FACULTAD DE CIENCIAS EXACTAS, QUIMICAS Y NATURALES

QUIMICA ANALÍTICA I - (716)

TRABAJO PRACTICO No 3
SENSIBILIDAD
La sensibilidad indica la cantidad o concentración mínima de una sustancia que
se puede identificar con una determinada reacción.
Ese valor mínimo se puede apreciar, ya sea mediante el desarrollo de un color o
una señal en un instrumento de medición.
S= R/C
R: señal de respuesta
C: concentración de la sustancia
Formas de expresar la sensibilidad de una reacción
Fritz Feigl propuso el límite de identificación (LI) como la mínima cantidad que
puede reconocerse en un ensayo en microgramos (µg), sin tener en cuenta el
volumen de solución que se emplea. Es una forma de expresión poco significativa
ya que no hace referencia al volumen.

Recordar que: 1 µg = 10-6g

También se usa como expresión de la sensibilidad el límite de concentración
(CL): es la mínima concentración a la cual un ensayo resulta positivo y se expresa
en g/mL.

CL= masa en gramos/ volumen en mL

 L.I. (en g ) . 10-6 L.I. (en g )

CL = -------------------------- = -----------------------

V (en mL) V (en mL) 106

SEGÚN LA UNIÓN INTERNACIONAL DE QUIMICA, LA SENSIBILIDAD SE EXPRESA COMO:

X [M] Y, donde:

X = Cantidad identificada.

M = una letra que representa la técnica empleada.

Y = volumen de reacción en mL.

M PUEDE SER:

A-PLACA A LA GOTA

B-PAPEL DE FILTRO

C- MICRO TUBO DE ENSAYO

D- MACROTUBO DE ENSAYO

M- MICROSCOPIO

Por ejemplo :

5 (A) 0,03

5 GRAMOS DE SUSTANCIA EN PLACA Y CON UN VOLUMEN DE 0,03 mL

SE HAN ADOPTADO TAMBIÉN VOLÚMENES FIJOS SEGÚN EL SOPORTE, PARA:

A. 0,03 mL

B. 0,03 mL

C. 1 mL
D. 5 mL

E. 0,01 mL

Pregunta de evaluación: ¿Qué indica la sensibilidad de una reacción? ¿Cuáles

son las maneras de expresarla?

……………………………………………………………………………………
EN EL CURSO DE ESTE TRABAJO PRÁCTICO SE ESTUDIARÁN:

A- INFLUENCIA DE VARIABLES QUE CONDICIONAN LA SENSIBILIDAD DE UNA REACCIÓN

1- INFLUENCIA DE LA TÉCNICA EMPLEADA

2- INFLUENCIA DEL pH

3- INFLUENCIA DEL POTENCIAL REDOX

4- INFLUENCIA DE LA TEMPERATURA

B- FORMAS DE INCREMENTAR LASENSIBLIBILAD

1- EXALTACIÓN DE LA REACTIVIDAD
2- CAMBIO DE SOLVENTE
3- FORMACIÓN DE LACAS
4- ENMASCARAMIENTO DE IONES
PARTE PRÁCTICA
1- INFLUENCIA DE LA TECNICA EMPLEADA: COMPARACIÓN DE DISTINTAS
TÉCNICAS:

La sensibilidad varía según el soporte empleado. Las reacciones hechas sobre

papel de filtro son más sensibles que las realizadas en tubo o en placa de toque.
Esto se debe a que en el papel de filtro se dan fenómenos de adsorción con el
analito (si el producto de la reacción es sólido), fijándolo en el sitio donde se
coloca la solución problema, mientras que el solvente difunde sobre el papel. Con
esto se logra un aumento de la concentración y por lo tanto un aumento de la
sensibilidad.
Se debe impregnar primero el papel con el reactivo; una gota de solución
problema reacciona inmediatamente.
Para estudiar la sensibilidad de una reacción se emplean diluciones de una
solución en estudio, de concentración perfectamente conocida.
Estudiaremos la reacción del níquel con dimetilglioxima (DMG) comparando
distintas técnicas.
A.- PREPARACION DE UNA SERIE DE SOLUCIONES SUCESIVAMENTE DILUIDAS 1:10

1) Lave y seque 7 tubos de ensayo.

