UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN CRISTÓBAL DE HUAMANGA

FACULTAD DE INGENIERÍA QUÍMICA Y METALURGIA

ESCUELA DE FORMACIÓN PROFESIONAL DE INGENIERÍA QUÍMICA

QUÍMICA ORGÁNICA (QU-144)

PRACTICA N°5

CROMATOGRAFÍA DE CAPA DELGADA Y CROMATOGRAFÍA

DE PAPEL

PROFESOR DE TEORÍA : CORDOVA MIRANDA, Alcira

PROFESOR DE PRÁCTICA: CORDOVA MIRANDA, Alcira

INTEGRANTES : BERMUDO CORONADO, Melania Ruth

CASTILLO VEGA, Flor Stephany

SURICHAQUI PARHUAY, Kevin Smith

DÍA DE PRÁCTICAS : MARTES HORA: 10 AM A 13 PM MESA: 3

FECHA DE EJECUCIÓN : 04/10/2016 FECHA DE ENTREGA: 11/10/2016

AYACUCHO-PERÚ

2016
 CROMATOGRAFÍA DE CAPA DELGADA Y CROMATOGRAFÍA
DE PAPEL
I.OBJETIVO(S).

 Separar los componentes de una mezcla de compuestos polares por

cromatografía en papel.
 Identificar los componentes de una mezcla, teniendo muestras de
comparación adecuadas.
 Determinar el Rf de los compuestos para unas condiciones dadas.
 Utilizar posteriormente estas técnicas para aplicaciones como: determinar la
pureza de un compuesto, el avance de una reacción, la identidad o la
diferencia de compuestos y de fracciones cromatográficas.
 observar las diferentes características de la placa en la cromatografía.
 Analizar la influencia del solvente en la separación cromatográfica.
II.REVISIÓN BIBLIOGRÁFICA.

CROMATOGRAFÍA

La cromatografía es un método de separación de diferentes componentes de

una muestra, este método logra la separación de los mismos a través del paso
de una muestra por una fase estacionaria con la ayuda de la fase móvil, cada
componente de la muestra tiene propiedades particulares que permitirá su
interacción en forma diferente entre la fase estacionaria y móvil, de esta forma
cada componente se retrasa en forma particular y si el caudal, las característica
de la fase estacionaria y móvil y la longitud de la columna son las adecuadas se
lograra la separación completa de todos los componentes de la muestra.
El objetivo principal de un estudio cromatografía es lograr la separación de
todos los componentes en una muestra, para ello es necesario jugar con una
serie de factores cromatográfica, es por ello que es necesario conocer como
están relacionados los diferentes factores experimentales con las ecuaciones
Cromatográfica. …(1)

La cromatografía es esencialmente un método físico de separación en el que

los componentes a separar se distribuyen entre dos fases, una inmóvil (lecho
estacionario), y otra móvil (fase móvil) la cual percola a través de la primera. El
proceso cromatográfico se da como resultado de repetidos procesos de sorción-
desorción durante el movimiento de los componentes de la mezcla arrastrada
por la fase móvil a lo largo del lecho estacionario (elución), produciéndose la
separación debido a las diferencias de constantes de distribución de los
componentes de la mezcla entre la fase estacionaria y la móvil. A la distribución
final de los componentes en función de su posición sobre el lecho estacionario,
o del tiempo en que eluyen se le denomina cromatograma.
Prácticamente no existen restricciones sobre la naturaleza de las fases a
utilizar, siempre que la fase estacionaria sea sólida o líquida y la fase móvil
líquida o gaseosa, por lo que es posible, en principio, realizar por medio de
estas técnicas
la

