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    Metodo Lactato Deshidrogenasa

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    Grace Yuquilema
    Este documento proporciona información sobre un método enzimático para medir la actividad de la lactato deshidrogenasa (LDH) en suero. Describe los principios del método, los reactivos utilizados, la preparación de muestras, el procedimiento, cálculos, controles de calidad y valores de referencia. El método mide cinéticamente la reducción del piruvato a lactato catalizada por LDH usando NADH como coenzima. Los niveles elevados de LDH se asocian con infarto de miocardio, embol

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    Metodo Lactato Deshidrogenasa

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    Este documento proporciona información sobre un método enzimático para medir la actividad de la lactato deshidrogenasa (LDH) en suero. Describe los principios del método, los reactivos utilizados, la preparación de muestras, el procedimiento, cálculos, controles de calidad y valores de referencia. El método mide cinéticamente la reducción del piruvato a lactato catalizada por LDH usando NADH como coenzima. Los niveles elevados de LDH se asocian con infarto de miocardio, embol

    Título original

    metodo lactato deshidrogenasa

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    Este documento proporciona información sobre un método enzimático para medir la actividad de la lactato deshidrogenasa (LDH) en suero. Describe los principios del método, los reactivos utilizados, la preparación de muestras, el procedimiento, cálculos, controles de calidad y valores de referencia. El método mide cinéticamente la reducción del piruvato a lactato catalizada por LDH usando NADH como coenzima. Los niveles elevados de LDH se asocian con infarto de miocardio, embol

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    Metodo Lactato Deshidrogenasa

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    Este documento proporciona información sobre un método enzimático para medir la actividad de la lactato deshidrogenasa (LDH) en suero. Describe los principios del método, los reactivos utilizados, la preparación de muestras, el procedimiento, cálculos, controles de calidad y valores de referencia. El método mide cinéticamente la reducción del piruvato a lactato catalizada por LDH usando NADH como coenzima. Los niveles elevados de LDH se asocian con infarto de miocardio, embol

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    LDH BR

    REF 1141010
    2 x 50 mL LDH BR
    SFBC
    CONTENIDO Método enzimático UV
    R1.Reactivo 2 x 40 mL
    R2.Reactivo 1 x 20 mL CINETICO
    Sólo para uso diagnóstico in vitro

    FUNDAMENTO INTERFERENCIAS

    La lactato deshidrogenasa (LDH/LD) cataliza la reducción de − Lipemia (intralipid > 20 g/L) no interfiere.
    piruvato a lactato (P-L) en presencia de nicotinamido adenin − Bilirrubina (> 40 mg/dL) no interfiere.
    dinucluceótido reducido (NADH) a pH 7,5.
    La reacción se controla cinéticamente a 340 nm a través de la − Hemoglobina (> 4 g/L) puede afectar los resultados.
    disminución de la absorbancia resultante de la oxidación del NADH − Otros medicamentos y sustancias pueden interferir3.
    +
    a NAD proporcional a la actividad LDH en la muestra.

    LDH/LD EQUIPO ADICIONAL


    + +
    Piruvato + NADH + H L-Lactato + NAD
    pH 7,5
    − Fotómetro o colorímetro con compartimiento de medición
    termostatado a 30/37ºC, para leer a 340 nm.
    Este test ha sido formulado de acuerdo a los métodos − Cronómetro, registrador gráfico o impresora.
    estandarizados descritos por la SFBC.
    1
    − Cubetas de 1-cm de paso de luz.
    − Pipetas de volumen variable para reactivos y muestras.
    COMPOSICION DE LOS REACTIVOS
    TECNICA
    R1 Sustrato LDH. Tampón TRIS 100 mmol/L pH 7,5, piruvato
    2,75 mmol/L, cloruro de sodio 222 mmol/L.
    1. Preincubar el reactivo de trabajo, muestra y patrón a la
    temperatura de reacción 30/37ºC.
    R2 Coenzima LDH. NADH 1,55 mmol/L. Biocidas. 2. Ajustar a 0 el fotómetro con agua destilada.
    3. Pipetear en una cubeta:

    ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD Temperatura de reacción 30/37ºC

    Conservar a 2-8ºC. Reactivo de trabajo 1.0 mL


    Todos los componentes del kit son estables hasta la fecha de Muestra o control 20 μL
    caducidad indicada en la etiqueta. Mantener los frascos cerrados,
    protegidos de la luz y evitar la contaminación durante su uso.
    4. Mezclar suavemente por inversión. Insertar la cubeta en el
    Descartar si se observan signos de deterioro:
    compartimiento termostatado del instrumento y poner el
    - Presencia de partículas y turbidez.
    cronómetro en marcha.
    - Absorbancia del Blanco (A) a 340 nm < 1,000 en cubeta de 1 cm.
    5. Incubar durante 30 segundos, y anotar la absorbancia inicial.
    6. Repetir las lecturas exactamente a los 1,2 y 3 minutos.
    PREPARACION DE LOS REACTIVOS 7. Calcular la diferencia entre absorbancias.
    8. Calcular el promedio de los resultados para obtener el cambio
    promedio en absorbancia por minuto (ΔA/min).
    Reactivo de trabajo. Mezclar 4 mL de R1 + 1 mL de R2. Estable 2
    meses a 2-8ºC ó 2 días a 16-25ºC.
    Resguardar de la luz. CALCULOS

