Machine Translated by Google

Sección 4
Efectos en la salud

Directriz de prueba n.° 471

Prueba de mutación inversa bacteriana

26 junio 2020

Directrices de la OCDE para la

Pruebas de productos químicos
Machine Translated by Google

OCDE/OCDE 471
Adoptado:
21 de julio de 1997
Corregido
26 junio 2020
(CAS RN párrafo 24)

DIRECTRICES DE LA OCDE PARA PRUEBAS DE PRODUCTOS QUÍMICOS

Prueba de mutación inversa bacteriana

INTRODUCCIÓN

1. La prueba de mutación inversa bacteriana utiliza cepas de Salmonella typhimurium y Escherichia coli que requieren
aminoácidos para detectar mutaciones puntuales, que implican la sustitución, adición o eliminación de uno o varios pares de bases de
ADN (1)(2)(3). El principio de esta prueba de mutación inversa bacteriana es que detecta mutaciones que revierten las mutaciones
presentes en las cepas de prueba y restablecen la capacidad funcional de las bacterias para sintetizar un aminoácido esencial. Las
bacterias revertidas se detectan por su capacidad de crecer en ausencia del aminoácido requerido por la cepa de prueba original.

2. Las mutaciones puntuales son la causa de muchas enfermedades genéticas humanas y existe evidencia sustancial de que
las mutaciones puntuales en oncogenes y genes supresores de tumores de células somáticas están involucradas en la formación de
tumores en humanos y animales de experimentación. La prueba de mutación inversa bacteriana es rápida, económica y relativamente
fácil de realizar. Muchas de las cepas de prueba tienen varias características que las hacen más sensibles para la detección de
mutaciones, incluidas secuencias de ADN sensibles en los sitios de reversión, mayor permeabilidad celular a moléculas grandes y
eliminación de los sistemas de reparación del ADN o mejora de los procesos de reparación del ADN propensos a errores. La
especificidad de las cepas de prueba puede proporcionar información útil sobre los tipos de mutaciones inducidas por agentes
genotóxicos. Se dispone de una gran base de datos de resultados para una amplia variedad de estructuras para pruebas de mutación
inversa bacteriana y se han desarrollado metodologías bien establecidas para probar sustancias químicas con diferentes propiedades
fisicoquímicas, incluidos compuestos volátiles.

3. Las definiciones utilizadas figuran en el anexo.

CONSIDERACIONES INICIALES

La prueba de mutación inversa bacteriana utiliza células procarióticas, que se diferencian de las células de mamíferos en 4.
factores tales como la captación, el metabolismo, la estructura cromosómica y los procesos de reparación del ADN. Las pruebas
realizadas in vitro generalmente requieren el uso de una fuente exógena de activación metabólica. Los sistemas de activación
metabólica in vitro no pueden imitar completamente las condiciones in vivo de los mamíferos. Por lo tanto, la prueba no proporciona
información directa sobre el poder mutagénico y cancerígeno de una sustancia en los mamíferos.

© OCDE, (2020)

Usted es libre de utilizar este material sujeto a los términos y condiciones disponibles en http://www.oecd.org/termsandconditions/.
Machine Translated by Google

2 471 OCDE/OCDE
5. La prueba de mutación inversa bacteriana se emplea comúnmente como detección inicial de actividad genotóxica y,
en particular, de actividad inductora de mutación puntual. Una extensa base de datos ha demostrado que muchas sustancias
químicas que son positivas en esta prueba también exhiben actividad mutagénica en otras pruebas. Hay ejemplos de agentes
mutagénicos que no se detectan con esta prueba; Las razones de estas deficiencias pueden atribuirse a la naturaleza
específica del criterio de valoración detectado, diferencias en la activación metabólica o diferencias en la biodisponibilidad.
Por otra parte, los factores que aumentan la sensibilidad de la prueba de mutación inversa bacteriana pueden llevar a una
sobreestimación de la actividad mutagénica.

