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    EC 4.2.1.11 (Enolasa)

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    La enolasa es una enzima clave en la vía glucolítica ya que cataliza la reacción reversible de deshidratación del 2-D-fosfoglicerato a fosfoenolpiruvato.

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    La enolasa es una enzima clave en la vía glucolítica ya que cataliza la reacción reversible de deshidratación del 2-D-fosfoglicerato a fosfoenolpiruvato.

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    EC 4.2.1.11 (enolasa)

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    GENERACIÓN DE UN ANTICUERPO MONOCLONAL CONTRA LA ENZIMA GLUCOLÍTICA α-

    ENOLASA HUMANA
    1 2 2 2
    Elibeth Mirasol Meléndez , Yolanda Medina Flores , Araceli Zavala Carballo , Juan Carlos Carpio Pedroza , Absalom
    1 1
    Zamorano Carrillo y Claudia Guadalupe Benítez Cardoza .
    1
    Laboratorio de Investigación Bioquímica, Posgrado en Biomedicina Molecular, ENMyH-Instituto Politécnico Nacional,
    2
    Guillermo Massieu Helguera No. 239 Fraccionamiento La Escalera-Ticomán. C.P.07320 México D.F. Laboratorio de
    Anticuerpos Monoclonales, Instituto Nacional de Diagnóstico y Referencia Epidemiológica, Prolongación de Carpio
    470, Col. Santo Tomás, C.P. 11340, México D.F. E-mail: [email protected]

    Palabras clave: anticuerpo, enolasa, glucólisis.

    Introducción. La enolasa es una enzima clave en la vía


    glucolítica ya que cataliza la reacción reversible de
    deshidratación del 2-D-fosfoglicerato a fosfoenolpiruvato.
    Todos los mamíferos tienen tres isoformas de esta
    enzima: α, β y γ-enolasa. La α-enolasa a diferencia de
    sus isoformas se encuentra en una variedad de tejidos y
    es una proteína considerada como multifuncional debido
    a que además de participar en la vía glucolítica también
    se ha relacionado con otras funciones tanto en el
    humano como en otros organismos. Así mismo, se han
    reportado cambios en los niveles de expresión de esta Fig. 2. Análisis in sílico de la secuencia lineal y estructura tridimensional
    enzima los cuales han sido asociados con diversas de la α-enolasa humana para diseñar péptidos inmunogénicos y menos
    enfermedades como el cáncer, considerando a esta conservados de la α-enolasa humana con respecto a sus isoformas.
    enzima como un posible marcador tumoral.
    Identificar específicamente la presencia de la α-enolasa
    en diversos tejidos utilizando como herramienta a los
    Anticuerpos Monoclonales, podría facilitar el diagnóstico
    de las enfermedades en las que se ha asociado.

    Metodología. Se realizaron análisis in sílico de la


    secuencia lineal y estructura tridimensional de la α-
    enolasa humana para diseñar péptidos inmunogénicos y
    no conservadas de la α-enolasa humana los cuales
    Fig. 3. Absorbancias obtenidas de la evaluación de hibridomas
    fueron mandados a sintetizar. Por otro lado se mediante la técnica de ELISA indirecta a una longitud de onda de 490
    sobreexpresó y purificó a la α-enolasa humana in vitro y nm contra el reconocimiento de α-enolasa humana y los dos péptidos
    se utilizó como antígeno para generar el Anticuerpo sintetizados a distintas concentraciones.
    Monoclonal anti-α-enolasa humana inmunizando a un
    lote de cinco ratones hembra de la cepa Balb/c con una
    concentración de antígeno igual a 15 μg/mL por ratón. La Conclusiones. Se logró sobreexpresar y purificar a la
    selección clonal fue realizada utilizando los péptidos proteína α-enolasa humana in vitro con un rendimiento
    diseñados y sintetizados anteriormente mencionados. de 17.93mg/L de cultivo. Por otro lado se identificaron las
    secuencias más específicas e inmunogénicas de la α-
    Resultados. enolasa humana y con esto fue posible identificar al
    hibridoma y la clona celular que reconoce a la α-enolasa
    humana de forma específica.

    Agradecimientos. A CONACyT y PIFI por las becas


    otorgadas para el desarrollo de mi tesis de maestría.

    Bibliografía.
    1. Pancholi V. (2001). Cell. Mol. Life Sci., 58 902.
    2. Petrak Jirik, et al. (2008), Proteomics, 8, 1744-1749
    Fig. 1. Análisis mediante SDS-PAGE de las fracciones obtenidas del 3. Rodríguez H. (2010). J. Biol. Chem. 287,20964-20974
    proceso de purificación de la α-enolasa humana mediante 4. Gavilondo J. (1990). Hibridomas por fusión celular, Anticuerpos
    cromatografía de afinidad Ni-sefarosa. monoclonales. Gavilondo J. Elfos. Cuba. p.p. 39-49.

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