RPR - CARMINADO

1. FINALIDAD e- Almacenamiento y estabilidad

Antígeno estabilizado, listo para usar. Para su uso en la detección serológica Para fines de transporte, el conjunto de reactivos puede permanecer hasta 72
de la sífilis. horas a temperatura ambiente. En el laboratorio, deberán almacenarse en la
heladera (2-8ºC), en la que permanecerán estables, hasta la fecha de validad
2. INTRODUCCIÓN expresada en el rótulo, siempre que estén libres de contaminación. ¡No
El Treponema Pallidum, agente causante de la sífilis, induce al organismo a congelar los reactivos!
formar dos tipos de anticuerpos, los no treponémicos o reactantes
(inespecíficos) y los treponémicos (específicos). La prueba VDRL (Venérea f- Precauciones y cuidados especiales
Disease Research Laboratoy) desarrollado por Harris, Rosenberg y Riedel, en la - Los reactivos no pueden ser congelados.
década de 40, es capaz de detectar anticuerpos inespecíficos o reactantes -Mantener los frascos siempre cerrados para evitar que se resequen los
presentes en el suero de los pacientes con infección sifilítica, ésto permite su reactivos.
empleo en amplia escala, como la prueba de selección serológica para la -Los reactivos se destinan al uso Diagnostico In Vitro, por tanto, no deben
sífilis. El RPR BRÁS (Rapid Plasm Reagin), consiste en una suspensión de la ingerirse o entrar en contacto con la piel y las mucosas.
VDRL estabilizada y lista para el uso, que emplea la muestra de suero no - Se debe evitar el uso de materiales que puedan causar contaminación de los
inactivado o plasma. La lectura final de la prueba, es hecha en microscópio. reactivos, tal como los tips de micropipetadores automáticos.
- Los controles fueron probados contra la presencia de anticuerpos anti HIV y
3. IMPORTANCIA CLÍNICA Hbs Ag. Pero se recomienda la manipulación con la mayor cautela posible.
La mayor importancia clínica en la reacción de la VDRL y sus derivados como
el RPR BRÁS, está en la detección serológica de la sífilis. A excepción de la 6. MATERIALES Y QUIPOS NECESARIOS (no suministrados)
fase inmediata al contagio, las demás fases de la sífilis producen reactantes. - Agitador mecánico tipo Kline, ajustable a 180 rpm, que circunscriba un
En vista que otras patologías, también pueden inducir a la formación de círculo de 19 mm de diámetro en un plano horizontal;
reactantes, toda y/o cualquier muestra reactiva al VDRL, debe ser sometida a - Micropipeta o dispositivo para tomar 0,05 ml (50 ul).
la investigación de anticuerpos treponémicos (específicos), tal como la prueba
de FTA- Abs, antes de confirmar el diagnóstico serológico de la sífilis. 7. PROCEDIMIENTO TÉCNICO
7.1- Procedimiento para suero o plasma.
4. MUESTRAS - Prueba cualitativa:
a-Preparación del paciente a- Verificar la temperatura ambiente, la cual debe estar entre 23 y 29°C, por
Como la lipemia puede interferir en la reacción, se recomienda la extracción de debajo de ésta, la reacción disminuye y por arriba de ésta temperatura, la
la muestra, después de un ayuno de alrededor de 8 a 12 hs. reación aumenta.
b- Con la ayuda del bastón pipetador/homogeneizador u otro dispositivo de
b-Tipos de muestras medida (micropipeta), transferir una gota (0,05 mL) de muestra en el centro
- Suero: usar el suero recién extraido y separado lo más rápidamente posible, del círculo de la tarjeta plástica. Proceder de igual manera para los controles.
después de la recolección, sin hemólisis y no lipémico. c- Homogeneizar la suspensión antigénica cuidadosamente y con suavidad,
- Plasma: usar plasma recién recogido y separado lo más rápidamente posible, añadir una gota, usando el frasco cuenta gotas, a cada círculo que contenga la
libre de hemólisis y lipemia. No se debe congelar o calentar el plasma. muestra y los controles, homogeneizando con el bastón; luego:
- LCR: usar LCR libre de contaminación y sometido a centrífuga antes del d- Colocar la tarjeta plástica en un agitador mecánico (Kline o similar) y agitar
análisis (no deberá ser calentado o inactivado). durante 8 minutos a 100 +_ 2 rpm (en clima seco, mantener en cámara
húmeda durante el proceso, para prevenir el desecamiento del material).
c-Almacenamiento y estabilidad e- Leer los resultados durante 1 minuto bajo una buena iluminación (no usar
Las muestras de suero pueden ser conservadas en la heladera (2–8 ºC) por un microscópio en circunstancia alguna).
período de hasta 5 días, de lo contrario, guardar la muestra en el freezer (- 20
ºC). Las muestras de plasma pueden conservarse en la heladera (2-8 ºC), por - Las muestras reactivas, presentan aglomerados de antígeno visibles a simple
2 días. No deben congelarse o calentarse. La muestra de LCR debe ser vista.
analizada lo más rápidamente posible, después de recogidas. - Las muestras no reactivas, presentan una mezcla homogénea de muestra y