6. La prueba de mutación inversa bacteriana puede no ser apropiada para la evaluación de ciertas clases de sustancias
químicas, por ejemplo, compuestos altamente bactericidas (por ejemplo, ciertos antibióticos) y aquellos que se cree (o se
sabe) que interfieren específicamente con el sistema de replicación de las células de mamíferos (por ejemplo, algunas
topoisomerasas). inhibidores y algunos análogos de nucleósidos). En tales casos, las pruebas de mutación en mamíferos
pueden ser más apropiadas.

7. Aunque muchos compuestos que resultan positivos en esta prueba son carcinógenos para mamíferos, la correlación
no es absoluta. Depende de la clase química y hay carcinógenos que no se detectan con esta prueba porque actúan a través
de otros mecanismos no genotóxicos o ausentes en las células bacterianas.

PRINCIPIO DEL MÉTODO DE PRUEBA

8. Se exponen suspensiones de células bacterianas a la sustancia problema en presencia y en ausencia de un sistema

de activación metabólica exógeno. En el método de incorporación en placa, estas suspensiones se mezclan con una capa de
agar y se siembran inmediatamente en un medio mínimo. En el método de preincubación, la mezcla de tratamiento se incuba
y luego se mezcla con un agar superpuesto antes de sembrarla en un medio mínimo. Para ambas técnicas, después de dos
o tres días de incubación, se cuentan las colonias revertidas y se comparan con el número de colonias revertidas espontáneas
en placas de control con disolvente.

9. Se han descrito varios procedimientos para realizar la prueba de mutación inversa bacteriana.
Entre los comúnmente utilizados se encuentran el método de incorporación en placa (1)(2)(3)(4), el método de preincubación
(2)(3)(5)(6)(7)(8), el método de fluctuación (9) (10), y el método de suspensión (11). Se han descrito modificaciones para los
ensayos de gases o vapores (12).

10. Los procedimientos descritos en esta guía pertenecen principalmente a los métodos de incorporación en placa y
preincubación. Cualquiera de ellos es aceptable para realizar experimentos con y sin activación metabólica. Algunos
compuestos pueden detectarse más eficazmente utilizando el método de preincubación.
Estos compuestos pertenecen a clases químicas que incluyen nitrosaminas alifáticas de cadena corta, metales divalentes,
aldehídos, colorantes azoicos y compuestos diazo, alcaloides de pirrolizidina, compuestos alílicos y compuestos nitro (3).
También se reconoce que ciertas clases de mutágenos no siempre se detectan utilizando procedimientos estándar como el
método de incorporación en placa o el método de preincubación. Estos deben considerarse "casos especiales" y se recomienda
encarecidamente que se utilicen procedimientos alternativos para su detección. Podrían identificarse los siguientes "casos
especiales" (junto con ejemplos de procedimientos que podrían utilizarse para su detección): colorantes azoicos y compuestos
diazo (3)(5)(6)(13), gases y sustancias químicas volátiles (12). (14)(15)(16), y glucósidos (17)(18). Una desviación del
procedimiento estándar debe estar científicamente justificada.

©OCDE 2020
Machine Translated by Google

OCDE/OCDE 471 3
DESCRIPCIÓN DEL MÉTODO

Preparativos

bacterias

11. Los cultivos frescos de bacterias deben desarrollarse hasta la fase de crecimiento exponencial tardía o
estacionaria temprana (aproximadamente 109 células por ml). No se deben utilizar cultivos en fase estacionaria tardía.
Es esencial que los cultivos utilizados en el experimento contengan un título alto de bacterias viables. El título puede
demostrarse a partir de datos de control históricos en las curvas de crecimiento o en cada ensayo mediante la
determinación del número de células viables mediante un experimento de cultivo en placas.
12. La temperatura de cultivo recomendada es de 37°C.
13. Se deben utilizar al menos cinco cepas de bacterias. Estos deben incluir cuatro cepas de S. typhimurium
(TA1535; TA1537 o TA97a o TA97; TA98; y TA100) que han demostrado ser confiables y reproducibles entre
laboratorios. Estas cuatro cepas de S. typhimurium tienen pares de bases GC en el sitio de reversión primario y se sabe
que es posible que no detecten ciertos mutágenos oxidantes, agentes reticulantes e hidracinas. Estas sustancias pueden
detectarse mediante cepas de E. coli WP2 o S. typhimurium TA102 (19) que tienen un par de bases AT en el sitio de
reversión primaria. Por tanto la combinación de cepas recomendada es:

