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Problemas Bioreactors

Bioreactors (Universitat de Barcelona)

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CAPÍTULO 2: CINÉTICA Y REACTORES ENZIMÁTICOS

Problema 2.1.
La actividad enzimática de la fosfatasa alcalina se ha medido determinando la cantidad
de p-nitrofenol (pNF) liberado al tratar un substrato artificial formado por p-nitrofenol
fosfato (pNFF). En la tabla adjunta se presentan los datos de velocidad de reacción
obtenidos para diferentes concentraciones de substrato:

cpNFF (mM) 0,10 0,13 0,17 0,25 0,5 1,00 2,00 4,00 8,00 15,0 25,0
r (mM·h-1) 0,40 0,49 0,65 0,88 1,8 3,32 4,90 6,19 7,13 7,79 7,83

Determinar los parámetros de la ecuación de Michaelis-Menten empleando las

representaciones de Lineweaver-Burk, Hanes y Eadie-Hofstee. Comparar los valores
obtenidos en cada linealización con los determinados mediante regresión no lineal: KM
= 1,63 mM y rmax = 8,56 mM substrato·h-1.

Respuesta: rmax (mM/h) KM (mM)

Lineweaver-Burk 10,0 2,45
Hanes 8,53 1,82
Eadie-Hofstee 9,05 2,095

Problema 2.2.
Eadie (1942) midió la velocidad inicial de la hidrólisis de la acetilcolina (sustrato) por
suero de perro (fuente de la enzima) y obtuvo los datos siguientes:

Concentración de sustrato, mol/L 0,0032 0,0049 0,0062 0,0080 0,0095

Velocidad inicial, mol·(L·min)-1 0,111 0,148 0,143 0,166 0,200

Evaluar los parámetros de la ecuación de Michaelis-Menten empleando las

representaciones gráficas de (a) Hanes, (b) Lineweaver-Burk y (c) Eaddie-Hofstee.
Comparar con los valores obtenidos mediante ajuste no lineal de los datos: r max = 0,302
mol·(L·min)-1, KM = 0,00574 mol/L

Respuesta: rmax (M/min) KM (M)

Lineweaver-Burk 0,275 4,73·10-3
Hanes 0,302 5,77·10-3
Eadie-Hofstee 0,265 4,27·10-3

Problema 2.3.
A partir de los datos de la tabla, correspondientes a la velocidad inicial de reacción de
una reacción catalizada enzimáticamente, para diferentes concentraciones iniciales de
sustrato, determinar los parámetros cinéticos utilizando las diferentes técnicas de
linealización. Comparar con los resultados obtenidos cuando se utilizan solamente dos
pares de datos concentración-velocidad de reacción al azar

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CS,0 (µmol/L) 4100 950 520 103 49 10,6 5,1

r0 (µmol/L·min) 0,0177 0,0173 0,0125 0,0106 0,008 0,0067 0,0043

Respuesta: rmax (M/min) KM (M)

Lineweaver-Burk 0,013 10,6
Hanes 0,018 69,5
Eadie-Hofstee 0,0142 12,6

Problema 2.4
Considerando los datos cinéticos de la tabla adjunta, determinar:
a) Tipo de inhibición
b) El valor de la constante de Michaelis
c) La constante de equilibrio de formación del complejo enzima-inhibidor

cS (mM) 2 3 4 10 15
r (mM·(L·min)-1) 139 179 213 313 370
r (mM·(L·min)-1) ; cI = 6 mM 88 121 149 257 313

Res. a) Inhibición competitiva; b) KM = 5,26 mM; c) N = 0,129 mM-1.

Problema 2.5.
En la purificación de la histidina-L (S) de hígado de cerdo, Dhaman y Radhakrishman
encontraron que la acción de la enzima E era inhibida por la histidina-D (I). A partir de
los resultados de la tabla adjunta encontrar la ecuación de velocidad y los parámetros
correspondientes para la reacción sin y con inhibidor. Explicar el tipo de inhibición que
ejerce la histidina-D.

Concentración de histidina-L Velocidad de consumo de histidina-L (mol/min.L)

(mol/L)
En ausencia de histidina-D Conc. histidina-D = 2,5 mol/L
0,5 0,4 ------
1 0,625 0,333
2 0,91 0,5
4 1,33 0,625

Res. Inhibición no competitiva: Utilizando la linealización de Hanes: velocidad de

reacción en ausencia de histidina-D:
2,027𝑐𝑆
𝑟=
2,206 + 𝑐𝑆
En presencia de histidina-D:
2,027
𝑐
1 + 0,526𝑐𝐼 𝑆
𝑟=
2,206(1 + 0,263𝑐𝐼 )
+ 𝑐𝑆
1 + 0,526𝑐𝐼

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Problema 2.6.
El salicilato inhibe la acción catalítica de la enzima glutamato deshidrogenasa. Teniendo
en cuenta los resultados experimentales de la tabla adjunta, determinar:
a) El tipo de inhibición. Suponer que la concentración de salicilato es constante
b) La constante de Michaelis para el substrato
c) La constante de equilibrio de disociación KI del complejo enzima-inhibidor

Substrato (mM) 1,5 2,0 3,0 4,0 8,0 16,0

r (mM.min-1) sin inhibidor 0,21 0,25 0,28 0,33 0,42 0,48
r (mM.min-1) ; cI = 40mM 0,08 0,10 0,12 0,13 0,16 0,18

Res: a) Inhibición no competitiva; b) KM = 2,23 mM; c) KI = N-1 = 31,6 mM

Problema 2.7
Para estudiar el efecto de una enzima sobre un determinado substrato se ha realizado
la serie de experimentos de la tabla adjunta en un reactor discontinuo isotermo. En
ellos se parte de una misma concentración de enzima y de diferentes concentraciones
de substrato, y se determina la concentración de éste al cabo de un tiempo de
funcionamiento del reactor.

Nº experimento cEo (mol.m-3) cSo (mol.m-3) cS (mol.m-3) tiempo(h)

1 0,01 4000 1 7
2 0,01 500 1 3
3 0,01 100 1 2

Determinar la ecuación de velocidad que representa adecuadamente los resultados

experimentales obtenidos.

