Universidad de Guayaquil

Facultad de Ciencias Naturales

Carrera de Biología
Biotecnología

Nombre: Alice Cortez Gavilanes

Tarea #1
Introducción

El coronavirus 2019 (COVID-19) es una enfermedad pandémica es causada por el

coronavirus del síndrome respiratorio agudo grave 2 (SARS-CoV-2). Se ha informado
que el virus se originó en murciélagos y, a través de animales intermediarios aún
desconocidos, y que se transmitió a los humanos en China en 2019. El SARS-CoV-2 se
propaga más rápido que sus dos predecesores, el SARS-CoV y el coronavirus del
síndrome respiratorio de Oriente Medio (MERS-CoV), pero tiene una menor tasa de
letalidad.

La enfermedad se transmite por inhalación o contacto directo con una persona infectada.
El período de incubación varía de 1 a 14 días. COVID-19 se manifiesta con varios
síntomas, que incluyen tos y fatiga. En la mayoría de las personas, la enfermedad es
leve, pero en otros, como en las personas mayores y aquellas con enfermedades
crónicas, puede progresar desde neumonía hasta una disfunción de múltiples órganos,
ademas se informa que muchas personas son asintomáticas. (Dërmaku-Sopjani. 2021)

Figura 1 Ilustracion del coronavirus

1. Características moleculares del agente viral; coronavirus (Covid19).

Los coronavirus, pertenecientes al grupo de virus de ARN de cadena sencilla, forman

una familia denominada Coronaviridae. Estos virus se caracterizan por su tamaño
relativamente grande, oscilando entre 118-136 nm, y se les conoce como virus "grandes
y pesados". La estructura viral consta de una nucleocápside que alberga el genoma viral,
alrededor de la cual se encuentra una envoltura formada por una bicapa lipídica que
aloja las proteínas virales.
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El SARS-CoV-2, en su calidad de recién descubierto betacoronavirus, comparte

similitudes genéticas del 79% con el SARS-CoV y del 50% con el MERS-CoV. Su
estructura genómica se asemeja a la de otros betacoronavirus. Los seis marcos abiertos
de lectura funcional (ORFs) se organizan en una secuencia de 5' a 3' e incluyen la
replicasa (ORF1a/ORF1b), la proteína espiga (S), la envoltura (E), la membrana (M) y
el nucleocápside (N). (Hu, Guo & Shi, 2021)

Figura 2 Estructura del SARS-CoV-2. Se señalan las principales estructuras del SARS-CoV-2, simplificadas

Proteína de envoltura "Spike" (S) y su relevancia

La proteína de envoltura "Spike" (S) desempeña un papel crucial en la entrada del

virus en las células hospedadoras. Esta proteína se adhiere a un receptor específico,
la enzima convertidora de angiotensina tipo 2 (ACE-2), como paso inicial en el
proceso de infección. La alta afinidad de la proteína S del SARS-CoV-2 por el
receptor ACE-2 humano puede tener implicaciones significativas en la propagación
del virus y sus efectos en varios sistemas del cuerpo.

Replicación y ensamblaje del virus

Una vez que el virus ha fusionado con la membrana celular, se libera el ARN
mensajero (ARNm) viral, que está listo para ser traducido en una variedad de
proteínas, tanto estructurales como no estructurales. Estas proteínas son cruciales
para la supervivencia y la virulencia del virus. Finalmente, las proteínas se
ensamblan junto con el genoma replicado en el retículo endoplasmático (RE) y el
complejo de Golgi, formando pequeñas vesículas que se exportan fuera de la célula
mediante exocitosis. (Sasso, et. al, 2020)

2. Técnicas de diagnóstico de tipo inmunitario.

La inmunodiagnóstico es una técnica de detección que se basa en la capacidad de los

anticuerpos para unirse específicamente a un antígeno. Esta técnica es muy
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poderosa, sensible y específica, lo que la hace ideal para detectar una amplia gama
de objetivos y tiene aplicaciones en el campo de las enfermedades infecciosas y
autoinmunes, diagnóstico del cáncer, seguridad alimentaria, medio ambiente, entre
otros.

Los anticuerpos son moléculas producidas por nuestras células inmunitarias en

respuesta a antígenos (cuerpos extraños) y tienen la capacidad de unirse de manera
específica a estos antígenos. Esta especificidad de los anticuerpos facilita la
identificación y proporciona una prueba indirecta de la presencia de antígenos.