separación de los componentes de cualquier mezcla. Por otra parte, la

utilización de las técnicas cromatográficas no está excenta de dificultades,
debido fundamentalmente a la gran cantidad de parámetros que pueden influir
en el proceso de separación, lo cual dificulta la elección de las condiciones
óptimas de separación y en muchas ocasiones implica la irreproducibilidad de
los resultados. Por ello la cromatografía no es una técnica de rutina que puede
aplicarse sin más a cualquier mezcla, sin invertir en muchos casos gran
cantidad de esfuerzo y tiempo. …(2)
Constante Rf: El último punto alcanzado por el disolvente en su avance se
denomina frente del disolvente. Puede usarse como punto de referencia para
expresar las distancias relativas recorridas por las diferentes sustancias en un
cromatograma. El símbolo utilizado para designar esta distancia relativa es Rf y
se define mediante:
 Como el denominador es siempre mayor que el numerador en Rf debería ser
un decimal. Por razones de conveniencia se suele expresar como un
porcentaje. Así un Rf de 50 indicaría que el compuesto avanzo la mitad de la
distancia del frente del disolvente. …(3)
TIPOS DE CROMATOGRAFÍA
Cromatografía de papel
La cromatografía en papel es un proceso muy utilizado en los laboratorios
para realizar análisis cualitativos ya que pese a no ser una técnica potente no
requiere de ningún tipo de equipamiento. La fase estacionaria está constituida
simplemente por una tira de papel de filtro. La muestra se deposita en un
extremo colocando pequeñas gotas de la disolución y evaporando el disolvente.
Luego el disolvente empleado como fase móvil se hace ascender por
capilaridad. La separación se realiza en función de la afinidad de los solutos con
las dos fases, las más solubles en agua se quedarán cerca del punto donde se
aplicó la muestra, y las menos solubles en agua y más solubles en el disolvente
llegarán más lejos. Las sustancias separadas se identifican mediante diversos
procedimientos físicos o químicos.
La cromatografía en papel es una técnica utilizada para análisis inorgánico
cualitativo, permite llevar a cabo la separación e identificación de iones,
trabajando con cantidades mínimas de sustancia. Pertenece al tipo de
“Cromatografía de partición” se fundamenta en que las sustancias problema,
pueden tener diferentes coeficientes de reparto en dos disolventes de
inmiscibilidad limitada, uno permanece fijo en la superficie del papel “fase
estacionaria” generalmente en agua, la fase móvil constituida generalmente por
una mezcla de disolventes parcialmente miscibles en ella. Hay varios tipos de
cromatografía, la ascendente (papel hacia arriba), descendente (papel
invertido), radial y de separación de zonas y sectores.
 Al entrar en contacto con los disolventes empieza su fase de movilidad lo que
produce unas manchas características sobre el papel, generalmente, estas no
son coloreadas y se revelan con una lámpara fluorescente, los contornos se
marcan con lápiz. Como medida en cromatografía sobre papel se emplea el Rf
(Retention factor), el cual se define como el cociente de dividir el recorrido de la
sustancia por el disolvente, esto es, la distancia media desde el origen hasta el
centro de la mancha (X) dividida por la distancia que media desde el origen
X
hasta el frente del disolvente (S). Rf =
S

