Cap 85 Endotoxinas

Impreso el: mar. abr. 25 2023, 05:16:23 p. m.
(EST) Estado: Oficial Vigente al 25-abr-2023 DocId: GUID-F9D9BFA5-099F-452C-9711-47674B37C1CC_2_es-ES

Impreso por: Alfonso Delgado Fecha Oficial: Oficial desde 01-may-2018 Tipo de Documento: Capítulos Generales @2023 USPC
No Distribuir DOI Ref: 82wgx DOI: https://doi.org/10.31003/USPNF_M98830_02_02
1
á85ñ PRUEBA DE ENDOTOXINAS BACTERIANAS

◆
Partes de este capítulo general han sido armonizadas con los textos correspondientes de la Farmacopea Europea y/o de la
Farmacopea Japonesa. Aquellas partes que no han sido armonizadas están marcadas con los símbolos (◆◆) para especificar dicha
situación.◆
La Prueba de Endotoxinas Bacterianas (PEB) es una prueba para detectar o cuantificar endotoxinas de bacterias gramnegativas
usando un lisado de amebocitos del cangrejo herradura (Limulus polyphemus o Tachypleus tridentatus).
Hay tres técnicas para esta prueba: la técnica de coagulación (gel-clot), la cual está basada en la formación de gel; la técnica
turbidimétrica, basada en la producción de turbidez después de la ruptura de uniones de un sustrato endógeno; y la técnica
cromogénica que se basa en el desarrollo de color después de la ruptura de un complejo sintético péptido-cromógeno. Efectuar
la prueba con cualquiera de las tres técnicas. En caso de duda o controversia, la decisión final se toma basándose en la prueba
de límite de coagulación, a menos que se indique algo diferente en la monografía del producto en análisis. La prueba se efectúa
de forma tal que se evite la contaminación por endotoxinas.
APARATOS
Eliminar los pirógenos de todo el material de vidrio y otros materiales termoestables en un horno de aire caliente, mediante
un proceso validado.◆1 ◆ Habitualmente se usan 30 minutos a 250° como tiempo y temperatura mínimos. Si se emplean
materiales de plástico, tales como microplacas y puntas de pipetas para pipeteadores automáticos, usar los que han demostrado
estar exentos de endotoxinas detectables y no interferir con la prueba. [NOTA—En este capítulo, el término “tubo” incluye
cualquier otro receptáculo, como por ejemplo los pocillos de las placas de microtitulación.]
l
ia
REACTIVOS Y SOLUCIONES DE PRUEBA
Lisado de Amebocitos
Un producto liofilizado obtenido a partir de un lisado de amebocitos (leucocitos) del cangrejo herradura (Limulus
fic
polyphemus o Tachypleus tridentatus). Este reactivo se refiere solo a un producto fabricado de conformidad con las
reglamentaciones de la autoridad competente. [NOTA—El Lisado de Amebocitos reacciona con algunos β-glucanos además de
reaccionar con las endotoxinas. Existen preparaciones de Lisado de Amebocitos que no reaccionan con los glucanos: se preparan
retirando del Lisado de Amebocitos el factor G que reacciona con los glucanos o inhibiendo el sistema de reacción del factor G
del Lisado de Amebocitos. Se pueden usar para pruebas de endotoxinas en presencia de glucanos.]
Agua para Prueba de Endotoxinas Bacterianas (PEB)

O
Usar Agua para Inyección o agua producida por otros procedimientos y que no reaccione con el lisado empleado, en el límite
de detección del reactivo.
Lisado SR
Disolver con agitación suave el Lisado de Amebocitos en Agua para PEB o en un amortiguador recomendado por el fabricante
del lisado. Almacenar el lisado reconstituido, refrigerado o congelado, de acuerdo con las especificaciones del fabricante.
PREPARACIÓN DE LAS SOLUCIONES
Solución Madre del Estándar de Endotoxina

Preparar una Solución Madre del Estándar de Endotoxina a partir de un Estándar de Referencia de Endotoxina USP que haya
sido calibrado con el Estándar Internacional para Endotoxinas vigente de la OMS. Seguir las especificaciones en el prospecto
del empaque y en la etiqueta para la preparación y almacenamiento de la Solución Madre del Estándar de Endotoxina. El contenido
de endotoxina se expresa en Unidades de Endotoxina (UE). [NOTA—Una Unidad USP de Endotoxina (UE) es igual a una Unidad
Internacional (UI) de endotoxina.]
Soluciones Estándar de Endotoxina

