Curly en Es

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ARTÍCULO DE INVESTIGACIÓN
OnduladoCodifica la oxidasa dual, que actúa con la

hemoperoxidasa Curly Su para dar forma al adulto
drosófilaAla
Thomas Ryan Hurd, Feng-Xia Liang, Ruth Lehmann*
HHMI y Centro Kimmel de Biología y Medicina del Instituto Skirball, Departamento de Biología Celular, Facultad de
Medicina de la Universidad de Nueva York, Nueva York, Nueva York, Estados Unidos de América
* [email protected]
Abstracto
Ondulado,descrito hace casi un siglo, es uno de los marcadores más utilizados endrosófilagenética. A
pesar de esto, la identidad molecular deOnduladoha permanecido oscuro. Aquí mostramos queOndulado
surgen mutaciones en el genoxidasa dual (duox),que codifica una especie reactiva de oxígeno (ROS) que
genera NADPH oxidasa. UsandoOnduladomutaciones y ARN de interferencia (ARNi), demostramos que
ACCESO ABIERTO Duox estabiliza de forma autónoma el ala en el último día del desarrollo de la pupa. A través de estudios
Citación:Hurd TR, Liang FX, Lehmann R (2015) Ondulado de supresión genética, identificamos una hemoperoxidasa novedosa, Curly Su (Cysu) que actúa con Duox
Codifica la oxidasa dual, que actúa con la hemoperoxidasa para formar el ala. El análisis ultraestructural sugiere que se requieren Duox y Cysu en el ala para unir y
Curly Su para dar forma al adultodrosófila Ala. PLoS Genet
adherir las superficies de la cutícula dorsal y ventral durante su maduración. Endrosófila,Duox es mejor
11(11): e1005625. doi:10.1371/journal.pgen.1005625
conocido por su papel en la eliminación de patógenos al generar ROS bactericidas. Nuestro trabajo se
suma a un número creciente de estudios que sugieren que la función principal de Duox es más estructural,
Editor:Barry James Thompson, Cancer Research
ya que ayuda a formar estructuras extracelulares y de cutículas junto con las peroxidasas.
UK, REINO UNIDO
Recibió:28 de agosto de 2015
Aceptado:2 de octubre de 2015
Publicado:20 de noviembre de 2015
Derechos de autor:© 2015 Hurd et al. Este es un artículo de

Resumen del autor
acceso abierto distribuido bajo los términos de la Licencia de
Los genetistas de la mosca de la fruta confían en un puñado de mutaciones dominantes que modifican la
atribución de Creative Commons , que permite el uso, la
morfología adulta de una manera que es fácil de detectar, como cambiar la forma de las alas, los ojos o las
distribución y la reproducción sin restricciones en cualquier
medio, siempre que se acredite el autor original y la fuente.

cerdas de la mosca. Uno de los primeros mutantes de este tipo identificados en los primeros días de la
genética de moscas y, hasta el día de hoy, probablemente la mutación más utilizada, esOndulado,lo que
provoca una curvatura hacia arriba en las alas adultas. A pesar de su importancia como marcador, la causa
Declaración de disponibilidad de datos:Todos los datos están
contenidos en este manuscrito.

genética deOnduladoha permanecido desconocido. Aquí, revelamos queOnduladose producen mutaciones
en el genduox,que codifica una enzima generadora de ROS. Las ROS, que antes se pensaba que eran
Fondos:TRH fue apoyado por una beca del Instituto
simplemente subproductos nocivos del metabolismo, también pueden tener propósitos beneficiosos. Aquí
Canadiense de Investigación en Salud. RL es investigador del
Instituto Médico Howard Hughes. Los patrocinadores no

proporcionamos evidencia de que Duox genera ROS para ayudar a formar y estabilizar las alas de las moscas
tuvieron ningún papel en el diseño del estudio, la recopilación de la fruta. Además, identificamos una segunda enzima, Cysu, que utiliza las ROS generadas por Duox para
y el análisis de datos, la decisión de publicar o la preparación entrecruzar proteínas en el ala, estabilizando y dando forma a su estructura. Duox ocurre en numerosos
del manuscrito.
organismos, incluidos los humanos, y cumple otras funciones, en particular en la inmunidad y la defensa
Conflicto de intereses:Los autores han declarado que contra patógenos. Con este nuevo conocimiento,OnduladoLas mutaciones proporcionarán
no existen intereses contrapuestos.
Genética PLOS | DOI:10.1371/journal.pgen.1005625 20 de noviembre de 2015 1 / 15

OnduladoCodifica la oxidasa dual
una excelente herramienta para estudiar y comprender los roles que desempeña Duox en una variedad de contextos
biológicos.
Introducción
Hace más de 90 años, Lenore Ward describió por primera vez una mutación dominante,Ondulado,que hace que
las alas deDrosophila melanogasterdoblarse hacia arriba [1 ]. Desde entonces,Onduladose ha convertido en un
segundo marcador cromosómico ubicuo utilizado pordrosófilagenetistas diariamente para seguir y rastrear
mutaciones. A pesar de su uso generalizado, ¿cómoOnduladolas mutaciones dominantes que alteran la curvatura
del ala han permanecido oscuras. Waddington propuso por primera vez queOnduladoprovoca una contracción
desigual de las superficies dorsal y ventral de las alas durante el período de secado, poco después de que las
moscas emergen de sus cajas de pupas.2 ,3 ]. Otros han demostrado posteriormente que alteraciones
comparables en la curvatura del ala pueden ser causadas por un crecimiento diferencial de los epitelios dorsal y
ventral.4 ]. Independientemente del mecanismo, se han descrito fenotipos de alas similares para
D. pseudoobscurayD. montiummutantes [5 ] sugiere que la causa subyacente de la formación de alas
rizadas se conserva evolutivamente entre los drosófilos [2 ]. El principal factor que limita nuestra
comprensión derizadoLa función en la morfogénesis del ala, sin embargo, es el hecho de que su identidad
molecular sigue siendo desconocida.
En este manuscrito descubrimos la naturaleza molecular largamente desconocida deOndulado.Mostramos
que las mutaciones en el genduoxcausar elOnduladofenotipo de ala. Duox es miembro de un grupo altamente
conservado de proteínas transmembrana denominadas colectivamente NADPH oxidasas. Estas enzimas funcionan
para transferir electrones a través de las membranas biológicas para generar ROS mediante la transferencia de
electrones de NADPH al oxígeno a través del dinucleótido de flavina y adenina (FAD) y los cofactores hemo.6 ]. Se
han descrito varias funciones biológicas para Duox. Quizás el mejor estudiado de estos endrosófilaes su papel en
la defensa del huésped donde se cree que genera ROS para matar patógenos [7 ]. Sin embargo, Duox también
juega un papel importante en el suministro de ROS, específicamente peróxido de hidrógeno, para que las hemo
peroxidasas catalicen la formación de enlaces covalentes entre biomoléculas. En los mamíferos, Duox genera
peróxido de hidrógeno para la peroxidasa tiroidea para catalizar la yodación y el entrecruzamiento de los residuos
de tirosina en la formación de hormonas tiroideas.8 ,9 ]. Duox también se expresa en tejidos distintos de la
tiroides, como el tracto gastrointestinal, donde su función es menos clara.6 ]. En insectos, gusanos y erizos de mar,
Duox participa en la formación de estructuras extracelulares a través de la reticulación de residuos de tirosina [10
– 12 ]. De hecho, en lugar de su función en la generación de ROS bactericidas, la actividad de reticulación de
tirosina de Duox puede ser la función ancestral principal, ya que parece estar conservada en todos los filos.
Aquí mostramos que mutaciones específicas en la región codificante del dominio de unión a NADPH
de duoxporque unOnduladofenotipo de ala. UsandoOndulado,demostramos queduoxse requiere durante
el último día del desarrollo de la pupa para estabilizar el ala. Además, a través de experimentos de
supresión, identificamos una nueva hemo peroxidasa, Curly Su (Cysu), que funciona conduoxadherir la
superficie dorsal del ala a la ventral. Descubriendo la identidad molecular de Onduladono solo
proporciona un punto de entrada para la comprensión funcional de este prominente fenotipo mutante
del ala, sino que también permitirá el descubrimiento de nuevosduoxgenes y reguladores que interactúan
a través de pantallas genéticas imparciales. Solo a través de estos enfoques podemos esperar
comprender la función molecular precisa de Duox en la miríada de procesos biológicos en los que está
involucrado.

