) Promedio 8,7 6,9 2,0 1,4 1,4 Rcord 60,0 (Amrica Central) b --7,4 (Asia) b 12,9 (Zimbabwe) 10,3 (Asia, Zimbabwe, Amrica Central) 10,3 (Asia) 9,6 (Zimbabwe) 4,8 (Zimbabwe) 100
Sorgo
2,3 1,7
1,6 20,8
a Las zonas subtropicales y templadas se consideran templadas. Las zonas entre 23,5 latitud Norte y 23,5 latitud Sur se consideran tropicales. b Asia est representada por Filipinas, Thailandia e India. Centro Amrica est representada por Mxico y Colombia.
Agrobiotecnologa
Tolerancia a estreses abiticos
Agricultura
Industria
Uso domstico
El uso de agua en la agricultura se ha incrementado siguiendo una funcin lineal en los ltimos 70 aos
La creciente demanda de agua es uno de los problemas ms acuciantes que enfrentar la agricultura intensiva
Agrobiotecnologa
Tolerancia a estreses abiticos
Agrobiotecnologa
Tolerancia a estreses abiticos
Estas adaptaciones pueden ocurrir a nivel molecular, (expresin gnica y sntesis . proteica) o a nivel bioqumico . (sntesis de nuevos metaboltos), . lo que conduce a respuestas . celulares y fisiolgicas alteradas.
Tomado de: Grover et al., Current Science, 2001.
.
.
Adaptado de: Buchanan, Gruissem and Jones. Biochemistry and Molecular Biology of Plants, 2000.
Las plantas responden al estrs tanto a nivel celular como del conjunto de los tejidos. Los estreses constituyen seales ambientales que son percibidas y reconocidas por las plantas. Las seales son transducidas en las clulas y transmitidas a travs de la planta. Tpicamente, la transduccin de seales a nivel celular resulta en la alteracin de la expresin gentica, lo que a su vez influye sobre el metabolismo y el desarrollo de la planta.
Demarcacin funcional de las rutas de sealizacin de estreses inducidos por salinidad y sequa
Las rutas de sealizacin del estrs hdrico y salino son inducidas por exceso de Na+ o por cambios osmticos. Las rutas de sealizacin inica y osmtica derivan en la restauracin de la homeostasis a nivel celular y de la planta.
recepcin
Sensores:
histidina kinasa, canales ionicos, Hsfs, GPCR, RLKs
Seal de estrs
membrana plasmtica
MAPKKK
Ca2+
Ca2+
transduccin de seales
MAPKK
SOS3
MAPKK
Fosforilacin de protenas
SOS2
Factores de transcripcin
antioxidantes, osmolitos
Agrobiotecnologa
Tolerancia a estreses abiticos
Proteccin de macromolculas, reparacin de daos, homeostasis osmtica Proteccin celular, reparacin de daos, homeostasis osmtica
Transportadores inicos
homeostasis ionica
MPK, MPKK, MPKKK, : MAP quinasa, MAPK quinasa y MAPKK quinasa, respectivamente; CaM: Calmodulina; CDPK: protena quinasa dependiente de calcio; SOS3, SOS2: protena quinasas (Salt overly sensitive); LEA: protenas abundantes en la embriognesis tarda; Hsfs: factores de choque trmico; GPCR: receptor acoplado a protena G; RLKs: quinasas de tipo receptor
ABA
AREB/ABF (bZIP) NAC HDZF
DREB1D/CBF4 (AP2/ERF)
MYB
MYC
DREB2 (AP2/ERF)
DREB1/CBF (AP2/ERF)
MYBR
MYCR
ABRE
NACR
HDZR
DRE/CRT
Tolerancia a estrs
Adaptado de: Nakashima y Yamaguchi-Shinozaki, Abiotic stress adaptation in plants, 2010.
Los factores de transcripcin que controlan respuestas inducibles por estrs estn representados por elipses. Los elementos que actan en cis controlando la trascripcin inducida por el estrs estn representados como cajas. Los crculos pequeos sobre los factores de transcripcin representan modificaciones (tales como fosforilaciones) inducidas por el estrs que resultan en su activacin.
Agrobiotecnologa
Tolerancia a estreses abiticos
Adaptada de: Bohnert and Jensen, Trends in Biotechnology, 1996.