Después de mezclar vigorosamente la Solución Madre del Estándar de Endotoxina, preparar las diluciones seriales
apropiadas de la Solución Estándar de Endotoxina, usando Agua para PEB. Usar las diluciones tan pronto como sea posible para
evitar la pérdida de actividad por adsorción.
◆1 Para una prueba de validez del procedimiento para inactivar endotoxinas, ver Esterilización por Calor Seco en Garantía de Esterilidad á1211ñ. Usar un
Lisado SR con una sensibilidad no menor de 0,15 Unidades de Endotoxina por mL.◆
https://online.uspnf.com/uspnf/document/4_GUID-F9D9BFA5-099F-452C-9711-47674B37C1CC_2_es-ES 1/6
Impreso el: mar. abr. 25 2023, 05:16:23 p. m.(EST) Estado: Oficial Vigente al 25-abr-2023 DocId: GUID-F9D9BFA5-099F-452C-9711-47674B37C1CC_2_es-ES
2
Soluciones Muestra
Preparar las Soluciones Muestra disolviendo o diluyendo los medicamentos, usando Agua para PEB. Algunas sustancias o
preparaciones se pueden disolver o diluir adecuadamente en otras soluciones acuosas. Si fuera necesario, ajustar el pH de la
solución (o de la dilución) a examinar de modo que el pH de la mezcla del lisado y la Solución Muestra se encuentre dentro del
intervalo de pH especificado por el fabricante del lisado, por lo general entre 6,0–8,0. El pH se puede ajustar con un ácido, una
base o una solución amortiguadora adecuada según lo recomiende el fabricante del lisado. Los ácidos y las bases se pueden
preparar a partir de concentrados o sólidos con Agua para PEB en recipientes exentos de endotoxinas detectables. Las soluciones
amortiguadoras se deben validar para garantizar que están exentas de endotoxinas y otros factores de interferencia detectables.
DETERMINACIÓN DE LA MÁXIMA DILUCIÓN VÁLIDA (MDV)
La máxima dilución válida es la dilución máxima permisible de una muestra a la que se le puede determinar el límite de
endotoxina. Determinar la MDV a partir de la siguiente ecuación:
MDV = (límite de endotoxina x concentración de la Solución Muestra)/(λ)
Límite de Endotoxina
El límite de endotoxina para medicamentos de administración parenteral, definido según la dosis, es igual a K/M◆2 ◆, donde
K es la dosis pirogénica umbral de endotoxina por kg de peso corporal y M es igual a la dosis máxima recomendada del producto,
en bolo, por kg de peso corporal. Cuando el producto se va a inyectar a intervalos frecuentes o por infusión continua, M es la
l
dosis máxima total administrada durante un periodo de una hora. El límite de endotoxinas para los medicamentos de
administración parenteral se especifica en la monografía individual en unidades como UE/mL, UE/mg, UE/Unidad de actividad
biológica, etc.
ia
Concentración de la Solución Muestra
mg/mL: en el caso del límite de endotoxina especificado por peso (UE/mg);
fic
Unidades/mL: en el caso del límite de endotoxina especificado por unidad de actividad biológica (UE/Unidad);
mL/mL: cuando el límite de endotoxina se especifica por volumen (UE/mL).
λ: la sensibilidad declarada en la Técnica de Coagulación (UE/mL) o la concentración más baja usada en la curva estándar para
la Técnica Turbidimétrica o la Técnica Cromogénica.
TÉCNICA DE COAGULACIÓN
O
La técnica de coagulación se usa para detectar o cuantificar endotoxinas basándose en la coagulación del lisado empleado
como reactivo en presencia de endotoxina. La concentración mínima de endotoxina requerida para hacer que el lisado se
coagule en las condiciones estándar es la sensibilidad declarada del lisado empleado como reactivo. Para garantizar tanto la
precisión como la validez de la prueba, efectuar las pruebas para confirmar la sensibilidad declarada del lisado y para determinar
factores de interferencia según se describe en Pruebas Preparatorias.
Pruebas Preparatorias
PRUEBA DE CONFIRMACIÓN DE LA SENSIBILIDAD DECLARADA DEL LISADO
Confirmar en cuatro determinaciones repetidas la sensibilidad declarada, λ, expresada en UE/mL del lisado antes de usarlo
en la prueba. La prueba de confirmación de sensibilidad del lisado se debe llevar a cabo cuando se usa una partida nueva de
lisado o cuando hay algún cambio en las condiciones de la prueba que pueda afectar el resultado. Preparar soluciones estándar
con al menos cuatro concentraciones equivalentes a 2λ, λ, 0,5λ y 0,25λ, diluyendo el ER Endotoxina USP con Agua para PEB.
Mezclar un volumen del Lisado SR con un volumen igual (como por ejemplo alícuotas de 0,1 mL) de una de las Soluciones
Estándar de Endotoxina en cada tubo de ensayo. Cuando se usen viales o ampollas de prueba individuales que contengan lisado
liofilizado, agregar directamente las soluciones al vial o a la ampolla. Incubar la mezcla de reacción durante un período constante
según las instrucciones del fabricante del lisado (habitualmente a 37 ± 1° durante 60 ± 2 minutos), evitando vibraciones. Para
analizar la integridad del gel, sacar uno a uno los tubos directamente de la incubadora y con un único movimiento suave,
invertirlos aproximadamente a 180°. Si se ha formado un gel firme que permanece en su lugar después de invertir los tubos,
registrar el resultado como positivo. Un resultado es negativo si no se forma un gel intacto. La prueba se considera válida cuando
la concentración más baja de las soluciones estándar presenta un resultado negativo en todas las pruebas repetidas.
El punto final es la concentración más baja en la serie de concentraciones decrecientes de endotoxina estándar que coagula
el lisado. Determinar la media geométrica del punto final calculando la media de los logaritmos de las concentraciones en el
◆2 K es 5 UE-USP/kg de peso corporal para cualquier vía de administración distinta de la intratecal (para la cual K es 0,2 UE-USP/kg de peso corporal).
En el caso de productos radiofarmacéuticos que no se administren por vía intratecal, el límite de endotoxina se calcula como 175 UE/V, donde V es la
dosis máxima recomendada en mL. En el caso de radiofármacos administrados por vía intratecal, el límite de endotoxina se obtiene mediante la fórmula
14 UE/V. Para formulaciones (por lo general productos oncológicos) que se administran por metro cuadrado de superficie corporal, la fórmula es K/M,
donde K = 100 UE/m2 y M es la dosis máxima/m2.◆
3
punto final de la serie de cuatro determinaciones repetidas y calculando luego el antilogaritmo de la media, según se indica en
la siguiente fórmula:
media geométrica de la concentración en el punto final = antilogaritmo (Σe/f)
donde Σe es la suma de los logaritmos de las concentraciones en el punto final de la serie de diluciones utilizadas, y f es el
número de tubos de ensayo repetidos. La media geométrica de la concentración en el punto final es la sensibilidad medida del
lisado (en UE/mL). Si no es menor de 0,5λ y no es mayor de 2λ, se confirma la sensibilidad declarada y se usa en las pruebas
realizadas con este lisado.
PRUEBA DE FACTORES DE INTERFERENCIA