2) Numérelos.
3) Coloque 5 mL de la solución original, de concentración conocida, en el primer
tubo.
4) Tome 1 mL de la solución original del tubo 1 y páselo al tubo 2 (la pipeta debe
estar limpia y enjuagada con la solución que se mide). Agregue 9 mL de agua y
homogeneice.
5) Repita lo indicado en el punto A-4) tomando 1 mL de solución del tubo 2
pasándolo al tubo 3 (la pipeta debe estar limpia y enjuagada con la solución que
se mide). Agregue 9 mL de agua y homogeneice, y así sucesivamente hasta la
sexta dilución en el tubo 7.
6) Calcule las concentraciones del componente que se estudia, en cada solución
preparada y tabule estos valores.
Reactivos: Solución original de Ni 2+ de 10 mg/mL; solución alcohólica de
dimetilglioxima al 1%; NH3.H2O 1N; solución saturada de dimetilglioxima en
alcohol; NH3.H2O(c) ; dimetilglioxima (s).
TABLA 1- SERIE DE DILUCIONES 1:10 EN TUBO DE ENSAYO

SOLUCION CONCENTRACION EN mg/ mL

ORIGINAL 10
1- DILUCIÓN 1
2- DILUCIÓN 0,1
3- DILUCIÓN 0,01
4- DILUCIÓN 0,001
5-DILUCIÓN 0,0001
6- DILUCIÓN 0,00001

B- OPERACIÓN EN SEMIMICROESCALA:
Se trabaja en tubo de hemólisis. Operamos con volúmenes de 1-2 mL de cada
solución en una serie como la A.

1) Coloque en 7 tubos de hemólisis numerados, 2 mL de cada solución de una

serie como la A (partiendo de una solución original de Ni 2+ de 10 mg/mL).
2) Agregue a cada tubo 5 gotas de solución alcohólica de dimetilglioxima 1 % y
alcalinice con solución de NH3 1 N hasta pH = 8.
3) Caliente los tubos en baño de agua hirviente durante 2 minutos. Retire y deje
enfriar.
4) Observe y tabule los resultados.

La reacción conduce a la formación de un precipitado de color rojo-rosado según

la concentración de níquel en medio ligeramente amoniacal. ( pH: 8).
EJEMPLO
TABLA 2- SERIE DE DILUCIONES EN TUBO DE HEMÓLISIS

SOLUCION Concentración vol. de reacción Cantidad de X en RESULTADO

en mg/mL en mL V (g)
ORIGINAL 10 2 0,02 +
1- DILUCION 1 2 2.10-3 +
2- DILUCION 0,1 2 2.10-4 +
3- DILUCION 0,01 2 2.10-5 +
4 -DILUCION 0,001 2 2.10-6 +
5- DILUCION 0,0001 2 2.10-7 -
6 -DILUCION 0,00001 2 2.10-8 -

X= (2.Cn)/1000
X: g de sustancia en estudio en el volumen tomado
Cn: concentración de la solución.
Para calcular la sensibilidad de la reacción en tubo de hemólisis, observar el último
tubo donde la reacción fue positiva y aplicar la fórmula de LI y de CL, por ejemplo:
Si es la cuarta dilución que dio reacción positiva, entonces
LI = 2.10-6 g = 2 µg
CL= masa en g/ volumen en mL
CL= 2.10-6 g = 10-6 g/mL
2 mL
Esta concentración también se puede expresar de la siguiente manera 1:1000000,
que significa 1g/1000000 mL.
***Observar que el precipitado de dimetilglioximato de níquel tiene tendencia a
ascender por las paredes del tubo. Este trepado se llama creeping y es
característico, ascendiendo sobre la superficie húmeda de un recipiente de vidrio o
de un papel de filtro.

C.- OPERACION SOBRE PAPEL DE FILTRO

1) Impregne el papel de filtro banda azul con solución saturada de dimetilglioxima

en alcohol.
2) Deje secar y corte el papel en bandas de 2 cm de ancho.
3) Coloque una pequeña gota (0,02 mL aproximadamente) con pipeta Pasteur o
capilar de cada solución de Ni2+ preparada según A.
4) Exponga las gotas a la acción de los vapores amoniacales provenientes de NH 3
(c) durante unos segundos.
5) Observe y tabule los resultados.