En la cromatografía en papel se utiliza como fase estacionaria una hoja de

papel de celulosa de elevada pureza recubierta de una capa de agua asociada
a las fibras de celulosa. La fase móvil, en la que irá disuelta la muestra, se
forma por disolventes cuya naturaleza se elige en función de los componentes
que se pretenden separar. …(4)
En este caso, el soporte y fase estacionaria es papel. El papel que
normalmente se utiliza es de celulosa. La celulosa es muy polar en el agua y se
vuelve electronegativa. El papel tiene propiedades de intercambio iónico
débiles, así como de adsorción.
La mayoría de las propiedades varían de papel a papel, lo que provoca
variaciones en el Rf. Actualmente existen papeles modificados con resinas
cambiadores de iones, alúmina, etc. El aparato que se usa consta de un soporte
para el papel, un recipiente para el disolvente y una cámara hermética para
desarrollar el cromatograma. La cámara hermética es necesaria para evitar la
evaporación de los disolventes volátiles debido a la gran superficie del papel
expuesta. Antes de sumergir el papel en el disolvente de elución se aplica la
muestra en forma de punto diminuto con cualquier objeto que pueda transferir
un pequeño volumen.
El papel debe estar en equilibrio con los vapores del disolvente antes de
empezar el desarrollo. La cromatografía en papel se ha aplicado con buen éxito
a problemas de química orgánica e inorgánica y de bioquímica. …(5)
Existen muchos tipos de cromatografía sobre papel, una primera división de
las variadas clases podría ser:
1. Cromatografía ascendente: el disolvente se encuentra en el fondo del
recipiente que sostiene al papel y va subiendo a través de el por
capilaridad.
2. Cromatografía descendente: el disolvente está en un recipiente está en
un recipiente del que cuelga el papel, fluye por él hacia abajo por una
combinación de capilaridad y gravedad.
En ambos casos el disolvente avanza a lo largo del papel pasando por
encima de la mancha, al avanzar disuelve y arrastra las sustancias de la
mancha, cada una de ellas se mueve, por lo general a distinta velocidad que las
otras. Se deja actuar el disolvente un tiempo determinado, se seca el papel y se
observan las sustancias separadas si tienen color, o en caso de no tener color
se procede al revelado por una reacción química apropiada. Esta técnica se
conoce como cromatografía monodimencional y el papel resultante recibe el
nombre de cromatograma monodimencional. …(6)
Cromatografía de capa fina
La llamada “capa fina” consiste en una placa de vidrio, rectangular o cuadrada,
denominadas cromatoplacas, o simplemente placas sobre cuya superficie se
deposita una capa uniforme muy delgada (en ocasiones de algunas micras de
espesor) de una substancia absorbente, casi siempre silicagel o alúmina, en
condiciones tales que resulte uniformemente extendida y suficientemente
adherida. En general, de hace una papilla acuosa con el adsorbente, que se
deposita sobre la placa mediante un aplicador adecuado. Las placas se secan
en estufa para activar la superficie del adsorbente y se encuentran aptas para
efectuar la cromatografía.
A las ventajas de resistencia a la temperatura y a los reactivos agresivos de la
cromatografía en capa fina, hay que añadir una mayor nitidez y sensibilidad de
los cromatogramas, así como una mayor rapidez en su desarrollo. Además, los
cromatogramas obtenidos pueden conservarse indefinidamente y archivarse si
se pulveriza la placa revelada con una dispersión de un plástico transparente y
especial donde quede grabado el cromatograma sobre la película endurecida
del plástico, que se separa fácilmente del soporte. …(6)
Se basa en la preparación de una capa, uniforme, de un adsorbente
mantenido sobre una placa de vidrio u otro soporte. Los requisitos esenciales
son, pues, un adsorbente, placas de vidrio, un dispositivo que mantenga las
placas durante la extensión, otro para aplicar la capa de adsorbente, y una
cámara en la que se desarrollen las placas cubiertas. Es preciso también poder
guardar con facilidad las placas preparadas y una estufa para activarlas.
La fase móvil es líquida y la fase estacionaria consiste en un sólido. La fase
estacionaria será un componente polar y el eluyente será por lo general menos
polar que la fase estacionaria, de forma que los componentes que se desplacen
con mayor velocidad serán los menos polares. Polaridad de los compuestos
orgánicos en orden creciente:
Hidrocarburos < olefinas < flúor < cloro < nitro < aldehído < éster < alcohol <
cetonas < aminas < ácidos < amidas.
La cromatografía en capa fina presenta una serie de ventajas frente a otros
métodos cromatográficos (en columna, en papel, en fase gaseosa) ya que el
utillaje que precisa es más simple. El tiempo que se necesita para conseguir las
separaciones es mucho menor y la separación es generalmente mejor. Pueden
usarse reveladores corrosivos, que sobre papel destruirían el cromatograma. El
método es simple y los resultados son fácilmente reproducibles, lo que hace
que sea un método adecuado para fines analíticos.
Al realizar la elección del adsorbente se debe tener en cuenta el tamaño de las
partículas del adsorbente, cuanto más finamente dividido esté mayor será su
adhesión al soporte, aunque también se le puede añadir un adherente. La
elección del eluyente se realiza de forma empírica. Hay que estudiar la
polaridad del componente y probar con eluyentes cada vez menos polares.
Generalmente se utiliza como reactivo revelador yodo, el cual forma complejos
coloreados con los componentes orgánicos (con tonos amarillo-marrón), pero
las manchas desaparecen con el tiempo con lo que es conveniente señalar las
manchas aparecidas.
Otro reactivo revelador bastante utilizado es el ácido sulfúrico, que reacciona
con los componentes orgánicos produciendo manchas negras. Sin embargo
debe tenerse en cuenta que el tamaño de las manchas no está relacionado con
la cantidad de componente separado. …(4)
La ventaja principal de la capa fina es que se analizan simultáneamente la
muestra y el patrón, mientras que en la cromatografía en columna las muestras
se analizan individualmente. Además, las muestras que son difíciles de separar,
se pueden resolver utilizando dos disolventes diferentes por desarrollo de la
placa en direcciones perpendiculares.
Otra ventaja es que, si los componentes no se pierden en los vapores que
rodean la placa, todos estarán en algún lugar de la misma, mientras que en la
cromatografía en columna algunos componentes no eluyen y se pierden. Y a
esto se suma que la placa de la capa fina se usa una sola vez, por lo que se
pueden utilizar condiciones severas de separación. …(5)