Por lo general, preparar soluciones (A–D) como se muestra en la Tabla 1, y efectuar la prueba de inhibición o potenciación
en las Soluciones Muestra con una dilución menor que la máxima dilución válida (MDV), que no contenga endotoxinas
detectables, procediendo según se describe en Prueba de Confirmación de la Sensibilidad Declarada del Lisado. La media
geométrica de las concentraciones en el punto final de las Soluciones B y C se determina usando la fórmula descrita en la Prueba
de Confirmación de la Sensibilidad Declarada del Lisado. La prueba de factores de interferencia deberá repetirse siempre que se
presenten cambios en alguna de las condiciones que pudieran influir en el resultado de la prueba.
Tabla 1. Preparación de Soluciones para la Prueba de Inhibición/Potenciación para Técnicas de Coagulación

Concentración de Endotoxina/
Solución a la que se Agrega Factor de Concentración Número de
Solución Endotoxina Diluyente Dilución de Endotoxina Repeticiones
l
Aa Ninguna/Solución Muestra — — — 4
B b 2λ/Solución Muestra Solución Muestra 1 2λ 4
ia 2
8
1λ
0,5λ
0,25λ
4
4
fic
Cc 2λ/Agua para PEB Agua para PEB 1 2λ 2
2 1λ 2
4 0,5λ 2
8 0,25λ 2
D d Ninguna/Agua para PEB — — — 2