antígeno, en forma de un punto rojizo en el centro de la circunferencia.
d-Criterios de rechazo - El fenómeno de Prozona, es observado ocasionalmente en éste tipo de
Las muestras de suero o plasma que presenten hemólisis, lipemia o señales reacción cuando ocurre una completa o parcial inhibición de la reactividad en
de contaminación microbiana, deben ser rechazadas. En el caso que la el suero no diluido y una reactividad máxima cuando el suero está diluido. Éste
muestra de LCR presenten señales de contaminación microbiana o abundante fenómeno que podría describirse como débilmente reactivo o de “aspereza” no
cantidad de sangre, debe ser rechazada. Muestras de suero congeladas que reactiva, en una prueba cualitativa; podría ser fuertemente reactivo cuando
se presenten turbias después de su descongelamiento, deberán ser diluido. Por lo tanto se recomienda que todos lo sueros que den resultados
rechazadas. débilmente reactivos o con “aspereza” no reactiva, en la prueba cualitativa;
sean automáticamente repetidos, utilizando la técnica cuantitativa.
e- Precauciones y cuidados especiales
- Evitar el congelamiento y descongelamiento frecuente en una misma - Prueba cuantitativa
muestra de suero. a- Verificar la temperatura ambiente que debe estar entre 23-29°C, debajo de
- Guardar los frascos de los reactivos siempre bien cerrados. ésta la reactividad disminuye y por arriba de ésta temperatura, la reactividad
- Todas las muestras deben ser manipuladas con extrema cautela, pues aumenta.
pueden transmitir diversas enfermedades infecto-contagiosas (hepatitis, SIDA, b- Distribuir 0,05 mL de solución salina fisiológica (NaCl 0,85%), en los
etc). El descarte debe hacerse preferentemente después de sometido al círculos del 2 al 5.
autoclave, debiéndose evitar la eliminación directamente al medio ambiente. c- Usando dispensador específico, colocar 0,05 mL de muestra en el círculo 1
Igual cuidado se recomienda en el desecho de los otros materiales como los y en el círculo 2.
tips, jeringas y agujas. d- Mezclar, el suero y el diluyente en el circulo 2, por aspiración, 8 veces.
e- Transferir 0,05 mL del circulo 2 para el circulo 3 y mezclar, luego transferir
5. INFORMACIONES GENERALES SOBRE EL PRODUCTO igual cantidad del circulo 3 para el circulo 4 y continuar la secuencia hasta el
a- Registro en el Ministerio de Salud: 100.970.10042 círculo 5, despreciando los últimos 0,05 mL; así se obtienen las diluciones
1:2, 1:4, 1:8, 1:16 respectivamente para los círculos 2, 3, 4 al 5.
b- Principio de la Técnica f- A partir de éste punto, proceder como se indica en la prueba cualitativa.
La muestra de análisis, es colocada en contacto con la suspensión del g- El título se considera a la dilución más alta que presente reactividad
antígeno - RPR CARMINADO en una placa apropiada y sometida a un proceso (ejemplo: si la muestra es reactiva hasta 1:16 éste será el título) en caso de
de rotación mecánica por 8 minutos. Durante ese tiempo, las partículas de que la última dilución aún se presente reactiva, continuar la dilución en la
colesterol recubiertas de cardiolipina y lecitina flocularán si la muestra serie (1:32, 1:64 1:128, etc), si así fuera preparar una dilución 1/16 del
contiene reactante, la floculación así formada co-aglutina con las partículas de suero no reactivo (0,2 mL del suero y 3 mL de salina) para ser utilizado como
colorante (rojo de toluidina) presentes en el antígeno, formando grumos diluyente de las muestras en lugar de la solución salina fisiológica.
visibles a simple vista, o permanecerán libres en suspensión, si la muestra no Para efectos de titulación considerar sólo las diluciones que presenten
contiene reactantes. reactividad. No se deben considerar las diluciones que presenten aspereza
reactiva.
c-Reactivos
- Antígeno RPR CARMINADO: suspensión antigénica constituida por una 7.2 Procedimiento para LCR
mezcla de cardiolipina, lecitina y colesterol estabilizada en tampón colina y Preparar la suspensión antigénica, adicionando una parte de salina a 10% a
coloreada con rojo de toluidina. La suspensión es estable hasta la fecha de una parte de la suspensión antigénica de RPR CARMINADO (ésta mezcla es
vencimiento indicada en el rótulo, siempre que se conserve en la heladera (2- estable por sólo2 h) y homogeneizar suavemente, por inversión o por rotación
8°C) y se mantenga libre de contaminantes. durante 5 minutos (no más de 2 h).
- Proceder a la prueba como lo indicado para el suero/plasma. En el caso de
d- Materiales suministrado con el conjunto de reactivos que la muestra sea reactiva, determinar su título.
- Tarjetas plásticas reutilizables.
- Bastones pipetadores / homogeneizadores - Precauciones y cuidados especiales (suero y LCR)
 RPR - CARMINADO