Resultados
OnduladoLas mutaciones ocurren dentroduox
En el curso del seguimiento genético de una mutación de pérdida de función en el genduox, duoxKG07745,
usando el estándardrosófilaherramienta genéticaRizado de Oster (CyO)balancer, nos dimos cuenta de que
no podíamos recuperar la progenie que contenía ambosduoxKG07745yCyO.Desde un) duoxyOnduladolas
mutaciones no se complementan entre sí y b)Onduladoaproximadamente se asigna a 23A4-23B2 [13 ], la
región cromosómica que contieneduox,nos preguntamos siOnduladopuede ser un alelo deduox.
Los cromosomas equilibradores contienen numerosas inversiones y aberraciones cromosómicas. Para excluir
la posibilidad de que nuestra incapacidad para recuperar la progenie se deba a alguna otra lesión en la región
23A4-23B2 deCyO,cruzamosduoxKG07745a variosOnduladomutaciones no asociadas conCyO [1 ,13 ,14 ]. De acuerdo
con nuestros resultados anteriores, todos losOnduladolos alelos probados no se complementaronduoxKG07745,
sugiriendo queOnduladolas mutaciones de hecho residen dentro de laduoxlugar geométrico (Figura 1A ). Sin
embargo, para proporcionar evidencia concluyente de queduoxyOnduladoson uno y lo mismo, expresamosduox
ubicuamente en unOnduladofondo mutante. Expresión ubicua deduox viabilidad restaurada, lo que permite la
recuperación de homocigotosOnduladomutantes (Figura 1A ). Estos resultados sugieren fuertemente que la
OnduladoEl fenotipo se debe a mutaciones en elduoxgene.
OnduladoLas mutaciones ocurren en la región de codificación de bolsillo de unión a NADPH de

duox
Para determinar con precisión cómoOnduladolas mutaciones alterande duoxsecuencia de nucleótidos,

secuenciamos duoxen dosOnduladomutantes:Cyk, que se generó previamente usando metanosulfonato de etilo [
14 ]; yCy1, la mutación espontánea original identificada por Ward [1 ]. Sorprendentemente, encontramos que el
mismo nucleótido estaba mutado en ambosCykyCy1(Figura 1B ). Esta mutación de un solo nucleótido resultó en la
conversión de una glicina conservada (número 1505) en el dominio de unión de NADPH de Duox a una serina en
Cyky a una cisteína enCy1(Figura 1C , rojo). Entre los residuos dentro del bolsillo de unión de NADPH de Duox, la
glicina 1505 está extraordinariamente bien conservada. Está presente en todas las NADPH oxidasas conocidas
desde levadura hasta humanos (Figura 1D ), lo que sugiere que es funcionalmente importante. Por lo tanto, una
conversión de una glicina conservada en un aminoácido polar específicamente en el bolsillo de unión de NADPH
de Duox provocaOndulado.En conjunto, nuestros resultados demuestran, después de más de 90 años desde su
descubrimiento, que elOnduladoEl fenotipo se debe a mutaciones dentro delduoxgene.
Onduladoes probablemente un alelo neomórfico deduox
Mutaciones en la región codificante de unión a NADPH deduoxporque unOnduladofenotipo, pero ¿cómo influyen
exactamente en la función de Duox? De los experimentos de complementación, es claro que Ondulado
mutaciones reducen la función normal de Duox ya que no son viables en combinación con una pérdida de función
duoxmutación o una deficiencia que descubre laduoxlugar geométrico (Figura 1A ). Sin embargo,Ondulado
mutantes también actúan de forma dominante, haciendo que las alas deOnduladomoscas para doblarse hacia
arriba (de ahí el nombre) en contraste con las alas rectas de tipo salvaje oduoxmoscas heterocigotas. Una posible
explicación es queOnduladolas mutaciones actúan en oposición a la actividad normal de Duox como negativos
dominantes o antimorfos. Esto, sin embargo, es poco probable debido a la sobreexpresión ubicua de Duox de
tipo salvaje en unOnduladoel fondo mutante no pudo restaurar la forma normal del ala (higo S1 ). Otra
posibilidad es queOnduladolas mutaciones aumentan la función normal de Duox ya sea aumentando la expresión
o activando Duox de manera constitutiva. Sin embargo, esto tampoco parece plausible porque la eliminación de
Duox de tipo salvaje enOnduladomutantes empeoraron (causando letalidad) en lugar de mejorar el fenotipo de
viabilidad (Figura 1A ). En cambio, la explicación más probable es que

