EXTRACCIÓN, CUANTIFICACIÓN Y ELECTROFORESIS DE ADN

Palta-Imbachi NS¹, Pantoja-Muñoz GS¹, Pérez-Revelo AN¹, Portilla-

Narváez LS¹, Portilla-Vallejo SC¹, Posso-Ipial DS¹, Ramírez-Lasso SS¹.

1. Estudiantes de Medicina, Universidad Cooperativa de Colombia,

Campus Pasto (Nariño), Colombia.

Resumen

En la presente bitácora se comprende y reconoce las bases moleculares y bioquímicas

provenientes de técnicas de extracción, separación, visualización y cuantificación de los
ácidos nucleicos. Considerando que los objetivos de este laboratorio se basaban en
extracción de ADN, posteriormente la práctica de las técnicas “desalamiento” y
“electroforesis” especificadas por la doctora Rosero Galindo CY y las respectivas
modificaciones, identificamos un buen resultado en la práctica, donde se logró visualizar
el ADN (1kb), comprobando que los pasos se realizaron correctamente y se cumplió el
objetivo del laboratorio

Palabras claves: Electroforesis, ADN, Agarosa, Extracción, Visualización.

Introducción moléculas de acuerdo a su tamaño y

reactividad, también puede ser utilizada
El ADN humano es el que contiene el en la separación del ADN dado que este
material genético que los organismos posee carga negativa debido a la
heredan de sus padres (1) y hoy en dia presencia de grupos fosfato en su
es posible visualizarlo por medio de dos estructura, característica que permite
técnicas que se llevaron a cabo a lo que, bajo la influencia de un campo
largo de esta práctica y se explicaran a eléctrico aplicado, las moléculas migren
continuación, luego de obtener una en dirección al ánodo (3) lo cual permite
muestra de sangre de un individuo es observar la migración de cualquier ácido
posible iniciar con la primera técnica de nucleico y por ende, cumplir el objetivo
laboratorio, la técnica Salting-Out, que de esta práctica, la visualización de
se refiere a la adición de una solución ADN.
saturada de sales que provoca la
agregación de proteínas y debris celular, Metodología
lo que permite su separación de los
ácidos nucleicos. Generalmente, estas Se siguió el protocolo descrito por la Dr.
soluciones se preparan a saturación con Rosero Galindo CY 2022 (4). Se
NaCl. Una centrifugación posterior a la realizaron dos prácticas de laboratorio,
adición de la solución concentrada de la extracción de ADN con la técnica de
sales precipita el debris y las proteínas, desalamiento.
y deja libre el ADN. (2) Si se logra
realizar este procedimiento Extracción de ADN. Muestra de sangre
correctamente es posible continuar con periférica obtenida de donante, sexo
la segunda técnica, la electroforesis en femenino de 20 años, sin patologías,
gel de agarosa, que logra separar quien autorizó voluntariamente la toma
de la muestra, codificada con el código
NP5 acorde a la norma bioética.

Variación importante: la muestra con

código NP5 se evidenció coagulada
debido a un error en el procedimiento,
por lo tanto se tomó una segunda
muestra de sangre periférica obtenida
Fig. 1 Muestra NP5 errónea con
de donante de sexo femenino de 20
formación de coagulo sanguíneo.
años sin patologías, quien autorizó
voluntariamente la toma de la muestra, 2. En la segunda practica se obtuvieron
posteriormente codificada con el código resultados exitosos, se extrajo gran
GP5 acorde a la norma bioética. cantidad de material genético de
células blancas y se observó
Desalamiento: se aumentó 15
perfectamente las fibras de ADN.
segundos el tiempo de centrifugación
para permitir que la centrifugadora
alcance la velocidad apropiada y
requerida.

Electroforesis.

Se modifico la disolución TBE buffer tris

borate-EDTA por el componente TAE
tris Acetate-EDTA buffer. Fig. 2. Muestra GP5 con botón de
DNA.
Resultados
Electroforesis en gel de agarosa:
Extracción de DNA: Se llevaron a cabo Para visualizar el DNA, utilizamos la
dos prácticas de laboratorios de técnica de electroforesis horizontal en
extracción de ADN, sin embargo, se gel de agarosa, que al aplicar una
obtuvo los resultados finales a partir de corriente a través de un gel que
la segunda muestra de sangre con contiene las moléculas de interés, estas
código GP5 que fue llevada a viajarán a través de este en diferentes
refrigeración durante el lapso de una direcciones y/o diferentes velocidades,
semana. separándolas unas de otras.