III. MATERIALES, EQUIPOS E INSTRUMENTO DE LABORATORIO Y

REACTIVOS QUÍMICOS UTILIZADOS.
- Luna de reloj. - Regla.
- Lápiz. - Cuba cromatográfica.
 - Lámpara UV. - Extracto de espinaca.
- Absorbente de silicagel. - Aceite esencial de anís.
- Papel de Whatman.
- Mechero de Bunsen. - Mortero.
- Cromatofolitos.
- Capilar.
Reactivos químicos: cloruro de metileno, metanol, etanol, ácido sulfúrico,
benceno, diclorometano, acetona

IV. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL.

ENSAYO N°1.- Cromatografía de Capa Delgada (CCD) o Cromatografía de

Capa Fina (CCF).

a) Separación de pigmentos de la espinaca.

Preparación del extracto de la espinaca: Poner las hojas de espinacas con
acetona y etanol en un mortero y moler, luego filtrar el líquido sobrenadante y
éste filtrado es el extracto de espinaca que se usará para aplicar en la placa
(cromatofolio).
Desarrollo de la cromatografía: Disponer de cromatofolios de 2x6 cm
aproximadamente y marcar ligeramente con una lápiz una línea base a una
distancia de 0,5 cm del borde inferior de la placa. Preparar un tubo capilar de
manera tal que uno de sus extremos quede en punta, (estirar un tubo capilar
en el mechero). Aplicar una muestra del extracto de espinacas con el capilar
preparado sobre la línea base de la placa cromatográfica (hacer un punto
con el lápiz en el medio, para aplicar la muestra), procurando que la
aplicación no se corra más de un milímetro de diámetro. Dejar secar el
solvente de la muestra aplicada e introducir la placa en una cámara
cromatográfica (se puede usar un vaso de precipitado de 100 mL) y taparlo
con una luna de reloj que contenga como eluyente cualquiera de los
siguientes disolventes: cloruro de metileno, metanol, acetato de etilo o etanol
(cada grupo de trabajo de utilizar un disolvente diferente y comparar, anotar
de todos los grupos). Dejar subir o correr el disolvente hasta que llegue a 0,5
cm del extremo superior de la placa. Sacar la placa de la cámara, marcar con
el lápiz el frente del eluyente y dejar secar. Marcar el contorno de las
manchas y hacer un dibujo de la placa para presentar los resultados en su
informe. Calcular el Rf de cada mancha.
b) Separación de los componentes del aceite esencial de anís
 Repetir el procedimiento anterior (desarrollo de la cromatografía), en lugar
del extracto de espinaca poner en la placa aceite esencial de anís, disuelto
en diclorometano y utilizar como eluyente benceno:diclorometano (4:1), (2:1),
(2:2) y (1:3). Cada grupo de trabajo debe utilizar un sistema de solvente
diferente y comparar, anotar de todos los grupos. Observar las placas en la
lámpara ultravioleta, marcar las manchas con un lápiz y dibujar. Luego
revelar con agua:ácido sulfúrico (1:1), observar y dibujar la placa para su
informe. Calcular el Rf.

