Microscopio de Fluorescencia

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Microscopio de fluorescencia

Para comprender el funcionamiento del microscopio de fluorescencia debemos conocer que


existe un :

Fluorosforo que es la parte de una molécula que le imparte la propiedad de fluorescencia.

Fluorocromo que es marcador colorante fluorescente empleado en investigación para crear


contraste en zonas de determinados especímenes.

Estos no se visualizan con luz blanca dado el amplio rango de onda que absorbe son solo
visibles sobre un fondo oscuro.

También debemos saber que existen distintos tipos de fluorescencia, una

Primaria o auto florescencia, fluorocromo intrínsecos. De este modo el organismo emite


fluorescencia de modo natural por ej la clorofila, la flavina, las medusas y algunos hongos

La fluorescencia secundaria seria una muestra marcada con colorantes fluorescentes,


fluorocromos exintrecos

Si la muestra no fluoresce de modo natural se tiñe con un colorante fluorescente


(fluorocromo) el cual se introduce en la estructura de la muestra

Esta sería una fluorescencia artificial, los colorantes más utilizados son la fluoresceína que
emite en la longitud de onda del color verde y la rodamina que emite en la longitud de onda
del color rojo.
La muestra se tiñe con los fluorocromos que serán más afines con cierta parte de la célula por
ejemplo DAPI tiñe los ácidos nucleicos y emite en el rango de longitud d onda del color azul, la
RODAMINA tiñe la actina y la fluoresceína la proteína.

Para poder visualizar la muestra vamos a seleccionar el filtro que dejara pasar la longitud de
onda especifica que queremos ver y la observaremos del color brillante de la longitud de onda
del fluorocromo luego se puede cambiar ese filtro para ver otra longitud de onda, las imagines
se ven de a una según la longitud de onda y luego una computadora que se adiciona al
microscopio de fluorescencia las superpone

Inmunofluorescencia: un fluorocromo acopiado a un anticuerpo que reconoce a una molécula


especifica.

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