1. La primera muestra con código NP5

presentó coagulación y posiblemente
un error en las cantidades de buffer,
debido a esto el material genético se
vio perdido por lo tanto se recolectó
en muy poca cantidad.
Fig. 3. Muestra GP5, ADN obtenido en
la extracción, disuelto en 100 ul de agua
ultrapura.
Una vez se obtuvo el material genético caso el Gen (G6PC) ubicado en el
fue de vital importancia determinar el cromosoma 17q21, dan lugar a una
rendimiento mediante enfermedad de almacenamiento de
espectrofotometría ya que el ADN glucógeno tipo GSD) (7), También es
absorbe luz ultravioleta a 260 nm muy importantes en la investigación de
permitiendo estimar su concentración, proteínas, y en la investigación de
con esto se logró ver cuántos
mutaciones genéticas, porque cuando
fragmentos de ADN diferentes están
las proteínas o el ADN están mutados,
presentes en una muestra y qué tan
grandes son entre sí. En este caso, el son con frecuencia más o menos largos,
ADN presentó una correcta migración y y por lo tanto, aparecen en un gel de
gran cantidad, ya que se obtuvieron 1kb. electroforesis de manera diferente de lo
normal. Por último, esta técnica es muy
utilizada en la investigación básica para
la comprensión de la función de genes y
proteínas, pero ahora ha irrumpido en el
área de diagnóstico clínico y forense.
Referencias
1. Velázquez, L. P. A., Martínez, M. D. C.
A., & Romero, A. C. (2014). Extracción y
purificación de ADN. Herramientas
moleculares aplicadas en ecología:
Fig. 4. Visualización en transiluminador, aspectos teóricos y prácticos, 1.
muestra GP5 banda de ADN brillante 2. Sandoval Rodríguez A, & Martínez Rizo
con control Positivo. A, & de la Mora D (2013). Extracción de
ácidos nucleicos. Salazar Montes A, &
Discusión Sandoval Rodríguez A, & Armendáriz
Borunda J(Eds.), Biología molecular.
Las técnicas combinadas de Fundamentos y aplicaciones en las
ciencias de la salud. McGraw Hill.
electroforesis y la extracción de ADN 3. Pérez Cardona, A y Gómez Piñerez, L.
proporcionan separaciones rápidas y (2018). Electroforesis de ácido
altamente eficientes haciendo posible la desoxirribonucleico (ADN) en gel de
automatización (5); Estos métodos agarosa. Sello Editorial Tecnológico de
específicos permiten el análisis de la Antioquia.
4. Rosero Galindo CY, guía de prácticas de
expansión de repeticiones de laboratorio, Extracción de ADN y
nucleótidos en el genoma (STRs), electroforesis, pag. 7-11 Universidad
constituyéndose como la herramienta cooperativa de Colombia, Programa de
ideal para el diagnóstico de algunas Medicina, 2022.
enfermedades hereditarias en las que la 5. ( Wallingford RA, & EAG 1989). C
electrophoresis. A in chromatography, 29,
diferencia de una sola repetición puede 1 76. ). ( Wallingford, R. A., & Ewing, A.
jugar un papel fundamental en el G 1989). Capillary electrophoresis.
diagnóstico y transmisión de la Advances in chromatography, 29, 1-76.) .
enfermedad (6) (como en la enfermedad 6. Dorschner MO BDSKD of five
de la glucosa-6-fosfatasa-α en donde la spinocerebellar ataxia disorders by
multiplex amplification and capillary
afectación se da en un solo gen en este
 electrophoresis. JMD 2002; 4: 108 13. ).
Dorschner MO, Barden D, Stephens K.
Diagnosis of five spinocerebellar ataxia
disorders by multiplex amplification and
capillary electrophoresis. J Mol Diagn
2002; 4: 108-13.).
7. ( Chou JY, & MBC (2008). M in the
glucose‐6‐phosphatase‐α(G6PC) gene
that cause type I glycogen storage
disease. H mutation, 29(7), 921 930. ).
( Chou, J. Y., & Mansfield, B. C. (2008).
Mutations in the glucose‐6‐phosphatase‐
α(G6PC) gene that cause type Ia
glycogen storage disease. Human
mutation, 29(7), 921-930).