Lab 9

PRÁCTICA 9
“BIOQUÍMICA”
METABOLISMO DE CARBOHIDRATOS, AMINOÁCIDOS Y ÚREA
INTEGRANTES:
❖ Espinoza Sacha
Stephany Mariela
❖ Sanchez Ccorahua
Joe Wilians
❖ Huamani Barrios
Melany Esthefany
DEGRADACIÓN DE CARBOHIDRATOS
Agar HIERRO KLIGLER
❑ OBJETIVO: Determinar si el microorganismo

es capaz de fermentar la glucosa y/o lactosa,
liberación de H2S.
❑ SUSTRATO: lactosa y glucosa.
❑ VÍA: Fermentativa.
❑ PRODUCTOS: Ácidos orgánicos y CO2.
❑ INDICADOR: Rojo de Fenol .
❑ INOCULACIÓN= Inoculación por punción sin
tocar fondo y estría recta sobre pico de
flauta.
❑ INCUBACIÓN= 37°C/ 24 h
Medio hierro de Kligler=fermentación glucosa y/o lactosa- β-GALACTOSIDASA

E. coli Proteus spp. Salmonella Shiguella spp. Pseudomona Bacillus Klebsiella
typhimurium s aeruginosa cereus pneumoniae
Glucosa + + + + - + +
Lactosa + - - - - - +
H2S - + + - - - -
Gas + - +/- - - - +
ASIMILACIÓN DE CITRATO
Citrato DE SIMMONS
Este ensayo determina la capacidad de un

microorganismo utilizar citrato como única fuente de
carbono.
❑ MEDIO: Únicas fuentes de carbono= citrato (citrato

permeasa/liasa) y CO2 y fuentes de nitrógeno
inorgánica: N2 y/o NH4+ (Kosher o Simmons)
❑ OBJETIVO: Determinar si el microorganismo es capaz
de emplear el citrato (citrato permeasa) como única
fuente de carbono.
❑ SUSTRATO: Fuente de C:Citrato de sodio. Fuente de
N: sulfato férrico amoniacal
❑ INOCULACIÓN: Estría ondulada cerrada en pico de
flauta
❑ INCUBACIÓN: 37°C por 48 +/- 2 h
❑ INDICADOR: Azul de bromotimolVerde= neutro, Azul=
alcalino= metabolismo de citrato= producción de
carbonatos y bicarbonatos alcalinos = prueba positiva
Reacción - + - - - + +
DEGRADACIÓN DE AMINOÁCIDOS
DESCARBOXILACIÓN DE LA LISINA; ( MEDIO LIA)
❑ OBJETIVO: Determinar si el microorganismo posee

la lisina descarboxilasa o desaminasa y producción
de H2S
❑ SUSTRATO: Lisina-Glucosa
❑ PRODUCTOS: Aminas biógenas(cadaverina)/
CO2/NH3
❑ INOCULACIÓN: Estría ondulada cerrada en pico de
flauta
❑ INCUBACIÓN: 37°C por 24 h
❑ INDICADOR: Purpura de bromocresol
▪ Purpura= alcalino=descarboxilación de la lisina
(producción de cadaverina-alcalina)LDC
▪ Rojo= desaminación de la lisina= producción de
ácido cetocarbónico=> Complejo con Fe LDA
▪ Amarillo= ácido= fermentación de glucosa/ no
descarboxilación de lisina
Descarboxilación de + + + - - - -
lisina
Sulfihidrico - - + - - - -
DEGRADACIÓN DE AMINOÁCIDOS
INOCULACIÓN= Inoculación por punción (picadura)
MEDIO SIM INCUBACIÓN= 37°C/ 24 h
Producción de Sulfhídrico (H2S) Producción de Indol Evaluación de la Movilidad

