UADY

FACULTAD
DE QUMICA
Campus de Ciencias
De la Salud

UNIVERSIDAD AUTNOMA DE YUCATN

FACULTAD DE QUMICA

CURSO DE VERANO 2013

BACTERIOLOGA

Pruebas treponmicas y no treponmicas

Elaborado por
DAVID POOT PECH

Docente
M. en C. Claribel Huchin Chan

FECHA DE ENTREGA

MRIDA, YUCATN A VIERNES 21 DE JUNIO DE 2013

1. Pruebas serolgicas
La sfilis se diagnostica en la mayor parte de los pacientes mediante las pruebas
serolgicas.

Se

utilizan

dos

tipos

generales

de

pruebas,

las

pruebas

biolgicamente inespecficas (no treponmicas) y las pruebas treponmicas

especficas.1
Las pruebas no treponmicas se emplean para la deteccin selectiva porque se
realizan con rapidez y son poco costosas. La positividad de una de estas pruebas
se confirma con una prueba treponmica.1

Estos grupos son complementarios, no mutuamente excluyentes. Las pruebas no

treponmicas son muy tiles como estudios de cribado. Las pruebas treponmicas
deben reservarse como estudios confirmatorios cuando una prueba no
treponmica es positiva o cuando la sospecha clnica de sfilis es alta, a pesar de
que una prueba no treponmica sea no reactiva.2

2. Pruebas serolgicas inespecficas con antgeno de cardiolipina

Las pruebas no treponmicas determinan los anticuerpos de IgG e IgM
(anticuerpos reagnicos) desarrollados frente a los lpidos que se liberan de las
clulas daadas durante la fase precoz de la enfermedad. El antgeno que se usa
para las pruebas no treponmicas es la cardiolipina, la cual se obtiene del
corazn de las vacas. Las pruebas que se usan con frecuencia son la prueba
Venereal Disease Research Laboratory (VDRL) y la prueba de rapid plasmid
reagin (RPR).1
Ambas pruebas consiste en una reaccin entre un antgeno de lecitina, colesterol
y cardiolipina purificada que se mezcla con el suero y/o diluciones del mismo. La
presencia de anticuerpos antirreaginas produce una aglutinacin de partculas,
esta deben observarse al microscopio.3 Ambas pruebas se pueden efectuar de
forma rpida, aunque se debe inactivar el complemento en el suero 30 minutos
antes de que se pueda realizar la prueba del VDRL, esta prueba solo puede
utilizarse para analizar el lquido cefalorraqudeo de los pacientes con sospecha
de neurosfilis. Otras pruebas no treponmicas utilizan la reagina srica no

calentada (USR) y la prueba de suero no calentada con rojo de toluidina

(TRUST).1
2.1.

VDRL (Venereal Disease Research Laboratory)

2.1.1. Fudamento
Es una reaccin de floculacin, donde el antgeno utilizado est compuesto por
colesterol, lecitina y cardiolipina. Esta prueba no treponmica mide anticuerpos
antilipdicos; IgG e IgM, los cuales son formados por el husped en respuesta al
material lipdico liberado de las clulas husped daadas en la infeccin por TP y
material lipdico de la superficie celular treponmica. Tiene gran sensibilidad y baja
especificidad, utiliza controles para su sofisticacin (vase Cuadro 1).4
2.1.2. Metodologa para VDRL5
a) Reaccin cualitativa (deteccin).
1. Obtener suero o plasma para utilizarse fresco o descomplementado.
2. Dejar que el ltex VDRL alcance la temperatura ambiente.
3. Agitar frasco antes de su empleo y durante el reparto utilizar el
cuentagotas para repartir el ltex retirarlo del frasco y tapar.
4. En la reparticin dejar caer la gota en forma vertical.
5. Agitar seis minutos en el agitador.
6. Leer inmediatamente al microscopio.5
Cuadro 1. Controles para la prueba cualitativa VDRL.
Reaccin cualitativa
(deteccin )
Depositar en una
placa de Kline
Suero o plasma
Control positivo suero
Suero fisiolgico
Ltex VDRL (con
contador de gotas
calibrado)