El esquema incluye tres espacios que estn definidos por la membrana plasmtica y el tonoplasto. Se muestran los efectos de la accin de protenas relacionadas con la tolerancia al dficit de H2O. El esquema se focaliza en los eventos bioqumicos y no incluye eventos de sealizacin o rutas que conducen a alterar la expresin gnica.
Solutos compatibles
Agrobiotecnologa
Tolerancia a estreses abiticos
turgencia
tensin
0 MPa
Dficit de H2O
Agrobiotecnologa
Tolerancia a estreses abiticos
Suelo
w = 1,2 MPa
Adaptado de: Buchanan, Gruissem and Jones, Biochemistry and Molecular Biology of Plants, 2000.
W : potencial de H2O W = S + P
El movimiento de agua hacia dentro o fuera de la clula depende del gradiente de potencial de agua (w) a travs de la membrana plasmtica
w externo = 0 MPa
Membrana plasmtica Valores intracelulares Pared celular Vacuola Rodeada por la membrana del tonoplasto
externo
> w
interno
Valores intracelulares
p =
0 MPa
Agrobiotecnologa
Tolerancia a estreses abiticos
externo
< w
interno
Adaptado de: Buchanan, Gruissem and Jones, Biochemistry and Molecular Biology of Plants, 2000.
Ajuste osmtico en una clula del mesfilo en una hoja de espinaca sometida a exceso de sal
Agrobiotecnologa
Adaptado de: Buchanan, Gruissem and Jones. Biochemistry and Molecular Biology of Plants, 2000.
Los iones de sodio y cloruro, que pueden interrumpir el metabolismo en el citoplasma, se concentran en la vacuola. Por el contrario, la concentracin de glicina-betana es alta en los cloroplastos y el citoplasma, pero baja en la vacuola.
Funciones sugeridas de compuestos que se producen en las plantas como respuesta al estrs hdrico
Grupo de productosa Iones Componente especfico Potasio Funciones sugeridas Ajuste osmtico, requisitos de macronutrientes, exclusin / exportacin de sodio Osmoproteccin Protenas relacionadas con patognesis Detoxificacin de radicales Ajuste osmtico Osmoprotector Ajuste osmtico Osmoprotector, reserva de carbono Reserva de carbono, ajuste osmtico Osmoprotector, ajuste osmtico Osmoprotector Osmoprotector Osmoprotector Proteccin contra la fotoinhibicin Balance inico, proteccin de la cromatina
Adaptado de: Bohnert and Jensen, Trends in Biotechnology, 1996. a
Protenas
LEA/dehidrinasb Osmotinab SOD/catalasa Prolina Ectona Sacarosa Fructanos Acclicos (ej., manitol) Cclicos (ej., pinitol) Glicina betana -alanina betana Dimetilsulfonio propionato Carotenoides, antocianinas, betalanas Espermina, espermidina
No todos los compuestos que se acumulan se encuentran en todas las especies; las rutas bioqumicas son especficas para rdenes y familias de plantas. Las LEAs (late-embryogenesis abundant proteins) y las dehidrinas, as como las protenas relacionadas con la patognesis, son ejemplos del reclutamiento de protenas con otra funcin en las respuestas de estrs abitico.
Espermina
Colina-O-sulfato
Adaptado de: Buchanan, Gruissem and Jones. Biochemistry and Molecular Biology of Plants, 2000.
Agrobiotecnologa
Tolerancia a estreses abiticos
Protena desnaturalizada: Protena intacta: molculas de H2O pocas molculas de H2O unidas rodeando a la protena en forma a la protena; alta entropa altamente ordenada; baja entropa
Adaptado de: Buchanan, Gruissem and Jones, Biochemistry and Molecular Biology of Plants, 2000.