- Homogeneizar la suspensión antigénica antes de usar: Antes de ser colocado para la venta, cada lote de productos, es sometido a
- El tiempo de homogeinización de la mezcla: muestra-antígeno, de 8 minutos, pruebas especificas, que son repetidas periódicamente, hasta la fecha de
debe ser observado rigurosamente, bajo riesgo de que el resultado no vencimiento expresado en el rótulo. Los certificados de análisis de cada lote,
corresponda a la realidad. pueden ser solicitados en el SAC – Servicio de Asesoría al Cliente, así como,
en caso de dudas o cualquier problema de origen técnico, a través del teléfono
8. RESULTADOS 0800-41-0027. Cualquier problema que no haga viable una buena respuesta
Evitar informar resultados usando la terminología “positivo”, ‘negativo’ e del producto y que haya ocurrido comprobadamente por falla de Laborclin,
inclusive expresar éste con cruces. será resuelto sin costo alguno para el cliente, conforme a lo dispuesto por ley.

Los resultados débilmente reactivos y reactivos en la prueba cualitativa, deben 12. BIBLIOGRAFÍA
ser confirmados por la técnica cuantitativa, antes que sean emitidos, En caso 1 - Pettit, D.E.; Larsen, S.A.; Harbec, P.S. Et. all. Toluidine red unheated
de resultados débilmente reactivos, con apenas un título de 1/1, considérese serum test for syhilis. J. Clin. Microbiol.18:11141-5, 1983.
la muestra como no reactiva. 2- Kasatiya, S.S.; Lambert, N.G. Color-coded antigen for the automated reagin
- Positivos test for syphilis. Appl. Microbiol. , 28:317-38, 1974.
Informar como “muestra analizada reactiva hasta el título de .. (indicar el 3- Parham, C.E.; Pettit, D.E.; Larsen, S.A. Et al. Interlaboratory comparsions
titulo)” of the toluidine red unheated serum test antigen reparation. J. Cin. Microbiol.,
- Negativos 20:434-7, 1974.
Informar como “Muestra analizada no reactiva”. 4- Larsen, S.A.; D’Costa, J.F. Laboratory tests and serologic surveillance for
yaws and other diseases and condictions. South-east Asian J. Trop. Med.
Interpretación Public Health, 17: 70-7, 1986.
- La prueba de RPR-CARMINADO reactiva, indica una infección pasada o 5- Larsen, S.A.; Pettit, D.E. et al; EDTA- treated plasma in the rapid lasma
presente por treponema, falla en el tratamiento, error de laboratorio o reagin card test and the toluidine red unheated serum test for seradiagnosis of
interferencia por otras patologías. syphilis. J. Clin. Microbiol. , 17:341-5, 1983.
- Muestras RPR-CARMINADO no reactivas, y no reactivas al FTA-ABS, indican 6- Fiumara, N.J.; Serologic responses to treatment of 128 patients with late
inexistencia de infección sifilítica presente o pasada. syphilis. Sex. Transm. Dis. ; 6:243-6, 1979.
- Muestras RPR-CARMINADO no reactiva y FTA-ABS reactivas, indican cicatriz 7 - Portnoy, J. Modifications of the rapid plasma reagin (RPR) card tests for
serológica (infección pasada tratada), siempre que se excluya la posibilidad de syphilis, for used large scale testing. Am. J. Clin. Path.. 40:473-479, 1963.
falla técnica. 8 - Falcone, V.H. et al. Evolution of rapid plasma reagin (circle) card Health
- Muestra RPR-CARMINADO no reactivas, no descartan la hipótesis de Rep., 79:491-495,1964
enfermedad en incubación. 9 - Portnoy, J. A note on the performance of modifications of the rapid plasma
- Se estima entre 1 a 2% la ocurrencia de resultados falsamente positivos, reagin (RPR) card test for syphilis for use in large scale Pub. Lab. 23:43,
sobre la población en general. 1965.
- La prozona es un fenómeno registrado en cerca de 1 a 2 %, de los pacientes 10 - Larsen, S.A. et al. A manual of tests for syphilis. American Pub. Health
con sífilis en fase secundaria; se caracteriza por resultados débilmente Assossiation, 1990.
reactivos o no reactivos en dilución 1/1 y que se revelan reactivos, incluso en 11 - Robins, S.L. et al: Patologia estrutural e funcional, 4a ed., G. Koogan,
diluciones arriba de 1/8. 1991.
- Aumento de 4 veces en el título (ejemplo de 1/8 para 1/132) de RPR-
CARMINADO, indica progresión de la enfermedad y la disminución de 4 veces
en el título (ejemplo de 1/32 para 1/8), indica regresión (éxito en la terapia).