Figura 1.Onduladoes un alelo deduox. (A)duoxLas mutaciones no se complementan.OnduladomutacionesOnduladomutaciones son letales como homocigotos y como
transheterocigotos con unaduoxmutación o una deficiencia que descubre laduoxlugar. Expresión ubicua deduoxrestaura la viabilidad a los homocigotosOndulado mutantes.–
= no viable, + = viable y nd = no determinado. (B)OnduladoLas mutaciones provocan un cambio de un solo aminoácido de una glicina conservada a serina o cisteína paraCyko
Cy1, respectivamente. (C) Caricatura de Duox. En rojo está el dominio de unión a NADPH. PHD significa dominio de homología de peroxidasa. (D) El residuo de glicina
conservado mutado enOnduladoes un aminoácido esencial en el dominio de unión a NADPH de Duox.
doi:10.1371/journal.pgen.1005625.g001
Onduladolas mutaciones son neomórficas, lo que provoca una ganancia de función dominante en Duox que es
diferente de su función normal.
Para investigar más a fondo la posible naturaleza neomórfica deOnduladomutaciones, probamos si
Onduladolas mutaciones requieren NADPH, el sustrato de Duox, para generar un fenotipo de ala. En
primera instancia, intentamos alterar los niveles endógenos de NADPH reduciendo

Fig. 2. Curly es probablemente un alelo neomórfico de duox. (A) La reducción de la niacinamida en la dieta provoca una disminución dependiente de la dosis en la expresividad
de laOndulado fenotipo de ala. Las moscas se criaron con alimentos que contenían diferentes concentraciones de niacinamida. (B) Derribo de la NAD+quinasa, CG6145, con el
controlador de ala apGal4 suprime laOnduladofenotipo de ala. La eliminación de CG6145 con apGal4 solo no provocó un fenotipo de ala. (C) y (D) Expresión ubicua deduoxCyK,
pero noduox,provoca unOnduladofenotipo de ala.UAS-duoxyUAS-duoxCyKse expresaron de forma ubicua utilizando eltuppgal4conductor.
la cantidad de niacinamida, un precursor de NADPH, en la dieta deOnduladomoscas. Curiosamente, encontramos

que una reducción de la niacinamida en la dieta causó una disminución dependiente de la dosis en la expresividad
del fenotipo del ala enOnduladomutantes (Figura 2A ). Para probar esto genéticamente, a continuación
derribamosCG6145,que codifica un NAD+quinasa que fosforila NAD+para generar NADP+[15 ]. Desmontaje
específico de CG6145 en el ala usandoapterous-gal4 (apGal4)reprimió fuertemente laOnduladofenotipo de ala (
Figura 2B ). Juntos, estos resultados sugieren queOndulado mutantes requieren NADP+y/o NADPH para provocar
cambios en la curvatura del ala. Por lo tanto, no sólo hagaOnduladoLas mutaciones reducen la función normal de
Duox, también lo dotan de una nueva función que requiere sustrato suficiente para alterar de forma dominante la
forma del ala.
Se requiere Duox de forma autónoma en el ala durante el último día

de desarrollo para estabilizar el ala
Habiendo determinado queOnduladoes probablemente un alelo neomóforo deduox,decidimos usar
Onduladomutaciones para explorarde duoxfunciónen vivoen el ala Para hacer esto, generamos una forma
mutante deduox,en lo sucesivo denominado comoduoxCyK, en el que la glicina 1505 fue mutada a una
serina, como en elCykmutante Para poder expresarduoxCyKcondicionalmente, lo fusionamos con un
elemento de secuencia de activación ascendente (UAS) para que pudiéramos controlar su expresión de una
manera dependiente del tiempo y específica del tejido utilizando el sistema Gal4 [dieciséis ]. Demostrar
que este transgén era funcional y capaz de recrear elOnduladofenotipo, lo expresamos de forma ubicua en
toda la mosca usandotubpgal4 [17 ]. De hecho, la expresión omnipresente deduoxCyK, pero no de tipo
salvajeduox,resultó en alas dobladas hacia arriba parecidas a las deCykmutantes (Figura 2C y 2D ). Esto no
solo demuestra que laduoxCyKtransgén es funcional, pero también proporciona más evidencia de que
Onduladoes un alelo deduox.

Duox podría requerirse de forma autónoma dentro del ala para su formación, o actuar de forma
no autónoma en otros tejidos, como es el caso derizado,una mutación que causa cambios similares en
la morfología del ala [2 ]. para determinar dondeduoxse requiere, primero expresamos duoxCyKoduox
ARNi en el ala usandoapGal4.Expresión deduoxCyK, pero no de tipo salvaje duox,causó la curvatura del
ala hacia arriba, mientras que la caída deduoxen el ala causó una ligera curvatura hacia abajo o
ahuecamiento del ala (Figura 3A ). Esto demuestra queduoxse requiere de manera autónoma en el ala
para su formación.
Los cambios en la curvatura del ala pueden ser causados por un crecimiento diferencial entre las superficies
dorsal y ventral del ala, o pueden ser causados por cambios en la estructura de la cutícula.3 ,4 ]. SiduoxCyKinfluían
de manera diferencial en el crecimiento, esperaríamos que fuera necesario al principio del desarrollo de la pupa,
pero no más tarde, cuando la proliferación y el crecimiento de las superficies ventral y dorsal del ala están casi
completos.18 ]. Para determinar cuándo está en desarrolloduoxCyKestá actuando, lo expresamos condicionalmente
en varias etapas de desarrollo utilizando un controlador inducible por choque térmico. Expresión de duoxCyK, pero
noduox,en el último día del desarrollo de la pupa, pero no antes de eso, resultó en alas hacia arriba (Figura 3B ).
Esto sugiere que Duox no influye en el crecimiento del ala y, en cambio, quizás juega un papel en la formación de
la cutícula del ala. En conjunto, nuestros resultados demuestran queduoxactúa de forma autónoma en el ala para
estabilizar la cutícula durante el último día del desarrollo de la pupa, coincidiendo con la formación de la cutícula
del ala.
Fig. 3.duoxse requiere dentro del ala durante el último día de desarrollo para la estabilización del ala. (A) Expresión deduoxCyK, pero noduox,en el compartimento
dorsal del ala provoca unaOnduladofenotipo. derribo deduoxen el compartimento dorsal del ala provoca el ahuecamiento hacia abajo y la flexión del ala. (B)
Expresión deduoxCyKpero no de tipo salvajeduoxen el día 9 de desarrollo, pero no antes, provoca unOnduladofenotipo.

