DESARROLLO DE

INCULO

INCULO
Crecimiento

Microorganismos

Propagacin

Ser vivo

Medio de cultivo

Inculo:

Cantidad de microorganismos o clulas

capaz de garantizar, las condiciones econmicas y de
fermentacin en un volumen dado el mosto.

Volume til del fermentador = V

Volume de inculo = 0,005.V a
0,5.V

0,5 a 50%

El valor, depende del organismo, del tipo de

medio, del proceso de que se trate, etc., se
debe
definir
previamente
experimentalmente

INCULO
EN LA INDUSTRIA

Estado lquido
(acuosos u oleosos)

Estado slido
Polvo o granular

ETAPAS PARA PREPARAR

EL INCULO
Reactivaci
n de la
cepa
Crecimiento en
medio
slido/lquido
Crecimiento en
medio lquido

DESARROLLO DE INCULO
Cultivo preservado se reactiva en medio lquido o
en medio slido.
Segn el mtodo de preservacin se requerir
tiempo para la recuperacin del cultivo.
Sucesivamente se ir incrementando el volumen
del recipiente de cultivo, para conseguir la
velocidad de crecimiento adecuada.

DESARROLLO DE INCULO
Es vital ir incrementando el volumen para que a
escala industrial se alcancen los resultados
ptimos.
Si el nmero de clulas no es el adecuado, la
produccin no ser ptima Adems, si crece en
condiciones diferentes a como crecer despus
(industrialmente), existir una fase de latencia en
el fermentador, reduciendo la rentabilidad.

Etapas del
desarrollo del
inculo

1.
Reactivacin
de la cepa.

2. Crecimiento
del
microorganismo
en medio slido

3. Crecimiento del
microorganismo
en un medio de
cultivo liquido

Inculo

Esquema de un fermentador tpico para

cultivo
en
suspensin
con
microorganismos o clulas animales.

Caractersticas de los
inculos microbianos
utilizados en
bioprocesos industriales

Antibiti
cos

Fuent
e

Enzim
as
Cepas
silvestres/
Colecciones

Aminoci
dos
Otras
sustanci
as

LA CANTIDAD DEL INCULO

REQUERIDA PARA EL PROCESO DE
FERMENTACIN:
la cantidad del inculo que se prepara
y se agrega, en la mayora de los
casos, es el 10% del volumen total
del trabajo.

LA CONCENTRACIN DE
MICROORGANISMOS EN EL
INCULO:
Cuando el producto deseado es la
biomasa,
la
concentracin
de
microorganismos
representa
la
eficiencia del proceso.
Si el inters va dirigido hacia los
metabolitos, el mismo parmetro es
una medida indirecta de su produccin.

Factores a considerar:
Concentracin de clulas Alcanzado (inculo)
Concentracin celular inicial (fermentacin)
Concentracin inicial sustrato Requerido
Volumen
y
nmero
de
fermentadores
disponibles
Fase de crecimiento apropiado
Influencia de la cantidad de transferencias
sobre el crecimiento y formacin de producto

Tipos de inculo, a nivel de:

Laboratorio (para investigacin y en la
etapa temprana de la escala industrial)
Produccin industrial

IMPORTANCIA
DEL
DESARROLLO DE
INCULOS

IMPORTANCIA DEL DESARROLLO

DE INCULOS

Para la elaboracin de procesos

fermentativos .
En la industria de los alimentos,
panadera, lcteos y otros.
Para la optimizacin de los
resultados en los procesos
biotecnolgicos.
En la Comercializacin como

Desarrollo de inculos microbianos

empleando lodos activados para la
remocin de acido sulfhdrico (H2S)
mediante biofiltracin
Desarrollo de inculos para la
determinacin de la DBO:
Desarrollo de inculos de
microorganismos lcticos y levaduras
para la nutricin y alimentacin
animal

PREPARACIN DEL INCULO:

El cultivo lctico para yogurt, est constituido por una
combinacin
de
Streptococcus
thermophilus
y
Lactobacillus
bulgaricus
al
50%;
estos
dos
microorganismos crecen en simbiosis y ambos son
responsables de la fermentacin lctica de la leche. Para
obtener un buen yogurt, es importante mantener el
balance en producciones sucesivas.
- Los tratamientos severos de temperatura podra inhibir
el crecimiento de ST y favorecer el crecimiento de LB.
El tratamiento a 90C durante algunos minutos inactiva
bacterifagos presentes en la leche. Se prefiere utilizar
leche descremada en lugar de leche desengrasada para
aumentar los slidos en el medio de cultivo.
- Las plantas deben trabajar cercanamente con los
distribuidores de los cultivos a fin de monitorear a los
fagos.