1,12·105 𝑐𝐸,0 𝑐𝑆
Res. 𝑟 = 463+𝑐𝑆

Problema 2.8.
El valor de la constante de Michaelis para una enzima es 0,01 mol/L. Para medir la
velocidad máxima se realizó un experimento en el que se consumió el 10% del substrato
inicial, cuya concentración era de 3,4.10-4 mol/L, en 5 minutos. a) ¿Cuál será el valor de
la velocidad de reacción máxima? b) ¿Cuál será la concentración de substrato del
sistema al cabo de 15 minutos de comenzar?

Res.: a) rmax = 2,175·10-4 mol·(L·min)-1; b) 𝑐𝑆 = 2,48·10-4 mol·L-1.

Problema 2.9.
La enzima E cataliza la descomposición del substrato S. Para analizar si la substancia I
actúa como inhibidor se han realizado los dos experimentos de la tabla adjunta en un
recipiente cerrado, agitado e isotermo. Uno de los experimentos en ausencia de I y el
otro en presencia de I.

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Experimento 1: cSo = 600 mol.m-3 ; cEo = 8 g.m-3 ; sin I

cS (mol.m-3) 350 160 40 10
t (h) 1 2 3 4

Experimento 2 : cSo = 800 mol.m-3 ; cEo = 8 g.m-3 ; cIo = 100 mol.m-3

cS (mol.m-3) 560 340 180 80 30
t (h) 1 2 3 4 5

a) Encontrar la ecuación de velocidad que representa la descomposición del substrato

S sin la presencia de inhibidor y determinar los parámetros cinéticos.
b) ¿Qué tipo de inhibición ejerce I? Encontrar la ecuación de velocidad en presencia
de I y los correspondientes parámetros de la ecuación.

44,3𝑐𝐸,0 𝑐𝑆 𝐸,0 𝑆 44,3𝑐 𝑐

Res. a) 𝑟 = 195,7+𝑐𝑆
; b) inhibición competitiva, 𝑟 = 195,7(1+4,58·10 −3 𝑐 )+𝑐
𝐼 𝑆

Problema 2.10.
De una serie de ensayos en discontinuo con una concentración de enzima constante,
se obtuvieron los datos siguientes de velocidad inicial.

CS,0 (mmol/L) 1 2 3 5 7 10 15 20
r0 (mmol/L·min) 0,12 0,22 0,30 0,45 0,52 0,5 0,40 0,33

1) ¿Existe problema de inhibición por el sustrato?

2) Encontrar la ecuación cinética que relaciona los datos anteriores y deducir el
valor de los parámetros de la misma

1,186𝑐𝑆
Res. 1) Sí; 2) 𝑟 =
9,01+𝑐𝑆 +0,122𝑐𝑆2

Problema 2.11.
Los 5’-ribonucleótidos son productos de alto valor añadido que pueden obtenerse por
hidrólisis enzimática selectiva de ARN, utilizando la enzima 5’-fosfodiesterasa.
Se han realizado experimentos en un reactor discontinuo con concentración constante
de enzima, variando la concentración inicial de ARN, obteniéndose los resultados
siguientes:

CS,0 0,1 0,25 0,5 0,75 1 1,5 2 3 4 5 7,5 10

(g/L)
r0 0,38 0,86 1,43 1,75 1,90 1,94 1,82 1,52 1,27 1,08 0,78 0,61
(g/L·h)

Determinar el modelo cinético que explica estos resultados y estimar el valor numérico
de los parámetros

4,00𝑐𝑆
Res. 𝑟 = 0,9476+𝑐 2
𝑆 +0,5518𝑐𝑆

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Problema 2.12.
La hidrólisis enzimática de la sacarosa sigue el modelo de inhibición por el sustrato. A
partir de los datos siguientes, correspondientes a la enzima invertasa, determinar los
parámetros cinéticos correspondientes.

CS,0 (mol/L) 0,049 0,0963 0,181 0,266 0,457 0,69 0,846

r0 (mol/L·min) 0,0051 0,0081 0,0121 0,0141 0,0135 0,0105 0,0088

Problema 2.13.
Para medir la actividad enzimática y la velocidad inicial de reacción, se colocaron en un
recipiente agitado 5 mL de celobiosa (100 µmol/mL) y 44 mL de solución tampón. La
reacción dio comienzo al añadir 1 mL de enzima -glucosidasa en solución que contenía
0,1 mg de proteína/mL. A 1, 5, 10, 15 y 30 min, se separó de la solución 0,1 mL de
solución y se determinó su contenido de glucosa. Los resultados fueron:

Tiempo, min 1 5 10 15 30
Conc. Glucosa, µmol/mL 0,05 0,23 0,38 0,52 1,03

1) ¿Cuál es la actividad de la -glucosidasa en unidades/mL de solución de enzima

y en unidades/mg de proteína? Una unidad se define como la actividad de la
enzima que produce 1 µmol/min
2) ¿Cuál es la velocidad inicial de reacción?

Res: 1) 𝑎𝑐𝑡𝑖𝑣𝑖𝑑𝑎𝑑⁄𝑚𝑔 = 29,65 − 3,306𝑡 + 0,2108𝑡 2 − 3,862 · 10−3 𝑡 3

𝑎𝑐𝑡𝑖𝑣𝑖𝑑𝑎𝑑
𝑚𝑙
= 2,965 − 0,3306𝑡 + 0,02108𝑡 2 − 3,862 · 10−4 𝑡 3 ; 2) 0,0297 mol/ml.mim

Problema 2.14.
Se realiza una serie de experimentos con diferentes concentraciones de enzima y
sustrato en un reactor discontinuo donde se dejan reaccionar. Al cabo de cierto tiempo
se interrumpe la reacción y se analiza el contenido del reactor. A partir de los resultados
mostrados a continuación, hallar una ecuación de velocidad que represente la acción de
la enzima sobre el sustrato

Experimento CE,0 mol/m3 CS,0 mol/m3 CS mol/m3 Tiempo, h

1 3 400 10 1
2 2 200 5 1
3 1 20 1 1

207𝑐𝐸,0 𝑐𝑆
Res. 𝑟 = 61,6+𝑐𝑆

Problema 2.15.
Bender y Marshall han estudiado la hidrólisis de una sustancia S a p-nitrofenol por la acción
de la encima elastasa. Estos autores han propuesto el siguiente mecanismo para la citada
reacción

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k1 k2
S + E → ES → E + A
+
P
Donde, P= producto (p-nitrofenol)
A = ácido trimetil acético
k1 = 150 m3/mol ks
k2 = 2,60 ks-1

