Traducción

dependiente de CAP
Regulación de la traducción
Etapas de la transcripción

Iniciación Elongación Terminación

Inicio de la síntesis de proteínas
 Inicia por alguno de dos distintos mecanismos:
 1. Traducción dependiente de CAP . En éste caso, el
ribosoma se une a la estructura CAP en el extremo 5’
terminal del mRNA)
 2. Dependiente de IRES ( del inglés Internal Ribosome
Entry Site). En éste caso el ribosoma se une a una región
interna del mRNA.
Estructura del RNAm y características

 Cadena de ribonucleótidos que transfiere la información contenida en el ADN

del núcleo al ribosoma para la síntesis de las proteínas.
 Posee una estructura monocatenaria y generalmente es lineal.
 Pueden ser policistrónicos en (codifican para más de una proteína) o
monocistrónicos en eucariotas( codifican para una proteína).
Estructura del RNAm
1. Contienen en su extremo 5’ terminal una guanina metilada o estructura cap
(caperuza 5’), sitio en donde se une el ribosoma.
2. Contiene una región entre la estructura CAP y el codón de inicio (AUG) y se
denomina región no traducida (RNT) 5’.
3. Codón de inicio AUG
4. Marco de lectura abierto, longitud específica
5. Codón de paro: UAA, UAG o UGA.
6. Región No Traducida 3’ (RNT 3’)
7. Cola de PoliA, o varias veces Adenina.
 De Zephyris - English Wikipedia,
CC BY-SA 3.0,
https://commons.wikimedia.org
/w/index.php?curid=1379696
 Cistrón: porción
de molécula del
cromosoma
bacteriano que
codifica la síntesis
de polipéptidos y
que pueden
codificar para la
síntesis de varias
enzimas que
actúan en una
misma vía
metabólica.
Características de los IRES
¿Qué es un IRES?
 IRES: Secuencia de RNA con una estructura secundaria compleja, localizada en
la región no traducida (RNT) 5’ de algunos mRNA.

 Secuencia nucleotídica que se encuentra en el extremo 5´UTR (untranslated

region o región no traducida) del mRNA y que permite la iniciación de la síntesis
proteica.

 IRES está tipicamente identificado por la inserción de mRNA en la region 5′ UTR,

entre dos cistrones de un ARNm bicistronico (Figura 1).
 Características de los IRES virales
 Los IRES fueron inicialmente identificados en genomas de virus de RNA de cadena
positiva. Ahora se ha confirmado su presencia en algunos RNAm celulares.
 Los IRES presentes en RNAm viral, presentan una estructura secundaria y terciaria
denominadas de tallo y burbuja.
 Se localizan en la región RNT 5’.
 Son usualmente largas
 Poseen múltiples codones AUG, río arriba del codón de inicio.
N. Sonenberg, N. Siddiqui, in Encyclopedia
of Cell Biology, 2016
 Figure 1. Schematic representation of
the bicistronic construct assay. (a and
b) In mRNAs transcribed from bicistronic
constructs, the first cistron is translated
by a cap-dependent scanning
mechanism while translation of the
second cistron depends on the
presence of IRES in the intercistronic
spacer. (c) Ribosome recruitment by
IRES is independent of the first cistron
expression. A 5′-UTR sequence is
qualified as IRES if it significantly
increases the Cistron-2/Cistron-1
expression ratio after insertion in the
construct. For simplicity, the diagram
does not show the 60S ribosomal
subunits, eIFs and ITAFs, which
participate in these processes.
¿Cuándo se expresan los IRES?

 Los RNAm que contienen IRES, se expresan durante

algunos estadios de crecimiento y muerte celular,
infecciones virales, estrés celular, etc.
 La traducción dependiente de IRES de algunos RNAm
representa una estrategia a prueba de fallas que
permite asegurar la sobrevivencia celular, o bien, la
muerte celular por apoptosis.
Traducción dependiente de CAP
CONOCIMIENTOS PRELIMINARES
-FACTORES DE INICIO
Factores de inicio de la traducción
en eucariotas (eIFs)
 Los eIFs son proteínas celulares con solubles distintas
funciones durante la síntesis de proteínas.
 Entre sus funciones está: reconocer a CAP y dirigir la
unión del ribosoma al RNAm.
 Nota: Cuando la unión del ribosoma sucede en la
vecindad del codón de inicio se le conoce como
traducción dependiente de IRES.
Factores de iniciación: Procariotas
y Eucariotas
Función: Promueven el ensamblaje del complejo de iniciación

FASES PROCARIOTAS EUCARIOTAS

INICIACIÓN IF-1, IF-2, IF-3 elF1, elF2, elF3, elF4A,
elF4B, elF4E, elF4F, elF5,
elF6, GEF.