Desarrollo de inculo para la produccin de metabolitos secundarios

METABOLITOS SECUNDARIOS
Son molculas sintetizadas por determinados
microorganismos, normalmente en una fase
tarda de su ciclo de crecimiento.

Caractersticas

No son necesarios
para el crecimiento
del microorganismo
que los produce.

Cada
uno
de
estos
productos es producido
por
un
grupo
muy
reducido de organismos.

La
produccin
puede
perderse
fcilmente
por
mutacin
espontnea.

Desarrollo de inculo para la produccin de metabolitos secundarios

Los metabolitos secundarios se sintetizan normalmente en
idiofase (fase estacionaria)

Ejemplos:
Antibiticos
toxinas
(micotoxinas)
Alcaloides
(cido
lisrgico)
Factores de
crecimiento
vegetal
(giberelinas)
Pigmentos.

CONSERVACIN DEL INCULO

El problema de trabajar con microorganismos
es su corto tiempo de vida, ya para trabajar
con ellos son necesarias sucesivas
generaciones que se mantengan idnticas
entre s. Esto puede presentar una serie de
problemas.
La conservacin de cepas de produccin en
un perodo largo de tiempo es un
requerimiento bsico para la fermentacin
industrial.
El objetivo no ser solo la supervivencia del
organismo, sino que este mantenga sus
capacidades de produccin despus de la

FORMAS DE
CUANTIFICAR EL
INCULO

FORMAS DE CUANTIFICAR EL INCULO

Existen varios mtodos para medir la

concentracin de microorganismo, los
mas comunes son:
A. La determinacin del nmero de
clulas
B. Determinacin de la masa celular
o biomasa

A. La determinacin del
nmero de clulas
1. Mtodos directos :
Cuenta total microscpica (Cmara de
Neubauer, de Petroff, mtodo de Breed)
Cuenta viable (en placa, cuenta en tubo
de Hungate, tincin con azul de tripano)

Cmara de Neubauer

Recuento en placa

A. La determinacin del nmero

de clulas
2. Mtodos indirectos:
Espectrofotometra
Nefelometra
Numero ms probable (NMP)

Determinacin por Nefelometra

B. Determinacin de la masa celular

1. Mtodos directos
Peso seco
Extraccin Filtracin
Pesado
Peso hmedo
Volumen hmedo

Desecador

B. Determinacin de la masa celular

2. Mtodos indirectos
Determinacin de Nitrgeno total:
Tcnica de micro-Kjeldahl
Espectrofotometra
Radiacin IR

Espectrofotometra

Cuanto
mayor es el
nmero de
clulas en
suspensin,
tanto menor
es el
porcentaje de
luz que
atraviesa el
medio.

GRACI
AS

Materia
orgnica

BIOGAS

Pequeas
cantidades de
hidrgeno (H),
sulfuro de
hidrgeno (SH2 )
y nitrgeno (N)

Amplio espectro a los

excrementos animales y
humanos
Aguas residuales orgnicas
de las industrias
(produccin de alcohol,
procesado de frutas,
verduras, lcteos, carnes,
alimenticias en general)
Restos de cosechas

fermentacin
anaerobia

Dixido de
carbono (CO2 )

CONSORCIO:
3 grupos de
microorganis
mos
anaerobios

Microorganis
mos en
relacin
simbitica
Metano (CH4)

 La diversidad microbiana en los digestores de

biogs es tan grande como la del rumen, donde se
han reportado diecisiete especies de bacterias
fermentativas que juegan un importante papel para
la produccin de biogs.

 Inculo del Biogs: Excremento de animales

conteniendo diferentes grupos de microorganismos,
por ejemplo las excretas de animales.
Dado las notables diferencias de textura en algunas
excretas, se tiene que aadir agua hasta lograrla
disolucin aproximada de los slidos en la mezcla,
para la activacin del inculo
Activacin: se disuelve en agua en una relacin
estircol agua de 1:3. Luego se homogeniza la
mezcla con la ayuda de una varilla de madera.
Antes de ingresarlo al biodigestor, se realiza un
simple filtrado para evitar que entren slidos muy
grandes y ocasionen la formacin de costras sobre
los lodos y evite la liberacin del biogs.

