Cultivo y Estudio de Bacterias

CULTIVO Y ESTUDIO DE BACTERIAS
A. PREPARACIÓN DE PLACAS PETRI CON MEDIOS DE CULTIVO SÓLIDOS
1. Esterilización de placas Petri con calor 2.2 Preparación del medio de cultivo sólido
Usar autoclave, recipiente de presión metálico Verter aún caliente la solución de Agar en la mitad
que esteriliza con vapor de agua. En su defecto, inferior de la placa de Petri. Colocar rápido la
hervir en olla a presión. El tiempo de
mitad superior de la placa para evitar que las
esterilización es de 20- 30 min a 120 ºC
bacterias del aire contaminen el experimento.
120ºC Dejar enfriar la placa de Petri hasta que la solución

de Agar se enfríe y adquiera el aspecto de gelatina
cuajada. (de 30 minutos a 2 h)
2.1 Preparación del medio de cultivo sólido
Por placa Petri usar:
 1,2 g de Agar Nutritivo (1/2 cucharadita)

 60 ml ( 1/4 taza) de agua caliente.
Hervir 5 minutos para disolver y esterilizar. 3. Refrigeración de placas de Petri hasta que
estén listas para su uso.
Al momento de guardar las placas de Petri en el

refrigerador, se deben colocar boca abajo. Esto
evitará que cualquier condensación de agua en la
tapa gotee sobre el agar e interrumpa la superficie
 . en crecimiento.
El Agar es una sustancia gelatinosa hecho de un tipo de alga

roja que proporciona una superficie de crecimiento ideal
para muchos tipos distintos de bacterias. Algunos tipos de
Agar contienen nutrientes añadidos, lo cual ayuda a
promover un crecimiento bacteriano más rápido.
Si no se dispone de agar nutritivo se puede añadir proteínas
(por ejemplo un concentrado de caldo de pollo)
B. CULTIVO DE BACTERIAS
1. Introducir las bacterias en las placas de Petri.

Contacto directo tocando el agar
Presionar ligeramente la yema de tu

dedo. También se puede presionar
una uña o la superficie de una
moneda vieja sobre el Agar o incluso
colocar un cabello pequeño o una
gota de leche en la placa.
Recolección de muestras con hisopo
Pasar hisopo sobre cualquier

superficie que se te ocurra (el interior
de tu boca, un picaporte, el móvil),
luego pasarlo por la superficie del
Agar (sin rasgarla).
2. Etiquetar y sellar las placas de Petri . Colocarlas en lugar oscuro y cálido
Meter las placas en una estufa (entre 20 y 37 °C), durante 4 a 6 días. Almacenarlas boca abajo,
de modo que las gotas de agua no interrumpan el crecimiento de las bacterias.
ESTUFA: entre 20 y 37 ºC
4 a 6 días
3. Registrar resultados
El resultado del crecimiento en placa son una serie de “protuberancias más o menos
redondeadas” o “granitos” de formas, texturas y colores diferentes.
Observar contenido de cada placa para llegar a una conclusión sobre qué lugares tenían la
mayor cantidad de bacterias.
C. REALIZAR TINCIÓN GRAM DE BACTERIAS
1. Esterilizar un portaobjetos de 3.Fijar la muestra por calor

vidrio para microscopio con etanol
El calor fija las bacterias al portaobjetos de forma
que no se enjuaguen tan fácilmente durante la
tinción
Pasar
rápidamente el
portaobjetos
dos o tres veces
por la llama de
un mechero
Bunsen. No
2. Colocar la muestra de bacterias sobrecalentar
en el portaobjetos
Esterilizar un asa bacteriológica en

la llama de un mechero Bunsen 4.Realizar tinción Gram
hasta que brille, luego dejar que se
Es necesario contar con los siguientes colorantes:
enfríe. Usarla para colocar una
muestra de bacterias del medio de  Cristal Violeta (violeta de genciana)
cultivo sobre el portaobjetos  Lugol
 Alcohol-acetona
 Safranina
a) Cubrir la preparación (previamente realizada)

con colorante cristal violeta por un tiempo de
1 minuto, enjuagar a chorro de agua.
b) Colocar en la preparación Lugol por el tiempo
de 1 minuto, enjuagar.
c) Agregar alcohol- acetona y enjuagar
inmediatamente (decoloración).
Es recomendable una muestra de bacterias d) Añadir Safranina a la preparación por el tiempo
que tenga menos de 24 horas.
de 1 minuto, enjuagar a chorro de agua.
Dejar secar al aire.

D. OBSERVAR BACTERIAS AL MICROSOCOPIO
Las bacterias varían en gran medida en tamaño, así que la magnificación total requerida
variará de 400x a 1000x. En el extremo más alto de estas magnificaciones, se recomienda usar
una lente objetiva con aceite de inmersión para una mayor claridad.
Las bacterias Gram + se tiñen de morado. Las

bacterias Gram - se tiñen de rojo.

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A. PREPARACIÓN DE PLACAS PETRI CON MEDIOS DE CULTIVO SÓLIDOS

120ºC Dejar enfriar la placa de Petri hasta que la solución

2.1 Preparación del medio de cultivo sólido

Por placa Petri usar:

 1,2 g de Agar Nutritivo (1/2 cucharadita)

Al momento de guardar las placas de Petri en el

El Agar es una sustancia gelatinosa hecho de un tipo de alga

1. Introducir las bacterias en las placas de Petri.

Presionar ligeramente la yema de tu

Recolección de muestras con hisopo

Pasar hisopo sobre cualquier

2. Etiquetar y sellar las placas de Petri . Colocarlas en lugar oscuro y cálido

1. Esterilizar un portaobjetos de 3.Fijar la muestra por calor

Esterilizar un asa bacteriológica en

a) Cubrir la preparación (previamente realizada)

Dejar secar al aire.

Las bacterias Gram + se tiñen de morado. Las

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