LA VALIDACIN DE MTODOS

SAUL PEARANDA QUIMIOSOFT SAS

LA VALIDACIN DE MTODOS UN ENFOQUE PRCTICO

La validacin ha sido objeto de atencin por ser requerida en normas sobre sistemas de gestin de la calidad [ISO 9001], sobre software y particularmente en la norma ISO 17025 sobre requisitos generales para laboratorios de calibracin y ensayo.

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La aplicabilidad del requisito sobre validacin de mtodos, particularmente en ISO 17025, es frecuentemente materia de controversia dado que cabe la interpretacin de que cuando se menciona o se describe un mtodo en una norma, entonces denominado mtodo normalizado, no es ya necesaria la validacin del mismo. Por otro lado y tambin en muchas ocasiones, los evaluadores de laboratorios exigen el cumplimiento del requisito de validacin cuando es suficiente la demostracin de la capacidad del evaluado para aplicar un mtodo suficientemente validado (mtodos normalizado).

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QU ES LA VALIDACIN DE UN MTODO? La versin ms reciente de la definicin de validacin se presenta en la norma ISO 9000:2000 en donde se establece que la validacin es la confirmacin y provisin de evidencia objetiva de que se cumplen los requisitos para un uso o aplicacin prevista.

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En ISO 17025 la validacin se define como la confirmacin por examen y la provisin de evidencia objetiva de que se cumplen los requisitos particulares para un uso especfico propuesto, tomada de la antigua norma sobre vocabulario ISO 8402, ahora sustituida por ISO 9000:2000. Puede aceptarse que las diferencias conceptuales no son significativas, y por tanto no se encuentran mayores controversias al respecto. Por ejemplo la referencia [EURACHEM Guide] an toma la definicin de validacin dada en ISO 8402. Por su actualidad, se considerar la que se encuentra en ISO 9000:2000.

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En particular para mediciones analticas, la referencia [EURACHEM Guide] tambin define la validacin de mtodos como el proceso de establecer las caractersticas de desempeo y las limitaciones de un mtodo y la identificacin de las influencias que pueden cambiar esas caractersticas, y en qu medida.

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Como alternativa, establece que la validacin de mtodos es el proceso de verificar que un mtodo es apropiado para un propsito dado, es decir, para usarse en la solucin de un problema analtico particular.
Adicionalmente, existen trminos como verificar, confirmar, comprobar, probar, corroborar, autentificar, substanciar, con significados muy similares, no siempre uniformes, por lo que es recomendable mantener la atencin en el concepto, y no tanto en el trmino que lo describe. Por ejemplo, la validacin aplicada a un instrumento de medida se conoce tambin como confirmacin metrolgica.

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El objeto de la validacin puede ser un mtodo, un proceso, un procedimiento, un diseo, un instrumento, un sistema, un producto, un servicio, un modelo, etc. El objeto de la validacin ser denotado como la herramienta (caractersticas), y el uso previsto como la funcin (requisitos).

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Los elementos en un proceso de validacin son: 1. La herramienta u objeto de la validacin 2. La funcin o uso previsto 3. Los requisitos para la funcin 4. Las caractersticas de la herramienta 5. La actividad de examinar 6. La expresin del resultado

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Ejemplos de funciones y herramientas:
Las funciones se asocian con requisitos, y las herramientas con caractersticas de desempeo

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Por ejemplo, puede hablarse de que la funcin a) determinar la acidez tiene como requisitos: la trazabilidad de los resultados a una referencia internacional, una incertidumbre de la medicin no mayor a 5%, un costo no mayor a un determinado monto.

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Para cada requisito se encuentra una caracterstica de desempeo. Por ejemplo, para el requisito trazabilidad de los resultados de la funcin determinar la acidez, la caracterstica puede ser la desviacin del valor de la referencia; para el requisito incertidumbre mxima de 5 % est la incertidumbre obtenida en la determinacin, etc.

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Adems, debe notarse que el cumplimiento de cada requisito puede estar asociado a diferentes herramientas. En la funcin calibrar un tornillo micromtrico, los tres requisitos especificados se asocian con las tres herramientas mostradas.