O
a Solución A: Una Solución Muestra de la preparación en análisis que esté exenta de endotoxinas detectables.
b Solución B: Prueba de interferencia.
c Solución C: Control para sensibilidad declarada del lisado.
d Solución D: Control negativo de Agua para PEB
Esta prueba se considera válida cuando todas las determinaciones repetidas de las Soluciones A y D no muestran ninguna
reacción y el resultado de la Solución C confirma la sensibilidad declarada.
Si la sensibilidad del lisado determinada en presencia de la Solución B no es menor de 0,5λ y no es mayor de 2λ, la Solución
Muestra no contiene factores que interfieran en las condiciones experimentales usadas. En caso contrario, la Solución Muestra a
examinar interfiere con la prueba.
Si la muestra en análisis no cumple con la prueba a una dilución menor que la MDV, se debe repetir la prueba empleando
una dilución mayor que no exceda la MDV. El uso de un lisado de mayor sensibilidad permite una dilución mayor de la muestra
a examinar y esto puede contribuir a la eliminación de la interferencia.
La interferencia se puede resolver mediante un tratamiento adecuado, como filtración, neutralización, diálisis o
calentamiento. Para establecer que el tratamiento elegido elimina eficazmente la interferencia sin pérdida de endotoxinas,
realizar la valoración descrita anteriormente, utilizando la preparación a examinar, a la que se ha agregado Estándar de
Endotoxina y se ha sometido al tratamiento seleccionado.
Prueba de Límite
PROCEDIMIENTO
Preparar las Soluciones A, B, C y D según se indica en la Tabla 2 y llevar a cabo la prueba en estas soluciones siguiendo el
procedimiento indicado anteriormente en la Prueba de Confirmación de la Sensibilidad Declarada del Lisado en Pruebas
Preparatorias.
4
Tabla 2. Preparación de Soluciones para la Prueba de Límite de Coagulación

Solución a la que se Agrega
Solución* Endotoxina Número de Repeticiones
A Ninguna/Solución Muestra Diluida 2
B 2λ/Solución Muestra Diluida 2
C 2λ/Agua para PEB 2
D Ninguna/Agua para PEB 2
* Preparar la Solución A y la Solución B de control positivo del producto utilizando una dilución no mayor que la MDV y tratamientos según se indica en la Prueba
de Factores de Interferencia en Pruebas Preparatorias. Las Soluciones B y C de control positivo contienen la Solución Estándar de Endotoxina a una concentración que
corresponde al doble de la sensibilidad declarada del lisado. La Solución D de control negativo consiste en Agua para PEB.
INTERPRETACIÓN
La prueba se considera válida cuando ambas determinaciones repetidas de las Soluciones B y C son positivas y las de la Solución
D son negativas. Cuando se obtiene un resultado negativo para ambas determinaciones repetidas de la Solución A, la preparación
en análisis cumple con la prueba. Cuando se obtiene un resultado positivo para ambas determinaciones repetidas de la
Solución A, la preparación en análisis no cumple con la prueba.
Cuando se obtiene un resultado positivo para una de las determinaciones de la Solución A y un resultado negativo para la
otra, repetir la prueba. En la repetición, la preparación en análisis cumple con la prueba si se obtiene un resultado negativo en
l
ambas determinaciones repetidas de la Solución A. La preparación no cumple con la prueba si se obtiene un resultado positivo
para una o ambas determinaciones repetidas de la Solución A. Sin embargo, si la preparación no cumple con la prueba a una
ia
dilución menor que la MDV, se puede repetir la prueba empleando una dilución mayor que no exceda la MDV.
Prueba Cuantitativa
PROCEDIMIENTO
fic
La prueba cuantifica endotoxinas bacterianas en las Soluciones Muestra por valoración volumétrica hasta un punto final.
Preparar Soluciones A, B, C y D según se indica en la Tabla 3 y analizar siguiendo el procedimiento en la Prueba de Confirmación
de la Sensibilidad Declarada del Lisado en Pruebas Preparatorias.
Tabla 3. Preparación de Soluciones para la Prueba de Coagulación