Agrobiotecnologa
Tolerancia a estreses abiticos
estreses primarios
sequa salinidad polucin qumica frio calor
estreses secundarios
Disrrupcin de la homeostsis osmtica e inica; daos a protenas funcionales y estructurales y a membranas celulares
Osmosensores (ej., AtHK1), enzimas que clivan fosfolpidos (ej., PDL), segundos mensajeros (ej., Ca2+, PtdOH, ROS), MAP quinasas, sensores de Ca2+ (ej., SOS3), quinasas dependientes de Ca 2+ (ej., CDPKs)
Control transcripcional
Detoxificacin
(SOD, PX)
Chaperonas
(Hsp, SP1, LEA, COR)
Activacin gnica
Osmoproteccin
(prolina, glicina-betana, polioles azcares)
Movimiento de agua e iones (acuoporinas, transportadores de iones)
Agrobiotecnologa
Tolerancia a estreses abiticos
Restablecimiento de la homeostsis celular, proteccin funcional y estructural de protenas y membranas celulares
Tolerancia al estrs
ABF: ABRE binding factor; AtHK1: histidin quinasa 1 de Arabidopsis thaliana; bZIP: basic leucine zipper transcription factor; CBF/DREB: C-repeatbinding factor/dehidratationresponsive binding protein; CDPK: protein quinasa dependiente de Ca2+; COR: cold-responsive protein; Hsp: Heat-shock protein; LEA: late embryogenesis abundant; MAP: mitogen-activated protein; MYC/MYB: familias de actores de transcripcin PLD: fosfolipasa; Ptd-OH: cido fosfatdico; PX: peroxidasa; ROS: especies reactivas de oxgeno; SOS: salt overly sensitive SOD: superoxidodismutasa; SP1: stable protein 1
Transformacin gentica
Poliam inas
Metabolism o de carbono
La tolerancia adquirida al estrs puede ser incrementada modificando la expresin de genes y protenas o por la sobrexpresin de metabolitos asociados al estrs. La tolerancia es un carcter que depende de la actividad concertada de muchos genes, protenas y rutas metablicas. La tolerancia a los estreses abiticos puede desarrollarse por ingeniera gentica o mejoramiento asistido con marcadores moleculares y quantitative trait loci (QTLs).
Agrobiotecnologa
Tolerancia a estreses abiticos
Craterostigma plantagineum es una planta poiquilohdrica modelo para el estudio de tolerancia a la deshidratacin
Los dos azcares ms prominentes hallados en C. plantagineum son 2-octulosa y estaquiosa. 2-octulosa predomina en las hojas y es convertido en sacarosa durante la deshidratacin. Estaquiosa predomina en las races, tanto en condiciones normales como bajo deshidratacin
Arriba: C. plantagineum (Planta de la Resurreccin). Abajo: efecto de la deshidratacin. Planta totalmente trgida (izquierda); planta deshidratada (centro); planta hidratada por 12 h (derecha).
Thellungiella halophila es una planta halfila modelo para el estudio de la tolerancia a salinidad
Tomado de: Vinocur and Altman, Current Opinion in Biotechnology, 2005.
Thellingiella halophila es una pequea halfila altamente tolerante al estrs salino. Tiene un ciclo de vida corto y comparte muchas similitudes biolgicas y moleculares con Arabidopsis thaliana. La fotografa muestra plantas de T. halophila y A. thaliana cultivadas durante 7 das en medio saturado con 0, 200 y 600 mM de NaCl.
Thellungiella halophila es una planta halfila modelo para el estudio de la tolerancia a salinidad
Anlisis de la expresin gentica frente a estrs inducido por fro utilizando microarreglos de 1.300 genes de Arabidopsis. Los genes sealados en la imagen corresponden a controles positivos (rd29A), negativos (nAChRE) y a controles internos no inducibles (-tubulina). Se utilizaron sondas realizadas con ADNc de plantas estresadas y no estresadas con fro. La coloracin roja indica induccin gnica; la coloracin verde, inhibicin. Lo puntos en amarillo indican que no hay cambios en la expresin gnica.
Clasificacin de genes inducibles o reprimibles por fro, sequa y salinidad mediante anlisis con microordenamientos. Los nmeros entre parntesis (panel izquierdo) indican genes cuya induccin es mayor de cinco veces para el estrs en cuestin y menor de tres veces para los restantes.
Identificacin de genes de Arabidopsis thaliana inducidos por estreses de fro, sequa y salinidad
Anlisis por Northern blot para tres genes altamente inducibles por salinidad (RAFL08-19-G15), sequa (RAFL08-08-O14) y fro (RAFL04-12-P22). Se muestra la expresin de un gen constitutivo (RAFL05-14-L02) como control interno.
Identificacin de genes regulados por factores de transcripcin inducibles por estreses abiticos
Estrategia para identificar genes inducidos por fro y sequa que son blanco del factor de transcripcin DREB1A (Dehydration Responsive Element Binding Protein)
Agrobiotecnologa
Tolerancia a estreses abiticos
Los genes inducibles por fro y sequa fueron clasificados en dos grupos: los que son blancos de la accin de DREB1A y los que no son inducibles por este gen.