    MUESTRAS U/L = ΔA/min x 8095


    Muestras con ΔA/min superiores a 0,150 a 340 nm deben diluirse
    Suero libre de hemólisis separado de las células a la mayor 1:10 con solución salina y repetir el ensayo. Multiplicar los
    brevedad tras la extracción. El empleo de heparina y citrato como resultados por 10.
    anticoagulantes eleva falsamente la actividad de LDH. Para expresar los resultados en unidades SI aplicar:
    La congelación se traduce en una pérdida de actividad del enzima. U/L x 0,01667 = μkat/L

    QUALITY SYSTEM CERTIFIED LINEAR CHEMICALS S.L. Joaquim Costa 18 2ª planta. 08390 Montgat, Barcelona, SPAIN
    ISO 9001 ISO 13485 Telf. (+34) 934 694 990 Fax. (+34) 934 693 435. website www.linear.es
    VALORES DE REFERENCIA4 NOTAS
    Suero 1. Este ensayo permite ser adaptado a distintos instrumentos
    automáticos. Cualquier adaptación a un instrumento deberá
    ser validada con el fin de demostrar que se cumplen las
    Temperatura 37ºC 30ºC
    características analíticas del método. Se recomienda validar
    207 - 414 U/L 140 - 280 U/L periódicamente el instrumento. Consultar con su distribuidor
    Adultos para cualquier dificultad en la adaptación del método.
    (3,40 - 6,80 μKat/L) (2,30 - 4,70 μKat/L)
    2. El diagnóstico clínico no debe realizarse únicamente con los
    Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango de resultados de un único ensayo, sino que debe considerarse al
    referencia. mismo tiempo los datos clínicos del paciente.

    CONTROL DE CALIDAD
    REFERENCIAS
    Para un control de calidad adecuado se incluirán en cada serie
    controles valorados (normales y elevados) que se tratarán como
    muestras problema. 1. Comission Enzymologie de la Societé Française de Biologie
    Clinique. Ann. Biol. Clin. 40: 123-128 (1982).
    REF 1980005 HUMAN MULTISERA NORMAL 2. Sociedad Española de Química Clínica, Comité Científico,
    Valorado. Nivel normal de LDH. Comisión de Enzimas. Método recomendado para la
    determinación en rutina de la concentración catalítica de
    REF 1985005 HUMAN MULTISERA ABNORMAL lactato deshidrogenada en suero sanguíneo humano. Quim
    Valorado. Nivel elevado de LDH. Clin 1988; 8:57-61.
    Si los resultados obtenidos se encuentran fuera del rango de 3. Young DS. Effects of drugs on clinical laboratory tests, 4th ed.
    tolerancia, revisar el instrumento, los reactivos y la técnica usada. AACC Press, 1995.
    rd
    Cada laboratorio debe establecer su propio Control de Calidad y 4. Tietz. N.W. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3 Edition.
    sus medidas correctoras cuando los controles no cumplan con las W.B. Saunders Co. Philadelphia, PA. (1995).
    tolerancias exigidas. 5. Friedman y Young. Effects of disease on clinical laboratory test
    th
    5 ed. AACC Press, 2000.
    SIGNIFICADO CLINICO2,5

    La actividad enzimática presente en la circulación es una mezcla


    de las actividades de cinco isoenzimas. Cada órgano tiene un perfil
    de isoenzimas característico y la pérdida de estos isoenzimas por
    un órgano enfermo se traduce en una elevación de la actividad LD
    total.
    Los niveles se ven aumentados de una forma evidente 8-12 horas
    tras un infarto de miocardio alcanzando su máximo 4-5 dias más
    tarde. Se hallan tambien valores elevados en suero en casos de
    embolismo pulmonar y en aproximadamente un tercio de pacientes
    con enfermedad renal especialmente aquellos con pielonefritis o
    necrosis tubular. En la hepatitis tóxica con ictericia, enfermedad de
    Hodkings y cánceres abdominales y de pulmón los aumentos son
    especialmente altos.
    Niveles moderados pueden tambien observarse en casos de
    enfermedad hepática y en la anemia megaloblástica y perniciosa,
    así como en la distrofia muscular progresiva.
    Los descensos no son clínicamente importantes.

    CARACTERISTICAS ANALITICAS

    - Limite detección: 15,73 U/L


    - Linealidad. Hasta 1500 U/L
    - Precisión
    U/L Intraserial Interserial
    Media 495 879 495 879
    DE 4,32 7,34 14 13,5
    CV% 0,87 0,83 2,83 1,54
    N 10 10 10 10

    - Sensibilidad. 0,152 mA / U/L LDH.


    - Correlación. Este ensayo (y) fue comparado con un método
    comercial similar (x). Los resultados fueron los siguientes:
    N = 52 r = 0,99 y = 1,031x + 3,147
    Las características analíticas han sido generadas usando un
    instrumento automático. Los resultados pueden variar según el
    instrumento utilizado. B1141-2/0901
    R1.cas

    QUALITY SYSTEM CERTIFIED LINEAR CHEMICALS S.L. Joaquim Costa 18 2ª planta. 08390 Montgat, Barcelona, SPAIN
    ISO 9001 ISO 13485 Telf. (+34) 934 694 990 Fax. (+34) 934 693 435. website www.linear.es

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