Pozuelo No. 1

Pozuelo No. 2

Pozuelo No. 3

Testigo antgeno

Control positivo
titulado

3 a 24 sueros o
plasmas pacientes
30 L
1 gota

30 L
1 gota

30 L
1 gota

b) Reaccin cuantitativa preparar varias disoluciones con el suero de control

positivo titulado o los sueros de pacientes, con solucin salina isotnica (de
1:2 hasta 1:128). Realizar la reaccin con cada una de estas disoluciones
(como en la reaccin cualitativa).5

2.1.3. Interpretacin de resultados

La formacin de cmulos de las partculas de ltex (en masas vase Figura 1) se
considera una reaccin positiva, reportndose como Reactiva. Es una prueba
negativa o no reactiva, si se observan las partculas de ltex repartidas
uniformemente.5

Figura 1. Prueba VDRL: las reacciones en esta prueba se evalan microscpicamente. (A) Suero
no reactivo. Las partculas de antgeno VDRL se encuentran dispersas de forma uniforme, sin
agruparse. (B) Suero reactivo: las partculas de antgeno VDRL estn fuertemente aglutinadas por
este suero sifiltico. Las partculas aisladas se agrupan en cmulos y grandes grumos. 100 x.

2.2.

RPR (Prueba rpida de reagina plasmtica)

2.2.1. Fundamento
Es una suspension estabilizada que contiene cardiolipina, lecitina y colesterol. a la
cual se le ha adicionado particulas de carbon.6
La prueba RPR es rpido, barato, y fcil de usar. Es excepcionalmente til en la
deteccin. Al igual que su contraparte no treponmico mayor, la VDRL, que puede
ser cuantificada. Estas pruebas son muy sensibles, es decir, hay pocos falsos
negativos, excepto como se discute a continuacin.7

2.2.2. Equipos, materiales y reactivos

Aguja calibre 20 descartable, sin bisel, tratada con silconas, frasco de plstico
para distribuir antgeno. De 3,89 g, tarjetas RPR recubiertas de plstico con diez
crculos, de aproximadamente 18 mm de dimetro cada uno, dispositivos plsticos
desechables (Dispenstir). para distribucin-agitacin, que libera 50 L.2

Placa rotatoria mecnica, de velocidad tija o regulable a 100 2 rpm, que

describa un crculo de 1,8 cm de dimetro en el plano horizontal.

Cubierta humectante para la placa rotatoria.

Lmpara incandescente de alta intensidad.

Dispositivo de seguridad para pipetear, con puntas descartables de 50 L.

Recipientes para residuos y desinfectantes.

Guantes de ltex desechables. anteojos de seguridad y ropa protectora.

Suspensin de antgeno RPR (una variante del antgeno para VDRL):

combinacin estabilizada de cardiolipina al 0,003%, lecitina al 0,020-0,022%,
colesterol al 0,09%. cloruro de colina al 10%, EDTA 0.0125M, carbn al
0,1875%, Na2HP04 0,1 M,2

KH,P04 0,01 M, timerosal al 0,1% y agua destilada.

Muestras de suero control: sueros liofilizados sobre una tarjeta reactivo (R), de
reaccin mnima (MR) y no reactivo (N).

Solucin fisiolgica al 0.9% como diluyente.

2.2.3. Mtodos para la detencin de RPR
2.2.3.1.

Mtodo cualitativo

1. Perforar el inserto del frasco y colocar la aguja calibrada.5

2. Mezclar perfectamente el frasco del antgeno por agitacin ligera antes de
cada determinacin.
3. Con el tubo gotero colocar en un crculo de la tarjeta una gota del suero o
plasma del paciente, extendiendo la gota en el rea de reaccin, con la
parte posterior del tubo gotero o de polietileno.
4. Con el frasco gotero en posicin vertical y con la aguja hacia abajo agregar
una gota de antgeno a la gota colocada en el paso 3.
No mezclar las dos gotas5
5. Mantener la tarjeta en rotacin por 8 minutos a 100 rpm.
6. Al trmino de la rotacin interpretar los resultados en un periodo de 1
minuto.5
2.2.3.2.

Interpretacin de resultados

Reactivo: aparicin de partculas de carbn aglutinado.

No reactivo: presencia de una suspensin homognea de color gris, en ocasiones

aparece el botn central, o algunas partculas de carbn migran al borde del
crculo, permaneciendo la suspensin homognea en ambos casos el resultado se
reporta como negativo o no reactivo.5

2.2.3.3.