1. S. typhimurium TA1535, y
2. S. typhimurium TA1537 o TA97 o TA97a, y
3. S. typhimurium TA98, y
4. S. typhimurium TA100, y
5. E. coli WP2 uvrA, o E. coli WP2 uvrA (pKM101), o S. typhimurium TA102.

Para detectar mutágenos entrecruzados, puede ser preferible incluir TA102 o agregar una cepa de E. coli con capacidad
de reparación de ADN [por ejemplo, E. coli WP2 o E. coli WP2 (pKM101).]
14. Se deben utilizar procedimientos establecidos para la preparación del cultivo, la verificación de marcadores y
el almacenamiento. Se debe demostrar la necesidad de aminoácidos para el crecimiento de cada preparación de cultivo
madre congelada (histidina para las cepas de S. typhimurium y triptófano para las cepas de E. coli). Se deben verificar
de manera similar otras características fenotípicas, a saber: la presencia o ausencia de plásmidos de factor R cuando
corresponda [es decir, resistencia a la ampicilina en las cepas TA98, TA100 y TA97a o TA97, WP2 uvrA y WP2 uvrA
(pKM101), y resistencia a la ampicilina + tetraciclina en cepa TA102]; la presencia de mutaciones características (es
decir, mutación rfa en S. typhimurium por sensibilidad al cristal violeta, y mutación uvrA en E. coli o mutación uvrB en S.
typhimurium, por sensibilidad a la luz ultravioleta) (2)(3). Las cepas también deben producir recuentos espontáneos en
placas de colonias revertidas dentro de los rangos de frecuencia esperados a partir de los datos de control históricos del
laboratorio y preferiblemente dentro del rango informado en la literatura.

Medio

15. Se utiliza un agar mínimo apropiado (por ejemplo, que contiene medio mínimo E de Vogel­Bonner y glucosa) y
un agar superpuesto que contiene histidina y biotina o triptófano, para permitir algunas divisiones celulares (1)(2)(9).

Activación metabólica

©OCDE 2020
Machine Translated by Google

4 471 OCDE/OCDE
dieciséis.
Las bacterias deben exponerse a la sustancia problema tanto en presencia como en ausencia de un sistema de activación
metabólica apropiado. El sistema más comúnmente utilizado es una fracción postmitocondrial suplementada con cofactor (S9)
preparada a partir de hígados de roedores tratados con agentes inductores de enzimas como Aroclor 1254 (1)(2) o una combinación
de fenobarbital y ß­naftoflavona (18 )(20)(21). La fracción postmitocondrial se utiliza normalmente en concentraciones en el rango
del 5 al 30% v/v en la mezcla S9.
La elección y condición de un sistema de activación metabólica pueden depender de la clase de sustancia química que se esté
probando. En algunos casos puede ser apropiado utilizar más de una concentración de fracción postmitocondrial. Para colorantes
azoicos y compuestos diazo, puede ser más apropiado utilizar un sistema de activación metabólica reductiva (6)(13).

Sustancia de prueba/Preparación

17. Las sustancias sólidas de prueba deben disolverse o suspenderse en disolventes o vehículos apropiados y diluirse, si
procede, antes del tratamiento de las bacterias. Las sustancias de prueba líquidas pueden agregarse directamente a los sistemas
de prueba y/o diluirse antes del tratamiento. Se deben emplear preparaciones frescas a menos que los datos de estabilidad
demuestren la aceptabilidad del almacenamiento.