Condiciones del inculo:

Ausencia de oxgeno disuelto e
inhibidores
pH de 6.8 a 7.5.
Mezclado
Presencia suficiente de nutrientes
Slidos totales.
Contenido de agua
Relacin Carbono/Nitrgeno

DESARROLLO DE
INCULO DE Bacillus sp.
PARA LA PRODUCCIN
DE AMILASAS

 FUENTE DE INCULO:
- Criopreservacin de un cultivo de Bacillus sp.:
Las cepas aisladas y seleccionadas se inoculan en un medio
mnimo e incubada a 37C con agitacin orbital a 250 RPM
hasta alcanzar una OD de 0.6 a 1.0, posteriormente las
bacterias son centrifugadas descartando el sobrenadante y
resuspendidas en medio mnimo con glicerol 10%, y se
almacenan en viales en nitrgeno lquido.
Almacenamiento en
nitrgeno lquido
PRODUCCION DE BIOMASA
Cultivo de Bacillus sp.

-80 a -196C

CEPAS
CARACTERIZADAS

Cepa de B. subtilis BSR6 (nprE,

amy, hisA, glyB, aprE::lacZ, CmR;
Jan et al., 2000).
*BSR6 es una derivada de la cepa 168 y
tiene una fusin transcripcional aprElacZ integrada en el locus amyE de B.
subtilis (amyE::pTTGACA cat)

 DESARROLLO DE INOCULO
A) ACTIVACIN DE INCULO:
Placas con Agar Luria Bertani (LB), las
cuales fueron inoculadas con diluciones de
las bacterias criopreservadas permitiendo
la formacin de colonias aisladas.

Microorganismo
criopreservado

Diluciones

Medio LB

B) PROPAGACIN DE INCULO:
Se toma una colonia aislada de una
placa con medio LB y esta se inocula en
50 ml de medio LB (en matraz
Erlenmeyer de 250 mL), el cultivo es
incubado a 37C con agitacin orbital a
250 rpm,14 horas hasta alcanzar una
O.D. de hasta 2.0. Luego las bacterias
son centrifugadas y resuspendidas en
10 mL de caldo LB.

Colonias aisladas de Bacillus sp.

Cultivo de Propagacin Cultivo resuspendido

 Medio Luria Bertani (LB):

-NaCl ..10 gr.
-Bacto-Triptona 10 gr.
-Extracto de levadura 5 gr.
Aforando a 1000 mL con agua destilada con un pH ajustado a 7.0.
Agar a una concentracin de 1.5% fue utilizado en medio slido.

Otros medios de Propagacin:

- Medio de cultivo (g/L): Pectina, 2; Extracto de
levadura, 1; Peptona de carne, 10; Peptona de soja, 10;
KH2PO4, 0,2; CaCl2, 0,05; (NH4)2SO4, 3; MgSO4,
0,8;MnSO4.6H2O, 0,05; FeSO4.7H20, 0,015; pH 5,0.
- Medio Basal: caldo nutritivo, 0.8; extracto de
levadura, 0.3; almidn soluble, 0.2; KH2P04, 0.1 y
K2HP04, 0.3

DESARROLLO DE
INCULO DE A. niger
PARA LA PRODUCCIN
DE CIDO CTRICO

Fuente de inculo:
La conservacin de esporas de Aspergillus
niger se lleva a cabo mediante:
-Congelacin (-18C -196C en Nitrog.
lquido),
- Secado en suelo estril o
- Liofilizacin.
Estas tcnicas de conservacin, se usan con
xito para pequeas cantidades de esporas,
pero el elevado costo del equipo y
funcionamiento, las hacen de uso limitado
para escalas mayores.

Mtodo de conservacin con aceite

mineral
Mtodo usado cuando la criopreservacin y la
liofilizacin no resultan econmicas.
Consiste en recubrir con aceite mineral estril un
cultivo que se encuentre en condiciones optimas
de crecimiento, generalmente de usa aceite
mineral de alta calidad de grado medicinal.

Desarrollo del inculo:

A)ACTIVACIN DEL INCULO:
Se usa de preferencia caldo de papa dextrosa
(PD),
sembrando
una
cantidad
de
microorganismo liofilizado en 50 ml de PD (5
das a 30C ) en un shaker orbital con 150 rpm.
Despus de activada la cepa, se siembra
nuevamente el microorganismo en medio slido
(PDA), mantenindolo a 30C por 5 das hasta
que se formen las esporas.

Al cabo del tiempo de incubacin y

habiendo
esporulado
el
microorganismo, se guarda para su
conservacin a 4 C.
De las cajas de Petri refrigeradas se
preparan suspensiones de esporas con
una concentracin aproximada de 2 x
107 esporas/mL con el fin de favorecer
la formacin de pellets.