Mtodo cuantitativo

Pruebas cuantitativas RPR se reportan como "no reactivo" o "reactivo" en

diluciones de 1:01, 1:02, 1:04, 1:08, 1:16, 1:32, 1:64, etc Si bien gran confianza
puede ser colocado en las pruebas RPR o VDRL, recuerde que los pacientes con
sfilis primaria activa infecciosa con frecuencia tienen VDRL no reactivo y las
pruebas de RPR (vase Figura 2).7

Figura 2. Reacciones de RPR pruebas cualitativas y cuantitativas.

2.3.

Reaccin en suero no calentado. USR (Unheated Serum Reagin)

2.3.1. Principios de la prueba

La USR es una prueba microscpica, no-treponmica y de floculacin en placa.
El antgeno de USR detectara anticuerpos (reaginas) antilipoidales en muestras
de suero de personas con otras condiciones agudas y crnicas.

La prueba de microfloculacin USR usa una suspensin de antgeno de VDRL

modificado que contiene cloruro de colina, la cual incrementa la reactividad del
anticuerpo en suero no calentado. Semejante a la VDRL, la prueba se lee
microscpicamente y es rpido y fcil de hacer. Sin embargo, a diferencia de la
VDRL, la suspensin antignica de la USR no debe ser preparada o descartada
diariamente.4

2.3.2. Materiales
2.3.2.1.

Reactivos

1. Suspensin antignica USR. Una combinacin estabilizada de cardiolipina,

colesterol y lecitina en una solucin resuspendida de EDTA, cloruro de
colina, fosfato y timerosal. La suspensin antignica se guarda a 2 8 C.
Suspensiones no abiertas son estables al menos por 1 ao desde la fecha
de manufactura o hasta la fecha de expiracin.2
2. Alcohol, Etanol 95%
3. Acetona 2
2.3.2.2.

Preparados

1. Muestras de suero control. Reactivo (R), dbil reactivo (D) y no reactivo

(NR).
2. Solucin salina 0,9%. Agregar 0,9 g de cloruro de sodio seco (ACS) a 100
ml de agua destilada.
2.3.4. Procedimientos
2.3.4.1.

Prueba Cualitativa

1. Las pruebas de floculacin en placa para sfilis, son afectadas por la

temperatura. Para obtener resultados confiables y reproducibles, la
suspensin antignica de USR, los controles y la muestra a analizar deben
estar a temperatura ambiente (23 29 C) cuando se realiza la prueba.2
2. Colocar con una pipeta automtica 50 l de suero no calentado en un anillo
de parafina o cermica de la placa. No usar placas de vidrio con
concavidades, pocillos o anillos de vidrio.

3. Resuspender suavemente la suspensin de antgeno de USR.

4. Sostener la aguja dispensadora de la suspensin antignica y la jeringa en
posicin vertical, dispensar varias gotas para eliminar el aire de la aguja;
luego agregar exactamente 1 gota (22 l) de suspensin antignica a cada
crculo conteniendo suero.
5. Colocar la placa sobre el rotador mecnico. Rotar la placa por 4 minutos a
180 2 rpm. Cuando se realiza la prueba en un clima seco, cubrir las
placas con un cobertor humidificante durante la rotacin para prevenir la
evaporacin excesiva.
6. Inmediatamente despus de la rotacin, sacar la placa del rotador y leer los
resultados.
7. Realizar la prueba cuantitativa en todas las muestra de suero que
produzcan un resultado reactivo, dbil reactivo o no reactivo rugoso en la
prueba cualitativa.2
2.3.4.1.1. Lectura e informe de los resultados cualitativos

Leer las reacciones usando un microscopio equipado con ocular de 10X y

objetivo de 10X.

Informar los resultados de la siguiente manera (vase cuadro 2):2

Cuadro 2. Interpretacin de resultados pruebas USR

Lectura
Grumos grandes o medianos
Grumos pequeos
Sin grumos o muy ligera rugosidad
2.3.4.2.