Condiciónes de la prueba

Solvente/vehículo

18. No debe sospecharse que el disolvente/vehículo reaccione químicamente con la sustancia problema y debe ser
compatible con la supervivencia de las bacterias y la actividad S9 (22). Si se utilizan disolventes/vehículos distintos de los conocidos,
su inclusión debe estar respaldada por datos que indiquen su compatibilidad. Se recomienda que, siempre que sea posible, se
considere primero el uso de un disolvente/vehículo acuoso. Al probar sustancias inestables en agua, los disolventes orgánicos
utilizados deben estar libres de agua.

Concentraciones de exposición

19. Entre los criterios que se deben tener en cuenta al determinar la cantidad máxima de sustancia de prueba que se utilizará
se encuentran la citotoxicidad y la solubilidad en la mezcla de tratamiento final. Puede resultar útil determinar la toxicidad y la
insolubilidad en un experimento preliminar. La citotoxicidad puede detectarse mediante una reducción en el número de colonias
revertidas, un claro o disminución del césped de fondo o el grado de supervivencia de los cultivos tratados. La citotoxicidad de una
sustancia puede verse alterada en presencia de sistemas de activación metabólica. La insolubilidad debe evaluarse como
precipitación en la mezcla final en las condiciones reales de prueba y evidente a simple vista. La concentración máxima
recomendada de prueba para sustancias solubles no citotóxicas es de 5 mg/placa o 5 µl/placa. Para sustancias no citotóxicas que
no son solubles a 5 mg/placa o 5 µl/placa, una o más concentraciones analizadas deben ser insolubles en la mezcla de tratamiento
final. Las sustancias de prueba que ya sean citotóxicas por debajo de 5 mg/placa o 5 µl/placa deben analizarse hasta una
concentración citotóxica. El precipitado no debe interferir con la puntuación.

20. Se deben utilizar al menos cinco concentraciones analizables diferentes de la sustancia problema con intervalos de
aproximadamente medio logaritmo (es decir, √10) entre los puntos de prueba para un experimento inicial. Intervalos más pequeños
pueden ser apropiados cuando se investiga una respuesta de concentración.

21. Se pueden considerar pruebas por encima de la concentración de 5 mg/placa o 5 µl/placa al evaluar
sustancias que contienen cantidades sustanciales de impurezas potencialmente mutagénicas.

©OCDE 2020
Machine Translated by Google

OCDE/OCDE 471 5

Control S

22. En cada ensayo se deben incluir controles simultáneos positivos y negativos (disolvente o vehículo) específicos
de la cepa, con y sin activación metabólica. Se deben seleccionar concentraciones de control positivo que demuestren el
desempeño efectivo de cada ensayo.

23. Para los ensayos que emplean un sistema de activación metabólica, las sustancias de referencia del control
positivo deben seleccionarse en función del tipo de cepas de bacterias utilizadas. Los siguientes productos químicos son
ejemplos de controles positivos adecuados para ensayos con activación metabólica:

Químico y CAS No.

9,10­dimetilantraceno [CAS no. 781­43­1]

7,12­Dimetilbenzantraceno [CAS no. 57­97­6]

Rojo Congo [CAS no. 573­58­0] (para el método de activación metabólica reductiva)

Benzo(a)pireno [CAS no. 50­32­8]

Ciclofosfamida (monohidrato) [CAS no. 50­18­0 (Nº CAS 6055­19­2)]

2­aminoantraceno [CAS no. 613­13­8]

El 2­aminoantraceno no debe utilizarse como único indicador de la eficacia de la mezcla S9. Si 2­

Si se utiliza aminoantraceno, cada lote de S9 también debe caracterizarse con un mutágeno que requiere activación
metabólica mediante enzimas microsomales, por ejemplo, benzo(a)pireno, dimetilbenzantraceno.