ELONGACIÓN EF-Tu, EF-Ts, EF-G eEF-1a, eEF-1b, eEF-2

TERMINACIÓN RF-1, RF-2 y RF-3 eRF-1, eRF-3

Factores de iniciación: Procariotas
y Eucariotas, funciones.
Funciones de los factores de iniciación en Eucariotas
Traducción dependiente de CAP
Traducción dependiente de CAP

 También se le conoce como canónico o de

barrido del ribosoma (ribosome scanning).
 Consiste en el método por el cuál se sintetizan
comúnmente las proteínas celulares.
 En la mayoría de los RNAm eucariotas la unión
al ribosoma ocurre mediante CAP y mediante
eIF4F.
Traducción dependiente de
Cap, 3 pasos:

 1. Se forma el complejo de pre-iniciación (subunidad 40S unida al eIF2-GTP-

Met-tRNA y el eIF3) se une al complejo de unión que está unido a Cap
(eIF4F) y que está presente en el RNA que será traducido.
 2. El complejo de preiniciación con la ayuda del eIF1A y la hidrólisis de ATP,
avanza sobre el RNA hasta alcanzar el codón de inicio AUG.
 3.- El complejo de preiniciación reconoce al codón AUG, que en general es
el primero que encuentra, los eIFs se liberan del complejo y la subunidad
ribosomal 60 S se une a la 40 S para formar al complejo ribosomal 80 S. La
unión de las subunidades es catalizada por el factor de iniciación eIF5B.
 eIF4E, interacciona directamente con cap

eIF4G, eIF4E y eIF4A actúan como una

plataforma para interactuar con el
complejo de preiniciación

eIF3 es el puente de interacción entre el

complejo de preiniciación y el eIF4G

eIF1A permite el avance del complejo de preiniciación en

dirección 5' a 3’. El movimiento requiere hidrólisis de ATP.
Los eIF1A, eIF2-GTP y eIF5 participan en reconocer el codón de inicio.
eIF5 unido a IF2, induce la hidrolisis de ATP, dando
como resultado la formación de un IF2 unido a ADP

Gracias a la hidrólisis del GTP unido a eIF2 y con la

participación de eIF5 se regula la liberación de los
factores del complejo de preiniciación.

Ocurre la unión de la subunidad 60S con 40S

mediante hidrólisis del GTP unido al eIF5B

Como resultado se forma

el complejo para inicio
de la traducción 80S
Traducción
Metabolismo de las proteínas
INTRODUCCIÓN

 Tal y como ocurre con la síntesis de ADN y ARN, durante la síntesis

de proteínas ocurren las fases de inicio, elongación y terminación.
 Adicionalmente, en la síntesis de proteínas ocurren dos procesos
adicionales:
 1) activación de precursores previo a la síntesis, y
 2) maduración postsintética del polímero completo.
Fase 1. Activación de los
áminoácidos
 La síntesis debe cumplir dos requerimientos
 1) El grupo carboxilo de cada aminoácido debe ser activado para
facilitar la formación del enlace peptídico.
 2) Se tiene que establecer una relación entre cada nuevo
aminoácido y la información contenida en el mRNA

 Estos dos requerimientos se cumplen gracias a la unión del

aminoácido al tRNA de la primera etapa de la síntesis de proteínas.
 La unión del aminoácido correcto al tRNA es determinante. Está
reacción tiene lugar el el citosol y no en los ribosomas.
Fase 1. Activación de los
áminoácidos
 Cada uno de los 20 aminoácidos se une mediante enlace
covalente a un tRNA en esta etapa.
 En este proceso se consume ATP y se emplean enzimas activadoras
dependientes de Mg2+ (las aminoacil-tRNA sintetasas).

