CRISTAL VIOLETA.

(24H)
Tinción: Simple, Cristal violeta
Técnica:
Sobre un portaobjetos con una suspensión
de microorganismos, previamente secada y
fijada a la llama, se vierte sobre una solución
diluida de safranina por un lapso de 1minuto,
a continuación, se saca y se remueven los
excesos del colorante con agua, se deja
secar y se lleva al microscopio a 100x. Aquí
se aprovecha la diferencia de cargas, entre la
del cristal violeta + y la carga – de los ácidos
nucleicos y los componentes celulares que
presenta la colonia bacteriana, permitiendo
así una tinción directa a la bacteria (color
violeta), como resultado a una adherencia de
colorante con la capa externa de cada
especie bacteriana (Bajo el principio de que
las cargas opuestas se atraen).

Resultado:
Se presentó una tensión muy escaza en las
bacterias solo se nota en una pequela
porción de ellas

Observaciones:
Se logra observar algunos bacilos
individuales que contrastan por la tensión
SAFRANINA. (24H)
Tinción:
Simple, safranina

Técnica:
Sobre un portaobjetos con una suspensión
de microorganismos, previamente secada y
fijada a la llama, se vierte sobre una solución
diluida de safranina por un lapso de 1minuto,
a continuación, se saca y se remueven los
excesos del colorante con agua, se deja
secar y se lleva al microscopio a 100x. Aquí
se aprovecha la diferencia de cargas, entre la
de la safranina + y la carga – de los ácidos
nucleicos y los componentes celulares que
presenta la colonia bacteriana, permitiendo
así una tinción directa a la bacteria (color
rojo), como resultado a una adherencia de
colorante con la capa externa de cada
especie bacteriana.

Resultado:
Presenta una alta coloración en las colonias
bacterianas
Observaciones:
Se presenta un visualización entera por el
contraste de color rojo en las colonia
bacterianas donde se pueden ver una gran
cantidad de bacterias con forma de bacilos
AZUL DE METILENO. (24H)
Tinción: Simple, Azul de metileno
Técnica:
Sobre un portaobjetos con una suspensión
de microorganismos, previamente secada y
fijada a la llama, se vierte sobre una solución
diluida de safranina por un lapso de 1minuto,
a continuación, se saca y se remueven los
excesos del colorante con agua, se deja
secar y se lleva al microscopio a 100x. Aquí
se aprovecha la diferencia de cargas, entre el
del azul de metileno + y la carga – de los
ácidos nucleicos y los componentes celulares
que presenta la colonia bacteriana,
permitiendo así una tinción directa a la
bacteria (color rojo), como resultado a una
adherencia de colorante con la capa externa
de cada especie bacteriana

Resultado:
Se muestra coloración esparcida por la caja
de Petri en algunas zonas específicas mas
que todo en los bordes

Observaciones:
Nos permite ver una coloración definida
donde es fácil identificar a los bacilos gracias
al contraste de azul de metileno
TINCIÓN DE GRAM. (24H)
Tinción: Compuesta diferencial, tinción de
Gram.

1. Técnica:
Realizar un frotis fino, dejar secar, fijar al
calor, introducirlo en el colorante primario,
cristal violeta por 1 minuto, enjuagar con
agua, introducirlo en lugol (Mordiente o
intensificante de color) por 1 minuto, enjuagar
con agua, decolorarlo con alcohol
emergiéndolo por 30- 45 segundos, enjuagar
con agua, introducirlo en el colorante de
contraste, safranina por 45s- 1min. Enjugar
con agua, secarlo y llevarlo al microscopio en
el objetivo de 100x.

Resultado:
Tinción Gram .

Observaciones
TINCIÓN DE ESPORAS. (1 Semana)
1. Tinción: Compuesta diferencial
específica, tinción de endoesporas
Schaeffer-Fulton

2. Técnica:
Preparar el frotis bacteriano indicado
(Cultivo bacteriano de 1 semana).
Teñir con verde malaquita. Colocar la
muestra, con pinzas, encima de la estufa
de forma que el colorante humee durante
5 min. (Evitar que la muestra hierva).
Añadir más colorante si éste se evapora;
(Es importante que la muestra no se
seque).
Lavar con abundante agua el exceso de
colorante.
Teñir con safranina 1 min.
Lavar con abundante agua el exceso de
colorante.
 Secar la preparación.
Observar la preparación al microscopio.
TINCIÓN DE CÁPSULAS. (24H)
Tinción: Compuesta diferencial específica,
para tinción de cápsulas bacterianas,
(Tinción negativa).

Técnica:
Preparar el frotis bacteriano indicado (Cultivo
bacteriano de 24hrs). Depositar sobre un
extremo de un portaobjetos, limpio y
desengrasado, una gota de tinta china y
extenderla, dejar secar, luego extender una
gota de cultivo a lo largo del cubre objetos,
dejar secar, luego introducir en una solución
de safranina por 10segundos, enjuagar
removiendo los excesos de safranina, dejar
secar y llevar al microscopio a 100x.
Microorganismo Reacción Relación con el Endosporas Cápsula Flagelos y
de Gram oxígeno (+ o -) (+ o -) patrón de
(+ o -) flagelación
Staphylococcus aureus + Aerobios- + + No tiene
anaerobios
facultativos
Shigella dysenteriae - Anaerobia - - No tiene
facultativa
Spirochaeta americana - Anaerobia + - Flagelos
facultativas periplasmicos
Salmonella paratyphi - Anaerobia - - Flagelos
periticos
Xanthomonas - Anaerobia - - Flagelo
campestris monotrico
Clostridium botulinum + Anaerobia + - Flagelos
periticos
Bacillus antracis + Aerobia + + Flagelos
periticos
Corynebacterium + Aerobio - - Flagelos
diphtheriae facultativo Pertricos
Nocardia + Aerobia - - No tiene
Borrelia anserina - Micro aerobias - - Peri
plasmáticos
Ehrlichia chaffeensis - Anaerobia - - No tiene
Ureaplasma urealy - Aerobia - - Flagelos
ticum polares
Enterobacter aerogenes - Anaerobia + - Flagelos
facultativa periticos
Xylella fastidiosa - Aerobia - + No tiene
Pseudomonas - Aerobia estricto - - Flagelos
aeruginosa polares,

Bibliografía