24. Para ensayos realizados sin sistema de activación metabólica, ejemplos de cepas positivas específicas
los controles son:

Químico y CAS No. Cepa

(a) Azida de sodio [CAS no. 26628­22­8] TA1535 y TA100

(b) 2­Nitrofluoreno [CAS no. 607­57­8] TA98

(C) 9­aminoacridina [CAS no. 90­45­9] o TA1537, TA97 y TA97a

ICR191 [CAS no. 17070­45­0]

(d) Hidroperóxido de cumeno [CAS no. 80­15­9] TA102

(Es) Mitomicina C [CAS no. 50­07­7] WP2 uvrA y TA102

(F) N­Etil­N­nitro­N­nitrosoguanidina [CAS no. 4245­77­6] o N­ WP2, WP2 uvrA y

Metil­N­nitro­N­nitrosoguanidina [CAS no. 70­25­7] o 4­ WP2 uvrA (pKM101)
1­óxido de nitroquinolina [CAS no. 56­57­5]

(gramo) Furilfuramida (AF­2) [CAS no. 3688­53­7] cepas que contienen plásmidos

25. Se pueden utilizar otras sustancias de referencia de control positivo apropiadas. El uso de clases químicas
Se podrán considerar productos químicos de control positivo relacionados, cuando estén disponibles.

©OCDE 2020
Machine Translated by Google

6 471 OCDE/OCDE
26. Deben incluirse controles negativos, que consistan en disolvente o vehículo solo, sin sustancia de prueba y, por lo demás,
tratados de la misma manera que los grupos de tratamiento. Además, también se deben utilizar controles sin tratar, a menos que existan
datos de control históricos que demuestren que el disolvente elegido no induce efectos nocivos o mutagénicos.

PROCEDIMIENTO

Tratamiento con sustancia de prueba

27. Para el método de incorporación en placa (1)(2)(3)(4), sin activación metabólica, normalmente se utilizan 0,05 ml o 0,1 ml de
las soluciones problema, 0,1 ml de cultivo bacteriano fresco (que contiene aproximadamente 108 células viables) y 0,5 ml de El tampón
estéril se mezcla con 2,0 ml de agar de recubrimiento. Para el ensayo con activación metabólica, normalmente se mezclan 0,5 ml de
mezcla de activación metabólica que contiene una cantidad adecuada de fracción postmitocondrial (en el rango del 5 al 30 % v/v en la
mezcla de activación metabólica) con el agar de recubrimiento (2,0 ml ), junto con las bacterias y la sustancia problema/solución
problema. El contenido de cada tubo se mezcla y se vierte sobre la superficie de una placa de agar mínimo. Se deja solidificar el agar
superpuesto antes de la incubación.

28. Para el método de preincubación (2)(3)(5)(6), la sustancia problema/solución problema se preincuba con la cepa problema
(que contiene aproximadamente 108 células viables) y un tampón estéril o el sistema de activación metabólica (0,5 ml), normalmente
durante 20 mín. o más a 30°­37°C antes de mezclar con el agar de recubrimiento y verterlo sobre la superficie de una placa de agar
mínimo. Por lo general, se mezclan 0,05 o 0,1 ml de sustancia problema/solución problema, 0,1 ml de bacterias y 0,5 ml de mezcla S9
o tampón estéril con 2,0 ml de agar superpuesto. Los tubos deben airearse durante la preincubación utilizando un agitador.

29. Para una estimación adecuada de la variación, se deben utilizar placas por triplicado en cada nivel de dosis. El uso de placas
duplicadas es aceptable cuando esté científicamente justificado. La pérdida ocasional de una placa no invalida necesariamente el ensayo.

30. Las sustancias gaseosas o volátiles deben analizarse mediante métodos apropiados, como en recipientes sellados.
buques (12)(14)(15)(16).

Incubación

31. Todas las placas de un ensayo determinado deben incubarse a 37 °C durante 48 a 72 horas. Después de la incubación
período, se cuenta el número de colonias revertidas por placa.

DATOS E INFORMES

Tratamiento de resultados

32. Los datos deben presentarse como el número de colonias revertidas por placa. También se debe proporcionar el número de
colonias revertidas en las placas de control negativo (control con disolvente y control sin tratar, si se utiliza) y positivo.