Observe hasta qué dilución se obtiene resultado positivo y proceda a

expresar los resultados como en el caso anterior.

Pregunta de evaluación: ¿Por qué la sensibilidad de una reacción aumenta

cuando el ensayo se realiza sobre papel de filtro?
Pregunta de evaluación: Al estudiar la sensibilidad de una reacción se observó
resultado positivo hasta la 5 dilución. ¿Cuál es el LI y la CL de la reacción, si la
cantidad de analito en esta dilución es de 4x 10 -3 mg en un ensayo a la gota
(0,03 mL)?
Pregunta de evaluación: La CL de la reacción entre el Ni2+ y DMG es de
1:300000. Expresar la sensibilidad en ppm, y como LI en una reacción a la
gota (0,03mL)
Recordar: para soluciones muy diluidas del analito, ppm (partes por millón) se
expresa en mg/L.

D- OPERACION POR MICROSCOPIA

1) Coloque sobre un portaobjeto gotas de aproximadamente 0,01 mL (con pipeta Pasteur, capilar
o micro-jeringa de 10 L) de cada una de las 7 soluciones de Ni2+preparadas según A.

2) Exponga las gotas a la acción de los vapores amoniacales provenientes del NH3 (c) durante unos
minutos.

3) Introduzca en cada gota un cristalito de dimetilglioxima.

4) Tape el portaobjeto con un vidrio de reloj durante 1 minuto.

5) Observe y tabule los resultados.

Observe hasta que dilución se obtiene resultado positivo y proceda a

expresar los resultados como en el caso anterior.
2- INFLUENCIA DE OTRAS VARIABLES EN LA SENSIBILIDAD DE UNA
REACCION

Reactivos: Solución original de Ni 2+ de 10 mg/mL; solución alcohólica de dimetil-

glioxima al 1%; HCl 1:100; HCl 1:10; solución original de Fe 3+ de 10
mg/mL; solución de SnCl2 al 1 % en HCl 1+1; solución saturada de
NH4SCN; solución de Pb2+ de 1 mg/mL.

A- INFLUENCIA DEL pH

1) Opere como en B-1 por duplicado obteniendo la serie de 7 tubos I y la serie II, de igual número
de tubos.

2) A la serie I agregue HCl 1:100 hasta pH = 4.

3) A la serie II agregue HCl 1:10 hasta pH = 1.

4) Agregue a cada tubo de las dos series 5 gotas de solución alcohólica de dimetil-glioxima al 1%.

5) Caliente los tubos en baño de agua hirviente durante 2 minutos. Retire y deje enfriar.

6) Compare los resultados obtenidos en B-4 con los obtenidos en este ensayo y tabúlelos
conjuntamente.

La formación de precipitado de níquel- dimetilglioxima tiene mayor sensibilidad en

pH levemente amoniacal entre 7,5 y 8. A medida que disminuye el mismo la
sensibilidad también disminuye.
Esto se debe a que al aumentar la concentración de H+, los nitrógenos de la DMG
se protonan utilizando su par de electrones libres, lo que impide que se forme el
precipitado.
Se puede comprobar al trabajar con:
HCl 1: 100, pH: 4 se verá coloración en el primero o segundo tubo, donde la
concentración de níquel es mayor.
HCl 1:10 , pH: 1- no se observará color en ningún tubo.

Pregunta de evaluación: ¿Cómo puede afectar el pH en la sensibilidad de una

reacción? Explicar y ejemplificar para el caso de Ni2+ y Dimetilglioxima, incluyendo
la reacción.
B- INFLUENCIA DEL POTENCIAL REDOX

1) Prepare una serie de 5 soluciones sucesivamente diluidas al 1/10 según A, partiendo de una
solución original de Fe3+ de 10 mg/mL.

2) Coloque 1 ml de la solución original y 1 ml de cada una de las diluciones en 6 tubos de

hemólisis.
3) Agregue a cada tubo 0,1 mL de solución de SnCl2 al 1% en HCl 1+1 (R).