Duox trabaja con la hemo peroxidasa Cysu para estabilizar el ala

El peróxido de hidrógeno generado por las NADPH oxidasas a menudo es utilizado por las peroxidasas, con mayor
frecuencia hemo peroxidasas, para entrecruzar proteínas y matar patógenos.6 ]. Las hemo peroxidasas son
esenciales para las reacciones de entrecruzamiento dependientes de NADPH oxidasa, pero en gran medida
prescindibles para sus otras funciones.6 ]. Para probar si Duox actúa con una hemoperoxidasa en el ala para
entrecruzar las proteínas y estabilizarlas, derribamos individualmente todos los conocidosD. melanogaster hemo
peroxidasas (Figura 4A ) [19 ] usando RNAi en las alas deduoxCyKmoscas. SiduoxCyKactúa solo en el ala y no
participa en las reacciones de entrecruzamiento, entonces la caída de las hemo peroxidasas no debería afectar la
curvatura del ala. Si acaso,duoxCyKrequiere una hemo peroxidasa para funcionar, entonces la eliminación debería
suprimir laOnduladofenotipo. De acuerdo con esto, la caída de una peroxidasa,CG5873,reprimió por completo la
Onduladofenotipo de una manera parecidaduoxcaídas, lo que sugiere que Duox funciona junto con CG5873 para
entrecruzar moléculas para formar el ala (Figura 4A ). Como CG5873 es un supresor deOnduladolo hemos
nombrado su rizado,ocysupara abreviar.
Sicysuactúa conduoxpara formar el ala, uno esperaría que: a) se expresara en el ala en el último día de
desarrollo, el período en el que Duox funciona para formar el ala; yb) tienen un fenotipo similar a Duox
cuando se silencian en el ala. Para probar esta primera predicción, generamos una cepa que expresa
endógenamente Cysu marcado con mCherry. De acuerdo con el funcionamiento de Cysu en el ala,
observamos la expresión de Cysu marcado con mCherry en el ala en el último día de desarrollo usando
microscopía confocal (Figura 4B ). Para probar nuestra segunda predicción, derribamos a Cysu en el ala
usando ARNi. El derribo de Cysu provocó un ligero hundimiento y ahuecamiento del ala que se asemeja a
las alas de derribo de Duox, lo que sugiere además que Cysu y Duox funcionan juntos para dar forma al ala
(Figura 4C ). Curiosamente, también se observaron defectos en la formación del escutelo y el notum en las
caídas de Duox y Cysu, lo que sugiere que podrían desempeñar un papel más amplio en la formación de la
cutícula.figura 4D ). De acuerdo con esto, Cysu se expresó en el tórax de las moscas de tipo salvaje, pero no
en las caídas de Cysu (Figura 4E ). En resumen, Duox y la hemo peroxidasa Cysu actúan juntos para
estabilizar el ala durante el desarrollo.
Se requiere Duox para la adhesión de las cutículas del ala dorsal y ventral.
EldrosófilaEl ala adulta se compone de dos paneles de cutícula que se sintetizan y secretan de forma escalonada
por las células epiteliales ectodérmicas dorsal y ventral hacia el final del desarrollo de la pupa.20 ,21 ]. Tras la
eclosión, las superficies cuticulares dorsal y ventral de cada ala se expanden y en aproximadamente una hora se
unen y adhieren entre sí.18 ]. Para determinar cómo la alteración de Duox influye en la formación de la cutícula del
ala, tomamos imágenes de tipo salvaje y duoxalas mutantes usando microscopía electrónica de transmisión (higo
5 ). En las alas de tipo salvaje, las cutículas ventral y dorsal están estrechamente yuxtapuestas y fuertemente
unidas (Figura 5A ). Por el contrario, en las alas de derribo de Duox, las cutículas ventral y dorsal rara vez se
contactan directamente entre sí y, en cambio, están separadas por un espacio lleno de material desordenado y
pobre en electrones (Figura 5B ). Curiosamente,OnduladoLas alas mutantes, por otro lado, parecían mucho más
similares a las alas de tipo salvaje con un agrupamiento anormal ocasional de la cutícula dorsal (Figura 5C ). Aún se
desconoce si este pellizco y agrupamiento reduce el área de superficie del ala dorsal que hace que el ala se curve
hacia arriba. Sin embargo, los experimentos de ultraestructura demuestran claramente el papel de Duox en la
adhesión y unión de las superficies de las dos cutículas de las alas durante la formación de las alas.
Discusión
Aquí hemos demostrado que laOnduladoLa mutación surge en la región de codificación de bolsillo de
unión a NADPH deduox.UsandoOnduladomutaciones yduoxRNAi, mostramos que se requiere Duox
dentro del ala para mantener su forma a partir del último día del desarrollo de la pupa. Resultados de

Fig 4. La hemo peroxidasa Cysu trabaja con Duox para estabilizar el ala. (A) Derribo decysu,pero no los otros sietedrosófilahemo peroxidasas, suprime laOndulado
fenotipo de ala. (B) Un mCherry::Cysu etiquetado de forma endógena se expresa en el ala pupal tardía. (C) El derribo de Cysu en el compartimento dorsal del ala
provoca que el ala se doble hacia abajo y se asemeje a las alas de derribo de Duox. (D) Derribo de Cysu con apGal4 en unCyk
El fondo causa defectos en la formación del escutelo y el notum. (E) Cysu::mCherry se expresa en el tórax de las moscas de control, pero no en las que expresancysu ARNi
con apGal4.

Fig. 5. Se requiere Duox para la adhesión y unión del panel de la cutícula del ala dorsal y ventral. (A) Caricatura de un ala. (B) En un ala de tipo salvaje, las
cutículas dorsal y ventral están en estrecho contacto. (C) Enduoxalas caídas, las cutículas dorsal y ventral rara vez están en contacto directo. (D) enOndulado alas,
producido por la expresión deduoxCyKen el compartimento dorsal del ala con apGAL4 se puede observar un agrupamiento de la superficie dorsal del ala.
nuestros estudios genéticos sugieren que Duox hace esto mediante el suministro de peróxido de hidrógeno a la
hemoperoxidasa Cysu para facilitar la unión de las dos superficies de la cutícula del ala, probablemente entrecruzándolas
físicamente, durante la formación del ala.

En todoOnduladomutantes secuenciados, se muta un residuo de glicina, 1505, en el bolsillo de unión a NADPH
de Duox. Esta glicina está presente en todas las NADPH oxidasas desde eucariotas microbianos hasta humanos, y
más ampliamente en los dominios de unión a NAD de oxidorreductasa y reductasa férrica (PFAM PF00175 y
PF08030, respectivamente). Aunque no se han realizado estudios de mutagénesis en este residuo en sí, se
encuentra junto a un residuo de cisteína igualmente conservado, que ha sido