 Se dice que los tRNA que están unidos a un aminoácido están

cargados.
Especificidad en el proceso

 Proceso específico:
 El aminoácido correspondiente es unido a su tRNA por la
aminoacil-tRNA sintetasa.
 Es decir: Hay una aminoacil-tRNA sintetasa por cada
aminoácido.

 El proceso demanda energía:

 En el proceso se gasta un ATP.
Activación de los aminoácidos. Caso específico
de Valina
El proceso demanda ATP

 1. El aminoácido y el ATP se
unen a la enzima.
 2. El ATP pierde dos
aminoacil-
fosfatos, el AMP se une con adenilato
el aminoácido. (aminoacil-AMP),

 3. El tRNA se une a la
enzima, el AMP es liberado.
 4. El tRNA se une al
aminoácido (queda
formado el complejo).
 5. El tRNA se libera ya
cargado y la enzima
vuelve a su estado natural. Aminoacilación
En resumen:

 La enzima une a su aminoácido correspondiente y al ATP.

 Ocurre la reacción y se forma aminoacil-adenilato (aminoacil-
AMP), liberando una molécula de pirofosfato inorgánico (PPi).
 Este complejo que se formo se une al tRNA (el aminoácido se
transfiere desde el complejo aminoacil-AMP a un grupo hidroxilo
(ya sea 2' o 3') del último nucleótido (A76, en el extremo 3') del
ARNt.

Adenosín monofosfato (AMP)

Pasos de la Acoplamiento covalente entre el grupo 5
fosfato del ATP y el extremo carboxilo del
aminoacilación aminoácido.

El aminoacil
RNAt sintetasa
(aaRS) utiliza la energía
generada por la
hidrólisis de ATP
para activar el
aminoácido,
formando el
aminoacil-AMP.

Adenosín monofosfato (AMP)

Reacción:
1. aminoácido + ATP → aminoacil-AMP + PPi
2.aminoacil-AMP + ARNt → aminoacil-ARNt + AMP

Reacción total:
aminoácido + ATP + ARNt → aminoacil-ARNt + AMP + PPi
tRNA cargados
Componentes requeridos en la primer fase de la
síntesis de proteínas de Escherichia coli.
Fase de inicio
Reconocimiento entre el mRNA y el ribosoma
 El reconocimiento se da por una secuencia conceso del mRNA
característica.
A) En Procariontes es la Secuencia Shine-Dalgarno (AGGAGG) que es
complementaria a una zona del 3' del ARN ribosomal 16S llamada
secuencia anti-Shine-Dalgarno (UCCUCC).
 La interacción posibilita la unión del ribosoma al extremo 5’ del
ribosoma. Secuencia de Kozak

B) En Eucariontes es mediante la secuencia de Kozak.

Descripta por Marilyn Kozak como 5‘ ACCAUGG 3‘
facilita el reconocimiento de la secuencia de iniciación
(AUG) durante el proceso de traducción.

El ARN ribosomal (o ribosómico) 16S (o gen 16, o 16S rRNA) es un componente de la subunidad
30S de los ribosomas procariontes.
 Estructura del ARN
1. Región CAP: caperuza o casquete, 7-
metilguanosina trifosfato. Esta en el extremo
5’. Mantiene la estabilidad, fundamental
en el proceso de traducción.
2. Cola de Poli A. Se ubica en la región 3’.
Protege de la degradación, aumenta su
vida media en el citosol.
3. Región concenso: a) Procariotas: Shine-
Dalgarno, b) Eucariotas: Kozak.
Secuencia Shine-Dalgarno
es una secuencia de ARN Secuencia de Kozak,
mensajero propia de los Es una secuencia que
transcritos de procariotas. se encuentra en la
Ubicación: se ubica 6 o 7 mayoría de los ARNm
nucleótidos antes del de eucariotas.
codón de inicio de la Secuencia:
traducción. 5’ GCCRCCAUGG 3’
Función: regula la iniciación R= A o G.
de la traducción (fase inicial AUG=codón de inicio
de reconocimiento al
ribosoma)
Fase 2. Inicio
 1. El mRNA que porta el mensaje del polipéptido que se
va a sintetizar se une a la subunidad menor del
ribosoma y al aminoacil-tRNA iniciador.
 2. La subnidad mayor se une al complejo para iniciar.
 El aminoacil-tRNA iniciador se une al codón UAG del
mRNA (el mensajero), que es el codón de inicio del
polipéptido.
 La reacción requiere GTP que es proporcionado por
proteínas citosólicas denominadas: factores de inicio.