1. Deducir una ecuación de velocidad para la producción de P en función de k1, k2, cEo
(concentración total de elastasa en las dos formas, E y ES) y de cS, (concentración
instantánea de sustrato).
2. La Badger Chemical Company está investigando la producción del p-nitrofenol mediante
este proceso en un tanque agitado continuo de volumen 0,3 m3. Se ha de tratar una
corriente de sustrato de concentración 100 mol/m3 y se desea convertir el 90% del sustrato
en producto, determinar el caudal de alimentación que puede tratarse si la concentración
de elastasa en el reactor es de 10 mol/m3.
𝑘 𝑘2 𝑐𝐸,0 𝑐𝑆
Res.: 1) 𝑟𝑃 = 𝑘1 +𝑘 𝑐
; 2) 0,31 m3/h
2 1 𝑆

Problema 2.16
En los últimos años se ha incrementado la utilización de enzimas como catalizadores. El
proceso implica la fijación de estas en un soporte sólido y la disposición del mismo en un
tubo por el que circula un líquido. Se ha pensado el tratamiento de una solución acuosa de
lactosa para convertirla en glucosa y galactosa, lo que permitiría la transformación de
residuos de la industria de quesos en productos útiles. La expresión de velocidades de
reacción media para este tipo de procesos (reacción S → P1 + P2) por unidad de volumen
de lecho puede escribirse como

k cS
−rs =
 c 
cS + K M 1 + P1 
 K 

¿Cuál será el tiempo espacial necesario en un reactor tubular para alcanzar una conversión
de lactosa del 80% a 40 °C para la que KM = 0,0528 M, K = 0,0054 M y k = 5,53 mol/L min?
La concentración inicial de lactosa es de 0,149 mol/L
Res.: 0.25 min.

Problema 2.17
Un sustrato se convierte en un producto por la acción catalítica de una enzima. Suponer
que los parámetros cinéticos de Michaelis-Menten para esta reacción enzimática son:
KM = 0,03 mol/L y rmax= 13 mol/L·min

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1) ¿Qué tamaño debería tener un reactor continuo tanque agitado (estacionario)

para convertir el 95% del sustrato alimentado (CS,0 = 10 mol/L) si el caudal de
alimento es de 10 L/h?
2) ¿Cuál debería ser el tamaño del reactor si se emplea un reactor de flujo en
pistón en lugar del RCTA de la primera parte?

Res. 1) 130 cm3; 2) 123 cm3.

Problema 2.18
Un sustrato se descompone en presencia de una enzima siguiendo la ecuación de
Michaelis-Menten con los siguientes parámetros cinéticos: KM = 10 g/L y rmax= 7 g/L·min

1) Si se opera con 2 reactores continuos tanque agitado de 1 L en estado

estacionario, ¿Cuál será la concentración de sustrato que abandona el segundo
reactor? El caudal es de 0,5 L/min. La concentración de sustrato en el alimento
al primer tanque es 50 g/L y la concentración de enzima en los dos reactores se
mantiene en el mismo valor todo el tiempo.
2) ¿Es el sistema de dos reactores más eficiente que un reactor cuyo volumen es
igual a la suma de los dos reactores?

Res. 1) 28,5 g/L; 2) 29,15 g/L

Problema 2.19
La celulosa puede convertirse en azúcar de acuerdo con la reacción enzimática
celulasa
Celulosa azúcar

En esta reacción la celobiosa y la glucosa actúan inhibiendo la ruptura. Para estudiar la

cinética de la reacción se realiza una serie de experimentos en un reactor tanque
agitado que se mantiene a 50ºC y se alimenta con celulosa finamente triturada (CS,0=
25 kg/m3, la misma en todos los ensayos) y varios inhibidores. Los resultados son los
siguientes:

Experimento CS (kg/m3) Serie 1 Serie 2 Serie 3

Sin inhibidor Con celobiosa Con glucosa
 (min) CB,0 = 10 kg/m3 CG,0 = 10 kg/m3
 (min)  (min)
1 1,5 587 940 1020
2 4,5 279 387 433
3 9 171 213 250
4 21,0 36 40 50

1) Encontrar una ecuación de velocidad que represente la hidrólisis de celulosa

por la celulasa en ausencia de inhibidor
2) Determinar el tipo de inhibición por la acción de la celobiosa (tipo de inhibición
y ecuación de velocidad)

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3) Determinar el tipo de inhibición por la acción de la glucosa (tipo de inhibición y

ecuación de velocidad)

Los datos del problema se han tomado de Ghose y Das, Advances in Biochemical
Engineering 1, 66 (modificados)

0,128𝑐 0,128𝑐
Res. 1) 𝑟 = 3,394+𝑐𝑆 ; 2) Inhibición competitiva, 𝑟 = 𝑆
; 3) Inhibición no
𝑆 3,394(1+0,087𝑐 )+𝑐 𝐼 𝑆
0,128
𝑐
(1+0,029𝑐𝐼 ) 𝑆
competitiva, 𝑟 = (1+0,094𝑐𝐼 )
3,394 +𝑐𝑆
(1+0,029𝑐𝐼 )

Problema 2.20
El hidrato de carbono A se descompone en presencia de la enzima E. Se sospecha que
el hidrato de carbono B influye también de alguna forma en la descomposición. Para
estudiar el fenómeno se alimentan varias concentraciones de A, B y E en un reactor
continuo tanque agitado (V = 240 cm3)
1) Encontrar la ecuación de velocidad a partir de los datos de la tabla adjunta
2) ¿Qué puede concluirse del papel de B en la descomposición?
3) Sugerir un mecanismo para la reacción

CS,0 (mol/m3) CS (mol/m3) CB,0 (mol/m3) CE,0 (mol/m3) q (cm3/min)

200 50 0 12,5 80
900 300 0 5 24
1200 800 0 5 48
700 33,3 33,3 33,3 24
200 80 33,3 10 80
900 500 33,3 20 120

20𝑐𝐸,0
𝑐
(1+0,013𝑐𝐼 ) 𝑆
Res. 1) 𝑟 = (1+0,127𝑐𝐼 )
; 2) B es un inhibidor; c) Es una inhibición no competitiva
200 +𝑐𝑆
(1+0,013𝑐𝐼 )

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CAPÍTULO 3: CINÉTICA Y REACTORES MICROBIANOS

Problema 3.1.
Los resultados de la tabla adjunta se han obtenido con Pyrodictium occultum a 48 ºC. El
primer experimento se ha llevado a cabo en ausencia de extracto de levadura y el
segundo en su presencia. En ambos experimentos había inicialmente Na 2S.