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El resultado de una validacin es una declaracin sobre el cumplimiento, o incumplimiento, de los requisitos para el uso o aplicacin dada, sustentada en evidencias, necesariamente objetivas.

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El proceso de validacin es de hecho una aplicacin del conocido ciclo de Deming o ciclo PHVA (Planear, Hacer, Verificar, Ajustar), tambin interpretado como una aplicacin del mtodo cientfico. Siguiendo este ciclo, se hacen planes para que las caractersticas de la herramienta satisfagan los requisitos establecidos, se experimenta con la herramienta, se comparan los resultados del experimento, es decir las caractersticas de la herramienta, con los requisitos, y en su caso se ajusta la herramienta en lo pertinente con la intencin de que los nuevos resultados con la herramienta modificada satisfagan los requisitos.

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RELACIN ENTRE LOS ELEMENTOS DE LA VALIDACIN

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AJUSTE Conviene subrayar que el ajuste es sobre la herramienta y no sobre los requisitos. Si se modifica la funcin y por tanto los requisitos, debe expresarse con toda claridad que la herramienta ha sido validada para una funcin distinta a la original. PROCESO DE VALIDACIN

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La validacin es una actividad indispensable para asegurar que un objeto satisfaga los requisitos necesarios para un cierto uso. Todo mtodo de medicin debe ser validado. Para ello, puede haber uno o ms involucrados, entre los cuales debe estar quien desarrolle el mtodo u objeto de la validacin. Puede darse el caso que el mtodo haya sido suficientemente validado y descrito por quien lo desarrolle y quien lo aplique slo tenga que demostrar su competencia para aplicarlo, lo cual ya no es parte de la validacin.

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Los elementos que constituyen una validacin son: El uso propuesto o funcin, el objeto de la validacin o herramienta, los requisitos para la funcin propuesta, el aporte de evidencias objetivas de desempeo de la herramienta, la actividad de examinar y la expresin del resultado. El resultado de una validacin debe ser expresada como que la herramienta cumple los requisitos para la funcin prevista, con una mencin explcita a los requisitos y a la funcin, uso o aplicacin, prevista.

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La validacin de un mtodo o procedimiento de medicin por un laboratorio se hace necesaria cuando el enunciado del mtodo o procedimiento permite libertades a quien lo aplique tales que el resultado de la aplicacin pueda variar significativamente como consecuencia. En muchos casos, se tienen procedimientos de medicin descritos en normas, cuyo detalle no es suficiente para asegurar su aplicacin y desempeo uniformes y como consecuencia se hace necesaria la validacin parcial en algunos parmetros.

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De hecho, cuando un laboratorio desarrolla un mtodo o cuando aplica uno desarrollado por alguien ms, necesita asegurarse que el mtodo es adecuado para la funcin o el uso previsto. Es natural suponer que el laboratorio que lo desarrolla tiene la obligacin de hacerlo plenamente antes de publicarlo y declarar su validez. No obstante, an cuando el laboratorio encargado de su desarrollo haya cumplido esta obligacin, pueden quedar aspectos cuya descripcin no sea suficiente, o que el quien lo aplique no disponga de los mismos equipos, instalaciones o personal competente de modo que no sea posible replicar los resultados del desarrollador. Entonces, puede afirmarse que todo mtodo debe ser validado, y que una parte de la validacin es realizada por el desarrollador y otra parte por quien lo aplica.

Mtodos Analticos Adecuados a su Propsito Gua EURACHEM USO DE MTODOS VALIDADOS

1. Cuando se usa un mtodo ajeno, ya sea un mtodo desarrollado en otra parte del laboratorio, un mtodo publicado o aun un mtodo de referencia, deben considerarse dos aspectos.

PRIMERO: La validacin existente es adecuada para el propsito requerido o se necesita de una validacin adicional?. SEGUNDO: si la validacin existente es adecuada: El laboratorio es capaz de alcanzar el nivel de desempeo que el mtodo requiere como posible? es decir, El analista es suficientemente competente?; Son adecuados el equipo y las instalaciones disponibles? Si el mtodo se ha validado mediante pruebas extensivas bajo todas las condiciones de operacin extremas, entonces un nuevo analista competente probablemente operar satisfactoriamente dentro del nivel de desempeo existente, aunque realmente es ms importante verificar el desempeo del analista contra lo que la especificacin analtica requiere ms que contra la validacin existente. Sin embargo, esto deber de todos modos verificarse siempre. Es decir, es ms importante el nivel de desempeo que el analista puede alcanzar con el mtodo que lo que otros analistas hayan alcanzado en el pasado.

