FINAL

HISTO 1

¿Qué es la histología?
La histología es la parte de la biología que estudia la composición, la estructura y las
características de los tejidos orgánicos de los seres vivos. Gracias a la histología podemos
conocer microscópicamente los tejidos de cada órgano.

Histo: tejido; logia: estudio

Medidas utilizadas en histología

Para ver a simple vista, macroscópicamente, órganos, pliegues y estructuras como arterias o
forámenes se utilizan los centímetros y los milímetros.
1 cm= 0,01m

1 mm= 0,1 cm

Pero si queremos observar tejidos microscópicamente, a través de un microscopio se utilizaran

las siguientes medidas.

Para ver células: micrómetros μm (1μm= 0,001 mm)

Para ver organoides a través de un microscopio electrónico: nanómetros nm (1nm= 0,001 μm)

La célula que nos permite compararla con todas las demás es el glóbulo rojo/ eritrocito, el cual
mide entre 7 y 8 μm, es decir unos 0,007/0,008 mm.

¿Por qué nuestros ojos no pueden ver células a simple vista?

Esto se debe a que el poder de resolución del ojo es de 0,2 mm y no podemos distinguir
imágenes a menos de esa medida; en cambio, el microscopio óptico tiene un poder de
resolución de 0,2 μm (es decir, 0,002 mm), lo cual le permite una mejor definición de la
imagen; y por último, el microscopio electrónico, tiene como poder de resolución 0,2
nm (0,002 μm).

Ejemplo práctico: si nosotros a simple vista estamos viendo 2 puntos muy juntos,
podemos verlos separados hasta 0,2 mm de resolución (ese sería el límite de resolución
del ojo humano en buen estado), si el limite baja a 0,1mm o menos, ya no los veremos
separados con definición, si no que comienzan a verse juntos, formando una sola
imagen con mala definición; diferente seria si quisiéramos hacerlo desde un
microscopio óptico, donde el límite de resolución es hasta 0,002 mm, una resolución
más baja, debería ser vista con un microscopio electrónico ya que el límite de
resolución de este último es hasta de 0,2 nm.

La distancia entre los puntos, se llama “limite de resolución” y es la distancia mínima

que debe haber entre dos puntos para mostrarlos separados e individuales; y el “poder
de resolución” es la capacidad de un sistema óptico para mostrar separados a dos
puntos muy juntos.

Límite de resolución:

K.λ
LR=
AN
LR= limite de resolución; K= constante de 0,61; λ= longitud de onda de luz usada; AN=
apertura numérica del objetivo

MICROSCOPIA Y TECNICA
Composición de un microscopio óptico

1. Ocular: lente situada cerca del ojo del observador. Capta y amplía la imagen formada
en los objetivos.
2. Objetivo: lente situada en el revólver. Amplía la imagen, es un elemento vital que
permite ver a través de los oculares.
3. Cabezal: es la cabeza del microscopio que te permite obtener mejores tomas del
objetivo.
4. Condensador: lente que concentra los rayos luminosos sobre la preparación.
5. Diafragma: regula la cantidad de luz que llega al condensador.
6. Foco: dirige los rayos luminosos hacia el condensador.
7. Tubo: es la cámara oscura que porta el ocular y los objetivos. Puede estar unida al
brazo mediante una cremallera para permitir el enfoque.
8. Revólver: Es el sistema que porta los objetivos de diferentes aumentos, y que rota para
poder utilizar uno u otro, alineándolos con el ocular.
9. Tornillos macro y micrométrico: Son tornillos de enfoque, mueven la platina o el
tubo hacia arriba y hacia abajo. El macrométrico, permite desplazamientos amplios
para un enfoque inicial y el micrométrico, desplazamientos muy cortos, para el enfoque
más preciso. Pueden llevar incorporado un mando de bloqueo que fija la platina o el
tubo a una determinada altura.
10. Platina: Es una plataforma horizontal con un orificio central, sobre el que se coloca la
preparación, que permite el paso de los rayos procedentes de la fuente de iluminación
situada por debajo.
 11. Pinzas sujetadoras: Dos pinzas, sirven para retener el portaobjetos sobre la platina y
un sistema de cremallera que permite mover la preparación. Puede estar fija o unida al
brazo por una cremallera para permitir el enfoque.
12. Brazo: Es la estructura que sujeta el tubo, la platina y los tornillos de enfoque asociados
al tubo o a la platina. La unión con la base puede ser articulada o fija.
13. Base o pie: Es la parte inferior del microscopio que permite que este se mantenga de
pie.

Técnica histológica
Son los pasos a seguir en el procesamiento de la muestra que permiten observar las
características histológicas de la misma.