El guanosín trifosfato (GTP, del inglés guanosine triphosphate), también conocido

como guanosina-5'-trifosfato, se emplea en el metabolismo celular junto al ATP.
Ribosomas
 Composición: ARN ribosómico y proteínas
 Ubicación: Citoplasma, mitocondrias, retículo endoplasmático, cloroplastos.

 Procariotas: coeficiente de sedimentación de 70S (svedgers). Contiene 66%

de ARN. Tiene dos subunidades:
 Subunidad mayor ARNr 5S y 23 S, 31 proteínas, coeficiente de sedimentación 60S.
 Subunidad menor ARNr 18 S, 33 proteínas, coeficiente de sedimentación 30S).
 Eucariotas: Coeficiente de sedimentación 80S.
 Subunidad mayor: ARNr 5 S, 28 S y 5,8 S y 49 proteínas.
 Subunidad menor: ARNr 18S y 33 proteínas.
 Mitocondrias. Son parte de a maquinaría para síntesis de proteínas que tienen
las mitocondrias.
 ARNr : 12S y 16S.

Un svedberg, unidad para medir el coeficiente de sedimentación, equivale a 10-13 segundos.

Sitios del ribosoma: A, P y E

 Durante el proceso de traducción:

 Sitio A: Sirve de entrada a nuevos tARN cargados.
 Sitio P: Es el sitio ocupado por el ARNt en turno y
cargado.
 Sitio E: Salida de los tARN después de haber dejado los
aminoácidos.
Fase 2. Inicio, por pasos
 Los factores de iniciación: elF1, elF2, elF3 (factores en eucariotas) se
unen a la subunidad pequeña del ribosoma.
 1. La subunidad menor se une al tRNA que lleva al aminoácido
metionina.
 2. El complejo se une al extremo CAP, extremo 5’ del ARNm; y
busca en la secuencia hasta hallar el codón AUG (codón de inicio).
 3. Al encontrar el codón AUG se ensambla la subunidad mayor y los
factores de iniciación se liberan.
 4. El tRNA iniciador se coloca en el sitio P, y con ello inicia la
traducción.

https://youtu.be/YoyFpumWtHo
Etapa iniciación en eucariotas
La importancia de eIF4E
 El factor de inicio de la traducción eIF4E reconoce a la estructura 5’
CAP (7-metilguanosintrifosfato, m7GpppN, donde N es cualquier
nucleótido) a través del extremo 5’ de RNAm.
 En eucariotas más del 95% de todas las proteínas se inician
involucrando a CAP.
 Mediante la regulación de eIF4E, la célula mantiene niveles óptimos
de crecimiento y división celular, y responde a estímulos externos y
señales de desarroll
 El factor de eIF4E también es blanco de regulación por infecciones
virales y por la vía de microRNAs.
Factores de iniciación: Procariotas
y Eucariotas
Función: Promueven el ensamblaje del complejo de iniciación

FASES PROCARIOTAS EUCARIOTAS

INICIACIÓN IF-1, IF-2, IF-3 elF1, elF2, elF3, elF4A,
elF4B, elF4E, elF4F, elF5,
elF6, GEF.

ELONGACIÓN EF-Tu, EF-Ts, EF-G eEF-1a, eEF-1b, eEF-2

TERMINACIÓN RF-1, RF-2 y RF-3 eRF-1, eRF-3

Fase de iniciación en Procariotas
Fase de inicio por etapas:
Paso 1
 1) La subunidad ribosómica 30S se une a los factores de inicio IF-1, e IF-3.
 2) El mRNA se une a la subunidad menor de 30S.
 3) El iniciador 5’ AUG es guiado hasta su posición correcta por la secuencia
Shine-Dalgarno (nombre dado por sus descubridores John Shine y Lynn
Dalgarno).
tRNA específico para el inicio