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2. Generalmente, los mtodos de referencia se desarrollan a partir de alguna forma de estudio de colaboracin y los organismos de normalizacin, quienes los desarrollan, frecuentemente tienen expertos en estadstica que ayudan a asegurar que los estudios de la validacin estn correctamente diseados, realizados y evaluados. El nivel de validacin de los mtodos est mejorando pero es peligroso suponer que slo por ser un mtodo de referencia se puede tomar por hecho que la validacin publicada es adecuada.

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3. Similarmente, es comn suponer que los mtodos de referencia pueden usarse sin validar y que los niveles de desempeo publicados sern alcanzados en forma directa por cualquiera que use el mtodo. sta no es una afirmacin segura, pues an en el caso de quienes estn familiarizados o son expertos en el campo de la qumica cubierto por el mtodo, necesitarn la prctica antes de llegar a ser totalmente competentes. Esto se detalla a continuacin.

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4. Cuando se usan mtodos validados (o cualquier mtodo) se recomienda que se sigan las siguientes reglas para asegurar que se ha alcanzado un desempeo aceptable.

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4.1. PRIMERAMENTE, los analistas por s mismos, deben familiarizarse completamente con el nuevo mtodo antes de usarlo por primera vez. Idealmente el mtodo debe ser explicado al analista por alguien experto en su uso. El analista entonces debe empezar, bajo estrecha supervisin, a trabajar con materiales de referencia o muestras de prctica. El nivel de supervisin disminuir conforme el analista demuestre que es suficientemente competente para hacerlo por s mismo. Por ejemplo, la competencia puede establecerse en trminos de la habilidad del analista para alcanzar los niveles de desempeo establecidos en el mtodo, tales como la repetibilidad, el lmite de deteccin, etc. sta es una forma comn de entrenamiento (aprendizaje) para el uso de un nuevo mtodo y los procedimientos de entrenamiento de un laboratorio frecuentemente sern diseados de esta manera con medidas objetivas, en lugar de probar la competencia a ciertos intervalos durante el entrenamiento. En cualquier caso, el analista deber haber ledo el mtodo y estar familiarizado con la teora detrs de las mediciones, repasando mentalmente las diferentes etapas, identificando los puntos donde se puede hacer una pausa y las partes del proceso donde el analista estar sujeto a un trabajo continuo. Cuando necesitan prepararse los reactivos, qu tan estables son una vez preparados? Necesitan stos prepararse con anticipacin? Una dificultad clsica consiste en pasar varias horas preparando un nmero de muestras y entonces darse cuenta de que la preparacin del reactivo requerido para la siguiente etapa involucra una sntesis complicada. Mientras tanto las muestras se van degradando...

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4.2. SEGUNDO, se requiere una evaluacin de cuntas muestras pueden manipularse a la vez. Es mejor analizar adecuadamente pocas muestras que tratar de analizar un gran nmero de muestras y tener que repetir la mayora de ellas. 4.3. FINALMENTE, se debe asegurar que se tiene disponible todo lo que se necesita para llevar a cabo el mtodo antes de iniciar el trabajo. Esto involucra reunir el conjunto apropiado de equipos, reactivos y patrones (con cualquier preparacin en espera) y quiz reservar el espacio en campanas de extraccin etc. 5. Si es necesario adaptar o cambiar un mtodo validado por otros, entonces ser necesaria una revalidacin apropiada. Dependiendo de su naturaleza, los cambios pueden hacer totalmente inadecuada la validacin original.

Mtodos Analticos Adecuados a su Propsito Gua EURACHEM USO DE LOS DATOS DE VALIDACIN PARA DISEAR EL CONTROL DE CALIDAD
1. CONTROL DE CALIDAD y ASEGURAMIENTO DE CALIDAD son trminos cuyo significado vara de acuerdo al contexto. En trminos prcticos, el aseguramiento de calidad se refiere a todas las medidas tomadas por el laboratorio para asegurar y regular la calidad, mientras que el control de calidad describe las medidas individuales que se relacionan con el seguimiento y control de operaciones analticas particulares.