PCR en emulsin
300-400 pb
100 pb
75 pb
0,03-0,07 Mb/h
13 Mb/h
25 Mb/h
21-28 Mb/h
Pronunciado descenso en el costo de secuenciacin por base secuenciada Datos cualitativos (secuencia) y cuantitativos (abundancia de la secuencia) Posibilidad de incluir muchas situaciones por corrida
ARNm
ARNm
ADNc
ADNc
Secuenciacin masiva
Secuenciacin masiva
Agrobiotecnologa
Tolerancia a estreses abiticos
Agrobiotecnologa
Tolerancia a estreses abiticos
- Se transformaron plantas de tabaco con una construccin gentica que contena el gen mtlD de E. coli bajo el promotor de 35S de CaMV. - Se realizaron experiencias de crecimiento en medios de alta concentracin salina. - Se evalu la altura de la parte area y el peso fresco de las plantas. - Las plantas transgnicas toleraron mayores niveles de salinidad.
Glucosa 6-fosfato Fructosa Fructosa 1,6-difosfato
Fructosa 6-fosfato
Agrobiotecnologa
Tolerancia a estreses abiticos
mtlD
Manitol 1-fosfato
Manitol
NT NT T NT T
Plantas de tabaco transgnicas que acumulan manitol y plantas control a los 30 das de crecimiento en medio de cultivo conteniendo 250 mM de NaCl. NT: no transgnica; T: transgnica.
Races de plantas de tabaco que acumulan manitol y plantas control a los 30 das en medio de cultivo sin sales (izquierda) y conteniendo 250 mM de NaCl (derecha). NT: no transgnica; T: transgnica.
myo-inositol
imt1 Inositol O-metiltransferasa
D-Ononitol
oep1 Ononitol epimerasa
D-Pinitol
La ruta de sntesis de D-ononitol y D-pinitol a partir de glucosa 6-P es inducible por sequa y/o salinidad en varias familias de plantas halfilas. En la planta del hielo (Mesembryanthemun crystallinum) se ha demostrado la induccin coordinada de la transcripcin de inps1 y imt1. En cambio, inps1 no se induce bajo estrs y el gen imt1 no est presente en Arabidopsis thaliana.
Expresin constitutiva del gen de la mio-inositol O-metiltransferasa de Mesembryanthemum crystallinum en Nicotiana tabacum
mio-inositol
D-ononitol
Agrobiotecnologa
Tolerancia a estreses abiticos
Acumulacin de mio-inositol y D-ononitol en plantas de tabaco no transformadas (SR1) y en una lnea transgnica (I5A) transformada con el gen de imt1 de M. crystallinum en condiciones de carencia de riego. Las plantas fueron privadas de agua durante 8 das. Las plantas I5A exhibieron mayor tasa fotosinttica, mayor nivel de fijacin de CO2 y mayor recuperacin de la fotosntesis que los controles en condiciones de estrs .
betana aldehdo
glicina betana
BADH: betana aldehdo deshidrogenasa GSMT: glicina sarcosina metiltransferasa SDMT: sarcosina dimetiltransferasa
colina
betana aldehdo
glicina betana
Fd(red) / Fs(ox): ferredoxina en forma reducida u oxidada SAH: S-adenosilhomocistena SAM: S-adenosilmetionina
c) Arthrobacter globiformis
glicina betana
glicina
sarcosina
(N-metilglicina)
N,N-dimetilglicina
glicina betana
* La ruta de metilacin de la glicina fue identificada en dos microorganismos halfilos: Actinopolyspora halophila y Ectothiorhodospira halochocloris
Adaptado de: Murata and Chen Curr. Opin. Plant Biol., 2002.
codA
tnos
- El contenido de glicina-betana en hojas de plantas transgnicas aument respecto del control. - Las plantas transgnicas exhiben tolerancia al estrs salino y a altas y bajas temperaturas.