Informe
Reactivo (R)
Dbil reactivo (D)
No reactivo (NR)

Prueba Cuantitativa

Diluir hasta un ttulo de punto final todas las muestras que produzcan resultados
reactivo, dbil reactivo o no reactivo rugoso en la prueba cualitativa. Analizar la
muestra de suero no diluida y diluida 1:2, 1:4 y 1:8. Se pueden realizar en una sola
placa las pruebas cuantitativas hasta diluciones 1:8 de tres muestras de suero
(vase Figura 3 y Cuadro 3 para la interpretacin del resultado).4, 6

Figura 3. Prueba cuantitativa parea USR

Cuadro 3. Informe de los resultados cuantitativos en suero
Suero no
diluido
(1:1)

Resultado en diluciones del suero

4,6

Inforeme

1:2

1:4

1:8

1:16

1:32

Reactivo, no diluido (1 dil)

Reactivo, 2 dils

Reactivo, 4 dils

Reactivo, 8 dils

N (rugoso)

Reactivo, 16 dils

Dbil Reactivo, 1 dil

A continuacin se reporta en el Cuadro 4, la sensibilidad de las pruebas no

treponmicas en los diferentes estadios de la enfermedad de sfilis.
Cuadro 4. Sensibilidad y Especificidad de las Pruebas No-Treponmicas
Sensibilidad (%) por estadio de sfilis no tratada (rango)
Prueba

Primaria

VDRL

78 (74-87)

RPR

86 (77-99)

USR

80 (72-88)

TRUST

85 (77-86)

Secundaria

100

Especificidad
No-sfilis %

Latente

Tarda

96 (88-100)

71 (34-94)

98 (96-99)

98 (95-100)

73

98 (93-99)

95 (88-100)

99

98 (95-100)

(rango)

99 98-99)

3. Pruebas serolgicas especficas con antgeno treponmico

3.1.

Prueba de absorcin de anticuerpos treponmicos fluorescentes

(FTA-ABS)

La prueba treponmica ms empleada era la prueba de absorcin de anticuerpos

treponmicos fluorescentes (FTA-ABS) la cual es una prueba de anticuerpos
fluorescentes indirectos. Las clulas de T. pallidum inmovilizadas en el
portaobjetos se utilizan como antgeno. El portaobjetos se recubre de suero del
paciente, que se ha mezclado con un extracto de treponemas no patgeno. A
continuacin se aaden antibiticos antihumanos marcados con fluorescena con
el propsito de detectar la presencia de anticuerpos especficos en dicho suero.1

3.1.1. Materiales y equipo

Estufa de incubacin de 35 a 37 C, bao de agua regulable a 56 C, dispositivo

de seguridad para pipetas. micropipeteadores graduables de 10 a 200 L, Ansa
bacteriolgica estndar de platino de 2 mm calibre 26, papel absorbente, soporte
para portaobjetos con cmara hmeda y toallas de papel, placas de coloracin, de
vidrio o plstico, con soporte para portaobjetos desmontable, portaobjetos de 2,5 x
7,5 cm, con un extremo mate, de 1 mm de espesor, con dos crculos grabados, de
1 cm de dimetro interno, cubreobjetos, tubos de ensayo (12 x 75 mm) y gradillas,
recipientes para descartar el material y desinfectantes, guantes de ltex
descartables, anteojos de seguridad y ropa protectora, microscopio de
fluorescencia equipado para microscopia con fluorescena, agitadora B.2

3.1.2. Reactivos Comerciales

Antgeno de T. pallidum: una suspensin de T. pallidum (cepa Nichols)

obtenida en tejido testicular de conejo y lavada con solucin salina
tamponada. para eliminar las globulinas de conejo.2

Suero anti-IgG humana marcado con FITC.2

Absorbente: preparado de cultivos de treponemas de Reiter no patgenos,

habitualmente sin el agregado de conservantes. A menudo se venden
fraccionados en cantidades de 5 mL y liofilizados, aunque tambin se
venden en estado lquido.

10

Suero control reactivo: una mezcla de muestras de suero humano

obtenidas de dadores sifilticos que son reactivos 4+. Se utilizan para
preparar sueros control 4+ y controles mnimamente reactivos 1+. El control
1+ muestra el grado mnimo de fluorescencia informado como reactivo y se
utiliza como estndar de lectura.