O
Solución a la cual se Agrega Factor de Concentración Número de

Solución Endotoxina Diluyente Dilución de Endotoxina Repeticiones
Aa Ninguna/Solución Muestra Agua para PEB 1 — 2
2 — 2
4 — 2
8 — 2
B b 2λ/Solución Muestra — 1 2λ 2
Cc 2λ/Agua para PEB Agua para PEB 1 2λ 2
2 1λ 2
4 0,5λ 2
8 0,25λ 2
Dd Ninguna/Agua para PEB — — — 2
a Solución A: Solución Muestra en análisis a la dilución, que no debe exceder la MDV, con la cual se completó la Prueba de Factores de Interferencia. Las diluciones
subsiguientes de la Solución Muestra no deben exceder la MDV. Usar Agua para PEB para efectuar una serie de diluciones en cuatro tubos que contengan la Solución
Muestra en análisis a concentraciones de 1, ½, ¼, y ⅛ con respecto a la concentración usada en la Prueba de Factores de Interferencia. Se pueden usar otras diluciones
hasta la MDV, según sea necesario.
b Solución B: Solución A que contenga endotoxina estándar a una concentración de 2λ (control positivo del producto).
c Solución C: Dos series repetidas de cuatro tubos de Agua para PEB que contengan la endotoxina estándar a una concentración de 2λ, λ, 0,5λ, y 0,25λ,
respectivamente.
d Solución D: Agua para PEB (control negativo).
CÁLCULO E INTERPRETACIÓN
La prueba se considera válida cuando se cumplen las tres condiciones siguientes: (1) ambas determinaciones repetidas de la
Solución D de control negativo son negativas; (2) ambas determinaciones repetidas de la Solución B de control positivo del
producto son positivas; y (3) la media geométrica de la concentración en el punto final de la Solución C está comprendida en
el intervalo de 0,5λ a 2λ.
5
Para determinar la concentración de endotoxinas de la Solución A, calcular la concentración en el punto final para cada
repetición multiplicando cada factor de dilución del punto final por λ. La concentración de endotoxinas en la Solución Muestra
es la concentración en el punto final de las repeticiones. Si la prueba se realiza con una Solución Muestra diluida, calcular la
concentración de endotoxinas en la Solución Muestra original multiplicando por el factor de dilución. Si ninguna de las diluciones
de la Solución Muestra es positiva en un ensayo válido, informar la concentración de endotoxina como menor que λ (si se analizó
la muestra diluida, informar como menor que λ multiplicado por el factor de dilución más bajo de la muestra). Si todas las
diluciones son positivas, la concentración de endotoxina se informa como igual o mayor que el factor de dilución mayor por λ
(p. ej., el factor de dilución inicial multiplicado por 8 y por λ en la Tabla 3).
La preparación cumple con los requisitos de la prueba si la concentración de endotoxinas en ambas determinaciones repetidas
es menor que la especificada en la monografía individual.
TÉCNICAS FOTOMÉTRICAS CUANTITATIVAS
Técnica Turbidimétrica
Esta técnica es una valoración fotométrica que mide los incrementos en turbidez del reactante. Dependiendo del principio
empleado en la valoración, esta técnica se puede clasificar como valoración turbidimétrica de punto final o valoración
turbidimétrica cinética. La valoración turbidimétrica de punto final se basa en la relación cuantitativa entre la concentración de
endotoxinas y la turbidez (absorbancia o transmisión) de la mezcla de reacción al término de un período de incubación. La
valoración turbidimétrica cinética es un método para medir el tiempo necesario para alcanzar una absorbancia o transmisión
predeterminada de la mezcla de reacción (tiempo de iniciación) o la velocidad de desarrollo de turbidez. La prueba se efectúa a
la temperatura de incubación recomendada por el fabricante del lisado (por lo general 37 ± 1°).
l
Técnica Cromogénica
ia
Esta técnica es una valoración para medir el cromóforo liberado de un péptido cromogénico adecuado por la reacción de
las endotoxinas con el lisado. Dependiendo del principio empleado en la valoración, esta técnica se puede clasificar como
valoración cromogénica de punto final o valoración cromogénica cinética. La valoración cromogénica de punto final se basa
en la relación cuantitativa entre la concentración de endotoxinas y la liberación del cromóforo al término de un período de
fic
incubación. La valoración cromogénica cinética es un método para medir el tiempo (tiempo de iniciación) necesario para
alcanzar una absorbancia predeterminada de la mezcla de reacción o la velocidad de desarrollo de color. La prueba se efectúa a
la temperatura de incubación recomendada por el fabricante del lisado (por lo general 37 ± 1°).
Pruebas Preparatorias
Con el fin de garantizar la precisión o validez de las técnicas turbidimétricas y cromogénicas, se realizan las pruebas
O
preparatorias para verificar que los criterios para la curva estándar son válidos y que la solución muestra no interfiere con la
prueba. Cuando cambian las condiciones que pueden influir en el resultado de la prueba es necesaria la validación del método
de prueba.
GARANTÍA DE LOS CRITERIOS PARA LA CURVA ESTÁNDAR