Contenido (mol g-1 peso fresco) Control Colina Glicinabetana 1,5 0,3 0,0 Lnea 1 1,4 0,3 0,9 0,2 Lnea 2 0,8 0,2 1,2 0,2 Lnea 3 1,0 0,3 0,8 0,3
3,0 0,3 3,0 0,2 0,2 0,0 2,5 0,3 0,1 0,0 0,8 0,1 0,0 0,2 0,0
3,0 0,3 3,0 0,2 2,0 0,1 2,2 0,1 0,1 0,0 0,7 0,1 0,1 0,0 0,2 0,0
Se hicieron germinar 5 semillas de plantas controles y 5 semillas de cada una de las lneas transgnicas en placas de Petri suplementadas con varias concentraciones de NaCl. Despus de incubar a 0oC por 2 das, las placas se incubaron a 22oC para permitir la germinacin y el crecimiento de plntulas. Se midi la altura total de las plantas desde el tope de la parte area hasta la punta de la raz a los 5 das de transferir las semillas a 22oC.
Tomado de : Hayashi et al., The Plant Journal, 1997.
Agrobiotecnologa
Tolerancia a estreses abiticos
5 cm
Se cultivaron plantas controles sin transformar y transgnicas en medio hidropnico por 30 das. Las plantas se transfirieron luego a medio suplementado con 200 mM de NaCl y se las incub por 10 das con luz.
Induccin de daos visibles en hojas de plantas controles y transgnicas por bajas temperaturas A B
Agrobiotecnologa
Tolerancia a estreses abiticos
Se cultivaron plantas transgnicas y controles durante 30 das y se las incub a 5oC bajo luz continua por 7 das. A continuacin, las plantas fueron incubadas en condiciones normales por 2 das.
Tolerancia a altas temperaturas en plantas de Arabidopsis thaliana que expresan el gen de colina oxidasa de Arthrobacter globiformis No transgnica
22 C 50 C 22 C
Transgnica
50 C
40 C
55 C
40 C
55 C
Tomado de: Alia et al., The Plant Journal, 1998.
Efecto de altas temperaturas durante la imbibicin y subsiguiente germinacin de semillas de plantas no transgnicas y transgnicas. La semillas fueron imbibidas a 22, 40, 50 y 55oC por 1 hora y luego sembradas en placas. Luego de incubarlas a 4oC por 2 das, las semillas fueron mantenidas a 22oC por 3 das.
Comportamiento frente a distintas formas de estrs de plantas modificadas para sobrexpresar glicina betana
Especies
Arabidopsis thaliana
Gen
codA codA codA codA codA codA cox cox codA codA cox betA betA / betB codA betA (modificado)
Acumulacin mxima
1,2 mol g 1 pf 1,2 mol g 1 pf 1,2 mol g 1 pf 1,2 mol g 1 pf 1,2 mol g 1 pf 1,2 mol g 1 pf 19 mol g 1 ps 13 mol g 1 ps 0,82 mol g 1 pf 0,3 mol g 1 pf 13 mol g 1 ps * 0,035 mol g 1 pf 5,3 mol g 1 pf 5,0 mol g 1 pf
Tolerancia aumentada
Fro Fro, salinidad Calor Luz intensa Salinidad Heladas Heladas, salinidad Sequa, salinidad Salinidad Salinidad Salinidad Salinidad Fro, salinidad Fro, salinidad Sequa, salinidad
Oryza sativa
* No se dispone de datos Adaptado de: Chen and Murata, Curr. Opin. Plant Biol., 2002. codA: gen de colina oxidas de E. coli; cox: gen de colina colina oxidasa de A. globiformis; BetA y BetB: genes de betana deshidrogenasa y de betana aldehido deshidrogenasa de E. coli;
Tolerancia frente a distintas formas de estrs de plantas modificadas para producir otros solutos compatibles
Solutos compatibles Fructano Gen sacB sacB mt1D mt1D mt1D mt1D imt1 Anti-proDH P5CF127A S6PDH TPS1 TPS1 TPS1 otsA, otsB Planta hospedadora Tabaco Remolacha azucarera Arabidopsis Tabaco Tabaco Tabaco Tabaco Arabidopsis Tabaco Caqui Tabaco Papa Tabaco Tabaco Acumulacin mxima 0,35 mg g 1 pf 0,5 % ps 10 mol g 1 pf 6 mol g 1 pf 3,8 mg g 1 ps 7 mol g 1 pf 35 mol g 1 pf 600 g g 1 pf 4 mg g 1 pf 61,5 mol g 1 pf 3,2 mg g 1 ps * * 90 g g 1 pf Tolerancia aumentada Sequa Sequa Salinidad Salinidad Salinidad Estrs oxidativo Sequa, salinidad Heladas, salinidad Salinidad Salinidad Sequa Sequa Sequa Sequa
Manitol
Adaptado de: Chen and Murata, Curr. Opin. Plant Biol., 2002.. * No se dispone de datos Anti-proDH: ADNc antisentido del gen de prolina deshidrogenasa de A. thaliana; imt: gen de myo-inositol O-metil transferasa de M. crystallinum; mt1D: gen de la manitol-1-fosfato deshidrogenasa de E. coli; otsA y otsB: genes de trehalosa-6-fosfato sintetasa y de treahalosa-6-fosfato fosfatasa de E. coli; P5CS: gen de -pirrolina-5-carboxilato sintetasa de V. aconitifolia; P5CF127A: gen mutado de -pirrolina-5-carboxilato sintetasa de V. aconitifolia; SacB: gen de la levanosacarasa de B. subtilis; S6PDH: gen de la sorbitol-6-fosfato deshidrogenasa de manzano; TPS1: gen de la trehalosa-6-fosfato sintetasa de levadura.