ENSAYO N°2.- Cromatografía de Papel (CP).

Utilizar papel Whatman N°1, cortado aproximadamente de 2x8 cm, marcar una
línea con un lápiz a 1 cm del borde inferior, aplicar la muestra (extracto de
espinaca) con un tubo de capilar, ponerlo en la cámara cromatográfica que
contiene el eluyente (etanol), cubrir con una luna de reloj. Cuando la fase móvil
llegue a 1 cm del borde superior, retirar el papel, marcar el frente del eluyente,
dejar secar el papel. Calcular el Rf.

V. DATOS Y RESULTADOS EXPERIMENTALES.

Ensayo N°01.- Cromatografía de Capa Delgada (CCD) o Cromatografía de

Capa Fina (CCF).

Ensayo N°02.- Cromatografía de Papel (CP).

VI. CONCLUSIONES, DISCUSIONES DE RESULTUADOS Y

RECOMENDACIONES.

CONCLUSIONES:

En esta práctica logramos conocer y aplicar la cromatografía por capa fina y de

papel, sus características y los factores que influyen en la separación por
cromatografía, además de aprender a calcular los valores del factor de
retención de las sustancias para poder deducir la relación que existe entre la
polaridad de las sustancias que se analizan con la de los eluyentes que se
utilizan con ellas y así mismo poder aplicar un criterio para identificar la pureza
de sustancias de acuerdo con la pigmentación que estas presenten al realizar la
cromatografía.

DISCUSIONES DE RESULTADOS:

- En la cromatografía de separación de pigmentos de la espinaca hemos

concluido que el mejor disolvente es el etanol, ya que, se ha podido
observar el recorrido de la muestra.
- En la cromatografía de separación de los componentes del aceite
esencial de anís, el mejor eluyente fue benceno:diclormetano (1:3), dicha
prueba se pudo comprobar en la lámpara ultravioleta. Y también se pudo
comprobar en el revelado, porque, nos dio un buen color y recorrido
gracias al agua:ácido sulfúrico (1:1).
- En la cromatografía de papel, se ha observado que la muestra arrojo 3
tipos de colores (amarillo, verde bajo y verde oscuro) y se obtuvo un
buen recorrido notándose el color amarillo.

RECOMENDACIÓN:

- Para hacer la cromatografía y ver el recorrido, no se debe de utilizar

lapicero (solamente lápiz).
- No mover el equipo cromatográfico, ya que, influyen en el recorrido del
eluyente.
- No tocar con la mano la superficie del cromatofolio (solo tocar los
costados). Y al momento de poner en el vaso el cromatofolio utilizar una
pinza.
- Para ser el revelado con alguna sustancia, se debe utilizar un frasco con
rociador.

VII. CUESTIONARIO.

1. ¿Qué significa cromatografía?

Método de análisis que permite la separación de gases o líquidos de una
mezcla por adsorción selectiva, produciendo manchas diferentemente
coloreadas en el medio adsorbente; está basado en la diferente
velocidad con la que se mueve cada fluido a través de una sustancia
porosa.
2. ¿Qué es un cromatograma?
Es el resultado gráfico de la cromatografía. En el caso de separación
óptima, los diferentes picos o manchas del cromatograma se
corresponden a los componentes de la mezcla separada.