Un diagnóstico preciso es un factor clave para un mejor tratamiento de cualquier

enfermedad, y los avances recientes en el campo del inmunodiagnóstico han
acelerado los procedimientos de tratamiento. Entre las más utilizadas se encuentran:

 La técnica de Inmunofluorescencia Indirecta (IFI) es muy utilizada en

estudios de autoinmunidad debido a su facilidad de manejo y
estandarización. Se basa en la detección de anticuerpos que reconocen
estructuras antigénicas celulares nativas, utilizando un anticuerpo
antiinmunoglobulina humana conjugado con un fluoróforo, como el
isotiocianato de fluoresceína (FITC). Los resultados se observan en un
microscopio de epifluorescencia, y esta técnica se utiliza para detectar
diversos tipos de anticuerpos, como los anti-DNA de doble cadena, los
anticuerpos antinucleares y los anticuerpos contra componentes específicos
de células y tejidos.

 ELISA es una técnica muy utilizada en el diagnóstico de enfermedades

autoinmunes debido a su facilidad de estandarización y manejo, además de
su amplia disponibilidad de antígenos. Ha sustituido al radioinmunoensayo,
ya que no implica el uso de sustancias radioactivas, lo que lo convierte en un
método más seguro y accesible. El ELISA indirecto, que es el tipo más
comúnmente empleado en el diagnóstico de enfermedades autoinmunes, se
basa en la detección de anticuerpos específicos presentes en las muestras de
pacientes, utilizando un anticuerpo dirigido hacia la región Fc humana de
cualquier isotipo (IgG, IgA o IgM). Estos anticuerpos anti-Fc se asocian a
enzimas como la peroxidasa o la fosfatasa alcalina.

En las placas de ELISA se pueden utilizar antígenos nativos, recombinantes

o sintéticos. Una vez que los anticuerpos de los pacientes han interactuado
con el antígeno en la placa, se realizan lavados para eliminar anticuerpos no
específicos, y posteriormente se agrega un anticuerpo antiinmunoglobulina
humana unido a una enzima. Luego, se añade un sustrato cromogénico
específico de la enzima, el cual cambia de color en función de la cantidad de
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anticuerpos del paciente que se han unido al antígeno. En resumen, la

intensidad del color observado está directamente relacionada con la cantidad
de anticuerpos del paciente que se han unido al antígeno.

 La Electroinmunotrasferencia (EIT) es una de las opciones más sensibles

y específicas para detectar anticuerpos dirigidos a antígenos específicos,
junto con el ELISA y el ELM. No obstante, la EIT tiene la desventaja de
proporcionar resultados de naturaleza cualitativa o semicuantitativa. Su
funcionamiento se basa en la capacidad de reconocimiento de anticuerpos
específicos hacia antígenos previamente adsorbidos en una membrana, la
cual puede ser de nitrocelulosa o nylon. Estos antígenos son previamente
separados en geles de poliacrilamida-dodecil sulfato de sodio (PAGE-SDS)
y luego son transferidos a la membrana.

La detección de la unión de los anticuerpos a los antígenos específicos se

lleva a cabo mediante la introducción de un anticuerpo que reconoce la
región Fc de las inmunoglobulinas humanas. Este anticuerpo se encuentra
conjugado con una enzima, que puede ser fosfatasa alcalina o peroxidasa. La
unión entre los anticuerpos y los antígenos se hace evidente mediante la
aplicación de un sustrato cromogénico soluble, que puede ser alfa-naftol/Fast
red o NBT/BCIP (dependiendo de la enzima utilizada), y este sustrato forma
un precipitado en la zona en la que se encuentra el complejo antígeno-
anticuerpo, todo esto gracias a la acción de la enzima. (Ramírez & Cabiedes,
2010).

3. Técnicas de diagnóstico de tipo molecular

En el contexto de la biología molecular, es esencial extraer y purificar adecuadamente el

ADN o ARN antes de realizar análisis. La extracción del material genético se logra
mediante métodos que incluyen lisis celular y separación de ácidos nucleicos. Los
avances tecnológicos han permitido automatizar este proceso.

La pureza de las muestras de ADN es fundamental para obtener resultados precisos en

las técnicas de biología molecular y evitar errores. Para lograr esta pureza, se pueden
utilizar varios métodos de purificación, como extracción, precipitación, ultrafiltración,
cromatografía, centrifugación y separación por afinidad. La elección del método
dependerá de diversos factores, como el tipo de muestra y la técnica a aplicar.

Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR)

Esta técnica se utiliza para amplificar una región específica de ADN utilizando primers
o cebadores, que son secuencias de ADN complementarias a la zona que se desea
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amplificar. Esta técnica se basa en la acción de enzimas, incluyendo la ADN

polimerasa, que agrega nucleótidos en la síntesis de nuevas cadenas de ADN.

