Practica 17. Cafeina EQ6

INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL
UPIBI - UNIDAD PROFESIONAL INTERDISCIPLINARIA
DE BIOTECNOLOGÍA
INGENIERÍA EN ALIMENTOS
LABORATORIO DE MÉTODOS CUANTITATIVOS
PARCIAL 2
REPORTE PRÁCTICA 17 “Determinacion de

cafeina por espectrometría UV”
GRUPO: 2LM2 EQUIPO: 6
INTEGRANTES:
Alcantara Sanchez Noé Maximiliano
Pérez Ortega María José
Juarez Tenorio Erick Brayan
PROFESORES:
Bolaños Valerio Emma
Aguilar Doroteo Leticia
FECHA: 5 de Noviembre del 2024
OBJETIVOS
1. Identificar compuestos orgánicos por medio de la espectroscopia UV-VIS.

2. Determinar la concentración de sustancias orgánicas en muestras problema,
por medio de una curva de calibración, aplicando la Ley de Beer-lambert.
INTRODUCCIÓN
La Ley de Beer, también conocida como Ley de Beer-Lambert, describe la

relación entre la absorbancia de una sustancia y su concentración en una
solución. Establece que la absorbancia de una sustancia es directamente
proporcional a su concentración y a la longitud del camino óptico que la
luz recorre a través de la solución. La ley se expresa con la fórmula
A=ε⋅c⋅l, donde A es la absorbancia, ε es el coeficiente de absorción molar,
c es la concentración de la sustancia, y l es la longitud del camino óptico.
Esta relación es de gran utilidad en técnicas analíticas como la
espectrofotometría, permitiendo cuantificar la concentración de una
sustancia en solución de manera precisa y sencilla.
La Ley de Beer tiene varias limitaciones, especialmente cuando las condiciones

ideales no se cumplen. Algunas de las principales limitaciones incluyen:
1. Concentraciones Altas: A concentraciones elevadas, las moléculas de

soluto pueden comenzar a interactuar entre sí, generando efectos de
asociación o disociación molecular. Esto altera la absorbancia y desvía los
resultados, ya que la relación lineal entre concentración y absorbancia se
pierde.
2. Interacciones Químicas: La ley supone que el soluto no reacciona con el
disolvente ni forma complejos en la solución. Si ocurren reacciones químicas,
como cambios de pH o interacción con el disolvente, el coeficiente de
absorción molar puede modificarse, afectando la precisión de los resultados.
3. Luz Dispersa y Turbidez: En soluciones con alta turbidez o en aquellas que
contienen partículas suspendidas, la dispersión de la luz reduce la cantidad
de luz que alcanza el detector, interfiriendo con la absorbancia medida y
causando desviaciones de la ley.
4. Inhomogeneidad en la Longitud del Camino Óptico: La ley asume que la
longitud del camino óptico de la luz a través de la muestra es constante y
uniforme. Cualquier variación, ya sea por inhomogeneidades en la muestra o
por variación en el diseño del equipo, afectará la absorbancia.
5. Limitación de Longitud de Onda: La Ley de Beer se aplica a longitudes de
onda específicas donde el coeficiente de absorción molar es constante. Sin
embargo, en zonas cercanas a los límites de absorción del soluto, la
absorbancia puede no seguir una relación lineal.
La NOM-218-SSA1-2011 Establece que las bebidas adicionadas con cafeína no

deben contener más de 33 mg de cafeína/100mL de producto, cuyo Límite Máximo
de Cafeína (Bebidas, congelados, polvos, jarabes, concentrados y concentrados de
manufactura) es de 200 mg/L.
Así mismo establece que la Determinacion de cafeina en bebidas no alcohólicas es

por medio de una extracción con cloroformo y determinada espectrométricamente a
una longitud de onda de 276 nm
los productos elaborados por la disolución en agua para uso y consumo humano (té
e infusiones de hierbas) , la cafeína debe declararse en la lista de ingredientes,
seguido del contenido exacto de cafeína expresado en mg/100 ml, que debe
corresponder al total e incluir las siguientes leyendas: “No consumir más de ___
unidades al día” (en el espacio en blanco indicar la cantidad correspondiente,
dependiendo de la concentración de cafeína, en ningún caso la ingesta de cafeína
por el consumo de estas bebidas debe exceder de 165 mg de cafeína por día).
DIAGRAMA DE BLOQUES
RESULTADOS
CONCENTRACIÓN(ppm) ABSORBANCIA λ max Mol/L
3 0.195 1.5452 x 1 0−5
5 0.284 2.5754 x 1 0−5
10 0.557 5.1509 x 1 0−5
15 0.857 7.7263 x 1 0−5
20 1.116 1.0301 x 1 0−4
FIGURA 1. Gráfica de concentración ppm
FIGURA 2. Gráfica de concentración Mol/L