estudiado en detalle porque las mutaciones en él causan enfermedad granulomatosa crónica en humanos.22 ].
Este residuo de cisteína no parece ser importante para el ensamblaje de la NADPH oxidasa o la unión de NADPH.
22 ,23 ]. En cambio, se cree que es necesario para orientar el NADPH unido para una transferencia de electrones
eficiente (a través de hidruro) a FAD y, finalmente, al oxígeno.22 ]. Dada la proximidad de la glicina 1505, es posible
que sus mutaciones afecten de manera similar la transferencia de electrones de NADPH a FAD. En consonancia
con esto es la observación de queOnduladolos mutantes no son homocigóticos viables ni viables con una
deficiencia, lo que sugiere que la mutación de la glicina 1505 provoca una reducción en la función normal de Duox.
A pesar deOnduladolas mutaciones reducen la función normal de Duox, también lo dotan de una nueva
función. Precisamente cuál es esta nueva función sigue siendo oscura, sin embargo, es probable que requiera una
fuente de electrones porque altera el NADPH/NADP+eliminando la niacinamida de los alimentos o derribando NAD
+quinasa suprimió el fenotipo del ala. Se sabe que la expresividad de laOnduladoEl fenotipo del ala puede ser
suprimido por el hacinamiento de larvas y/o larvas hambrientas.24 ]. Dado esto, es posible que la reducción de la
captación de niacinamida sea una causa de la disminución de la expresividad delOnduladofenotipo de ala en
larvas hambrientas. También se ha sugerido que la escasez de riboflavina durante la etapa larvaria es una causa
de esta supresión.2 ,25 ]. Dado que la riboflavina es un precursor de FAD, un cofactor también necesario para la
función de Duox, también puede suprimir el fenotipo del ala al reducir la FAD endógena y, a su vez, reducir la
actividad de Duox. A pesar de todo,Onduladoes probable que las mutaciones sean neomórficas y su sensibilidad a
los factores ambientales probablemente esté mediada por cambios en la disponibilidad del sustrato.
Se requiere Duox de forma autónoma para la estabilización del ala. Los resultados de este estudio y otro
apoyan fuertemente esta afirmación [10 ]. Expresión deduoxCyKo derribo deduoxen el último día antes de la
eclosión, pero no antes, causó defectos en la morfogénesis del ala. Esto sugiere que Duox yOnduladono influyen
en el crecimiento o la proliferación del epitelio del ala porque estos procesos están completos en este momento [
18 ]. En cambio, el análisis ultraestructural sugiere que Duox juega un papel importante en la formación de la
cutícula del ala. Enduoxcaídas, se observaron espacios frecuentes entre las dos superficies de la cutícula del ala,
en contraste con las alas de tipo salvaje. Los defectos en la adhesión de las dos superficies de la cutícula también
fueron evidentes enOnduladomutantes A diferencia de las alas deduoxcaídas, sin embargo, las superficies de la
cutícula enOnduladolas alas estaban muy a menudo estrechamente unidas con un agrupamiento ocasional de la
superficie dorsal. Es posible que en elOndulado mutantes, este pellizco aberrante de la superficie dorsal
disminuye su área en relación con la superficie ventral, lo que hace que el ala se doble, como lo insinuó por
primera vez Waddington hace 75 años.3 ]. Sin embargo, no sabemos si esta es la causa del rizado o solo una
consecuencia del mismo.
Se sabe que Duox participa en la formación de matrices y cutículas extracelulares.10 – 12 ]. Por lo
general, hace esto mediante el suministro de peróxido de hidrógeno a las hemo peroxidasas, que utilizan
el peróxido de hidrógeno para realizar reacciones de reticulación. De acuerdo con el papel de Duox en la
reticulación de la cutícula, descubrimos que la hemoperoxidasa Cysu era esencial para la función de Duox
en el ala. Duox es inusual entre las NADPH oxidasas porque contiene su propio dominio de homología de
peroxidasa, que enCaenorhabditis elegansyD. melanogasterse ha propuesto para cumplir la función de las
hemo peroxidasas, obviando así su necesidad [7 ,26 ,27 ]. Sin embargo, dado que el dominio de homología
de peroxidasa dedrosófilaDuox carece de muchos residuos de aminoácidos, incluidas las histidinas
proximales y distales, esenciales para la función eficiente de la peroxidasa; no está claro qué tan bien
funciona en esta capacidad.27 ]. De hecho, nuestros resultados sugieren que enD. melanogaster,Duox
requiere la heme peroxidasa Cysu no solo para estabilizar la cutícula del ala, sino también para la
formación del notum y el scutellum. Estos hallazgos apuntan a un papel más general de Duox y Cysu en la
formación de la cutícula.
Endrosófila,Duox se ha estudiado intensamente en el contexto de la defensa del huésped y la inmunidad
intestinal. En el intestino, se cree que Duox genera ROS para matar patógenos; las moscas que han reducido la
actividad de Duox tienen una mayor susceptibilidad a la infección [7 ,26 ]. Tras la infección ROS

generados por Duox matan a los patógenos y posiblemente envían señales a las células epiteliales intestinales
para que proliferen y se renueven.7 ,28 ]. Nuestros resultados, así como otros, demuestran que Duox también es
fundamental en la formación de estructuras de cutícula y matrices extracelulares [10 –12 ]. Es posible que Duox
realice una función similar en eldrosófilaintestino, quizás formando barreras extracelulares o estructuras para
proteger contra la infección. De hecho, se ha demostrado que Duox, junto con las hemoperoxidasas, forma tales
barreras en los intestinos de las garrapatas y los mosquitos.29 ,30 ]. Por lo tanto, sería interesante explorar si
Duox y posiblemente Cysu también están involucrados en la formación de barreras para proteger contra la
infección en eldrosófilaintestino.
Duox es una proteína importante que tiene varias funciones diversas, que apenas estamos
comenzando a comprender.OnduladoLas mutaciones brindan una excelente oportunidad para explorar
más a fondo las funciones de Duox al identificar interactores y reguladores desconocidos a través de
pantallas supresoras genéticas imparciales. La identificación de Cysu a través de tal enfoque demuestra su
viabilidad y utilidad. Dichos enfoques no solo nos informarán sobre la función de Duox en el ala, sino
también sobre su papel en la inmunidad y más allá.
Materiales y métodos
Cría y cepas de Drosophila
Las moscas se propagaron en viales de poliestireno (28,5 mm de diámetro) que contenían medio de levadura de melaza de harina
de maíz a 25 °C. Para la mayoría de los cruces, se aparearon 5 hembras vírgenes con 3 a 5 machos. Las cepas de moscas utilizadas
se muestran entabla 1 .
Expresión condicional de duox y duoxCyK

duoxyduoxCyKse expresaron condicionalmente utilizando un controlador gal4 aguas abajo del promotor de la
proteína 70 de choque térmico (HS) (HS-gal4). En varios momentos durante el desarrollo.drosófila se incubaron
a 37°C durante 2 horas para inducir la expresión.
duoxKG07745(BDSC 16468)
Para verificar la ubicación deP{SUPor-P}DuoxKG07745realizamos PCR inversa. De acuerdo con el informe de
FlyBase (FBal0226250), la secuencia flanqueante 3' estaba en la posición genómica 2L:2,826,884. Sin
embargo, inesperadamente, encontramos que la secuencia flanqueante 5' estaba en la posición
2L:2,755,447. Esto sugiere queP{SUPor-P}DuoxKG07745contiene una deleción que perturba 17 genes deBac
aduox.
Generación de uas-duox y uas-duoxCyKpresiones

ElduoxEl marco de lectura abierto se amplificó a partir de ADNc y se clonó en el vector pVALIUM22 [31 ]
entre los sitios de restricción XbaI y EcoRI usando métodos estándar. ElCykLa mutación se generó mediante
mutagénesis dirigida al sitio utilizando un kit de mutagénesis dirigida al sitio QuikChange. Las
construcciones se integraron en el sitio attP2 en el tercer cromosoma utilizando la integrasa phiC31 de
BestGene.
Generación de la cepa Cysu::mCherry

BestGene fabricó moscas que expresan Cysu etiquetadas con mCherry mediante la inyección de una construcción mímica
# 1315 en Mi{MIC}CG5873MI11428(BDSC 56608) [32 ].