Conservacin del cultivo

Activacin del inculo

DESARROLLO DEL
INOCULO
SEMINARIO 1
BIOTECNOLOGIA

Desarrollo del inculo

Las tcnicas biotecnolgicas consisten en
la manipulacin de los organismos,
fundamentalmente a escala gentica, para
usos especficos. En esos conceptos est
comprendida la biotecnologa tradicional y
la denominada biotecnologa moderna en
la que la tecnologa del ADN recombinante
(tambin llamada ingeniera gentica) se
ha convertido en parte central de la misma.

 En el proceso de obtencin del producto deseado, los

sistemas biolgicos actan como catalizadores de la reaccin
propiciando que sta se lleve a cabo en condiciones ptimas
y con el mayor rendimiento. Los sistemas biolgicos usados
son: microorganismos, cultivos celulares, enzimas o esporas.
De todos ellos destacan los microorganismos debido a dos
razones fundamentales: su elevada diversidad y plasticidad
metablica y la sencillez y economa de su cultivo.
La operacin tiene dos fases: la de preparacin, incluyendo la
fermentacin, y la de obtencin del producto.

 Los aspectos clave de esta etapa consisten en:

la localizacin de un microorganismo de inters
industrial. Normalmente ese microorganismo
provendr de colecciones o bien de las cepas
salvajes existentes en la naturaleza

 La produccin de bioetanol, es un ejemplo de

mucho inters. La materia prima usada en la
fermentacin
para
producirlo
consiste
tpicamente en una mezcla de hexosas y
pentosas. Por tanto el bioetanol es el producto
de la transformacin de una mezcla de sustratos
mediante microorganismos.

 Cuando un microorganismo crece en presencia de al

menos dos sustratos, uno de ellos es normalmente
agotado primero, lo que resulta en un cambio en la
pendiente de la curva de crecimiento de biomasa. La
poblacin de levaduras usadas en la produccin de
bioetanol, a escala industrial, puede variar de acuerdo
con las condiciones particulares del proceso de cada
planta as como del estrs que el ambiente fermentativo
impone a los consorcios de microorganismos. Por ello, las
levaduras aisladas de una industria en particular pueden
estar adaptadas a dichas condiciones y por tanto son
mejores para ese proceso que una cepa comercial pura.

 Propagacin:

Manejo: Direccin y gobierno de un negocio.

En microbiologa hace referencia a dirigir una
secuencia correcta de un procedimiento o
proceso.

 cultivo preservado se reactiva en medio lquido en agitacin

o en medio slido, en condiciones adecuadas para la
fermentacin posterior. Segn el mtodo de preservacin se
requerir ms o menos tiempo para la recuperacin del
cultivo. Sucesivamente se ir incrementando el volumen del
recipiente de cultivo, para conseguir la velocidad de
crecimiento adecuada. Es vital ir incrementando el volumen
para que a escala industrial se alcancen los resultados
ptimos. Si el nmero de clulas no est en el nmero
adecuado, la produccin no ser adecuada. Adems, si crece
en condiciones diferentes a como crecer despus, existir
una fase de latencia en el fermentador, reduciendo la
rentabilidad.

 Inculo: Suspensin de microorganismos que se

transfieren a un ser vivo o a un medio de cultivo a
travs de la inoculacin.
Por otra parte:
Un inoculo microbiano es una preparacin solida o
lquida la cual contiene una gran cantidad de
microorganismos.

Crecimiento: Dicho de un ser orgnico: Tomar aumento

natural (se dice principalmente de la estatura).
En microbiologa, la palabra crecimiento se define como
un incremento en el nmero de clulas.

Preparacin del inculo.

Conservac
in

Microorgani
smos
viables

Mtodos de conservacin.
Resiembra:

La
Desecaci
n
Consiste en remover el agua celular e
impedir la rehidratacin de las clulas
de los microorganismos.

La congelacin:

La
liofilizaci
n
Es la remocin de agua de clulas
congeladas a presin reducida
(sublimacin).

Fase de laboratrio Fase industrial

Fases de produccion de

DESARROLLO DE INCULO

http://www.powershow.com/view4/5f5c84ZGRkN/CRESCIMENTO_MICROBIANO_powerpoint_ppt_present
ation

http://www.powershow.com/view4/5f5c84ZGRkN/CRESCIMENTO_MICROBIANO_powerpoint_ppt_present
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DESARROLLO DE
INCULO

DESARROLLO DE INCULO