33. Se deben presentar los recuentos de placas individuales, el número medio de colonias revertidas por placa y la desviación
estándar para la sustancia problema y los controles positivos y negativos (sin tratar y/o con disolvente).

34. No existe ningún requisito de verificación de una respuesta positiva clara. Los resultados equívocos deben aclararse mediante
pruebas adicionales, preferiblemente utilizando una modificación de las condiciones experimentales. Se necesitan resultados negativos

©OCDE 2020
Machine Translated by Google

OCDE/OCDE 471 7
se confirmará caso por caso. En aquellos casos en los que no se considere necesaria la confirmación de resultados negativos, se deberá
justificar. En los experimentos de seguimiento se debe considerar la modificación de los parámetros del estudio para ampliar el rango de
condiciones evaluadas. Los parámetros del estudio que podrían modificarse incluyen el espaciamiento de las concentraciones, el método de
tratamiento (incorporación en placa o preincubación líquida) y las condiciones de activación metabólica.

Evaluación e interpretación de resultados.

35. Existen varios criterios para determinar un resultado positivo, como un aumento relacionado con la concentración en el rango
analizado y/o un aumento reproducible en una o más concentraciones en el número de colonias revertidas por placa en al menos una cepa con
o sin activación metabólica. sistema (23).
En primer lugar se debe considerar la relevancia biológica de los resultados. Se pueden utilizar métodos estadísticos como ayuda para evaluar
los resultados de la prueba (24). Sin embargo, la significación estadística no debería ser el único factor determinante para una respuesta positiva.

36. Una sustancia de prueba cuyos resultados no cumplan con los criterios anteriores se considera no mutagénica en esta prueba.

37. Aunque la mayoría de los experimentos darán resultados claramente positivos o negativos, en casos raros el conjunto de datos
impedirá emitir un juicio definitivo sobre la actividad de la sustancia de prueba. Los resultados pueden seguir siendo equívocos o cuestionables
independientemente del número de veces que se repita el experimento.

38. Los resultados positivos de la prueba de mutación inversa bacteriana indican que una sustancia induce mutaciones puntuales
mediante sustituciones de bases o cambios de marco en el genoma de Salmonella typhimurium y/o Escherichia coli. Los resultados negativos
indican que, en las condiciones de la prueba, la sustancia de prueba no es mutagénica en las especies analizadas.

Informe de prueba

39. El informe de prueba debe incluir la siguiente información:

Sustancia de prueba:

­ datos de identificación y número CAS, si se conocen;

­
naturaleza física y pureza;

­
propiedades fisicoquímicas relevantes para la realización del estudio;

­
estabilidad de la sustancia problema, si se conoce.

Disolvente/Vehículo:

­
justificación de la elección del disolvente/vehículo;

­
solubilidad y estabilidad de la sustancia problema en disolvente/vehículo, si se conocen.

Presiones:

©OCDE 2020
Machine Translated by Google

8 471 OCDE/OCDE
­ cepas utilizadas;

­
número de células por cultivo;

­ características de la cepa.

Condiciónes de la prueba:

­
cantidad de sustancia problema por placa (mg/placa o µl/placa) con justificación para la selección de la dosis y número de placas
por concentración;

­ medios utilizados;

­
tipo y composición del sistema de activación metabólica, incluidos los criterios de aceptabilidad;

­
procedimientos de tratamiento.

Resultados:

­
signos de toxicidad;
­
signos de precipitación;

­
recuentos de placas individuales;

­
el número medio de colonias revertidas por placa y la desviación estándar;

­
relación dosis­respuesta, cuando sea posible;

­
análisis estadísticos, si los hubiere;
­
datos de control negativos (disolvente/vehículo) y positivos simultáneos, con rangos, medias y desviaciones estándar;

­
datos históricos de control negativos (disolvente/vehículo) y positivos, con, por ejemplo, rangos, medias y
desviaciones estandar.

Discusión de los resultados.

Conclusión.