En la PCR, se reproducen las mismas etapas que ocurren en el interior de una célula.
Primero, se combina la muestra de ADN con los primers, los desoxinucleótidos, la
ADN polimerasa y un cofactor, generalmente magnesio. Luego, se somete esta mezcla a
ciclos, que consisten en fases con cambios de temperatura específicos que permiten la
amplificación de la región de interés del ADN.

Cada ciclo de amplificación se divide en tres fases: desnaturalización, en la que se

separan las dos hebras de ADN; apareamiento, donde los primers se unen a las
secuencias específicas; y extensión, durante la cual la ADN polimerasa agrega nuevos
nucleótidos a la cadena de ADN. La PCR es una técnica altamente específica y sensible,
ya que los primers son específicos para la región de interés.

Una vez amplificados los fragmentos de ADN de interés, se pueden someter a

electroforesis en gel de agarosa para su separación y análisis. La PCR se utiliza en
diversas aplicaciones, como la detección de patógenos en alimentos y la identificación
de genes asociados a la virulencia.

Existen diferentes variantes de la PCR, cada una con características y aplicaciones

específicas que han contribuido a avances en la tipificación y la determinación de
relaciones clonales entre infecciones a través de la amplificación de genes o secuencias
de ADN polimórficas. (Mellado, 2020).

Figura 3 Proceso de técnica de PCR

4. Diferencias entre los diagnósticos de tipo inmunitario frente al molecular.

Técnica Desventajas Ventajas

Inmunitario Puede ser menos sensible Aplicaciones en el punto
que las pruebas de atención/necesidad
moleculares.
Pueden identificar a
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Riesgo de resultados individuos previamente

negativos incorrectos. infectados

Generalmente diseñadas Rápido y de bajo costo,

para enfermedades con bajo volumen de
individuales, no para el muestra
tamizaje de múltiples
objetivos a gran escala. Ventaja de alto
rendimiento sobre los
Necesitan anticuerpos métodos basados en la
optimizados para detectar biología molecular
el antígeno de interés, lo
que podría limitar la Amplias oportunidades de
cantidad de antígenos muestra, sin necesidad de
objetivo que se pueden pretratamiento, por
detectar. ejemplo, lágrimas, saliva,
sudor

Menos complejidad del

protocolo, relevante en una
variedad de entornos

Escalable, facilitando
pruebas en grandes
cohortes o poblaciones
enteras
Molecular La PCR no puede Altamente precisas y
distinguir entre bacterias o pueden desarrollarse
virus muertos y vivos, rápidamente.
cepas no patógenas de las
patógenas, y no está clara Utiliza diseños de
en cuanto a la persistencia iniciadores a partir de
de la infección. secuencias de microbios;
potencial para un número
Los protocolos de prueba ilimitado de diseños de
son complicados. pruebas de
PCR/isotérmicas una vez
Principalmente adecuados que se obtiene una
para laboratorios de secuencia.
diagnóstico grandes y
centralizados con tiempos Bases de datos en
de entrega prolongados: constante crecimiento de
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las pruebas suelen tardar secuencias de genomas

de 4 a 6 horas en que están fácilmente
completarse. accesibles

Los cambios en la Menos falsos negativos

precisión del diagnóstico
ocurren a lo largo del Permite el seguimiento en
curso de la enfermedad. tiempo real de la
progresión de la
enfermedad. (Nichols,
2021)

Bibliografía

 Dërmaku-Sopjani M, Sopjani M. Molecular Characterization of SARS-CoV-

2. Curr Mol Med. 2021;21(7):589-595. doi:
10.2174/1566524020999201203213037. PMID: 33272175.

 Hu, B., Guo, H., Zhou, P., & Shi, Z. L. (2021). Characteristics of SARS-CoV-2 and
COVID-19. Nature Reviews Microbiology, 19(3), 141-154.

 Mellado, O. M. D. (2020). Técnicas de biología molecular en el diagnóstico de

enfermedades infecciosas. NPunto, 3(30), 88-111.
 Ramírez, D. F. H., & Cabiedes, J. (2010). Técnicas inmunológicas que apoyan el
diagnóstico de las enfermedades autoinmunes. Reumatología Clínica, 6(3), 173-
177.

 Verónica Sasso, Corina, & Ortiz Flores, Rodolfo (2020). COVID-19: aspectos
moleculares de la enfermedad, diagnóstico y tratamiento.¿ Qué sabemos hasta el
momento? Revisión Sistemática. Revista de la Facultad de Odontología.
Universidad Nacional de Cuyo, 14(2).