 Aunque solo existe un codón para metionina, todos los

organismos contienen dos tRNA para Metionina.
 1) Uno de los tRNA se emplea para el codón de inicio AUG.
 2) y el otro para codificar un residuo de metionina en una
posición interna de un polipéptido.
 Se designan como tRNAfMet (inicial) y tRNAMet (posición
interna).
 El residuo aminoácido incorporado en el codón de inicio en
N-formilmetionina (f-Met).
 Lega al ribosoma como N-formilmetionina tRNAfMet (fMet-tRNAfMet).
Iniciación de la transcripción

 1) El codón de inicio Met – tRNAMet se une a la subunidad

pequeña del ribosoma y forma el complejo de preiniciación 43S.
 2) El complejo 43S se une a un mRNA en una región 5’ y localiza el
codón de iniciación para formar el complejo preiniciador 48S.
 3) La subunidad grande ribosomal se adiciona para generar un
ribosoma competente capaz de proceder con la elongación de la
transcripción.
Fase de inicio por etapas:
Paso 2
 El IF2 que esta unido al GTP y el fMet-tRNAfMet, se unen al complejo
formado por la subunidad ribosómica 30S, el IF-3 y el mRNA.
 El anticodón del tRNA se aparea correctamente con el codón de
inicio del mRNA.
Fase de inicio por etapas:
Paso 3
 El gran complejo que se ha formado se une a la subunidad 50S.
 Al mismo tiempo, el GTP unido al IF-2 se hidroliza a GDP+Pi, los cuales se
desprenden del complejo.
 Los tres factores de iniciación (IF-1, IF-2 y IF-3 abandonan el ribosoma.
 El complejo queda correctamente unido al sitio P, e inicia la
traducción.
ELONGACIÓN
TERCERA FASE DE LA SÍNTESIS DE PROTEÍNAS
Requisitos

 1. El complejo formado entre el aminoacil-tRNA, mRNA y el

ribosoma.
 2. Los demás aminocil-tRNA
 3. Un conjunto de tres proteínas citosólicas solubles denominadas
factores de elongación.
 Procariontes: EF-T-Ts y EF-Tu), EF-G.
 Eucariontes: eEF-1, eF1-1, eF1-2. (eEF-1a, eEF-1b, eEF-2).
 4. GTP, para añadir cada residuo de aminoácido
Elongación
Primer paso: unión de un aminoacil-tRNA
entrante
 1. Se forma un complejo entre el Factor de
elongación EF-Tu y el GTP.
 2. Se forma un siguiente complejo entre el
aminoacil-tRNA y el EF-Tu-GTP.
 Resultado: Aminoacil-tRNA-EF-Tu-GTP.
 El Aminoacil-tRNA-EF-Tu-GTP se une al sitio A.
 El GTP se hidroliza y se libera un complejo EF-
Tu-GDP del ribosoma.
 El complejo EF-Tu-GTP se regenera y se
reinicia el ciclo.
Elongación
Segundo paso: formación de un
enlace peptídico

 Se forma un enlace peptídico entre los

dos aminoácidos unidos mediante sus
respecivos tRNA a los sitios A y P del
ribosoma.
 El enlace peptídico ocurre por la
transferencia del grupo N-formilmetionil
iniciador desde su tRNA del grupo
amino del segundo aminoácido (que
ahora está en el sitio A).
 La reacción produce un dipeptidil-tRNA
en el sitio A. Mientras el tRNAfMet
permanece “desacilado” en el sitio P.
Elongación
Tercer paso: Translocación
 El ribosoma se desplaza un codón
hacia el extemo 3’ del mRNA.
 Este movimiento desplaza al
dipeptidil-tRNA desde el sitio A al
Sitio P; y desplaza al tRNA
desacilado del sitio P al sitio E de
donde el tRNA es liberado al
citosol.
 El tercer codón ha llegado al sitio A
y el segundo codón al sitio P.
 Este movimiento requiere se
energía y la participación de EF-G
 Terminación: requiere de
una señal específica
 La elongación continúa hasta que el ribosoma
añade el último aminoácido codificado por el
mRNA, hasta que aparece uno de los tres codones
de terminación del mRNA: UAA, UAG y UGA.
 Las mutaciones en el anticodon del tRNA y que
causan la inserción de un aminoácido en un codón
de terminación son deletéreas para la célula.
 En bacterias participan tres factores de terminación:
las proteínas RF-1, RF-2 y RF-3 que contribuyen a la
hidrólisis del enlace peptidil-tRNA terminal.
 El mRNA y tRNA abandonan en ribosoma.
 El ribosoma 70S se disocia en sus dos subunidades:
30S y 50S. Queda lista para iniciar de nuevo.
 RF-1 y RF-2 se unen de acuerdo al codón que este
presente.
Factores de iniciación: Procariotas
y Eucariotas
Función: Promueven el ensamblaje del complejo de iniciación