Suero control inespecfico: una mezcla de sueros obtenida de individuos no

sifilticos. Sin agregado de conservantes. Este control muestra una
reactividad inespecfica > 2+ en una dilucin 1:5 en buffer de fosfatos (PBS)
y casi no se tie cuando se diluye 1:5 en absorbente.

Aceite: aceite de inmersin de baja fluorescencia, no secante, tipo A,

Cargille 1248.

Acetona: reactivo grado ACS.2

3.1.3. Reactivos preparados

PBS, pH 7,2.2

Tween 80 (polisorbato 80) al 2% en PBS. Calentar los reactivos en bao

Mara a 56 C. Agregar a 49 mL de PBS esteril 1 mL de Tween 80, medido
desde el extremo de una pipeta, lavando la pipeta con la mezcla. Controlar
el pH y llevarlo a 7,2 con NaOH 1 N. Desechar si se forma un precipitado o
el pH cambia.

Medio de montaje: agregar una parte de PBS a 9 partes de glicerina

(reactivo proanlisis).

Agua destilada.

3.2.

Preparacin de los reactivos de la prueba

3.2.1. Antgeno de T. pallidum

Rehidratar el antgeno de acuerdo con las instrucciones del fabricante.2

Los frascos ampolla abiertos, conservados a 2 a 8 C, son estables durante

una semana.2

Para preparar los portaobjetos, mezclar completamente la suspensin del

antgeno en una agitadora durante 10 segundos. Determinar por
microscopia de fondo oscuro que los treponemas estn adecuadamente
dispersos antes de realizar los frotis para la prueba FTA-ABS.

11

Limpiar los portaobjetos con una gasa limpia para eliminar las panculas de
polvo. Limpiar los portaobjetos por vibracin snica o frotndolos con
alcohol si los treponemas no se ven con claridad despus de la coloracin.

Preparar frotis muy delgados de T. pallidum dentro de cada circulo

mediante un ansa de alambre de 2 mm. Colocar el antgeno contenido en
un ansa dentro de dos crculos de 1 cm. Dejar secar al aire al menos
durante 15 minutos.

Fijar los portaobjetos en acetona durante 10 minutos y secar al aire. No fijar

ms de 60 portaobjetos con 200 mL de acetona.

Conservar los frotis fijados con acetona a - 20 C. No descongelar y

congelar nuevamente los frotis.

Conservar los frascos ampolla de antgeno no abiertos a 2 a 8 C. El

antgeno no abierto es estable hasta la fecha de vencimiento. 2

3.2.2. Titulacin de la anti-IgG humana

Rehidratar el conjugado de acuerdo con las instrucciones. Si esta turbio,

centrifugarlo a 500 g durante 10 minutos. Fraccionar en alcuotas pequeas
y conservar a -2 0 C. No congelar nuevamente el conjugado
descongelado; conservarlo a 2 a 8C.2

Preparar diluciones 4+ y 1+ del suero reactivo de control, para determinar la

dilucin de trabajo del conjugado.

Correr el patrn control con una referencia o un conjugado conocido.2

3.3.

TINCION INESPECIFICA SUERO REACTIVO 4+ y 1+

3.3.1. Adsorbente

Rehidratar el material liofilizado con agua destilada esteril o de acuerdo con

las

instrucciones del fabricante. El absorbente

rehidratado puede

conservarse a 2 a 8 C o a -2 0 C. Puede utilizarse todo el tiempo que se

desee mientras la reactividad obtenida sea aceptable y el producto no este
contaminado.2
3.3.2. Suero problema

12

Seguir las medidas de seguridad recomendadas para la manipulacion de

sueros humanos.2

Calentar el suero problema y el suero control a 56 C durante 30 minutos,

antes de realizar la prueba.

El da de la prueba recalentar el suero problema durante 10 minutos a 56

C.2

3.3.3. Suero control

Rehidratar el suero de acuerdo con las instrucciones del fabricante.2

Fraccionar en alcuotas de 0,25 mL y conservar a -2 0 C durante todo el

tiempo en que la reactividad sea aceptable.