Agrobiotecnologa
Tolerancia a estreses abiticos
exportacin
compartimentalizacin
exclusin
Agrobiotecnologa
Tolerancia a estreses abiticos
Adaptado de: Zhu. Annual Review in Plant Biology, 2002.
El estrs por alta concentracin de Na+ da lugar a una seal mediada por Ca2+ que activa el complejo de kinasas SOS3-SOS2, el que a su vez estimula la actividad de intercambio Na+/H+ de SOS1 y regula la expresin de distintos genes a nivel transcripcional y post-transcripcional.
Tolerancia a estrs salino en plantas de tomate transformadas con el gen nhx1 de la bomba vacuolar de Na+/H+ de Arabidopsis thaliana
A B
Tomado de: Zhang and Blumwald. Nature Biotechnology, 2001
Tolerancia a estrs salino en plantas de Brassica napus transformadas con el gen nhx1 de la bomba vacuolar de Na+/H+ de Arabidopsis thaliana
Plantas transgnicas y control crecidas en 200 mM de NaCl
Tomado de: Zhang et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2001.
X1OE1
X1OE2
X1OE3
Controles
Las diferentes lneas transgnicas presentan niveles de expresin X1OE1: nivel alto; X1OE2: nivel medio; X1OE3: nivel bajo
Tolerancia a estrs salino en plantas de Paspalum dilatatum transformadas con el gen nhx1 de Arabidopsis thaliana
Se transformaron plantas de P. dilatatum con una construccin que permite expresar el gen nhx1 de A. thaliana en forma constitutiva
WT
WT
Texto: Arial 24
Gentileza: Ing. Agr. G. Schrauf
Agrobiotecnologa
Tolerancia a estreses abiticos
Tolerancia a estrs hdrico en tabaco transformado con el gen ipt bajo un promotor inducible por senescencia
La salinidad y la sequa aceleran el proceso de . senescencia en las plantas. Bajo un estrs no letal, las plantas tienden a florecer . ms rpidamente. El estrs modifica la relacin fuente/sumidero Las citoquininas retrasan el proceso de senescencia
El retraso de la senescencia originada por el estrs puede proveer mecanismos de supervivencia mediante la activacin de mecanismos de evasin (regulacin del turn-over proteico, mayor eficiencia en el uso de agua, consumo de nutrientes de almacenamiento, retraso de la floracin inducida por estrs) Se expres un gen de la enzima isopentenil transferasa (IPT) bajo un promotor inducible por senescencia para mantener niveles ptimos de citoquininas y retrasar el estrs inducido por este proceso. La IPT es el factor limitante de la biosntesis de citoquininas.
Agrobiotecnologa
Tolerancia a estreses abiticos
El promotor utilizado proviene del gen de una quinasa tipo receptor asociada a senescencia (SARK) de Phaseolus vulgaris. El gen SARK es inducido por este proceso.