©OCDE 2020
Machine Translated by Google

OCDE/OCDE 471 9

LITERATURA

(1) Ames, BN, McCann, J. y Yamasaki, E. (1975). Métodos para detectar carcinógenos y
Mutágenos con la prueba de mutagenicidad de Salmonella/Microsomas de mamíferos. Mutación Res., 31, 347­364.

(2) Maron, DM y Ames, BN (1983). Métodos revisados para la prueba de mutagenicidad de Salmonella.
Mutación Res., 113, 173­215.

(3) Gatehouse, D., Haworth, S., Cebula, T., Gocke, E., Kier, L., Matsushima, T., Melcion, C., Nohmi, T., Venitt, S. y Zeiger,
E. ( 1994). Recomendaciones para la realización de ensayos de mutación bacteriana.
Mutación Res., 312, 217­233.

(4) Kier, LD, Brusick DJ, Auletta, AE, Von Halle, ES, Brown, MM, Simmon, VF, Dunkel, V., McCann, J., Mortelmans, K.,
Prival, M., Rao, TK y Ray V (1986). El ensayo microsomal de mamíferos/Salmonella Typhimurium: un informe del programa de
toxina genética de la Agencia de Protección Ambiental de EE. UU. Mutación Res., 168, 69­240.

(5) Yahagi, T., Degawa, M., Seino, YY, Matsushima, T., Nagao, M., Sugimura, T. y Hashimoto,
Y. (1975). Mutagenicidad de colorantes azoicos cancerígenos y sus derivados. Cartas de Cáncer, 1, 91­96.

(6) Matsushima, M., Sugimura, T., Nagao, M., Yahagi, T., Shirai, A. y Sawamura, M. (1980).
Factores que modulan las pruebas microbianas de mutagenicidad. En: Sistemas de prueba a corto plazo para la detección de carcinógenos.
Ed. Norpoth KH y Garner, RC, Springer, Berlín­Heidelberg­Nueva York. págs. 273­285.

(7) Gatehouse, DG, Rowland, IR, Wilcox, P., Callender, RD y Foster, R. (1990). Ensayos de mutación bacteriana. En:
Pruebas básicas de mutagenicidad: UKEMS Parte 1 revisada. Ed. DJ Kirkland Cambridge University Press, págs. 13­61.

(8) Aeschbacher, HU, Wolleb, U. y Porchet, L. (1987). Prueba de mutagenicidad de preincubación líquida para alimentos.
J. Seguridad alimentaria, 8, 167­177.

(9) Green, MHL, Muriel, WJ y Bridges, BA (1976). Uso de una prueba de fluctuación simplificada para detectar
bajos niveles de mutágenos. Mutación Res., 38, 33­42.

(10) Hubbard, SA, Green, MHL, Gatehouse, D. y JW Bridges (1984). La prueba de fluctuación en bacterias. En: Manual de
procedimientos de pruebas de mutagenicidad. 2da edición. Ed. Kilbey, BJ, Legator, M., Nichols, W. y Ramel C., Elsevier,
Amsterdam­Nueva York­Oxford, págs. 141­1

(11) Thompson, ED y Melampy, PJ (1981). Un examen del ensayo de suspensión cuantitativa para detectar mutagénesis con
cepas de Salmonella typhimurium. Mutagénesis ambiental, 3, 453­465.

(12) Araki, A., Noguchi, T., Kato, F. y T. Matsushima (1994). Método mejorado para la mutagenicidad
Prueba de compuestos gaseosos mediante el uso de una bolsa de muestreo de gas. Mutación Res., 307, 335­344.

(13) Prival, MJ, Bell, SJ, Mitchell, VD, Reipert, MD y Vaughn, VL (1984). Mutagenicidad de colorantes de bencidina y
congéneres de bencidina y colorantes monoazo seleccionados en un ensayo de Salmonella modificado.
Mutación Res., 136, 33­47.

(14) Zeiger, E., Anderson, BE, Haworth, S, Lawlor, T. y Mortelmans, K. (1992). Salmonela
Pruebas de mutagenicidad. V. Resultados de las pruebas de 311 sustancias químicas. Reinar. Mol. Mutágeno., 19, 2­141.