Experimento 1
t(h) 0 10 15 20 30 40 50 60 70
CM.10-4 (g.mL-1) 2,7 2,8 15 70 400 600 775 600 525
% H2S 0,5 0,8 1,0 1,2 2,8 4,7 7,5 8,0 8,2

Experimento 2
t(h) 0 5 10 15 20 30 40 50 60
CM.10-4 (g.mL-1) 2,7 7 11 80 250 350 350 250 ---
% H2S 0,1 0,7 0,7 0,8 1,2 4,3 7,5 11 12,3

Determinar:
a) La duración de la fase de retardo o inicio en ausencia o en presencia de extracto de
levadura
b) ¿Cuál es la diferencia entre las velocidades específicas de crecimiento sin y con la
presencia del extracto de levadura?
c) ¿Cuál es la duración de la fase estacionaria?
d) ¿En qué fase tiene lugar la producción máxima de H2S?

Res: 1) sin levadura,  = 0,245 h-1 y t0 = 8,53 h; con levadura,  = 0,254 h-1 y t0 = 2,40 h;
2) la velocidad específica de crecimiento apenas cambia; 3) sin levadura entre 40 y 70
min, con levadura entre 30 y 50 min; 4) Sin levadura al inicio de la fase estacionaria, con
levadura durante toda la fase estacionaria

Problema 3.2.
En la tesis publicada más tarde como libro, Monod propuso por primera vez la ecuación
que lleva su nombre. Como prueba experimental que daba soporte a su ecuación
presentó los resultados obtenidos con cuatro experimentos realizados en un recipiente
cerrado, agitado e isotermo sobre el crecimiento de cultivo bacteriano puro en una
solución de lactosa. Los resultados de uno de los experimentos son:

t (h) cS (mg/L) cm (mg/L)

0,54 137 15,5 a 23,0
0,36 114 23,0 a 30,0
0,33 90 30,0 a 38,8
0,35 43 38,8 a 48,5
0,37 29 48,5 a 58,3
0.38 9 58,3 a 61,3
0,37 2 61,3 a 62,5

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Comprobar que con estos resultados se obtiene la ecuación de Monod, y obtener el

coeficiente de rendimiento YM/S.

Res: Se cumple la ecuación de Monod con max = 0,79 h-1 y KM = 28,7 mg/L. YM/S (medio) =
0,316

Problema 3.3.
La velocidad de crecimiento de una bacteria Stepinpooni puede describirse por el modelo
cinético
 cM 
r M =  max  1 - *  cM
 cM 

donde max= 0.5 h-1 y cM*= 20 g/dm3

El sustrato se encuentra en exceso.

El crecimiento celular se efectúa en un reactor discontinuo de 2 dm3. Representar la
velocidad de crecimiento y la concentración celular (g/dm3) en función del tiempo tras una
inoculación de 0,4 g de células en el reactor. Ignorar el tiempo de retardo.

20 𝑒𝑥𝑝(0,5𝑡) 990 𝑒𝑥𝑝(0,5𝑡)

Res. 𝑐𝑀 = y 𝑟𝑀 = 2
99+𝑒𝑥𝑝(0,5𝑡) (99+𝑒𝑥𝑝(0,5𝑡))

Problema 3.4.
En la tesis publicada más tarde como libro, Monod propuso por primera vez la ecuación
que lleva su nombre. Como prueba experimental que daba soporte a su ecuación
presentó los resultados obtenidos con cuatro experimentos realizados en un recipiente
cerrado, agitado e isotermo sobre el crecimiento de cultivo bacteriano puro en una
solución de lactosa. Los resultados de un segundo experimento son:

t (h) cS (mg/L) cm (mg/L)

0,52 158 15,8 a 22,8
0,38 124 22,8 a 29,2
0,32 114 29,2 a 37,8
0,37 94 37,8 a 48,5
0,36 25 48,5 a 59,6
0.37 19 59,6 a 66,5
0,38 2 66,5 a 67,8

Comprobar que con estos resultados se obtiene la ecuación de Monod, obtener el

coeficiente de rendimiento YM/S y comparar los resultados de los parámetros del modelo
con los obtenidos en el problema 3.2

Res: Se cumple la ecuación de Monod con max = 0,97 h-1 y KM = 36,1 mg/L. YM/S (medio) =
0,306

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Problema 3.5.
El crecimiento de un cultivo de E. coli en un substrato de manitol puede representarse por
la ecuación siguiente

1, 2 cS cM
rM =
2 + cS

Donde cS = g manitol/m3, YM/S= 0,1 g células/g manitol

1) Determinar la concentración de salida de las células producidas al alimentar un

fermentador tanque agitado continuo con una corriente de 1 m3/h de solución de
manitol (cS,0= 6 g/m3) y un volumen V = 1 m3.
2) El D de lavado
3) La concentración de salida de las células si el reactor fuese de 5 m3.
Sol.: 1) 0 g células/m3; 2) 0,9 h-1; 3) 0,56 g células/m3

Problema 3.6.
El crecimiento del microbio E. coli en glucosa sigue la cinética de Monod de acuerdo con la
siguiente expresión:
1, 333 cS cM g células
rM = 3
4 + cS m h

con YM/S= 0,1 y cS en g glucosa/m3.

Determinar el caudal de alimentación de una solución de glucosa (cS,0 = 60 g/m3) a un
fermentador continuo tanque agitado (V= 1 m3) que daría una velocidad máxima de
consumo de glucosa y, entonces, una velocidad máxima de producción de células.
Determinar también este valor.
Res.: 1 m3/h, rM= 4,8 g células (m3·h)-1

Problema 3.7.
Una corriente de substrato S (cS,0 = 3, cM,0 = 0 y cP,0 = 0 en kg/m3) se descompone de acuerdo
con la fermentación microbiana S + M → P + M y modelo cinético

2 cS cM
rM =
1 + cS

El rendimiento YM/S es 0,5 kg células/kg de substrato.