SARK
IPT
Tolerancia a estrs hdrico en tabaco transformado con el gen ipt bajo un promotor inducible por senescencia
No transgnica
Transgnica
Agrobiotecnologa
Tolerancia a estreses abiticos
Fila superior: sin riego segunda semana Fila inferior: riego restaurado, tercera semana
Tolerancia a estrs hdrico en tabaco transformado con el gen ipt bajo un promotor inducible por senescencia
La tolerancia a estrs hdrico puede visualizarse como un carcter de productividad en condiciones de escasez de agua
Agrobiotecnologa
Tolerancia a estreses abiticos
Plantas transgnicas y control cultivadas en condiciones de riego diario normal (derecha) y bajo 30% del riego diario normal (izquierda)
Tolerancia a estrs hdrico en tabaco transformado con el gen ipt bajo un promotor inducible por senescencia
Produccin de semillas
semillas /planta
Agrobiotecnologa
Tolerancia a estreses abiticos
1 L/da
0,3 L/da
Sequa
Agrobiotecnologa
Tolerancia a estreses abiticos
Transformacin de plantas de Arabidopsis thaliana con el gen del factor de transcripcin Hahb-4 de girasol
La disponibilidad de agua regula la expresin del gen hahb-4 en los diferentes rganos de la planta
Agrobiotecnologa
Tolerancia a estreses abiticos
Hahb-4 es un factor de transcripcin de girasol que pertenece a la familia Hd-Zip. Los factores de este tipo contienen un dominio de unin a ADN asociado con un cierre de leucinas y estaran involucrados en procesos del desarrollo vinculados a factores ambientales.
Transformacin de plantas de Arabidopsis thaliana con el gen del factor de transcripcin Hahb-4 de girasol
Plantas transformadas con el gen Hahb-4 (derecha ) y no transgnicas (izquierda) sometidas a sequa.
Gentileza Dr. R. Chan
Transformacin de plantas de Arabidopsis thaliana con el gen del factor de transcripcin Hahb-4 de girasol
WT
WT
Agrobiotecnologa
Tolerancia a estreses abiticos
Las mismas plantas que en el panel superior a las 24 h de resumido el riego normal
WT
WT
Ensayos de campo con plantas de trigo transformadas con el gen Hahb-4 de girasol
4000 Yield (kg ha-1) 3000 a 2000 1000 0
Ta .IV .ii .a .1 2 Ty pe Ta .IV . ii .a .3 Ta .IV . ii .a .4 Ta .IV . ii .a .6 BI 3
Ta.IV.ii.a.12
Villalonga
ab
b ab ab a
39 5451S 62 3712W
Villalonga
2000
ild
Monte Buey
1500
32 5508S 62 2728W
1000
500
Monte Buey
Wild type
Ta.IV.ii.a.3
Ta.IV.ii.a.4
Ta.IV.ii.a.6
00 4
Agrobiotecnologa
Tolerancia a estreses abiticos
Sobreexpresin del gen hva1 de cebada (Hordeum vulgare L.) en plantas transgnicas de arroz
Se transformaron plantas de arroz con el gen hva1 de cebada que codifica una protena LEA (Late Embryogenesis Abundant). La secuencia se puso bajo la direccin del promotor de actina de arroz. Las plantas transgnicas exhibieron mayor crecimiento de hojas y races en condiciones de estrs.
Agrobiotecnologa
Tolerancia a estreses abiticos
Tomado de: Xu et al., Plant Physiol., 1996.
Planta control no transgnica (NT) y dos lneas transgnicas (36, 41) que fueron sometidas a tres ciclos consecutivos de estrs hdrico de 7 das cada uno, consistentes en 5 das sin riego seguidos por 2 das con riego.
Agrobiotecnologa
Tolerancia a estreses abiticos
Tolerancia a aluminio en plantas de tabaco transformadas con el gen de citrato sintetasa de Pseudomonas aeruginosa
- Los suelos cidos y con alta concentracin de aluminio resultan txicos para las races, las cuales no son capaces de desarrollarse y absorber los nutrientes disponibles. - El exudado de cidos orgnicos produce la quelacin del aluminio produciendo tolerancia al mismo. - Se transformaron plantas de Nicotiana tabacum con una construccin que contiene el gen de citrato sintetasa (csb) de la bacteria Pseudomonas aeruginosa dirigido por el promotor 35S de CaMV. - Se cuantificaron los niveles de citrato en la planta y del exudado por las races, en races transgnicas con CSb y controles sin transformar.