9. LIMITACIONES DEL MÉTODO

- La contaminación de muestras y reactivos; inclusive de los materiales
complementarios, compromete la calidad de los resultados.
- No hay ninguna correlación entre la calidad de floculación y el título de la
muestra.
- Lecturas tardías pueden presentar resultados falsos.
- Todas las muestras reactivas al RPR CARMINADO, deben ser confirmadas por
una prueba de treponemica (como FTA- ABS).
- Una muestra no reactiva al RPR CARMINADO, no excluye la probabilidad de
la enfermedad.
- Individuos con antecedentes de sífilis, pueden presentar títulos de reactividad
bajos (cicatriz serológica); inclusive años después de tratados.

- Interferencias
Entre las muchas existentes, presentamos una lista de las principales:
- En el ambiente de prueba, temperaturas inferiores a 23°C, causan
disminución de la reactividad y arriba de 29°C, causan aumento de la
reactividad.
- Muestras con hemólisis o contaminadas.
- Desecamiento de la suspensión antigénica en climas calientes y secos,
- Velocidad y tiempo de agitación diferentes a lo prescripto.
- Relación muestra/suspensión antigénica diferente de lo prescripto.
- Suspensión antigénica dañada por el pasaje forzado a través de la aguja o
que haya tenido contacto con materiales fabricados con caucho.
Para mayor información, se recomienda la lectura de los textos de Tietz y
Young.

10. CONTROL DE CALIDAD

- Materiales necesarios
Controles suministrados con el kit y muestras de control de título conocido.

- Periodicidad
Al abrir el kit, se recomienda que los reactivos sean probados utilizando los
controles que lo acompañan y las muestras de control conocidas. Con cada
conjunto de pruebas, se deben examinar los controles que lo acompañan.

- Interpretación y evaluación
Se espera que los controles negativos no presenten floculación y los positivos
presenten floculación. Laborclin Produtos para Laboratórios
LB 172108
Ltda.
11. GARANTÍA DE CALIDAD R. Cassemiro de Abreu, 521 – Pinhais/PR - CEP 83.321-210
Laborclin obedece a lo dispuesto en la ley 8.078/90 – Código de Defensa al
REV 01 CNPJ 76.619.113/0001/31 – Insc. Est. 13700129-26
Consumidor. Para que el producto tenga un mejor desempeño, es necesario: Resp. Téc. Ana Lúcia Monteiro – CRF/PR- 5972
- Que el usuario conozca y siga rigurosamente el presente procedimiento
12/2019 www.laborclin.com.br - Indústria Brasileira

técnico. SAC: 0800-410027 – [email protected]

- Que los materiales sean almacenados en condiciones adecuadas.
- Que el equipo y los demás accesorios necesarios, estén en buenas
condiciones de uso, mantenimiento y limpieza.