Determinar el valor de cS que podría obtenerse en un fermentador tanque agitado (V = 1
m3) con recirculación siendo el caudal de alimentación fresca 1 m3/h. Comparad con el
correspondiente valor sin recirculación (α = 2,  = 1,3).
Res.: cS= 1 kg/m3, cS(rec.) = 0.25 kg/m3

Problema 3.8.
Un substrato A se convierte por fermentación en un alcohol (P) siguiendo la cinética que
se señala a continuación y en la que se ha supuesto que el producto es el único factor
limitante

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n
 cP 
r P = max  1 - *  cP
 cP 

donde max = 1,73 h-1, n = 0 en verano, n = 1 en primavera, n = 2 al invierno, cP* = 0,12 g

alcohol/g solución y  = 1000 kg/m3.
Calcular la cantidad máxima de alcohol que se podrá producir en cada una de las estaciones
(kg/día) en un fermentador tanque agitado comercial (V = 30 m3) para un caudal de
alimentación arbitraria.
Res.: Primavera, 37368 kg/día; verano, 149472 kg/día; invierno, 22144 kg/día.

Problema 3.9.
Libros de texto de fermentadores bien triturados se emplean para producir glucosa en un
fermentador tanque agitado a escala piloto (V= 50 l) bajo la acción de un microbio
devorador de textos. En presencia de un exceso de materia triturada de textos,
generalmente incomprensibles, la glucosa producida resulta ser el factor limitante de la
conversión. Los resultados obtenidos son los siguientes:
cuando q= 16 l/h cP = 54 mmol/l
cuando q= 4 l/h cP = 75 mmol/l
cuando q → 0 cP → 90 mmol/l
Determinar el caudal necesario para maximizar la producción de glucosa y encontrar su
velocidad de producción.
Res.: 31 L/h, 1095 mmol/h

Problema 3.10
Uno de los modelos cinéticos propuestos para fermentaciones que presentan inhibición
por sustrato es el de Andrews, cuya expresión matemática es:

𝜇𝑚𝑎𝑥
𝜇=
𝐾 𝐶
1+ 𝑀 + 𝑆
𝐶𝑆 𝐾𝐼

Los resultados obtenidos sobre el crecimiento de un microorganismo en un fermentador

tanque agitado de 1L de volumen, con alimentación estéril, utilizando distintos caudales
de líquido a los que corresponden distintos valores de estado estacionario se recogen en
la tabla siguiente:

q (L/h) 0,20 0,25 0,35 0,50 0,70 0,80 0,50 0,60 0,70
CS,0 (g/L) 30 30 30 30 30 30 60 60 60
CS (g/L) 0,5 0,7 1,1 1,6 3,3 10 30 22 15

a) Determinar los parámetros cinéticos de este microorganismo

b) Si el rendimiento celular, YM/S es 0,46 g/g ¿Cuál es la concentración celular de estado
estacionario correspondiente a un caudal de 0,2 L/h?

Res: a) max = 1,135 h-1, KM = 2,363 g/L, KI = 23,6 g/L; b) 𝑐𝑀 = 13,6 g/L

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Problema 3.11
En la tabla se indican las concentraciones de sustrato y biomasa en un biorreactor continuo
tanque agitado operado en estado estacionario a varias velocidades de dilución. Si la
concentración de sustrato en la alimentación es 70 g/L, calcular los valores de las
constantes de Monod KM y µmax, y el rendimiento YM/S.

D (1/h) 0,30 0,25 0,20 0,12 0,08

CS (g/L) 4,5 4,1 1,6 0,8 0,4
CM (mg/L) 3,26 3,36 3,96 4,06 4,16

Res: a) max = 0,358 h-1, KM = 1,423 g/L, 𝑌̅𝑀/𝑆 = 5,5·10-5 g/g

Problema 3.12
A partir de cultivos en discontinuo de un microorganismo, se han obtenido los parámetros
de modelo de Monod que describe su crecimiento (µmax = 0,2 h-1 y KM = 0,35 g/L). Se desea
llevar a cabo el mismo proceso en un biorreactor continuo tanque agitado a escala
industrial
a) Si la alimentación es estéril ¿Cuál será el volumen de fermentador necesario para
tratar un caudal de 500 L/h de una corriente de sustrato de 30 g/L si se desea
alcanzar una conversión del 90%? ¿Cuál será la velocidad de dilución que permite
maximizar la producción celular? Si se sabe que el rendimiento de sustrato en
biomasa es 0,09 g/g ¿Cuál será la producción de biomasa?
b) Se propone modificar el equipo incorporando un separador de biomasa en la
corriente de salida. Se obtiene así una corriente de recirculación con una
concentración celular cuatro veces mayor que la de salida del reactor. Si se desea
obtener la misma conversión global de sustrato y se aplica una relación de
recirculación (caudal de recirculación/caudal de alimento) de 0,30 ¿Qué caudal será
factible alimentar en esas condiciones?
Res. a) V = 2793 L; Dopt = 0,178 h-1; 0,435 g/(L·h); b) q0 = 5000 L/h

Problema 3.13.
Se está diseñando un proceso para reducir en condiciones óptimas la concentración de un
substrato en una corriente estéril desde cS,0 = 60 a 3 g m-3, que consiste en una combinación
en serie de dos bioreactores, un quimiostato seguido de un reactor en flujo en pistón. El
modelo cinético es

(4 / 3) cS cM
rM =
4 + cS

Con rM en g m-3 h-1. Además, YS/M = 10 y q = 2.5 m3 h-1.

1. Determinar el volumen total mínimo y comparar con el resultado obtenido
utilizando un solo FCTA.
2. Calcular la razón de recirculación óptima en el caso de utilizar un solo reactor
tubular con recirculación. Comparar el volumen de reactor necesario con los
valores obtenidos en el apartado anterior.

Res.: 1) 3.02 m3, VFCTA= 4.4 m3; 2) R= 2.5, V= 3.2 m3

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Problema 3.14.
Quiere diseñarse un sistema de fermentación continuo para tratar una alimentación
estéril de caudal 250 L/h con una concentración de sustrato cS,0 = 25 g/L, para producir
2100 kg/año de producto P, considerando 300 días/año y 24 h/día.
1. ¿Recomendarías un sistema de fermentación con un único biorreactor o con dos
biorreactores conectados en serie?
2. Diseñar un sistema de fermentación que, manteniendo la producción señalada,
minimice el volumen total de fermentación. Señalar los volúmenes,
concentraciones de biomasa, sustrato y producto de todo el sistema.