La prueba se debe efectuar para cada lote de lisado empleado como reactivo. Utilizando la Solución Estándar de Endotoxina,
preparar por lo menos tres concentraciones de endotoxina dentro del intervalo indicado por el fabricante del lisado para generar
la curva estándar. Realizar la valoración usando por lo menos tres determinaciones repetidas de cada concentración de
endotoxina estándar, siguiendo las instrucciones del fabricante del lisado (con respecto a relaciones de volumen, tiempo de
incubación, temperatura, pH, etc.). Si el intervalo deseado en los métodos cinéticos es mayor de dos logaritmos, se deben
incluir estándares adicionales para que cada aumento logarítmico esté comprendido en el intervalo de la curva estándar. El
valor absoluto del coeficiente de correlación, r, debe ser mayor o igual a 0,980 para el intervalo establecido de concentraciones
de endotoxina.
PRUEBA PARA FACTORES DE INTERFERENCIA

Seleccionar una concentración de endotoxina en o cerca del centro de la curva estándar de endotoxina. Preparar las Soluciones
A, B, C y D según se indica en la Tabla 4. Llevar a cabo la prueba en las Soluciones A, B, C y D al menos por duplicado, de acuerdo
con las instrucciones del lisado empleado, por ejemplo, en lo que respecta al volumen entre la Solución Muestra y el Lisado SR,
la relación de volumen de la Solución Muestra y el Lisado SR, el tiempo de incubación, etc.
Tabla 4. Preparación de Soluciones para la Prueba de Inhibición/Potenciación para Técnicas Fotométricas

Solución a la cual se Agrega Endoto-
Solución Concentración de Endotoxina xina Número de Repeticiones
A a Ninguna Solución Muestra No menos de 2
B b Concentración central de la curva estándar Solución Muestra No menos de 2
Cc Al menos 3 concentraciones (la concentración más baja se de- Agua para PEB No menos de 2 para cada una
nomina λ)
6
Tabla 4. Preparación de Soluciones para la Prueba de Inhibición/Potenciación para Técnicas Fotométricas (continuación)
Solución a la cual se Agrega Endoto-
Solución Concentración de Endotoxina xina Número de Repeticiones
D d Ninguna Agua para PEB No menos de 2
a Solución A: Solución Muestra se puede diluir sin que exceda la MDV.

b Solución B: La preparación en análisis a la misma dilución que la Solución A, que contenga endotoxina agregada a una concentración igual o cercana a la
concentración central de la curva estándar.
c Solución C: La endotoxina estándar a las concentraciones usadas en la validación del método descrito para Garantía de Criterios para la Curva Estándar en Pruebas
Preparatorias (controles positivos).
d Solución D: Agua para PEB (control negativo).
La prueba se considera válida cuando se cumplen las condiciones siguientes.