1) Obtención de la muestra: puede tener distintos orígenes:

a) biopsias b) autopsias

c) raspajes d) extendidos

Es importante que el tamaño de la muestra sea de 0,5 cm3; también es de importancia

que hagamos el corte de la muestra con un utensilio con filo como un bisturí por
ejemplo, y debemos cortar parte de tejido sano. Luego de obtener el corte, se depositara
en un frasco esterilizado de boca ancha, que contenga líquido fijador para la muestra y
esta no se deteriore

2) Fijación:

Paso fundamental en la técnica que tiene por objetivo preservar la estructura y ultra
estructura de los componentes tisulares de la muestra, evitando la autolisis del tejido.
Los fijadores pueden ser físicos (congelación) o químicos como el formol (el cual se
utiliza al 10%, en caso de tener que diluirse se hará con agua destilada). Un buen fijador
debe ser rápido, barato y fácil de conseguir.

La muestra debe quedar totalmente embebida en el fijador, si la muestra flota podemos

ponerle un pedacito de algodón por encima para que baje y si baja del todo le
pondremos algo por debajo.

Estos dos primeros pasos (toma de muestra y fijación) los hace el médico veterinario, y
luego se lleva la muestra a un laboratorio.

El proceso comienza en el laboratorio a partir del paso 3 (deshidratación).

3) Deshidratación:

Antes de comenzar el proceso de deshidratación, se lava la muestra con agua corriente

hasta que no le quede absolutamente nada de formol (una de las maneras de comprobar
si hay formol, es olfateándola).
Luego de haber quitado el formol, comienza el proceso de deshidratación, que es la
completa eliminación del agua del tejido para luego poder embeberlos en medios de
inclusión no hidrosolubles. Se pasa la muestra por concentraciones crecientes de alcohol
(70%, 96% y 100%) para eliminar lentamente el agua y evitar la retracción del tejido.

4) Aclaración:

Cuando termina el proceso de deshidratación, sacamos la muestra del alcohol y la

colocamos en Xylol, el cual es un solvente orgánico. Este paso prepara a la muestra para
el paso siguiente (inclusión) y hace que la muestra quede compatible con la parafina, ya
que si lo dejamos en agua, la parafina nunca podría entrar a la muestra porque no es
hidrosoluble, es liposoluble.

5) Inclusión en parafina:

Para realizar los cortes en el micrótomo es necesario endurecer el tejido, manteniendo la

arquitectura. La parafina líquida penetra en los vasos, en los espacios intercelulares y en
el interior de las células. Al enfriarse se endurece, conservando la organización del
tejido y haciendo fácil la obtención de los cortes.

6) Confección del taco:

En un recipiente/ molde (como puede ser una cubetera) se coloca la muestra y se llena el
molde de parafina. Cuando la parafina se endurece a temperatura ambiente o en frio, se
desmolda y queda un cubo en caso de usar una cubetera.

7) Corte con micrótomo:

El objeto es obtener cortes lo suficientemente delgados como para permitir el paso de la

luz para examinarlo al microscopio, los cortes deben ser de entre 5 y 7 micras. Los
micrótomos son instrumentos de gran precisión que nos proporcionan cortes delgados
parejos de espesor graduable.

8) Montaje:

Los cortes se extienden en agua tibia contenida en un cristalizador, a medida que van
saliendo del micrótomo. En esa misma agua se coloca adhesivo (albúmina de Mayer o
Gelatina) para que la muestra se pegue al portaobjetos. Luego se sumerge al
portaobjetos por debajo del preparado, con la ayuda de una aguja histológica se colocan
los cortes sobre el portaobjetos y a continuación se lo levanta.

9) Coloración/ Tinción:

Los colorantes son en general hidrosolubles, por lo tanto necesitan que el corte esté,
además de desparafinado, re-hidratado. Se sumerge la muestra en xylol, toluol o benzol,
los cuales disuelven la parafina; luego de esto se rehidrata, se lo pasa por diferentes
graduaciones de alcohol decrecientes (100%, 96%, 70%) hasta quedar una muestra
hidrosoluble.
Luego se procede a la coloración para darles el contraste necesario que permita la
observación al microscopio óptico. La tinción con hematoxilina y eosina (H&E) es la
más frecuente de los preparados histológicos.

La hematoxilina es un colorante básico (tiñe azul/violeta) que tiñe estructuras acidas

como por ejemplo ARN y ADN de núcleos y retículos endoplasmaticos; y la eosina es
un colorante ácido (tiñe rojo/rosa) que tiñe estructuras básicas como las proteínas de los
citoplasmas.

A las estructuras que tienen afinidad por los colorantes ácidos (eosina) se los llama
acidofilos o eosinofilos; y a las que tienen afinidad por los colorantes básicos
(hematoxilina) se los llama basófilos.