Preparar los siguientes controles para cada determinacin:

o Suero control reactivo (R) 4+: un suero sifiltico que muestre
fluorescencia 4+ en una prueba sin absorcin y fluorescencia solo
levemente reducida en la prueba absorbida. Para producir suero no
absorbido, agregar 50 L de suero control reactivo a un tubo que
contenga 200 L de PBS y mezclar bien. Para producir suero
absorbido, transferir 50 L del suero control reactivo a un tubo con
200 L de absorbente y mezclar bien.
o Suero control mnimamente reactivo (MR). Es una dilucin en PBS
del suero control reactivo, que del mnimo grado de fluorescencia
(1+) considerada reactiva.
o Suero control inespecfico (NS): un suero no sifiltico que muestre
fluorescencia >2+ en la prueba no absorbida. Para producir el suero
no absorbido, transferir 50 L del suero control inespecfico a un tubo
que contenga 200 L de PBS y mezclar bien. Para producir el suero
absorbido, transferir 50 L del suero control inespecfico a un tubo
con 200 |iL de absorbente y mezclar bien.
o Los controles para tincin inespecfica de los conjugados consisten
en un frotis de antgeno cubierto con 30 L de PBS en lugar de suero
y un frotis de antgeno cubierto con 30 L de absorbente en lugar de
suero.2

13

3.4.

Prueba FTA-ABS

Identificar los portaobjetos preparados antes con antgeno numerndolos en

el extremo mate.2

Numerar cada tubo y portaobjetos para que se correspondan con el suero

problema y el suero control por utilizar.

Preparar diluciones del suero control reactivo (4+), mnimamente reactivo

(1+) y control inespecfico en absorbente o PBS de acuerdo con las
instrucciones.

Pipetear 200 L de absorbente en un tubo de ensayo para cada suero

problema.

Agregar 50 L de suero problema calentado al tubo correspondiente y

mezclar ocho veces.

Cubrir los frotis de antgeno que corresponda con 30 L de las diluciones

suero control reactivo (4+), mnimamente reactivo (1+) y control
inespecfico.

Cubrir los frotis de antgeno que corresponda con 30 L de PBS y 30 L. de

absorbente para los controles a y b de tincin inespecfica. Los controles
deben mostrar el siguiente patrn:

Cubrir los frotis de antgeno que correspondan con 30 L de las diluciones

del suero problema.

Evitar la evaporacin colocando los portaobjetos en cmara hmeda e

incubar a 35 a 37 C durante 30 minutos.

Al finalizar la incubacin realizar los siguientes lavados:2

o Colocar los portaobjetos en los soportes para tincin y lavar 5
segundos con PBS corriente.
o Colocar durante 5 minutos los portaobjetos en cubetas de coloracin
que contengan PBS.
o Agitar los portaobjetos sumergindolos y retirndolos del PBS al
menos 30 veces.
o Repetir los dos pasos anteriores con PBS nuevo.

14

o Lavar los portaobjetos durante 5 segundos con agua destilada

corriente y secar en forma suave con papel absorbente.

Diluir la anti-IgG humana marcada con FITC hasta su ttulo de trabajo en

PBS con 2% de Tween 80 y colocar aproximadamente 30 L de conjugado
diluido sobre cada frotis.

Repetir la incubacin y los lavados de los portaobjetos.

Montar los portaobjetos de inmediato, colocando una pequea gota de

medio de montaje y un cubreobjetos sobre cada frotis.

Colocar los portaobjetos en una habitacin oscura y leer antes de

transcurridas 4 horas.

Controlar los frotis por microscopia de fondo oscuro, utilizando primero la

lmpara de tungsteno, para verificar la presencia de treponemas en el frotis,
luego leer la fluorescencia FITC (prueba).

Utilizando el portaobjetos de control mnimamente reactivo (1+) como

estndar de lectura, registrar la intensidad de fluorescencia de los
treponemas:

Informar los resultados de la siguiente forma (vase Cuadro 5 y Figura 4):2

Cuadro 5. Sistema de informe para la prueba FTA-ABS

Lectura inicial de la prueba

Lectura de repeticin
Informe
4+
Reactivo
3+
Reactivo
2+
Reactivo
1+
Reactivo
Mnimamente reactivo*
1+
1+
1+
1+
No reactivo
1+
1+
No reactivo
N
No reactivo
Fluorcencia atpica observada**
Fluorescencia en rosario
*En ausencia de signos de infeccin treponmica, este resultado de la prueba debe
considerarse dudoso. Debe obtenerse una segunda muestra 1 a 2 semanas despus de la
muestra inicial y enviarla al laboratorio para realizar pruebas serolgicas.
**La fluorescencia en rosario ha sido observada en pacientes con lupus eritematoso sistmico
activo o con otras enfermedades autoinmunitarias.