1. El valor absoluto del coeficiente de correlación de la curva estándar generada usando la Solución C es mayor o igual a
0,980.
2. El resultado de la Solución D no excede el límite del valor del blanco requerido en la descripción del lisado empleado como
reactivo o es menor que el límite de detección de endotoxina del lisado empleado como reactivo.
Calcular la recuperación media de la endotoxina agregada restando la concentración media de endotoxina en la solución,
si la hubiera (Solución A,Tabla 4), de la que contiene la endotoxina agregada (Solución B,Tabla 4). Para considerar que no presenta
factores que interfieran con la valoración en las condiciones de la prueba, la concentración medida de endotoxina agregada a
la Solución Muestra debe estar entre 50%–200% de la concentración conocida de endotoxina agregada después de restar la
endotoxina detectada en la solución sin endotoxina agregada.
Cuando la recuperación de endotoxina se encuentra fuera de los intervalos especificados, se considera que la Solución
Muestra en análisis contiene factores de interferencia. Luego, repetir la prueba usando una dilución mayor que no exceda la
l
MDV. Además, la interferencia de la Solución Muestra o de la Solución Muestra diluida que no exceda la MDV se puede eliminar
mediante un tratamiento validado apropiado, como filtración, neutralización, diálisis o calentamiento. Para establecer que el
ia
tratamiento elegido elimina eficazmente la interferencia sin pérdida de endotoxinas, realizar la valoración descrita anteriormente
utilizando la preparación a examinar, a la que se ha agregado Endotoxina Estándar y se ha sometido posteriormente al
tratamiento seleccionado.
Procedimiento de Prueba
fic
Seguir el procedimiento descrito anteriormente para Prueba de Factores de Interferencia en Pruebas Preparatorias.
Cálculo
Calcular la concentración de endotoxina de cada una de las determinaciones repetidas de la Solución A usando la curva
estándar generada con la Solución C de control positivo. La prueba se considera válida cuando se cumplen las tres condiciones
O
siguientes.
1. Los resultados de la Solución C de control cumplen con los requisitos de validación definidos en Garantía de Criterios para
la Curva Estándar, en Pruebas Preparatorias.
2. La recuperación de endotoxina, calculada a partir de la concentración encontrada en la Solución B después de restar la
concentración de endotoxina encontrada en la Solución A está dentro del intervalo de 50%–200%.
3. El resultado de la Solución D de control negativo no excede el límite del valor del blanco requerido en la descripción del
lisado empleado o es menor que el límite de detección de endotoxina del lisado empleado como reactivo.
Interpretación
En las valoraciones fotométricas, la preparación en análisis cumple con la prueba si la concentración media de endotoxinas
de las determinaciones repetidas de la Solución A, después de la corrección por dilución y concentración, es menor que el límite
de endotoxina para el producto.
Estándares de Referencia USP á11ñ
ER Endotoxina USP

Cap 85 Endotoxinas

Cargado por

Copyright:

Formatos disponibles

Cap 85 Endotoxinas

Cargado por

Información del documento

Derechos de autor

Formatos disponibles

Compartir este documento

Compartir o incrustar documentos

Opciones para compartir

¿Le pareció útil este documento?

¿Este contenido es inapropiado?

Copyright:

Formatos disponibles

Cap 85 Endotoxinas

Cargado por

Copyright:

Formatos disponibles

Impreso el: mar. abr. 25 2023, 05:16:23 p. m.

(EST) Estado: Oficial Vigente al 25-abr-2023 DocId: GUID-F9D9BFA5-099F-452C-9711-47674B37C1CC_2_es-ES

á85ñ PRUEBA DE ENDOTOXINAS BACTERIANAS

Agua para Prueba de Endotoxinas Bacterianas (PEB)

PREPARACIÓN DE LAS SOLUCIONES

Solución Madre del Estándar de Endotoxina

Soluciones Estándar de Endotoxina

DETERMINACIÓN DE LA MÁXIMA DILUCIÓN VÁLIDA (MDV)

MDV = (límite de endotoxina x concentración de la Solución Muestra)/(λ)

media geométrica de la concentración en el punto final = antilogaritmo (Σe/f)

PRUEBA DE FACTORES DE INTERFERENCIA

Tabla 1. Preparación de Soluciones para la Prueba de Inhibición/Potenciación para Técnicas de Coagulación

B b 2λ/Solución Muestra Solución Muestra 1 2λ 4

D d Ninguna/Agua para PEB — — — 2

Tabla 2. Preparación de Soluciones para la Prueba de Límite de Coagulación

B 2λ/Solución Muestra Diluida 2

C 2λ/Agua para PEB 2

D Ninguna/Agua para PEB 2

Tabla 3. Preparación de Soluciones para la Prueba de Coagulación

Solución a la cual se Agrega Factor de Concentración Número de

Aa Ninguna/Solución Muestra Agua para PEB 1 — 2

Cc 2λ/Agua para PEB Agua para PEB 1 2λ 2

Dd Ninguna/Agua para PEB — — — 2

TÉCNICAS FOTOMÉTRICAS CUANTITATIVAS

GARANTÍA DE LOS CRITERIOS PARA LA CURVA ESTÁNDAR

PRUEBA PARA FACTORES DE INTERFERENCIA

Tabla 4. Preparación de Soluciones para la Prueba de Inhibición/Potenciación para Técnicas Fotométricas

A a Ninguna Solución Muestra No menos de 2

B b Concentración central de la curva estándar Solución Muestra No menos de 2

D d Ninguna Agua para PEB No menos de 2

a Solución A: Solución Muestra se puede diluir sin que exceda la MDV.

La prueba se considera válida cuando se cumplen las condiciones siguientes.

También podría gustarte