4) Agregue a cada tubo 0,5 mL de solución saturada de NH4SCN (R).

5) Prepare un blanco agregando 1 mL de agua, 0,1 mL de SnCl21% y 0,5 mL de solución saturada de

NH4SCN (R).

6) Observe y tabule los resultados.

REACCIÓN

OBSERVAR QUE:

- Al agregar cloruro estannoso a las diluciones se produce la reducción de hierro

férrico a hierro ferroso.
- A medida que aumenta la relación Sn+2 / Fe+3 hay menos Fe+3 para reaccionar, y
el SCN- no va a reaccionar con el Fe+2 (solo reacciona con el Fe+3).
2 Fe3+ + Sn2+  2 Fe2+ + Sn4+
- A medida que disminuye la concentración de hierro férrico (mayor dilución de la
solución) el color de rojo irá virando al rosa.
- Las sales ferrosas no dan la coloración y la reacción generalmente dará positiva
hasta la tercera dilución.

Pregunta de evaluación: Explique cómo puede afectar el potencial redox en un

ensayo de sensibilidad de reacción. Ejemplificar.
C- INFLUENCIA DE LA TEMPERATURA

1) Prepare 2 tubos de hemólisis y numérelos.

2) Agregue a cada uno, 1 ml de solución de Pb2+ de 1 mg/mL y 1 mL de HCl 1+1(R)

3) Coloque uno de los tubos en un baño de agua hirviente y deje el otro a temperatura ambiente.

4) Observe y registre las señales de ambos tubos.

REACCIÓN:

OBSERVAR QUE:

-La reacción conduce a la formación del precipitado de cloruro de plomo.

-En caliente es soluble. En frío es insoluble, formándose finas agujas brillantes.

Pregunta de evaluación: ¿Es posible que disminuya la sensibilidad de una

reacción por aumento de la temperatura? Ejemplificar.
2- FORMAS DE INCREMENTAR LA SENSIBILIDAD DE UNA REACCIóN

Reactivos: Solución de Co2+ de 10mg/mL. Solución saturada de NH4SCN; etanol;

éter; HCl 1:10; solución de Mg2+ de 10 mg/ml; NaOH 3 M; solución de

P- nitrobenceno-azo-resorcinol (magnesón I) al 0,5% en NaOH 0,25 M y

HCl 3N-

A- CAMBIO DE SOLVENTE

1) Prepare una serie de 5 soluciones sucesivamente diluidas al 1/10 partiendo de una solución
original de Co2+ de 10 mg/mL.

2) Prepare 18 tubos de hemólisis agrupándolos en 3 series de 6 tubos cada una. Enumérelos.

3) Coloque en el primer tubo de cada serie 1 mL de la solución original de Co2+ de 10 mg/mL y en

los 5 tubos restantes de cada serie 1 mL de cada una de las diluciones sucesivas.

4) Agregue a los 18 tubos 1 mL de SnCl2 5% en HCl 1+1.

5) Agregue a los 18 tubos 2 mL de NH4SCN solución saturada (R).

6) Agregue a los 6 tubos de la primera serie 2 mL de agua y agite.

7) Agregue a los 6 tubos de la segunda serie 2 mL de etanol y agite.

8) Agregue a los 6 tubos de la tercera serie 1 mL de HCl 1:10 (R)y 1 ml de éter, agite y deje separar
las fases.

9) Observe y tabule los resultados.

Una sustancia puede disolverse de diferente manera en dos disolventes no

miscibles (no solubles entre sí), así se origina la extracción con disolventes
orgánicos no miscibles con el agua. En algunos casos la sustancia extraída es
más soluble en el disolvente orgánico y se concentra en él.
Con la extracción no solo se produce una concentración física sino que al mismo
tiempo como consecuencia de la variación de desplazamiento del equilibrio, se
consigue que reacciones poco desplazadas en medio acuoso lo sean ampliamente
en otro disolvente. La concentración física y el desplazamiento químico del
equilibrio dan un aumento de la sensibilidad.
1- Una solución acuosa de catión cobalto Co2+ reacciona con tiocianato de
amonio para formar los complejos correspondientes hasta índice de
coordinación 4.