15

Figura 4. Treponema pallidum. Este control de la prueba FTA-ABS muestra tincin 4+ de las
espiroquetas. Se observan la forma helicoidal y las espirales firmemente enrolladas en algunas de
las celulas bacterianas. Esta microfotografa es una preparacin con inmunofluorescencia indirecta
de T. pallidum que utiliza antiglobulina humana conjugada con fluorescena (aumento original.
600x).

4. Otras pruebas treponmicas

Otra de estas pruebas es la Treponema pallidum haemaglutination assay (TPHA)
la cual consiste en un test de aglutinacin indirecto para la determinacin de
anticuerpos T. pallidum en el suero/plasma humano. Una prueba de estas es la
TPI (Treponema pallidum immobilizatiton) sin embargo, esta prueba ya es
obsoleta debido a su baja sensibilidad en la sfilis primaria.

La Reaccin de inmovilizacin del T. pallidum (TPI o prueba de Nelson): esta es

una prueba costosa, de ejecucin muy delicada, que ya ha sido prcticamente
sustituida por la FTA-ABS, a pesar de ser la ms especfica. Se ha considerado
prueba de referencia en casos dudosos y consiste en la demostracin de la
inmovilizacin de T. pallidum vivos mviles por los anticuerpos especficos en el
suero del paciente, despus de la segunda semana de la infeccin. Se mezclan
diluciones del suero del paciente con complemento y T. pallidum vivos y
activamente mviles, extrados de chancros testiculares de conejo. La reaccin se
lee en el microscopio de campo oscuro y se considera positiva cuando se produce
la inmovilizacin de ms del 50 % de los treponemas presentes. En suero normal,
el movimiento activo contina. Esta prueba es difcil de realizar, requiere
treponemas vivos y en la actualidad rara vez se practica.8

16

Reaccin de hemaglutinacin pasiva (HAP) (TPHA) y microhemaglutinacin

Treponema pallidum (MHA-TP): estas pruebas son de reciente introduccin; la
MHATP se ha utilizado para la determinacin de anticuerpos especficos
antitreponmicos. Se basa en la sensibilizacin de hemates formalinizados de
pavo o de carnero, con un lisado de T. pallidum. La adicin de un suero positivo
provoca la aglutinacin de los hemates. Es una prueba muy sensible, pero menos
especfica que la FTA-ABS, es muy simple y de bajo costo, por lo que su uso se
est generalizando. Esta prueba se hace positiva un poco ms tarde, en la
evaluacin de la infeccin; es confirmatoria para el diagnstico de la sfilis, con la
excepcin de la fase primaria de la enfermedad. Se han empleado ensayos que
usan la reaccin en cadena de polimerasa (PCR) para la demostracin del ADN
de T. pallidum en muestras clnicas, pero el papel del PCR en laboratorio clnico
necesita an ser determinado.8

4.1.

Prueba rpida para determinacin de sfilis en sangre total

Las pruebas rpidas para

la determinacin de

sfilis son

un ensayo

inmunocromatogrfico en fase slida para deteccin cualitativa de anticuerpos tipo

IgG, IgM e IgA contra Treponema pallidum.4
Los tipos de muestra con que se ha estandarizado este mtodo son sangre, suero
y plasma, otros fluidos no son recomendados para realizar esta prueba.
Las muestras que son obtenidas prematuramente durante el periodo de infeccin,
pueden tener niveles no detectables de anticuerpos. Si se obtiene un resultado
negativo y la clnica del paciente es sospechosa, se debe repetir la prueba
despus de un tiempo segn criterio mdico.4

4.1.1. Procedimiento

Rotular el dispositivo de prueba rpida con el nombre o nmero del

paciente.4

Limpiar la zona de puncin con algodn impregnado en alcohol, secar con

un algodn seco y limpio.

17

Presionar el dedo seleccionado para hacer llenado capilar.

Puncionar con la lanceta la parte lateral de la yema del dedo.