Tabla 1.drosófilapresiones.
Nombre Genotipo Fuente de referencia

duoxKG07745 y[1];P{y[+mDint2]w[BR.E.BR] = SUPor-P} Bdsc (16468)
Duox[KG07745]/In(2LR)Gla,wg[Gla-1]Bc[1]
Dúox Df Df(2L)C144,dpp[d-ho]ed[1]/ Bdsc (90)
In(2LR)Gla,wg[Gla-1]Bc[1] Egfr[E1]
Cy1 T(2;3)Cicatriz, Cicatriz[1]/Cy[1] Bdsc (880)
Cyk Ci[K]/In(2LR)Gla Bdsc (26167)
act5C-gal4 y[1]w[*];P{w[+mC] = Act5C-GAL4}17bFO1/TM6B, Tb[1] Bdsc (3954)
apgal4 yw; P[w+,ap-GAL4]/CyO Laboratorio J. Treisman
uas-duox y[-]v[-];;attP2-pVALIUM22-duox/TM3 Ser (colonia 12042-1-1M) Este estudio
uas-duoxCyK y[-]v[-];;attP2-pVALIUM22-duox[CyK]/TM3 Ser (colonia 12042-4-1M) Este estudio
ARNi uas-duox ;UASt-dDuoxIR976-1145/CyO Won-Jae Lee

HS-gal4 ;hs-gal4/CyO Laboratorio R. Lehmann
CG6145 ARNi P{KK106577}VIE-260B VDRC (104271/KK)

Pxn ARNi P{KK108816}VIE-260B VDRC (107180/KK)
w1118; P{GD5987}v15276 VDRC (15276/GD)
w1118P{GD5987}v15277 VDRC (15277/GD)
CG10211 ARNi w1118; P{GD5320}v12352/TM3 VDRC (12352/GD)
ARNi cysu w1118; P{GD6190}v14374 VDRC (14374/GD)
ARNi pxt w1118; P{GD6192}v14377 VDRC (14377/GD)
w1118; P{GD6192}v14379 VDRC (14379/GD)
P{KK103684}VIE-260B VDRC (104446/KK)
cd ARNi w1118; P{GD3115}v6831/Cio VDRC (6831/GD)
CG42331 ARNi w1118P{GD12065}v22456 VDRC (22456/GD)
P{KK110316}VIE-260B VDRC (104585/KK)
P{KK105949}VIE-260B VDRC (104226/KK)
ARNi pxd w1118; P{GD16228}v48587 VDRC (48587/GD)
w1118; P{GD16228}v48588 VDRC (48588/GD)
Irc ARNi P{KK106899}VIE-260B VDRC (101098/KK)
cysu::mCherry ;;Mi{pBS-KS-attB1-PT-SA-SD-2-mCherry}CG5873[MI11428] Este estudio
tuppgal4 y[1]w[*];P{w[+mC] = tubP-GAL4}LL7/TM3, Sb[1] Bdsc (5138)

uast-duox ;uast-duox Won-Jae Lee
doi:10.1371/journal.pgen.1005625.t001
secuencia ADN
El ADN genómico se aisló crudamente homogeneizando una o dos moscas en 0,2 mg/ml de proteinasa K
(Roche MC00079), Tris 10 mM pH 8,0, EDTA 1 mM y NaCl 25 mM e incubando durante 25 min a 55 °C.
Posteriormente, la proteinasa K se inactivó hirviendo las muestras durante 5 min. duoxluego fue
amplificado por PCR a partir de ADN genómico y secuenciado por Genewiz.
medio de niacinamida
Las moscas se criaron en un medio definido con varias concentraciones de niacinamida desde el embrión
hasta el adulto. Se preparó una solución como se describe enTabla 2 y el pH se ajustó a 7,0 con NaOH. Se
disolvieron 20 mg/ml de agar grado de cultivo de levadura (Sunrise Science Products 1910) en la solución
mediante calentamiento antes de añadir 0,4 mg/ml de colesterol (Sigma C3045) y niacinamida (Sigma
N0636).

Tabla 2. Medio de niacinamida.
Material Volumen Concentración
H2O a 500ml
Solución de aminoácidos 50x BME (Sigma B6766) 50ml 5X
Sal de potasio de L-glutamato (Sigma G1149) 500 miligramos 1,0 mg/ml
Glicina (Sigma G-7126) 200 miligramos 0,4 mg/ml
Sacarosa (Sigma 3,75 gramos 7,5 mg/ml
Biotina (Sigma B4639) 500 μl de 10 mg/ml de solución madre 0,02 mcg/ml
B12 (Sigma V6629) 500 μl de 14 mg/ml de solución madre 0,028 microgramos/ml
Cloruro de colina (Sigma C7527) 37,5 miligramos 75 mg/ml

Ca-pantotenato (Sigma C8731) 3 miligramos 6 mg/ml
Piridoxina-HCl (Sigma P6280) 1,5 miligramos 3 mg/ml
Riboflavina (Sigma R-0508) 1,2 miligramos 2,4 μg/ml
Tiamina-HCl (Sigma T1270) 0,75 miligramos 1,5 mcg/ml
Ácido fólico (Sigma F858) 18 miligramos 36 mg/ml