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2. La validacin de un mtodo da una idea de las capacidades de desempeo y de las limitaciones del mtodo que pueden ser experimentadas durante el uso rutinario, mientras el mtodo est bajo control. En el uso cotidiano, es necesario aplicar controles especficos al mtodo para verificar que contina bajo control, es decir, que se est desempeando de acuerdo a lo esperado. Durante la etapa de validacin, el mtodo fue ampliamente aplicado a muestras de contenido conocido: 0.09C, 0.5C, 0.9C y M+A. Una vez que el mtodo est en uso rutinario, se aplica a muestras de contenido desconocido. Puede aplicarse un control adecuado si se contina con la medicin de muestras de contenido conocido, de esta forma se permite al analista decidir si la variedad de respuestas obtenidas realmente reflejan la diversidad de las muestras analizadas o si estn ocurriendo cambios inesperados e indeseados en el desempeo del mtodo. En la prctica estas muestras conocidas deben medirse con cada lote de muestras como parte del proceso del control de calidad (uso de los datos de validacin para disear el control de calidad).

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3. El tipo de verificaciones que se haga depende de la naturaleza, de la frecuencia y lo crtico del anlisis, del tamao del lote, del grado de automatizacin y de la dificultad de la prueba, as como tambin, de las lecciones aprendidas durante el proceso de desarrollo y validacin. El control de calidad puede tomar una gran variedad de formas, tanto dentro del laboratorio (interno) como entre el laboratorio y otros laboratorios (externo). 4. CONTROL DE CALIDAD INTERNO: ste incluye la utilizacin de: blancos, material de referencia, muestras adicionadas, muestras ciegas, rplicas de anlisis y muestras de control de calidad. Se recomienda el uso de cartas de control, particularmente para llevar un seguimiento de los resultados de las muestras de control de calidad (0.9C). 5. Los tipos de control de calidad adoptados deben estar suficientemente demostrados para asegurar la validez de los resultados. Pueden usarse diferentes clases de control de calidad para seguir diversos tipos de variacin dentro del proceso. Las muestras de control de calidad analizadas (0.09C, 0.5C, 0.9C y M+A) a intervalos en una corrida analtica indicarn el sesgo del sistema; el uso de varios tipos de blanco indicar cuales son las contribuciones a la seal del instrumento adems de la que proviene del analito; los anlisis por duplicado verifican la repetibilidad.

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6. Las muestras de control de calidad (0.09C, 0.5C, 0.9C y M+A) son muestras tpicas las cuales son suficientemente estables y homogneas, en un periodo de tiempo dado, para dar el mismo resultado (sujetas a variaciones aleatorias en el desempeo del mtodo analtico) y estn disponibles en cantidades suficientes para poder realizar anlisis repetidos. Durante este perodo de tiempo, la variacin aleatoria en el desempeo del mtodo analtico puede ser controlada llevando un seguimiento del valor analizado de la muestra de control de calidad, comnmente graficndolo en una carta de control. Se establecen lmites en la carta (convencionalmente, los lmites de advertencia se colocan a 2 (2s) del valor de la media y los lmites de accin se colocan a 3 (3s) del valor de la media. Una vez graficados los valores de control de calidad con los lmites asignados segn las reglas existentes, podr observarse si el control de calidad es satisfactorio. En funcin de que el valor de la muestra de control de calidad sea aceptable, es probable que los resultados obtenidos de las muestras del mismo lote as como de las muestras de control, puedan considerarse como confiables. La aceptacin del valor obtenido con la muestra de control de calidad se deber verificar desde el inicio del proceso analtico, para que en caso de un problema, slo se haya desperdiciado poco esfuerzo en un anlisis poco confiable de las muestras.