Para obtener el modelo cinético y los coeficientes de rendimiento se han realizado dos
experimentos continuos a escala de laboratorio con un quimiostato de 1 L utilizando una
alimentación estéril con una concentración de substrato cS,0 = 30 g/L. Los resultados se
indican en la tabla siguiente:

Concentraciones, g/L
Caudal (mL/h) cS cM cP
27,5 10,0 12,0 1,04
18,8 2,32 16,7 1,44

Res: cM1 = 12 g/L, cS1 = 4,91 g/L, cP1 = 1,04 g/L, cM = 13,39 g/L, cS = 2,69 g/L, cP = 1,16 g/L;
1 RCTA y 1 FT en serie, VRCTA = 10,6 m3 VFT = 1,24 m3

Problema 3.15.
Para reducir el impacto ambiental y al mismo tiempo producir ácido láctico, el efluente
de una fábrica de quesos con un caudal de 1 m3/h y una concentración de 60 kg de
lactosa/m3, se trata en una planta de fermentación que consiste en un FCTA de 3 m3. El
modelo cinético encontrado en la bibliografía señala que la producción del ácido láctico
puede seguir el modelo siguiente

 c  c c
rM = max 1 − P*  S M
 c P  K M +c S
max = 0,5 h-1
KM = 0,3 kg/m3
cP* = 50 kg/m3
YM/S = 0,1 kg biomasa/kg lactosa
YP/M = 8 kg ácido láctico/ kg biomasa

1) Determinar si la corriente tratada puede enviarse a la red de aguas residuales

considerando que la concentración máxima permitida de lactosa es 12 kg/m 3.
2) En caso de incumplimiento de la normativa se ha pensado instalar a la salida del
FCTA un segundo fermentador de tipo tubular para rebajar la concentración de
lactosa hasta los niveles permitidos. ¿Qué volumen ha de tener el segundo
reactor?
3) Otra alternativa para cumplir la normativa es substituir el FCTA per uno igual
pero más grande. ¿Qué volumen habría de tener?

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Discutir los resultados

Res: 1) cS= 39,35 kg/m3; 2) VFT= 6,72 m3; 3) VFCTA= 8.6 m3

Problema 3.16.
Dos fermentadores tanque agitado continuos están conectados en serie. El primero tiene
un volumen de 100L y el segundo 50L. La alimentación al primer reactor es estéril, contiene
5 g/L de sustrato y se alimenta al fermentador con un caudal de 18 L/h. El crecimiento
bacteriano sigue una cinética de Monod con los siguientes parámetros: max = 0,25 h-1, KM
= 120 mg/L y YM/S = 0,5 g/g. Calcular la concentración de sustrato en el segundo reactor
en condiciones estacionarias. Si se invierte el sentido de circulación, ¿cuál será la
concentración a la salida del segundo reactor?
Res. 𝑐𝑆 = 0,012 g/L; si se invierte el orden: 𝑐𝑆 = 0,309 g/L

Problema 3.17.
Un microorganismo tiene una cinética de crecimiento que sigue el modelo de Monod
con los siguientes parámetros cinéticos y estequiométricos: max = 0,5 h-1, KM = 2 g/L y
YM/S = 1 g/g. Si se utiliza un fermentador tanque agitado con alimentación estéril (CS,0 =
50 g/L) a una velocidad de dilución de 0,402 h ¿cuántos tanques en serie del mismo
volumen, trabajando con la misma D serían necesarios para transformar el 98% del
sustrato?
Res. 2 tanques es serie

Problema 3.18.
En un biorreactor continuo de mezcla perfecta se lleva a cabo la fermentación de un
sustrato con concentración 143 g/L, mediante un microorganismo que tiene una µmax =
1 h-1 y una KM = 1,1·10-3 g/L. Calcular
a) La velocidad de dilución que proporciona la máxima productividad celular
b) Si la concentración del producto para el valor de Dopt = es de 10 g/L ¿Cuál será la
productividad (en producto) máxima?
c) Si la concentración de biomasa para la velocidad de dilución del apartado a) es
de 4 g/L ¿Cuál es la velocidad de formación de biomasa?
Res. a) D = 0,977 h-1; b) rP = 9,97 g/L·h; c) rM = 3,99 g/L·h

Problema 3.19.
Calcular las concentraciones de sustrato y biomasa en estado estacionario en un
quimiostato de 25 L, cuando la concentración de sustrato en la alimentación es de 2 g/L
y el caudal 8 L/h. Los valores de KM y µmax son 10,5 mg/L y 0,45 h-1, respectivamente, y
el rendimiento YM/S 0,48
Res. CS = 25,75 mg/L y CM = 0,948 g/L

Problema 3.20.
Si un reactor de flujo en pistón de 1 m2 de sección se alimenta con un caudal de 0,1 m3/s,
la velocidad específica de crecimiento es 1 h-1 y la concentración de biomasa es de 100
g/m3 en un punto situado a 10 m del punto de alimentación. Calcular:
a) La velocidad de formación de biomasa en ese punto

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b) Si bajo esas mismas condiciones la velocidad especifica de formación del

producto es de 1 g de producto por g de biomasa y hora ¿Cuál sería la velocidad
de formación del producto en ese mismo punto?
c) Si la concentración de sustrato está cambiando a razón de 1200 g/m3 · m de
reactor ¿Cuál sería el rendimiento de sustrato en biomasa observado?
Res. a) 𝑟𝑀 = 100 g células/m3·h; b) 𝑟𝑃 = 100 g de P/m3·h; c) YM/S = 2,315·10-4 g/g

Problema 3.21.
En la tabla que se muestra a continuación se presentan los datos obtenidos en un proceso
de fermentación llevado a cabo en un quimiostato operado en estacionario a varias
velocidades de dilución
a) Calcular los parámetros de la ecuación de velocidad suponiendo que sigue una
cinética de Monod
b) Dada una concentración de sustrato en el alimento de 100 g/L y suponiendo que la
alimentación es estéril, calcular el rendimiento medio de sustrato en biomasa, y
obtener una expresión para la velocidad de consumo de sustrato
c) Determinar el caudal de alimentación que podrá ser procesado en un reactor
similar de 100 m3 operado en estacionario si se pretende convertir el 80% de una
alimentación estéril conteniendo 120 g/L de sustrato