MnCl2.4 H2O (Sigma M3634) 24 miligramos 48 mg/ml
MgSO4.7 H2O (Sigma M-9397) 123 miligramos 0,246 mg/ml
k2HPO4(P285-500 Fisher) 303 miligramos 0,606 mg/ml
KH2correos4(P288-500 Fischer) 303 miligramos 0,606 mg/ml
NaCl (Sigma S7653) 6,45 miligramos 0,0129 mg/ml
CaCl2(Sigma C-5080) 6,45 miligramos 0,0129 mg/ml
FeSO4.6 H2O (Sigma F8633) 11,8 miligramos 0,0129 mg/ml
doi:10.1371/journal.pgen.1005625.t002
Imágenes
Las imágenes fluorescentes se adquirieron con un objetivo 10X/NA en un microscopio confocal Zeiss LSM 780.
Todas las demás imágenes se obtuvieron con un microscopio Zeiss SteREO Discovery.V8.
Microscopio de transmisión por electrones
Para la microscopía electrónica de transmisión, las moscas enteras se sumergieron brevemente en etanol al 95 % para
eliminar las burbujas de aire, se decapitaron y se sumergieron en fijador que contenía glutaraldehído al 4 % en tampón
PIPES 0,1 M, pH 7,2 a temperatura ambiente durante 2 horas, y luego durante la noche a temperatura ambiente. 4°C. A
continuación, las moscas se incrustaron en agar al 1 % y se fijaron posteriormente con tetróxido de osmio al 2 % con
ferricianuro de potasio al 1,5 % en tampón PIPES 0,1 M durante 1 hora y luego se tiñeron en bloque con acetato de uranilo
al 1 % en ddH.2O a 4°C durante la noche. Las muestras se deshidrataron con etanol a temperatura ambiente antes de la
incubación con óxido de propileno y la incrustación en resina Spurr (Electron Microscopy Sciences, Hatfield, PA). Las
secciones semifinas de 500 nm se tiñeron con azul de toluidina al 0,1 % para evaluar el área de interés. Se cortaron
secciones ultrafinas de 60 nm, se montaron en rejillas de cobre ranuradas recubiertas con formvar y se tiñeron con acetato
de uranilo y citrato de plomo mediante métodos estándar. Las rejillas teñidas se examinaron con un microscopio
electrónico Philips CM-12 (FEI; Eindhoven, Países Bajos) y se fotografiaron con una cámara digital Gatan (4k x 2,7k) (Gatan,
Inc., Pleasanton, CA).
información de soporte
S1 Fig. Expresión deduoxno rescata elOnduladofenotipo de ala.duoxse expresó
ubicuamente en unCykfondo usandoact5c-gal4. (TIF)

Expresiones de gratitud
Nos gustaría agradecer a Jessica Treisman y Won-Jae Lee por brindarnos amablementedrosófila
presiones. Damos las gracias a Allison Blum y Lacy Barton por su lectura crítica del manuscrito.
Agradecemos a Chris Petzold y Kristen Manning-Dancel del NYULMC OCS Microscopy Core por su
ayuda con la microscopía electrónica de transmisión. Agradecemos a la DGRC y al Bloomington
Stock Center por los reactivos.
Contribuciones de autor
Concibió y diseñó los experimentos: TRH RL. Realizó los experimentos: TRH FXL. Analizado
los datos: TRH RL. Escribió el artículo: TRH RL.
Referencias
1.Ward L. La genética de Curly Wing en Drosophila. Otro caso de factores letales equilibrados. Genética.
1923; 8(3):276–300. IDPM:17246014
2.Gronke S, Bickmeyer I, Wunderlich R, Jackle H, Kuhnlein RP. Curled codifica el homólogo de Drosophila de la
deadenilasa circadiana de vertebrados Nocturna. Genética. 2009; 183(1):219–32. hacer:10.1534/
genetica.109.105601 IDPM:19581445
3.Waddington C. El control genético del desarrollo del ala en Drosophila. Revista de Genética. 1940; 41:75–
139.
4.Lee JH, Budanov AV, Park EJ, Birse R, Kim TE, Perkins GA, et al. Sestrin como inhibidor de la retroalimentación de TOR
que previene patologías relacionadas con la edad. Ciencia. 2010; 327(5970):1223–8. hacer:10.1126/ciencia.
1182228 IDPM:20203043
5.Sturtevant AH, Novitski E. Las homologías de los elementos cromosómicos en el género Drosophila.
Genética. 1941; 26(5):517–41. IDPM:17247021
6.Bedard K, Krause KH. La familia NOX de NADPH oxidasas generadoras de ROS: fisiología y
fisiopatología. Revisiones fisiológicas. 2007; 87(1):245–313. hacer:10.1152/physrev.00044.2005
IDPM: 17237347
7.Kim SH, Lee WJ. Papel de DUOX en la inflamación intestinal: lecciones del modelo de Drosophila de interacciones
intestino-microbiota. Fronteras en microbiología celular y de infecciones. 2014; 3:116. hacer:10.3389/fcimb.2013.
00116 IDPM:24455491
8.De Deken X, Wang D, Many MC, Costagliola S, Libert F, Vassart G, et al. Clonación de dos cDNA tiroideos humanos que
codifican nuevos miembros de la familia NADPH oxidasa. J Biol Chem. 2000; 275(30):23227–33.
hacer:10.1074/jbc.M000916200 IDPM:10806195
9.Dupuy C, Ohayon R, Valent A, Noel-Hudson MS, Deme D, Virion A. Purificación de una nueva flavoproteína involucrada
en la NADPH oxidasa de la tiroides. Clonación de las cdnas porcinas y humanas. J Biol Chem. 1999; 274(52):37265–9.
IDPM:10601291
10Anh NT, Nishitani M, Harada S, Yamaguchi M, Kamei K. Papel esencial de Duox en la estabilización del ala de
Drosophila. J Biol Chem. 2011; 286(38):33244–51. hacer:10.1074/jbc.M111.263178 IDPM:21808060
11Edens WA, Sharling L, Cheng G, Shapira R, Kinkade JM, Lee T, et al. El entrecruzamiento de tirosina de la matriz
extracelular es catalizado por Duox, una oxidasa/peroxidasa multidominio con homología con la subunidad
gp91phox de oxidasa de fagocitos. J Cell Biol. 2001; 154(4):879–91. hacer:10.1083/jcb.200103132 IDPM: 11514595
12Wong JL, Creton R, Wessel GM. El estallido oxidativo en la fertilización depende de la activación de la oxidasa
dual Udx1. Célula de desarrollo. 2004; 7(6):801–14. hacer:10.1016/j.devcel.2004.10.014 IDPM:15572124
13Littleton JT, Bellen HJ. Análisis genético y fenotípico de trece genes esenciales en el intervalo citológico 22F1-2;
23B1-2 revela nuevos genes necesarios para el desarrollo neuronal en Drosophila. Genética.
1994; 138(1):111–23. IDPM:8001779
14Cook K. Mutaciones de Jim Kennison. En: FlyBase, editor.http://flybase.org/reports/FBrf0206482.
html2008 .
15.Magni G, Orsomando G, Raffaelli N. Propiedades estructurales y funcionales de la NAD quinasa, una enzima clave en la
biosíntesis de NADP. Mini Rev Med Chem. 2006; 6(7):739–46. IDPM:16842123
dieciséis.Brand AH, Perrimon N. Expresión génica dirigida como medio para alterar el destino celular y generar
fenotipos dominantes. Desarrollo. 1993; 118(2):401–15. IDPM:8223268
17Bello BC, Hirth F, Gould AP. Un pulso de la proteína Abdominal-A de Drosophila Hox programa el final de la proliferación
neuronal a través de la apoptosis de los neuroblastos. Neurona. 2003; 37(2):209–19. IDPM:12546817