FIGURA 3. Gráfica de barrido de longitud de onda
1era ecuación ppm
y=0.0550x+0.0183
2
r=0.0995 r =¿0.9990
2da ecuación Mol/L
y=10617.4917x+0.02633
2
r=0.0996 r =¿0.9992
ANÁLISIS DE RESULTADOS
1. Preparación de la muestra madre, disolución y obtención de espectro
de absorción.
Podemos cuantificar la cafeína, por ello, en primer lugar, se preparó un

blanco de etanol al 10%, y disoluciones patrón a distintas concentraciones ( 3
ppm, 5 ppm, 10 ppm, 15 ppm, 20 ppm) para elaborar una recta de calibración,
Una vez preparadas vamos a registrar los correspondientes espectros de
absorción UV, para determinar la longitud de onda a la que se produce el
máximo de absorción. En la figura 4 se representaron gráficamente las
absorbancias obtenidas con las disoluciones patrón frente a sus
correspondientes longitudes de onda (nm). Se observa que el máximo de
absorción de la cafeína se produce a 273 nm, por lo tanto mediremos a esta
longitud de onda.
FIGURA 4. Espectro de absorbancia de soluciones patrón (nm)
2. Preparación e interpretación de la muestra (Hoja de limón, té natural)
Se realizó una muestra madre de la hoja de limón a través de una infusión,

donde se añadió 3055 mg de hoja de limón en condiciones húmedas, y una
solución donde en este caso se tomó 2 mL de la muestra madre y aforó a 25
mL de etanol 10%.
A continuación medimos absorbancia a 273 nm de nuestra muestra y se

interpreta ducha absorbancia correspondiente a la cafeína de la muestra con
un resultado de 4.939 y se obtiene la concentración de la muestra.
FIGURA 5. Resultado de absorbancia de la muestra a 273 nm
Posteriormente para la cuantificación de la cafeína en la muestra (hoja de limón - té

natural) se realizaron los siguientes cálculos utilizando la Ley de Beer-lambert.
A=ε∗c∗ι
A=absorbancia(adimensional)
ε =coeficiente de absorción (molar )
ι=longitud de onda(cm)
c=concentración( M )
MEMORIA DE CÁLCULO
Cálculos para convertir ppm a Mol/L
3 (
mg 1 mol
L 194.14 g )( 10001 gmg )=1.5452 x 1 0−5
5 (
mg 1 mol
L 194.14 g )( 10001 gmg )=2.5754 x 1 0 −5
10 (
mg 1 mol
L 194.14 g )( 10001 gmg )=5.1509 x 1 0 −5
15 (
mg 1 mol
L 194.14 g )( 10001 gmg )=7.7263 x 1 0 −5
20 (
mg 1mol
L 194.14 g )( 10001 gmg )=1.0301 x 1 0 −4
Cálculos de las concentraciones de cafeína en muestras a partir de la curva de

calibración
1era ecuación ppm
A=abc
A=absorbancia(adimensional)
L
a=absortividad ( cm)
mg
b=longitud de celda(1 cm)
mg
c=concentración( )
L
4.939=0.0550 x 1 xC +0.0183
4.93 9absorción del te−0.0183 cm mg

C= =89.4672
L L
0.0550 cm
mg
mg
ppm=89.4672 (0.025 L)=2.2366 mg
L
2.2366 mg 3055 mg
→ =0.073 mg
X 100 mg
0.073 mg por cada 100 mg de te