2- Si se agrega etanol que es soluble en agua, se produce un cambio en la

constante dieléctrica del sistema, y aumenta la estabilidad del complejo
formado. Esto se debe a que la interacción de los iones responde a la Ley
de Coulomb :
F = q+ . q-
d2
F = fuerza eléctrica

q+ y q- = carga eléctrica del catión y del anión

d = distancia que separa a los iones

 = constante dieléctrica del solvente

La constante dieléctrica del agua es mayor que la del etanol, por lo cual
si se usa etanol aumenta la fuerza de atracción entre los iones que forman
el complejo.

El complejo está muy disociado en medio acuoso y solo es perceptible el

color azul con concentraciones elevadas de cobalto y tiocianato.
Al agregar etanol se logra un color azul intenso y hay incremento de la
sensibilidad.

3- Si se acidifica la solución con ácido clorhídrico la reacción se hace más

sensible ya que la forma ácida del complejo: H2[Co(SCN)4], es más soluble
en éter o en alcohol que las sales.

4- Si se agrega un pequeño volumen de éter o acetato de etilo, se extrae el

complejo, adquiriendo la fase orgánica un intenso color azul y aumentando
la sensibilidad.

El Sn2+ evita la posible interferencia de Fe3+

Ocurren 5 fenómenos:
1- Cambio de la constante dieléctrica: al aumentar la fuerza de atracción de
los iones, aumenta la concentración del complejo azul.
2- Desplazamiento del equilibrio y estabilización: al extraer la especie
disminuye su concentración en la fase acuosa y todos los equilibrios se
desplazan hacia su formación, aumentado la estabilidad,
3- Concentración de la especie: si el volumen de extracción es menor al de la
fase acuosa y el coeficiente de reparto es favorable, la fase orgánica tendrá
una concentración de cobalto superior a la que había en fase acuosa.
4- Cambio y aumento de color: el color del complejo es más intenso que el de
la fase acuosa si se agrega etanol y se realiza la extracción.
5- Separación: es importante la separación cuando el cobalto se encuentra en
presencia de interferentes no extraíbles.

Pregunta de evaluación: Explicar: ¿Por qué aumenta la sensibilidad de una

reacción al agregar un solvente miscible (soluble) con el agua?
Pregunta de evaluación: Explicar: ¿Por qué aumenta la sensibilidad de una
reacción al realizar una extracción? Ejemplificar.

B.- FORMACION DE LACAS

1) Prepare una serie de 5 soluciones sucesivamente diluidas al 1/10 partiendo de una

solución original de Mg2+ de 10 mg/mL.

2) Prepare 2 series de 6 tubos de hemólisis cada una. Enumérelos.

3) Coloque en el primer tubo de cada serie 2 mL de la solución original de Mg2+ de 10 mg/mL y en
los 5 tubos restantes de cada serie 2 mL de cada una de las diluciones sucesivas.

4) Agregue a los 6 tubos de la primera serie 10 gotas de NaOH 3 M (R) y agite.

5) Agregue a los 6 tubos de la segunda serie 1 gota de HCl 3N (R), 2 gotas de solución de
Magnesón (I) (R) y agite. Luego agregue 10 gotas de NaOH 3 N y agite.

6) Haga un blanco de reactivo para la segunda serie.

Observe y tabule los resultados.

Algunos precipitados poco visibles e incoloros se ven mejor si pueden adsorber algún
producto coloreado orgánico. La adsorción es un fenómeno de atracción electrostática
que es función de la superficie. Esto conduce a la formación de lacas, que se producen
en aquellos precipitados que son coloides y que tienen tendencia a formar geles (retienen
gran cantidad de agua).
Así el hidróxido de magnesio adsorbe el Magnesón.