D (1/h) 0,38 0,33 0,29 0,235 0,232

CS (g/L) 0,57 0,33 0,23 0,14 0,11
CM (mg/L) 5,96 5,98 5,99 6,00 6,01

0,432𝑐
Res: a) max = 0,432 h-1, KM = 0,104 g/L; b) −𝑟𝑆 = 0,104+𝑐𝑆 (100 − 𝑐𝑆 ); c) q0 = 43,0 m3/h
𝑆

Problema 3.22.
Se pretende producir en continuo una nueva enzima, alimentando 3000 m3/día de un
medio con una concentración de sustrato de 40 g/L, a un reactor de mezcla completa con
un sistema de separación de biomasa, que permite una recirculación al reactor. La
velocidad específica de consumo de sustrato es de 3,0 g/g·h. El tiempo de residencia 1 h y
la relación de recirculación es 0,3. Determinar la concentración de biomasa que se debe
alcanzar en el reactor para que el proceso sea viable si se desea convertir el 90% del
sustrato alimentado
Res. 9,23 g/L·h

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CAPITULO 5: ESTERILIZACIÓN

Problema 5.1.
Un fermentador que contiene 40 m3 de disolución de sustrato va a esterilizarse por inyección
directa de vapor saturado. El medio contiene “típicamente” 5·1012 bacterias/m3 y debe
reducirse de manera que la probabilidad de que una bacteria contaminante sobreviva a la
esterilización sea de 1 en 1000. Se inyectarán 5000 kg/h de vapor (a 345 kPa de presión), y la
inyección se detendrá cuando la temperatura del medio alcance 122ºC. En el periodo de
temperatura estable, la pérdida de calor a través de las paredes del recipiente se supone
despreciable. Finalmente, el fermentador se enfriará pasando 100 m3/h de agua a 20ºC a
través de un serpentín de enfriamiento hasta que el medio alcanza una temperatura de 30ºC.
El serpentín tiene un área de intercambio de calor de 40 m2 y para esta operación el
coeficiente global de intercambio de calor (U) para enfriamiento es 2500 kJ/h.m2.K. La
resistencia térmica de las esporas bacterianas en el medio puede caracterizarse por un factor
pre-exponencial de Arrhenius de 5.7·1039 h-1 y una energía de activación de 2.834·105 kJ/kmol.
La capacidad calorífica y la densidad del medio son, respectivamente, 4,187 kJ/kg.K y 1000
kg/m3. Estimar el tiempo necesario para la etapa de temperatura constante (estable).

Nota: La entalpía del vapor saturado a 345 kPa es 2731 kJ/kg y la del agua líquida a 25ºC es de
105 kJ/kg, respectivamente

Res: 2,86 min

Problema 5.2.
Un esterilizador continuo con inyector de vapor y enfriamiento por evaporación al vacío se
empleará para esterilizar un medio con un caudal de 2 m3/h. El tiempo de calentamiento y
enfriamiento puede suponerse despreciable. La cantidad típica de bacterias del medio puede
tomarse como 5·1012 bacterias/m3 y debe reducirse de forma que sólo sobreviva una bacteria
en 2 meses de operación continua. La resistencia térmica de las esporas bacterianas en el
medio puede caracterizarse por un factor pre-exponencial de Arrhenius de 5.7·1039 h-1 y una
energía de activación de 2.834·105 kJ/kmol. El esterilizador se construirá con conducciones de
0,103 m de diámetro interno. Se dispone de vapor a 600 kPa para llevar el esterilizador a la
temperatura de esterilización de 125ºC. Las propiedades físicas del medio a 125ºC son: Cˆ P =
4,187 kJ/kg·K, ρ = 1000 kg/m3 y μ = 4 kg/m.h.

a) ¿Qué longitud debe tener la conducción en el esterilizador si se admite flujo en pistón?

b) ¿Qué longitud debería tener la conducción en el esterilizador si se considera el efecto
de la dispersión axial?

Res: a) 23,8 m; b) 27 m.

Problema 5.3.

Un filtro constituido por un lecho de fibras de vidrio (Dc = 15 μm, profundidad de lecho B = 10
cm, y densidad de empaquetamiento α = 0,03) se usa para esterilizar aire a 20ºC y 1 atm con
una velocidad de aire, v0 = 10 cm/s (µ = 1,8·10-4 g/cm.s;  = 1,206·10-3 g/cm3). La corriente de
aire contiene 5000 bacterias/m3 (dP = 1 μm y ρP = 1 g/cm3)

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1) Estimar eficacia de eliminación (recolección) de partículas de una fibra aislada por

impacto inercial, por intercepción y por difusión
2) Estimar la eficacia de eliminación conjunta de una fibra aislada en base a la
combinación de mecanismos
3) Estimar la eficacia de eliminación del lecho filtrante.
4) Estimar la eficacia si v0 se dobla

Res. 1) imp = 8,82·10-4, int = 9,93·10-4, dif = 1,64·10-3; 2) c = 0,0059; 3) f = 0,79 y  = 0,89;
4)  = 0,949

Problema 5.4.

Un fermentador que contiene 10 m3 de una disolución de sustrato a 25ºC va a esterilizarse

pasando vapor saturado (presión absoluta 500 kPa, temperatura saturación 151,1 0C) a través
de un serpentín. El medio contiene 3·1012 bacterias/m3 que debe reducirse de manera que la
probabilidad de que una bacteria contaminante sobreviva a la esterilización sea de 1 en 100. El
fermentador se calentará hasta alcanzar 115ºC. En el periodo de temperatura estable, la
pérdida de calor a través de las paredes del recipiente se supone despreciable. Finalmente, el
fermentador se enfriará pasando 20 m3/h de agua a 25ºC a través de un serpentín de
enfriamiento hasta que el medio alcance 40ºC. Los serpentines tienen 40 m2 de área de
intercambio de calor y para esta operación el coeficiente global de intercambio de calor (U)
para calentamiento y para enfriamiento es, respectivamente, 5500 y 2500 kJ/h.m2.K. La
resistencia térmica de las esporas bacterianas en el medio puede caracterizarse por un factor
pre-exponencial de Arrhenius de 5.7·1039 h-1 y una energía de activación de 2.834·105 kJ/kmol.
La capacidad calorífica y la densidad del medio son, respectivamente, 4,187 kJ/kg.K y 1000
kg/m3. Estimar el tiempo necesario para la etapa de temperatura constante (estable).

Res. 51,6 min

Problema 5.5.