❑ FeSO4+H2S => FeS(precipitado ❑ Presencia de triptofanasa ❑ Móvil(+): crecimiento disperso
negro) +H2SO4 ❑ Adicionar reactivo de Erlich/Kovac fuera de la picadura
❑ Medio reductor= tiosulfato de sodio ❑ Inmóvil(-): crecimiento sólo en la
❑ Medio neutro-alcalino= presencia
▪ Positivo (+) anillo color
de amonio rosa picadura
▪ Positivo (+) precipitado ▪ Negativo (-) color
negro amarillo
▪ Negativo (-) color
amarillo
Sulfihidrico - + + - - - -
Indol + - - - - - -
Movilidad + + + - - + -
REDUCCIÓN DE NITRATOS Y NITRITOS
REDUCCIÓN DE NITRATOS Y NITRITOS:
Algunos microorganismos utilizan el nitrato en una vía alternativa como fuente de energía, reduciéndolo a nitrito o a
nitrógeno libre. Esta propiedad es una característica importante en la diferenciación de muchos grupos bacterianos.
La presencia de nitrito en el medio se demuestra añadiendo alfa – naftilamina y ácido sulfanílico, con la formación
de un compuesto rojo: el parasulfobencenoazo – alfa – naftilamina.
N0 3 - → NO 2 - → NO → N 2O → N 2
MEDIO: Caldo nitratos Nitrato nitrito ´óxido óxido Nitrógeno
SUSTRATO: Nitrato de sodio nítrico nitroso molecular
ENZIMA: Nitrato reductasa/nitrito reductasa
PRODUCTO: Nitritos
INOCULACIÓN: 2 asadas de una suspensión del cultivo puro del
microorganismo que se desee identificar.
INCUBACIÓN: 37 ° C, 24 h
REVELADOR: Adicionar 4 gotas de reactivo de Griess A y Griess B
INTERPRETACIÓN: + Color rojo
- Ausencia de color indica:
1) Nitratos no fueron reducidos
2) Nitratos reducidos a productos diferentes al nitrito
3) Adicionar Zn para reducir nitratos a nitritos,
si aparece coloración roja se confirma que la
reacción es negativa
Nitrato + + + + + + +
gas - - - - - - -
PRUEBA DE LA UREASA
CALDO UREA:
❑ MEDIO: Medio Urea (Glucosa Christensen/Sacarosa Surraco)
❑ OBJETIVO: Determinar si el microorganismo posee la enzima
ureasa-utiliza la urea como fuente de N
❑ SUSTRATO: Utilización de la urea como fuente de N.
❑ INOCULACIÓN: 2 asadas de una suspensión del cultivo puro
del microorganismo que se desee identificar.
❑ INCUBACIÓN: 37 °C por 24-48 h
❑ REVELADOR: Rojo de fenol
▪ Rojo-rosa= alcalino= hidrolisis de urea= libera NH3
▪ Amarillo= ácido=utiliza sacarosa en medio Surraco
▪ o glucosa en Christensen
❑ INTERPRETACIÓN:
Reacción - + - - - - +
❖ https://www.britanialab.com/back/public/upload/productos/upl_60706c3393e5
1.pdf.
❖ Adriana Callicó, Bárbara Cedré, Sergio Sifontes, Vismar Torres, Yadira Pino, Ana
H. Callís, Sara C. Esnard.(2004) Caracterización fenotípica y serológica de
BIBLIOGRAFÍA
aislamientos clínicos de Pseudomonas aeruginosa. Centro de
Investigación-Producción de Vacunas y Sueros. Ciudad de La Habana. Cuba.
❖ MacFaddin, J. (2003). Pruebas Bioquímicas para la identificación de Bacterias
de Importancia Clínica . Buenos Aires: Editorial Médica Panamericana S.A.
❖ Irasema Pérez Portuondo, Teresa Orberá Ratón y José L. Tamayo Núñez (2011)
Aislamiento e identificación de Bacillus cereus a partir de dos variantes de arroz
comercial (Oryza sativa L.).Centro de Estudios de Biotecnología Industrial.
Facultad de Ciencias Naturales, Universidad de Oriente, Patricio Lumumba,
Cuba.
❖ Becton,Dickinson and Company(2014).BBL Kligler Iron Agar
Slants.PROCEDIMIENTOS DE CONTROL DE CALIDAD.Recuperado
de:https://www.bd.com/resource.aspx?IDX=22736

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❑ OBJETIVO: Determinar si el microorganismo

Medio hierro de Kligler=fermentación glucosa y/o lactosa- β-GALACTOSIDASA

Este ensayo determina la capacidad de un

❑ MEDIO: Únicas fuentes de carbono= citrato (citrato

❑ OBJETIVO: Determinar si el microorganismo posee

Producción de Sulfhídrico (H2S) Producción de Indol Evaluación de la Movilidad

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