FASES PROCARIOTAS EUCARIOTAS

INICIACIÓN F1-1, F1-2, F1-3 elF1, elF2, elF3, elF4A,
elF4B, elF4E, elF4F, elF5,
elF6, GEF.

ELONGACIÓN EF-Tu, EF-Ts, EF-G eEF-1a, eEF-1b, eEF-2

TERMINACIÓN RF-1, RF-2 y RF-3 eRF-1, eRF-3

Biosíntesis de las proteínas en Procariotas y Eucariotas
El proceso de traducción
REGULACIÓN POR IF4E, EVIDENCIA RECIENTE
Etapas de la traducción

Iniciación Elongación Terminación Reciclamiento

 En traducción en Eucariontes regulada por eIF4E el proceso se ha

dividido en cuatro etapas iniciación, elongación, terminación y
reciclamiento.
 Cada etapa es catalizada por: factores de iniciación, factores de
elongación y factores de terminación.
Etapa de iniciación

 De acuerdo a un estudio más reciente (Martínez-Silva & Dinkova

2010), se requieren hasta 12 factores de inicio.
 El primer paso es la formación del complejo de proteínas sobre el
RNAm. El 5’CAP es reconocido por el factor 4E (eIF4E) unido a eIF4G
(proteína de anclaje).
 El factor eIF4G recluta al eIF4A, una helicasa dependiente de ATP
tipo DEAD que facilita el desenrollamiento de estructuras
secundarias en el RNA.
 INICIO
 El complejo formado por los factores eIF4E, eIF4G
y eIF4A es conocido como eIF4F. Una vez unido
eIF4F al 5’ CAP del mRNA, se recluta eIF4B.
 El factor eIF4G recluta a la proteína de unión a
poly(A) (PABP, siglas en inglés), promoviendo la
circularización del mRNA, protege al transcrito
de la acción de nucleasas y facilita el posterior
reciclaje de los componentes de la maquinaria
de traducción.
 El complejo multifactor (eIF5, eIF1 y eIF1A) y la
subunidad ribosomal 40S, permiten la formación
del complejo 48S que encuentra el codón de
inicio.
 Ocurre el reconocimiento de Met-tRNAi met hacia
el codón de inicio AUG.
Elongación
 Durante el proceso se mantiene el
marco de lectura.
 Actúan tres factores de elongación:
eEF1A, eEF1B y eEF2.
 El factor eEF1A, se une a GTP y ayuda a
cargar los aa-tRNAs correctos al
ribosoma, eEF1B necesario para el
intercambio de GDP por GTP en eEF1A,
y eEF2, el cual mediante hidrólisis de
GTP promueve la translocación del
ribosoma exactamente tres nucleótidos
sobre el mRNA.
Terminación

 La terminación de la traducción
eucarionte es mediada por el
factor de liberación eRF1, el cual se
une al ribosoma en lugar del tRNA
para reconocer cualquiera de los
tres codones de paro (UAA, UAG o
UGA).
 El factor, eRF3 unido a GTP
promueve la liberación de eRF1. El
evento requiere hidrólisis de GTP.
Reciclamiento
 Después de la terminación de la síntesis de proteínas y la liberación
de la cadena polipeptídica, el ribosoma queda con el sitio A vacío
y un tRNA desacilado en el sitio P, este es reconocido como
complejo de post-terminación (post-TC).
 Para iniciar una nueva vuelta, el complejo se disocia para permitir
la unión de la subunidad ribosomal 40S con los factores de inicio.