REACCIONES

Mg+2 + 2 OH- ↔ Mg(OH)2↓ (blanco, Gelatinoso)

A medida que aumenta la dilución es más difícil ver el precipitado poco soluble
pero el precipitado tiene la propiedad de adsorber en su superficie ciertos
colorantes orgánicos dando lugar a la formación de lacas intensamente coloreadas
y así la reacción aumenta la sensibilidad.
El colorante usado es el Magnesón (p-nitrobenceno -azo- resorcinol).
La asociación Mg+2–colorante más la adsorción, modifican la estructura electrónica
del colorante, que presentará diferente color cuanto está libre en la solución que
cuando está adsorbido en la superficie.
Es importante que el fenómeno de adsorción se opere en medio alcalino, con
gotas de solución de hidróxido de sodio.
Magnesón I: sensibilidad de 0,5 ug de Mg+2
Magnesón II: sensibilidad de 0,2 ug de Mg+2
Pregunta de evaluación: Explicar y ejemplificar el aumento de sensibilidad por
formación de lacas.

3- INFLUENCIA DE OTROS COMPONENTES DEL SISTEMA EN LA

SELECTIVIDAD DE UNA REACCIÓN: INMOVILIZACIÓN DE LA
INTERFERENCIA POR ENMASCARAMIENTO

Reactivos: Solución de Co2+ de 1mg/mL; solución de Fe3+ de 1mg/mL; solución de

Sn2+ al 5% en HCl 1+1; solución saturada de NH4SCN; acetato de etilo.

1)Prepare 4 tubos de hemólisis.

2) Agregue a cada uno 1 mL de solución de Co2+ de 1 mg/mL.

3) Agregue al segundo y tercer tubo 0,1 mL de solución de Fe3+ de 1mg/mL.

4) Agregue al tercer tubo 3 mL de solución de Sn2+ al 5%(R) y agite.

5) Agregue al primer tubo 3,1 mL de agua, al segundo tubo 3,0 ml de agua y agite.

6) Agregue al cuarto tubo 3,1 mL de HCl 1:5 en lugar de agua.

7) Agregue a los 4 tubos 1 mL de NH4SCN solución saturada (R)y 1 mL de acetato de etilo.

8) Agite y deje reposar.

9) Tabule e interprete los resultados.

Mediante el Enmascaramiento se evita la interferencia de los iones molestos en
forma sencilla y rápida que aventaja a la clásica separación por precipitación o
extracción.
ESQUEMA DE TRABAJO

1-
Co +2 2- Co +2 3- Co +2 4- Co +2
…………………… Fe+3 Fe+3 HCl 1:5
H20 H20 Sn+2 …………
NH4SCN NH4SCN NH4SCN NH4SCN
ACETATO DE ETILO ACETATO DE ETILO ACETATO DE ETILO ACETATO DE ETILO

EXTRACCIÓN INTERFERENCIA ENMASCARAMIENTO ACIDEZ

REACCIONES QUE TIENEN LUGAR EN CADA TUBO:

1-

SE EXTRAE EN LA FASE DE ACETATO DE ETILO SUPERIOR-

DENSIDAD DEL ACETATO DE ETILO: 0,900 g/mL

2- INTERFERENCIA DEL Fe+3

SE OBSERVA COLORACIÓN ROJO OSCURO, QUE IMPIDE LA APRECIACIÓN DEL COLOR AZUL DEL
PRODUCTO DE INTERÉS.
3- Como el hierro interfiere se lo puede reducir a Fe+2 con Sn2+, y no se obtiene
coloración con sales ferrosas, ya que solo el cobalto reaccionara con tiocianato y
se observará color azul en la fase superior.

2 Fe3+ + Sn2+  2 Fe2+ + Sn4+

Otra manera de inmovilizar interferencias es formando un complejo más estable,

en este caso agregando F -. El complejo [FeF6]3- es incoloro y mucho más estable
que el [Fe(SCN)6]3-.

Fe3+ + 6 F-  [FeF6]3-

4- Al agregar ácido se aprecia en la fase superior color azul muy intenso, mayor
que en el tubo 1, ya que se obtiene la forma ácida del complejo de color azul
intenso. H2[Co(SCN)4]

El color es un factor que rige la perceptibilidad de un compuesto. La sensibilidad

será mayor cuanto más intensa es la coloración del complejo.

Pregunta de evaluación: Explicar 2 maneras de incrementar la selectividad de una

reacción por enmascaramiento. Ejemplificar para el caso de Co2+ con interferencia
de Fe3+.
Pregunta de evaluación: Explicar: ¿Por qué aumenta la sensibilidad de una
reacción al realizar una extracción? Ejemplificar.