Si vamos a sumergir el preparado a la hematoxilina, debemos hacerlo durante 5 a 10

min y luego lavar; y si vamos a sumergirlo eosina, se debe hacer durante 2 a 3 min y
lavar.

Otros tipos de coloración o tinte:

-Sudan: utilizado para teñir lípidos

-Ácido peryodico de Schiff o leucofucsina (PAS): es un colorante incoloro, pero que se

torna rojo estable al contacto con los grupos aldehídos. Permite la tinción de
componentes celulares que contienen hidratos de carbono, por ejemplo
algunas membranas celulares, células caliciformes en la mucosa del intestino, fibras
reticulares que están rodeados por hidratos de carbono, etc.

-Impregnación metálica: Se denomina impregnación metálica a la precipitación de un

metal (plata) reducida sobre las fibras reticulares y otros elementos determinados de los
tejidos. El metal entra en contacto con los tejidos bajo la forma de solución salina; la
reducción es debida en parte a la acción propia del tejido y a la de sustancias reductoras
utilizadas en cada técnica o a agentes físicos como la luz. El metal forma un compuesto
metal-orgánico para sensibilizar el tejido y luego la plata reemplaza ese metal. Con este
método podemos ver las fibras reticulares de la matriz extracelular que rodean células y vasos
para poner en evidencia los límites de los elementos celulares obteniéndose una imagen
negativa de estos últimos; elementos citológicos (núcleo, aparato de Golgi); y elementos
nerviosos los cuales dan una imagen positiva.

-Metacromasia: Se denomina así al cambio que ocurre en el color que exhiben

ciertos colorantes utilizados en tinciones histológicas cuando se unen a determinadas sustancias
presentes en estos tejidos, llamadas cromotropos. Por ejemplo, el azul de toluidina, el violeta de
cresilo o la tionina azul, cuando se unen a glucosaminoglicanos muy ácidos presentes
en cartílago o a la heparina. La ausencia de cambio de color de una tinción se
denomina ortocromasia.

10) Montaje final

Si el preparado es para estudiarlo patológicamente, no se requiere el montaje final, pero
si el preparado es para estudio, como en el caso de histología debe hacerse un montaje
final.

Esto consiste en colocar un cubre objetos sobre la muestra colocada en el porta objetos.
Para poder pegar el vidrio cubre objetos al porta objetos se necesita bálsamo de Canadá.
Este bálsamo actúa en medios liposolubles, por lo que, antes de colocar el bálsamo,
debemos deshidratar (pasar por diferentes grados de alcohol crecientes) el preparado y
también volver a realizar la aclaración sometiéndolo a xylol para que quede liposoluble.
Ahora si, una vez liposoluble, se coloca el bálsamo de Canadá sobre el porta objetos y
luego se le pega arriba el cubre objetos

Epitelios
Origen de los tejidos
El origen de cualquier tejido proviene de la fecundación entre ovulo y espermatozoide,
esta unión formara un cigoto el cual se dividirá por mitosis a 2, 3, 4… 8 células, estas
divisiones no se llamaran células, si no, blastomeras. Las blastomeras se seguirán
dividiendo hasta formar una Mórula (entre 18 y 32 células), la división sigue, comienza
a ingresar liquido entre medio de las células de la Mórula, este líquido va quedando en
el interior y forma una cavidad… se forma una Blástula.

La Blástula está compuesta por una cavidad liquida en el medio, llamada Blastocele y
esta se encuentra rodeada por una superficie de células. Estas células se irán aplanando
y agrupando formando el macizo celular externo o trofoblasto (capa de células planas
que rodean al blastocisto) y el macizo celular interno o embrioblasto (agrupado en un
polo del Blastocisto).
Comienza la implantación. La implantación ocurre durante un período breve conocido
como ventana de implantación. La adherencia del blastocisto al epitelio endometrial
ocurre durante la ventana de implantación, que es el período durante el cual el útero es
receptivo para la implantación del blastocisto.

Al entrar en contacto con la pared uterina por las células trofoblásticas del polo
embrionario, el trofoblasto prolifera con rapidez y comienza a invadir el endometrio.

La cavidad amniótica ira creciendo hasta formar el saco amniótico, el

epiblasto/ectodermo e hipoblasto/endodermo le irán dando lugar a esta cavidad. El
Blastocele se va convirtiendo en el saco vitelino. Para descubrir el origen de los tejidos
nos concentraremos solo en estas estructuras.

Sobre el ectodermo se ira formando luego, la llamada línea primitiva, la cual se ira
hundiendo en el ectodermo, formando un surco y terminando en un nódulo primitivo. A
través de esta línea y del nódulo primitivo se formara el mesodermo. Y estos tres tejidos
primitivos (endodermo, mesodermo y ectodermo) son los que dan origen a todos los
tejidos del nuevo organismo que se está formando.