Lnea
Control CSb-4 CSb-11 CSb-15 CSb-18
0,43 0,05 1,41 0,07 1,62 0,08 2,31 0,10 4,47 0,35
Tolerancia a aluminio en plantas de tabaco transformadas con el gen de citrato sintetasa de Pseudomonas aeruginosa
A B
A: Plantas controles germinadas en medio con (derecha) y sin (izquierda) 300 M de aluminio, 2 semanas post-germinacin. B y C: Plantas controles (B) y CSb-18 (C) germinadas en medio conteniendo 0, 75, 300 y 1000 M de aluminio, 10 das post-germinacin. D y E: Plntulas CSb-4 y CSb-18 de una semana germinadas en 200 M de aluminio. H: Segregacin del fenotipo de tolerancia a aluminio en la progenie de CSb-18 luego de 4 semanas de crecimiento en medio con 300 M de aluminio. Las flechas indican las plntulas susceptibles. F, G, I y J: Tincin con hematoxilina de los pelos y la punta de las races de plntulas de 7 das tratadas por 1 h con 100 M de aluminio. (F) y (I) son controles y (G) y (J) plntulas CSb-18.
Tomado de: de la Fuente et al., Science, 1997.
Tolerancia a aluminio en plantas de papaya transformadas con el gen de citrato sintetasa de Pseudomonas aeruginosa
Agrobiotecnologa
Tolerancia a estreses abiticos
Plantas de papaya (Carica papaya) control y transformadas con el gen csb a los 30 das de cultivo en presencia de 300 M de aluminio. Izquierda: planta de papaya transgnica; derecha: planta transformada con el vector vaco.
Incremento de la captacin de fsforo en plantas de tabaco que expresan el gen de la citrato sintetasa de Pseudomonas aeruginosa
En suelos alcalinos (compuestos fosforados con calcio y magnesio) y cidos (compuestos fosforados con hierro y aluminio) la disponibilidad de fsforo soluble es baja. El exudado de cidos orgnicos por parte de las races aumenta su disponibilidad. Se introdujo en plantas de tabaco el gen de citrato sintetasa de Pseudomonas aeruginosa bajo el promotor 35S de CaMV. Las plantas que expresaron la citrato sintetasa fueron capaces de solubilizar y absorber el fsforo inmovilizado en suelos alcalinos. actividad CS (mg CoA min-1mg-1 protena) 225 11 430 14 595 18 eflujo de citrato (nmol por plntula por hora) 57 7,2 105 12,2 231 15,3
Tomado de: Lpez-Bucio et al., Nature Biotechnology, 2000.
Incremento de la captacin de fsforo en plantas de tabaco que expresan el gen de la citrato sintetasa de Pseudomonas aeruginosa
A B C
Crecimiento y productividad de lneas de tabaco CSb sometidas a distintos tratamientos con fsforo. Se cultivaron plantas transgnicas (CSb-4 y CSb-18) y control (1522) en suelo alcalino estril de bajo contenido de fsforo, con o sin agregado de fsforo. Las plantas fueron fotografiadas luego de 4 meses en el invernculo.
1522 A
CS-4
CS-18
B1522
CS-4
CS-18
1522 CS-4
CS-18
1522
CS-4
CS-18
D: Frutos de plantas cultivada con 22 ppm de PO4H2Na E: Vista superior de una maceta conteniendo la planta CSb-18 en que se observan precipitados de citrato de calcio (flechas). F-H: Tincin de races de la planta CSb18 con Tryptan blue. F: planta no inoculada. G y H: planta inoculada con la micorriza Glomus fasciculatum
H
Tomado de: Lpez-Bucio et al., Nature Biotechnology, 2000.
Incremento de la captacin de fsforo en plantas de tabaco que expresan el gen de la citrato sintetasa de Pseudomonas aeruginosa
Efecto de citrato en la acumulacin de biomasa de plantas de tabaco cultivadas en medio conteniendo una fuente insoluble de fosfato Se cultivaron plantas transgnicas (CSb-4 y CSb-18) y control (1522) en medio (pH 8,0) suplementado o no con 1 mM de cido ctrico. Las fuentes soluble e insoluble de fosfato (PO4H2Na y Ca10(PO4)6(OH)2) se ajustaron a 1 mM. Las plntulas se cosecharon a los 15 das y se determin el peso seco. Datos promedio de tres experimentos independientes.
Tomado de: Lpez-Bucio et al., Nature Biotechnology, 2000.
Sin
Referencias
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Agrobiotecnologa
Tolerancia a estreses abiticos
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