Con la pipeta plstica o tubo capilar tomar la cantidad de sangre necesaria

para la prueba.

Adicionar la cantidad requerida de sangre segn la tcnica utilizada dentro

del pozo de muestra.

Agregar las gotas necesarias de diluyente (de acuerdo a la tcnica

utilizada) dentro del pozo de muestra .En este paso se debe esperar a que
se absorba cada gota de diluyente antes de agregar la siguiente.

Interpretar la prueba dentro del tiempo sealado en la tcnica.4

4.1.2. INTERPRETACIN
En la ventana de resultados aparecer una banda de color en la lnea de
control sealada con la letra C, lo que indica que la prueba est
funcionando adecuadamente.

En la ventana de resultados, en la lnea sealada con la letra T aparece el

resultado del paciente:

Negativo: Solamente aparece la banda de color en el control C. 4

Positivo: Aparecen dos bandas de color, la banda control C y la banda test T. 4
Invlido: Cuando no aparece ninguna banda de color en la lnea de control C, se
debe repetir la prueba con un dispositivo de prueba nuevo.
A continuacin en el Cuadro 6, se resumen las diferencias de las pruebas de
serologa treponmicas y no treponmicas.
Cuadro 6. Diferencias entre las pruebas treponmicas y no treponmicas.

Caractersticas

Pruebas no treponmicas

Pruebas treponmicas

VDRL
(Venereal
Disease
Research Laboratories).
RPR (rapid plasma reagin).
USR
(Unheated
serum
reagin).
TRUST
(Toluidine
red
unheated serum test).

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TP-PA
(Treponema
pallidum
particle agglutination)
MHA-TP (microhaemagglutination
assay for antibodies to Treponema
pallidum).
FTA-ABS (fluorescent treponemal
antibody absorption)
EIA
(Nontreponemal
enzyme
immunoassays).

Costos

Baja especificidad.
Subjetividad.
Bajos

MHA-TP (microhaemagglutination
assay for antibodies to Treponema
pallidum).
Pruebas rapidas
No sirven para seguimiento.
Algunas requieren instrumental y
personal calificado.
Las pruebas treponmicas suelen
permanecer positivas para toda la
vida, por lo que no permiten
distinguir entre sfilis activa y
pasada.
La cuantificacin de las pruebas
Treponmicas no es fiable.
Permanece positiva de por
vida.
Altos

Complejidad

Baja

Variables

Ventajas

Desventajas

Ampliamente difundidas y
disponibles.
Permiten
seguimiento
al
poderse valorar la respuesta
al tratamiento y diagnosticar
infecciones recurrentes de
sfilis.

5. Listado de referencias
1- Murray, P.; Rosenthal, K.; Pfaller, M. Micribiologa mdica. 6 Edicin. Editorial
Elsevier, Barcelona, 2009, pp 409
2- Winn, W.; Allen, S.; Janda, W.; Koneman, E.; Procop, G.; Schrekenberger, P.;
Woods, G. Koneman diagnstico microbiolgico: texto y atlas en color. 6
edicin, Ed. Mdica Panamericana, Buenos Aires, 2008, pp 1082; 1461-5.
3- Basualdo J. Torres R. Microbiologa Biomdica. Editorial Atlante S.R.L.
Buenos Aires, 2006, pp. 491.
4- Malbrn, C.G. Manual de tcnicas y procedimiento para el diagnstico de
sfilis. Centro Nacional de Referencia en Enfermedades de Transmisin
Sexual. INEI-ANLIS, Argentina, 2010; pp 1-37.
5- Garibay, A. Manual de prcticas de Inmunologa. Editorial UniSon, Hermosillo,
Sonora, 2006; pp 75-82
6- xx. Trejos, S.; Zambrano, J. Manual para el diagnstico de sfilis. Instituto
nacional de salud. 2011. pp. 5, 23.
7- Texas department of state health service. Interpretation of Serological Tests for
Syphilis. HIV-STD testing locations in Texas FACTS, 2005, 1-4.

19

8- Llop, A.; Valds-Depena, M.; Zuazo, J. Microbiologa y parasitologa mdicas.

Tomo 1, CIP editorial Ciencias Mdicas, La Habana, 2001, pp 394, 395.

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