Un esterilizador continuo con inyector de vapor y enfriamiento por evaporación al vacío se

empleará para esterilizar un medio líquido. El tiempo de calentamiento y enfriamiento puede
suponerse despreciable. La cantidad típica de bacterias del medio puede tomarse como 5·1012
bacterias/m3 y debe reducirse de forma que sólo sobreviva una bacteria en 3 meses de
operación continua. La resistencia térmica de las esporas bacterianas en el medio puede
caracterizarse por un factor preexponencial de Arrhenius de 5.7·1039 h-1 y una energía de
activación de 2.834·105 kJ/kmol. La sección de temperatura estable del esterilizador dispondrá
de una conducción de 20 m de longitud de 0,078 m de diámetro interno. Se dispone de vapor a
600 kPa para llevar el esterilizador a la temperatura de esterilización de 125ºC. Las
propiedades físicas del medio a 125ºC son: Cˆ P = 4,187 kJ/kg·K, ρ = 1000 kg/m3 y μ = 4 kg/m.h.

a) ¿Qué caudal horario de medio se esterilizará si se admite flujo en pistón?

b) ¿Calcular el caudal horario de medio si se considera el efecto de la dispersión axial?

Res. a) q0 = 0,974 m3/h; b) q0 = 0,6 m3/h

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Problema 5.6.

Se necesita diseñar un filtro para un fermentador de 104 galones que debe airearse con un
caudal de aire de 535 ft3/min (a 20ºC y 1 atm). La población bacteriana del aire es de 80 por ft3.
El tamaño medio de las bacterias es de 1 μm con una densidad de 1,08 g/cm3. Se van a usar
filtros de lana de vidrio (Dc = 15 μm) con una densidad de empaquetamiento α = 0,03. La
sección del filtro normal al movimiento del aire se diseñará para dar una velocidad superficial
del aire v0 de 5 ft/ s.

a) ¿Qué profundidad de filtro se recomendaría para eliminación la contaminación?

b) ¿Qué profundidad será necesaria si la velocidad de aire v0 se reduce a 1ft/s?

Propiedades físicas del aire: µ = 1,8·10-4 g/cm.s;  = 1,206·10-3 g/cm3.

Res: a) 21,4 cm; b) 80,6 cm

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CAPÍTULO 6: AERACIÓN Y AGITACIÓN

Problema 6.1.
En el estudio de la fisiología de una levadura se utiliza un bioreactor de 800 mL de
volumen de líquido, equipado con una turbina de seis palas. El diámetro del tanque es
106 mm y la velocidad del agitador 1200 rpm. La viscosidad y densidad del medio de
cultivo pueden suponerse igual a las del agua y el medio es no coalescente respecto a la
dinámica de burbujas. La potencia de aireación estimada es 9,5W.
Determinar:
a) la entrada de potencia por unidad de volumen si la entrada de potencia en presencia
de gas es el 50% de la entrada de potencia sin gas.
b) el klab si la entrada de aire es 1 VVM (volumen de aire/volumen reactor ·min)
c) la concentración de oxígeno disuelto si la velocidad de respiración del cultivo de
levadura es 79,3 mmol O2 /L· h, y la concentración de saturación del oxígeno a 1 atm y
25ºC es 0,26 mmol·L-1
d) el aumento en el valor de klab y el porcentaje de saturación que se alcanzaría si se
instalara una segunda turbina en el eje del agitador.
Nota: para un medio no coalescente y una turbina de 6 palas pueden tomarse los valores
de C = 0,0018, α = 0,3 y β = 0,7, respectivamente
Res: a) 5937 W/m3; b) klab = 0,113 s-1; c) 0,065 mmol/L (porcentaje de saturación 25%);
d) klab = 0,182 s-1 (aumento del 61%) y porcentaje de saturación 53,5%

Problema 6.2.
En un fermentador continuo tanque agitado (quimiostato) se tratan 0.1867 moles-C de
glucosa/ L · h en un proceso fermentativo con S. cerevisiae a 1 atm. Para un tiempo de
residencia de 5 h se observa que no sale sustrato de la unidad de reacción. El coeficiente
de rendimiento YO/C= 0.425 moles de O2 por mol-C de glucosa, y la constante de Henry
del O2 en agua a 25°C es 790,6 atm·L·mol-1. Determinar:
a) El tiempo en que se consumiría totalmente el oxígeno disuelto si se cortara el
suministro de aire suponiendo que la velocidad de consumo de oxígeno es constante.
b) El valor mínimo de klab para mantener la concentración de oxígeno disuelto en un
60% del valor de saturación si el aire de burbujeo contiene un 20.95% en volumen de O2
Res: a) 7,2 s; b) klab = 748 h-1

Problema 6.3.
Un tanque de 1 m de diámetro, equipado con una turbina de disco, dispone de pantallas
deflectoras y las proporciones geométricas de los diferentes elementos se corresponden
con las relaciones estándar para fermentadores industriales. Se utiliza en un proceso con
un medio de cultivo de densidad 1100 kg/m3 y viscosidad 0,01 kg/m·s. Las condiciones de
operación vienen fijadas por un caudal de aeración de 0,7 vvm (volúmenes de aire por
volumen de reactor y minuto) y velocidad de agitación de 250 rpm. Calcular las necesidades
de potencia del sistema sin aeración, la potencia del sistema aerado y la retención de gas
(g)
Res: P = 1637 W, Pg = 720 W, g = 0,56

Problema 6.4.

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Las dimensiones de un fermentador equipado con dos juegos de turbinas de 6 palas

planas y con cuatro pantallas deflectoras son:
⎯ Diámetro del fermentador: 3 m
⎯ Diámetro del agitador: 1,5 m
⎯ Anchura de pantallas: 0,3 m
⎯ Altura de líquido: 5 m

La densidad y la viscosidad del líquido son 1200 kg/m3 y 0,02 kg/m·s, respectivamente.
La velocidad de agitación es de 60 rpm y el caudal de aeración es de 14,1 m3/min. Para
un agitador de estas características se cumple la ecuación
0,95
 Pg 
k L a = 20, 256   vS0,67
V
Pg es la potencia en kW y V es el volumen en m3, vS es la velocidad superficial del gas
en m/s y KLa se expresa en kmol/m3·h·atm

Calcular:
a) La potencia para el sistema sin aeración
b) La potencia para el sistema aerado
c) El coeficiente de transferencia de oxígeno

Res: P =45562 W, Pg = 18225 W, kla = 1,08 kmol/(m3·h·atm)

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