(15) Simmon, V., Kauhanen, K. y Tardiff, RG (1977). Actividad mutagénica de sustancias químicas identificadas en el agua
potable. In Progress in Genetic Toxicology, D. Scott, B. Bridges y F. Sobels (Eds.), Elsevier, Amsterdam, págs. 249­258.

©OCDE 2020
Machine Translated by Google

10 471 OCDE/OCDE
(16) Hughes, TJ, Simmons, DM, Monteith, IG y Claxton, LD (1987). Técnica de vaporización para medir la actividad
mutagénica de sustancias químicas orgánicas volátiles en el ensayo de Ames/Salmonella. Mutagénesis ambiental, 9,
421­441.

(17) Matsushima, T., Matsumoto, A., Shirai, M., Sawamura, M. y Sugimura, T. (1979). Mutagenicidad del carcinógeno
natural cicasina y conjugados sintéticos de metilazoxi metano en Salmonella typhimurium. Cáncer Res., 39, 3780­3782.

(18) Tamura, G., Gold, C., Ferro­Luzzi, A. y Ames. BN (1980). Fecalasa: un modelo para la activación de glucósidos
dietéticos a mutágenos por la flora intestinal. Proc. Nacional. Acad. Ciencia. Estados Unidos, 77, 4961­4965.

(19) Wilcox, P., Naidoo, A., Wedd, DJ y Gatehouse, DG (1990). Comparación de Salmonella
typhimurium TA 102 con cepas de Escherichia coli WP2 Tester. Mutagénesis, 5, 285­291.

(20) Matsushima, T., Sawamura, M., Hara, K. y Sugimura, T. (1976). Un sustituto seguro de los bifenilos policlorados
como inductor de los sistemas de activación metabólica. En: "Activación metabólica in vitro en pruebas de mutagénesis",
Eds FJ de Serres et al. Elsevier, Holanda Septentrional, págs. 85­88.

(21) Elliott, BM, Combes, RD, Elcombe, CR, Gatehouse, DG, Gibson, GG, Mackay, JM y Wolf, RC (1992). Alternativas
al S9 inducido por Aroclor 1254 en ensayos de genotoxicidad in vitro. Mutagénesis, 7, 175­177.

(22) Maron, D., Katzenellenbogen, J. y Ames, BN (1981). Compatibilidad de disolventes orgánicos con la prueba de
Salmonella/Microsoma. Mutación Res., 88, 343­350.

(23) Claxton, LD, Allen, J., Auletta, A., Mortelmans, K., Nestmann, E. y Zeiger, E., (1987). Guía para las pruebas de
mutagenicidad bacteriana de Salmonella typhimurium/microsomas de mamíferos. Mutación Res., 189, 83­91.

(24) Mahon, GAT, Green, MHL, Middleton, B., Mitchell, I., Robinson, WD y Tweats, DJ (1989).
Análisis de datos de ensayos de colonias microbianas. En: Subcomité del UKEMS sobre directrices para pruebas de
mutagenicidad, Parte II. Evaluación estadística de datos de pruebas de mutagenicidad. Ed. Kirkland, DJ, Cambridge
University Press, págs. 28­65.

©OCDE 2020
Machine Translated by Google

OCDE/OCDE 471 11

ANEXO
DEFINICIONES

Una prueba de mutación inversa en Salmonella typhimurium o Escherichia coli detecta una mutación en un aminoácido que
requiere una cepa (histidina o triptófano, respectivamente) para producir una cepa independiente de un suministro externo
de aminoácidos.

Los mutágenos de sustitución de pares de bases son agentes que provocan un cambio de bases en el ADN. En una prueba
de reversión, este cambio puede ocurrir en el sitio de la mutación original o en un segundo sitio en la estructura bacteriana.
genoma.

Los mutágenos de cambio de marco son agentes que provocan la adición o eliminación de uno o más pares de bases en el
ADN, cambiando así el marco de lectura en el ARN.

©OCDE 2020