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    Tinciones en Microbiologia

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    Sergio Murillo Blondel
    La tinción de Gram es una técnica de tinción bacteriológica que permite diferenciar bacterias Gram positivas de Gram negativas. La tinción de Ziehl-Neelsen se usa para teñir micobacterias acidorresistentes como Mycobacterium tuberculosis. Estas técnicas de tinción siguen procesos específicos que involucran el uso de colorantes y decolorantes para permitir la visualización de las bacterias bajo el microscopio.

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    Tinciones en Microbiologia

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    Sergio Murillo Blondel
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    La tinción de Gram es una técnica de tinción bacteriológica que permite diferenciar bacterias Gram positivas de Gram negativas. La tinción de Ziehl-Neelsen se usa para teñir micobacterias acidorresistentes como Mycobacterium tuberculosis. Estas técnicas de tinción siguen procesos específicos que involucran el uso de colorantes y decolorantes para permitir la visualización de las bacterias bajo el microscopio.

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    La tinción de Gram es una técnica de tinción bacteriológica que permite diferenciar bacterias Gram positivas de Gram negativas. La tinción de Ziehl-Neelsen se usa para teñir micobacterias acidorresistentes como Mycobacterium tuberculosis. Estas técnicas de tinción siguen procesos específicos que involucran el uso de colorantes y decolorantes para permitir la visualización de las bacterias bajo el microscopio.

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    Sergio Murillo Blondel
    La tinción de Gram es una técnica de tinción bacteriológica que permite diferenciar bacterias Gram positivas de Gram negativas. La tinción de Ziehl-Neelsen se usa para teñir micobacterias acidorresistentes como Mycobacterium tuberculosis. Estas técnicas de tinción siguen procesos específicos que involucran el uso de colorantes y decolorantes para permitir la visualización de las bacterias bajo el microscopio.

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    Tincin de Gram

    Descubierta por Hans Christian Gram. Usada con frecuencia para examen

    microscpico directo de muestras y subcultivos.

    Tcnica de tincin de Gram


    Realizar frotis delgado del material a estudiar y dejar secar al 2. Fijar el material en el portaobjeto pasndolo 3 4 veces a travs de la llama de un mechero Bunsen. 3. Colocar el frotis sobre un soporte para tincin y cubrir la superficie con solucin de cristal violeta por el lapso de 1 min. 4. Lavar con agua destilada o buffer. 5. Cubrir el frotis con solucin de yodo, durante 1 min. 6. Lavar nuevamente con agua. 7. Cubrir la placa con decolorante de alcohol acetona hasta que no desprenda mas el color violeta, (10 seg.). 8. Lavar con agua corriente. 9. Cubrir la placa con safranina durante 1 min. 10. Lavar con agua corriente y colocar la placa en una posicin que drene el exceso de agua y el frotis seque. 11. Observar el frotis con 1 gota de aceite de inmersin con objetivo x 100.
    1.

    Interpretacin

    Fundamento de la Tincin de Gram


    1. Las bacterias Gram positivas, fijan el colorante cristal violeta (colorante primario), que al unirse al lugol (mordiente), forman un complejo insoluble en agua, debido a que las bacterias GP, poseen en su pared celular, RNA en forma de ribonucleato de magnesio. Este complejo imposibilita que el colorante cristal sea barrido por el alcohol acetona, quedando teida de color morado. 2. Las bacterias Gram negativas, no poseen este compuesto en su pared celular, por lo tanto no forman el complejo insoluble, se tien con el ltimo colorante ( fucsina bsica) que es de color rosado.

    Gram Positivos
    Cocos: Cocos en racimos = estafilococos Cocos en cadenas = estreptococos Diplococos Grampositivos = Streptocococus pneumoniae.
    Grandes bacilos Grampositivos como:
    Especies de Bacillus o Clostridium

    Pequeos bacilos Grampositivos como:

    Especies de listeria Corynebacterium

    Gram Negativos
    Bacilos:
    Bacilos GramNeg.

    Bastones Gramnegativos curvos: especies de vibrio (en heces diarreicas), Campylobacter.

    Bacilos: Haemphilus.
    Diplococos en forma arrionada:
    especies de Neisseria

    Tincin para Microorganismos Acidoresistentes


    Las micobacterias estn recubiertas por un grueso material creo que resiste la tincin, sin embargo una vez teidas las clulas bacterianas

    resisten la decoloracin con solventes orgnicos fuertes como alcohol cido. Por ese motivo, estas bacterias se conocen como acidorresistentes, fenmeno descubierto por Ziehl y Neelsen en 1882.

    Ej. microbacteria de la tuberculosis

    Tcnica de tincin de Ziehl- Neelsen


    Realizar frotis delgado del material a estudiar, dejar secar al aire. 2. Fijar el material en el portaobjeto pasndolo 3 4 veces a travs de la llama de un mechero Bunsen.
    1. 3. Colocar el frotis sobre un soporte para tincin y cubrir la

    superficie con solucin fucsina fenicada por 3 min. Mientras se calienta la placa de la siguiente manera: 4. Pasar la llama por debajo de la placa, hasta la emisin de vapores, dejar enfriar. Repetir esta operacin tres veces.
    5. Lavar la placa con abundante agua corriente para eliminar el

    exceso de colorante.

    6. Decolorar con la solucin de alcohol cido hasta

    que el extendido no elimine mas colorante, 30 seg. 7. Lavar la placa con agua.
    8. Cubrir la placa con azul de metileno por el lapso de 1 min. 9. Lavar con agua el exceso de colorante.

    10. Dejar secar la preparacin y examinar al microscopio aplicando una gota de aceite de inmersin X100.

    Otras tinciones

    Azul Crecil brillante Colorante de Leifon

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