3. ¿qué es un absorbente? ¿cuáles son los absorbentes más

utilizados en la cromatografía de capa delgada?
Un adsorbente es un sólido que tiene la capacidad de retener sobre su
superficie un componente presente en corrientes líquidas o gaseosas. Se
caracterizan por una alta superficie específica y por su inercia química
frente al medio en el que se van a utilizar.

Sílica gel (se utiliza en el 80% de las separaciones)

Óxido de Aluminio o Alúmina (ácida, neutra o básica)
Tierra Silícea ó Kieselguhr
Celulosa (Nativa o micro-cristalina)
Poliamidas

4. ¿Qué es un eluyente? Ejemplos

Es la palabra utilizada en métodos cromatográficos de separación para
referirse a la sustancia (puede ser puro, mezcla de varias o disolución)
que se añade en una columna cromatografía para "hacer correr" nuestro
producto de interés
o Éter de petróleo
o Éter di etílico
o Ciclo hexano
o Tetracloruro de carbono
o Acetato de etilo
o Piridina
o Cloroformo
o Diclorometano
o Benceno
o Etanol
o Metanol
o Agua
o Ácido acético
o compuestos cancerígenos.
5. ¿Qué es un revelado? Explique y ponga ejemplos
 El revelador es un compuesto que ha de reaccionar con los compuestos
que se desea analizar de forma que se obtenga una mancha coloreada a
simple vista.

a. Luz UV: si la sustancia absorbe luz ultravioleta, se puede usar una

fase estacionaria impregnada con un indicador fluorescente (F25a ó
F366), el número que aparece como subíndice nos indica Ia longitud
de onda de excitación del indicador utilizado".
b. La introducción de la placa en vapores de yodo.
c. El rocío con una solución de agua:H2SO4 a 1:1 (dentro de un
compartimiento especialmente protegido y bajo una campana de
extracción de gases). Después calentar intensamente, por ejemplo,
con un mechero. hasta carbonizar los compuestos.

6. ¿En qué consiste la cromatografía en columna?

Es el método más utilizado para la separación de compuestos orgánico a
escala preparativa. La fase estacionaria se deposita en el interior de una
columna de vidrio que termina con una placa porosa que impide su paso
y en un estrechamiento con una llave. La mezcla se deposita sobre la
parte superior de la fase estacionaria mientras que la fase móvil
atraviesa el sistema. Los compuestos van saliendo por separado de la
columna y se recogen en fracciones, los más polares quedan más
retenidos y para que salgan generalmente hace falta aumentar la
polaridad del disolvente. El tiempo necesario para eluir un compuesto de
la columna se llama tiempo de retención.

7. ¿Cuáles son las ventajas y desventajas de la cromatografía con

respecto a las técnicas de separación y purificación conocidas e
prácticas anteriores?

8. ¿Cuáles son las aplicaciones más útiles de la cromatografía de

papel?
La cromatografía en papel pertenece a la categoría "Cromatografía de líquidos".
La fase estacionaria se compone de una cinta de papel introducida
verticalmente en un recipiente de cristal y la fase móvil de un líquido. El
movimiento de la fase móvil se produce debido a la fuerza capilar. Un campo de
uso de la cromatografía en papel es el análisis de mezclas.

VIII. Bibliografía.
1. http://www.ciens.ucv.ve:8080/generador/sites/LIApregrado/archivos/Guia
%20para%20cromatografia.pdf
2. http://www.mncn.csic.es/docs/repositorio/es_ES/investigacion/
cromatografia/principios_de_cromatografia.pdf
3. http://exa.unne.edu.ar/quimica/quimica.analitica/qa_arch_matdid/
arch_teoria/Temas%20teoricos/Profesorado/Cromatografia.pdf
4. http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/M.Cromatogrficos_6700.pdf
5. http://blog.utp.edu.co/docenciaedwin/files/2014/09/TIPOS-
CROMATOGRAF%C3%8DA.pdf
6. http://exa.unne.edu.ar/quimica/quimica.analitica/qa_arch_matdid/
arch_teoria/Temas%20teoricos/Profesorado/Cromatografia.pdf