18Kiger JA Jr., Natzle JE, Kimbrell DA, Paddy MR, Kleinhesselink K, Green MM. Remodelación de tejidos durante la
maduración del ala de Drosophila. Desarrollo Biol. 2007; 301(1):178–91. hacer:10.1016/j.ydbio.2006.08. 011
IDPM:16962574
19Hughes AL. Evolución de las Heme Peroxidasas de Culicidae (Diptera). Psique. 2012; 2012.
20Moussian B. Avances recientes en la comprensión de los mecanismos de diferenciación de la cutícula de insectos.
Insecto Biochem Mol Biol. 2010; 40(5):363–75. hacer:10.1016/j.ibmb.2010.03.003 IDPM:20347980
21Doctor J, Fristrom D, Fristrom JW. La cutícula de la pupa de Drosophila: síntesis bifásica de proteínas de la cutícula de la
pupa in vivo e in vitro en respuesta a la 20-hidroxiecdisona. J Cell Biol. 1985; 101(1):189–200.
IDPM:3891759
22Debeurme F, Picciocchi A, Dagher MC, Grunwald D, Beaumel S, Fieschi F, et al. Regulación de la actividad NADPH
oxidasa en fagocitos: relación entre la unión de FAD/NADPH y el ensamblaje del complejo oxidasa. J Biol
Chem. 2010; 285(43):33197–208. hacer:10.1074/jbc.M110.151555 IDPM:20724480
23Aliverti A, Piubelli L, Zanetti G, Lubberstedt T, Herrmann RG, Curti B. El papel de los residuos de cisteína de la
ferredoxina-NADP+ reductasa de espinaca según lo evaluado por mutagénesis dirigida al sitio. Bioquímica. 1993;
32(25):6374–80. IDPM:8518283
24Nozawa K. Los efectos de las condiciones ambientales en la expresividad de Curly en Drosophila
melanogaster. El Diario Japonés de Genética. 1965; 31(6):163–71.
25Pavelka J, Jindrak L. Mecanismo de la supresión inducida por luz fluorescente del fenotipo Curly en
Drosophila melanogaster. Bioelectromagnetismo. 2001; 22(6):371–83. IDPM:11536279
26Ha EM, Oh CT, Bae YS, Lee WJ. Un papel directo para la oxidasa dual en la inmunidad intestinal de Drosophila.
Ciencia. 2005; 310 (5749): 847–50. hacer:10.1126/ciencia.1117311 IDPM:16272120
27Meitzler JL, Brandman R, Ortiz de Montellano PR. La unión alterada del hemo es responsable del fenotipo de formación
de ampollas asociado con mutaciones en el dominio de peroxidasa de doble oxidasa 1 (DUOX1) de Caenorhabditis
elegans. J Biol Chem. 2010; 285(52):40991–1000. hacer:10.1074/jbc.M110.170902 IDPM: 20947510
28Buchon N, Broderick NA, Chakrabarti S, Lemaitre B. La microbiota invasiva e indígena afecta la actividad de las células
madre intestinales a través de múltiples vías en Drosophila. Genes Dev. 2009; 23(19):2333–44. hacer:
10.1101/gad.1827009 IDPM:19797770
29Kumar S, Molina-Cruz A, Gupta L, Rodrigues J, Barillas-Mury C. Un sistema de peroxidasa/oxidasa dual modula la
inmunidad epitelial del intestino medio en Anopheles gambiae. Ciencia. 2010; 327 (5973): 1644–8. hacer:
10.1126/ciencia.1184008 IDPM:20223948
30Yang X, Smith AA, Williams MS, Pal U. Una red de ditirosina mediada por oxidasa dual y peroxidasa influye en la
persistencia de los patógenos de la enfermedad de Lyme dentro del vector. J Biol Chem. 2014; 289 (18):
12813–22. hacer:10.1074/jbc.M113.538272 IDPM:24662290
31Ni JQ, Liu LP, Binari R, Hardy R, Shim HS, Cavallaro A, et al. Un recurso de Drosophila de líneas transgénicas
de ARNi para neurogenética. Genética. 2009; 182(4):1089–100. hacer:10.1534/genética.109.103630
IDPM:19487563
32.Venken KJ, Schulze KL, Haelterman NA, Pan H, He Y, Evans-Holm M, et al. MiMIC: un recurso de inserción de
transposones altamente versátil para diseñar genes de Drosophila melanogaster. Métodos Nat. 2011; 8
(9):737–43. IDPM:21985007

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OnduladoCodifica la oxidasa dual, que actúa con la

Recibió:28 de agosto de 2015

Aceptado:2 de octubre de 2015

Publicado:20 de noviembre de 2015

Derechos de autor:© 2015 Hurd et al. Este es un artículo de

medio, siempre que se acredite el autor original y la fuente.

contenidos en este manuscrito.

Instituto Médico Howard Hughes. Los patrocinadores no

Genética PLOS | DOI:10.1371/journal.pgen.1005625 20 de noviembre de 2015 1 / 15

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físicamente, durante la formación del ala.

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Expresión condicional de duox y duoxCyK

Generación de uas-duox y uas-duoxCyKpresiones

Generación de la cepa Cysu::mCherry

# 1315 en Mi{MIC}CG5873MI11428(BDSC 56608) [32 ].

Genética PLOS | DOI:10.1371/journal.pgen.1005625 20 de noviembre de 2015 11 / 15

Nombre Genotipo Fuente de referencia

uas-duox y[-]v[-];;attP2-pVALIUM22-duox/TM3 Ser (colonia 12042-1-1M) Este estudio

uas-duoxCyK y[-]v[-];;attP2-pVALIUM22-duox[CyK]/TM3 Ser (colonia 12042-4-1M) Este estudio

ARNi uas-duox ;UASt-dDuoxIR976-1145/CyO Won-Jae Lee

CG6145 ARNi P{KK106577}VIE-260B VDRC (104271/KK)

tuppgal4 y[1]w[*];P{w[+mC] = tubP-GAL4}LL7/TM3, Sb[1] Bdsc (5138)

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Tabla 2. Medio de niacinamida.

Material Volumen Concentración

B12 (Sigma V6629) 500 μl de 14 mg/ml de solución madre 0,028 microgramos/ml

Cloruro de colina (Sigma C7527) 37,5 miligramos 75 mg/ml

Ácido fólico (Sigma F858) 18 miligramos 36 mg/ml

Microscopio de transmisión por electrones

Genética PLOS | DOI:10.1371/journal.pgen.1005625 20 de noviembre de 2015 13 / 15

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