PRÁCTICA 3 y 4 BQ Micro

PRÁCTICA # 3
EFECTO DE LA CALIDAD DE LOS NUTRIENTES SOBRE EL CRECIMIENTO

MICROBIANO
OBJETIVO: Determinar la variación del crecimiento de un microorganismo

conforme se desarrolla en medios de cultivo diferentes variando la fuente de
carbono.
INTRODUCCIÓN:
La velocidad de crecimiento de un microorganismo puede variar mucho según la
complejidad del medio de cultivo, incluso en un exceso de todos los componentes
del medio. En el caso por ejemplo de Salmonella typhimurium puede crecer en un
medio simple que contenga una fuente de carbono y energía (lisina o glucosa) y
una mezcla de sales inorgánicas que proporcionen el N, P, S y los elementos
vestigiales más necesarios. Algunas fuentes de carbono sencillas permiten una
velocidad de crecimiento mucho mayor que otras, lo cual refleja las posibilidades
de cada compuesto a la hora de proporcionar energía para las reacciones
celulares y metabolitos carbonados para el crecimiento.
En el laboratorio se suele utilizar este método de manipular los componentes del
medio de cultivo proporcionándoles las condiciones más adecuadas para su
desarrollo, estos requerimientos varían de un organismo a otro, pero en general
los requisitos básicos para que ocurra la multiplicación celular incluyen: un medio
que contenga los nutrientes indispensables en cantidades apropiadas, una
atmósfera, temperatura, presión osmótica, pH, humedad y aireación.
CONCEPTOS/ANTECEDENTES:
- Heterótrofo
- Autótrofo
- pH
- Humedad
- Aireación
- Óxido-reducción
- Temperatura
- Presión osmótica
MATERIALES Y REACTIVOS:
Cepa: Escherichia coli
Medio mínimo: Incluye por 1L de agua destilada los siguientes componentes:
- 3 g KH2PO4
- 7.5 g Na2HPO4
- 0.5 g NaCl
- 1 g NH4Cl
- 0.12 g MgSO4
- 11 mg CaCl2
- 5 mg FeSO4
- 5g Fuente de C
- Ajustar pH a 7.2
Medio de Glucosa + sales
Medio de Lisina + sales
Medio de Glutamato + sales
Agua peptonada
Caldo Nutritivo
Caldo BHI
Caldo Luria
Shaker
Escala de McFarland
PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL:
Prepare 6 matraces EM de 125 mL con 50 mL de los medios de cultivo
esterilizados y formulados como se indica a continuación:
Matraz 1: medio de glucosa + sales
Matraz 2: medio de glutamato + sales
Matraz 3: medio de lisina + sales
Matraz 4: caldo nutritivo
Matraz 5: caldo BHI
Matraz 6: medio mínimo
Inocular los matraces con un cultivo de Escherichia coli ponerlos a incubar a 37°C,
a 120 rpm por 24 horas.
RESULTADOS:
Determinar turbidimétricamente con la escala de McFarland el número de
microorganismos de los diferentes medios de cultivo y reportar los resultados en
una tabla como la siguiente:
Medios # de tubo en la # de moo x 106/mL

escala
Matraz 1
Matraz 2
Matraz 3
Matraz 4
Matraz 5
Matraz 6
CONCLUSIONES:
CUESTIONARIO:
1. ¿Qué es la nutrición bacteriana?
2. Para crecer, las bacterias necesitan un mínimo de nutrientes, ¿cuáles son
esos requerimientos nutricionales?
3. ¿La escala de McFarland que te indica?
4. ¿Da 3 ejemplos de macronutrientes y que función tienen en los
microorganismos?
BIBLIOGRAFÍA:
PRACTICA # 4
EFECTO DE LA TEMPERATURA SOBRE EL CRECIMIENTO MICROBIANO
OBJETIVO: Determinar que efecto produce la exposición a las variaciones de la

temperatura sobre el crecimiento de microorganismos con características
bioquímicas, morfológicas y fisiológicas distintas (E.coli: Bacilo G (-) no
esporulado, S. aureus: Coco en racimos G (+) y Bacillus subtilis: Bacilo G(-)
esporulado).
INTRODUCCIÓN:
Los microorganismos son capaces de sobrevivir y además desarrollarse en los
medios de cultivo bajo condiciones físicas y/o químicas diversas, sin embargo, se
presentan condiciones limitantes y específicas que pueden tolerar para
permanecer viables.
Bajo circunstancias naturales, las fluctuaciones de las condiciones del ambiente
pueden tienen efectos inhibidores e incluso letales en una población microbiana
dependiendo de la intensidad de las condiciones físicas.
En general los microorganismos se desarrollan a una muy amplia gama de
temperaturas, desde muy bajas como los psicrófilos, hasta muy altas como los
termófilos y los mesófilos entre estas dos temperaturas; pero todos tienen una
temperatura máxima, óptima o mínima para su desarrollo.
Los microorganismos se diferencian además de sus temperaturas cardinales,
también en la forma en que responden a este factor, por ejemplo, S. aureus
produce un pigmento de mayor intensidad a 20°C aunque su margen de
temperatura es muy amplío (12-45°C), o B. subtillis que por diferenciación produce
una espora termófila ó mesófila y finalmente, E.coli que no resiste altas
temperaturas porque no produce ningún tipo de estructura de resistencia.
CONCEPTOS/ANTECEDENTES:
- Espora
- Temperatura cardinal
- Resistencia microbiana
- Efecto letal del calor
MATERIALES Y REACTIVOS:
Cepas. E.coli, S.aureus y B. subtilis
NaCl 0.85%
Agar nutritivo
9 Cajas Petri
Termómetro
3 Tubos 18X150
Asa Bacteriológica
PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL:
1. Prepare una solución de cada moo. poniendo por cada mL de solución
salina una asada del cultivo
2. Las 9 cajas petri que contienen el agar ya solidificado rotúlelas de la
siguiente manera para cada moo.
T= testigo C= Control
3. En un baño de agua coloque los tubos con la suspensión bacteria y un tubo con
agua y dentro de él un termómetro.
4. Cuando la temperatura del baño llegue a 50°C espera 5 minutos y siembre por
estría en el área de la caja marcada con este tiempo, luego a los 10, 15 y 20
respectivamente.
5. Realice el mismo procedimiento a las temperaturas de 70 y 80°C
6. Incube todas las cajas invertidas a una temperatura de 37°C por 24 horas y
reporte el resultado a través del crecimiento en cruces y en base a la resistencia a
temperatura y tiempo de exposición de moo.
RESULTADOS:
Microorganism Resistencia
o T°C 5’ 10’ 15’ 20’ T°C
50°C
50°C
50°C
70°C
70°C
70°C
85°C
85°C
85°C
CONCLUSIONES:
CUESTIONARIO:
1. ¿Cómo se clasifican los microrganismos de acuerdo con su temperatura?
2. ¿Cómo afecta la temperatura en el crecimiento bacteriano?
3. ¿Qué temperaturas resisten cada uno de los microorganismos que usaste
en la práctica y a que temperatura mueren?
BIBLIOGRAFÍA:

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