2da ecuación mol/L
A=ε bC absortividad molar
4.939=10617.4917 xC+ 0.02633
( )
cm 4.93 9 absorción del te − 4 mol
C= =4.6517 x 1 0
1 L L
10617.4917 cm
mol
−4 mol −5
molar =4.6517 x 1 0 (0.025 L)=1.1629 x 1 0 mol
L
194.14 g 1000 mg
1.1629 x 1 0 mol∗¿( )( )=2.2576 mg
−5
1 mol 1g
2.2576 mg 3055 mg
→ =0.073 mg
X 100 mg
0.073 mg por cada 100 mg de te
CONCLUSIÓN
Se logró observar la absorbancia del té de limón natural mediante el

espectrómetro con la longitud de onda de 273 nm, como valor teórico de la
cafeína.
Los resultados son coherentes tanto en precisión como en el valor

aproximado de cantidad de cafeína en la hoja de limón.
Se obtuvieron los valores de concentración de cafeína en té de limón natural

húmedo aplicando la ley de Beer-lambert y con una curva de calibración de
etanol 10%.
El análisis espectrofotométrico determinó una concentración de cafeína de

0.073 mg por cada 100 mg de té de limón natural. Este resultado valida la
capacidad de esta técnica para detectar y cuantificar pequeñas cantidades de
cafeína en muestras naturales, demostrando que el té de limón contiene una
cantidad mínima de este compuesto, lo que puede ser relevante para
consumidores que buscan infusiones con bajos niveles de cafeína.
BIBLIOGRAFÍA
● Christian, G. D. (2003). Analytical Chemistry (6th ed.). John Wiley &

Sons.
● Harris, D. C. (2015). Quantitative Chemical Analysis (9th ed.). W.H.
Freeman
● NORMA Oficial Mexicana NOM-218-SSA1-2011, Productos y
servicios. Bebidas saborizadas no alcohólicas, sus congelados,
productos concentrados para prepararlas y bebidas adicionadas
con cafeína. Especificaciones y disposiciones sanitarias. Métodos
de prueba.
● Skoog, D. A., West, D. M., Holler, F. J., & Crouch, S. R. (2013).
Fundamentals of Analytical Chemistry (9th ed.). Cengage Learning.

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Juarez Tenorio Erick Brayan

Bolaños Valerio Emma

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FECHA: 5 de Noviembre del 2024

1. Identificar compuestos orgánicos por medio de la espectroscopia UV-VIS.

La Ley de Beer, también conocida como Ley de Beer-Lambert, describe la

La Ley de Beer tiene varias limitaciones, especialmente cuando las condiciones

1. Concentraciones Altas: A concentraciones elevadas, las moléculas de

La NOM-218-SSA1-2011 Establece que las bebidas adicionadas con cafeína no

Así mismo establece que la Determinacion de cafeina en bebidas no alcohólicas es

CONCENTRACIÓN(ppm) ABSORBANCIA λ max Mol/L

3 0.195 1.5452 x 1 0−5

5 0.284 2.5754 x 1 0−5

10 0.557 5.1509 x 1 0−5

15 0.857 7.7263 x 1 0−5

20 1.116 1.0301 x 1 0−4

FIGURA 1. Gráfica de concentración ppm

FIGURA 2. Gráfica de concentración Mol/L

1era ecuación ppm

2da ecuación Mol/L

Podemos cuantificar la cafeína, por ello, en primer lugar, se preparó un

FIGURA 4. Espectro de absorbancia de soluciones patrón (nm)

2. Preparación e interpretación de la muestra (Hoja de limón, té natural)

Se realizó una muestra madre de la hoja de limón a través de una infusión,

A continuación medimos absorbancia a 273 nm de nuestra muestra y se

Posteriormente para la cuantificación de la cafeína en la muestra (hoja de limón - té

ε =coeficiente de absorción (molar )

Cálculos para convertir ppm a Mol/L

Cálculos de las concentraciones de cafeína en muestras a partir de la curva de

1era ecuación ppm

b=longitud de celda(1 cm)

4.93 9absorción del te−0.0183 cm mg

0.073 mg por cada 100 mg de te

A=ε bC absortividad molar

4.939=10617.4917 xC+ 0.02633

0.073 mg por cada 100 mg de te

Se logró observar la absorbancia del té de limón natural mediante el

Los resultados son coherentes tanto en precisión como en el valor

Se obtuvieron los valores de concentración de cafeína en té de limón natural

El análisis espectrofotométrico determinó una concentración de cafeína de

● Christian, G. D. (2003). Analytical Chemistry (6th ed.). John Wiley &

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