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7. Con el fin de establecer lmites reales en las cartas de control, los clculos inciales de la media y de la desviacin estndar deben reflejar la forma en que se pretende usar el mtodo de manera rutinaria. De este modo, las lecturas deben reflejar todas las variaciones posibles en las condiciones de operacin: diferentes analistas, variaciones en la temperatura del laboratorio, etc. Si no se hace esto, entonces, la desviacin estndar ser irrealmente pequea ocasionando que en el uso normal sea imposible estar dentro de los lmites fijados en la carta. 8. El uso de varios tipos de blancos permite al analista asegurar que los clculos hechos para el analito puedan corregirse para eliminar cualquier contribucin a la respuesta que no se le atribuya al analito. 9. Las rplicas de anlisis proporcionan un medio de verificar los cambios en la precisin en un proceso analtico, los cuales podran afectar el resultado de forma adversa. Las rplicas pueden ser consecutivas en una corrida (para verificar la repetibilidad) o tomadas en forma aleatoria (para verificar el sesgo). 10. El anlisis ciego es una forma efectiva de realizar anlisis repetidos y proporciona una ruta para verificar la precisin. Consiste en analizar rplicas de porciones de prueba colocadas dentro de una corrida analtica posiblemente por el supervisor del laboratorio y se llaman de esta forma debido a que normalmente el analista no est enterado de la identidad de las porciones de prueba o de que stas son rplicas. De esta forma, el analista no tendr ideas preconcebidas acerca de que ciertos resultados deban estar relacionados.

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11. Los patrones y material de referencia, colocados a intervalos dentro de una corrida analtica, permiten verificar que la respuesta del analito durante el proceso analtico es estable. 12. Es responsabilidad de la gerencia del laboratorio establecer y justificar un nivel apropiado de control de calidad, basado en una evaluacin de riesgo, tomando en consideracin la confiabilidad del mtodo, lo crtico del trabajo y la factibilidad de repetir el anlisis si ste no funciona adecuadamente la primera vez. Es ampliamente aceptado que para anlisis de rutina, un nivel de control de calidad interno del 5% sea considerado como razonable, es decir, por cada 20 muestras analizadas deber existir una muestra de control. Sin embargo para mtodos de rutina robustos, con un gran nmero de muestras, puede ser razonable un nivel menor. Para procedimientos ms complejos, no es raro un nivel del 20% y en ocasiones puede requerirse hasta un 50%. Para anlisis poco frecuentes, en cada ocasin debe realizarse un proceso de validacin completo. De manera tpica, esto puede involucrar el uso de materiales de referencia que contengan una concentracin certificada o conocida del analito, seguido de rplicas de anlisis de la muestra y de la muestra adicionada (es una muestra a la cual se le ha agregado intencionalmente una cantidad conocida del analito). Aquellos anlisis que se realizan con ms frecuencia deben ser objeto de procedimientos sistemticos de control de calidad incorporando el uso de cartas de control y muestras de verificacin.

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13. CONTROL DE CALIDAD EXTERNO: (tambin conocido como evaluacin externa de la calidad) por ejemplo las pruebas de desempeo. Una forma reconocida para un laboratorio de llevar un seguimiento de su desempeo en contra de sus propios requisitos, as como de los de laboratorios pares, es mediante la participacin peridica en esquemas de pruebas de desempeo. Estas pruebas ayudan a resaltar el desempeo de la reproducibilidad entre laboratorios y los errores sistemticos, es decir, el sesgo. Tambin pueden usarse para determinar la repetibilidad aunque sta tambin puede verificarse, de manera ms efectiva, usando controles internos. Las pruebas de desempeo y otros tipos de intercomparaciones se aceptan como medios importantes para dar seguimiento a la trazabilidad a niveles nacionales e internacionales. Los cuerpos de acreditacin reconocen el beneficio de estos esquemas y alientan a los laboratorios a participar en pruebas de aptitud como parte integral de sus protocolos de aseguramiento de calidad. Es importante dar seguimiento a los resultados de estas pruebas como una forma de verificar el aseguramiento de calidad y tomar las acciones necesarias. En ciertos casos, los cuerpos de acreditacin pueden especificar la participacin en un esquema de prueba de aptitud en particular, como un requisito para la acreditacin. El valor de las pruebas de aptitud es slo tan bueno como los esquemas mismos. A menudo, puede ser que no existan esquemas disponibles que sean relevantes para los tipos de anlisis que el laboratorio desea verificar, especialmente si se est trabajando aisladamente.