UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERÍA

FACULTAD DE INGENIERÍA QUÍMICA Y TEXTIL

Departamento Académico De Ingeniería Química

Laboratorio de Bioquímica y Microbiología

PI-721/A

Microscopio y su observación

Realizado por Grupo 3:

Profesora responsable de la práctica:

Ing. Janet Rojas Orosco

Periodo académico: 2021-1

Fecha: 23 de junio de 2021

Tabla de Contenido

Microscopio y su observación ........................................................................................................ 1

Objetivos ..................................................................................................................................... 1

Objetivo general ...................................................................................................................... 1

Objetivos específicos ............................................................................................................... 1

Fundamento teórico ..................................................................................................................... 1

Parte experimental ....................................................................................................................... 4

Diagrama de flujo .................................................................................................................... 4

Muestras vistas en el microscopio ........................................................................................... 7

Discusión de resultados ............................................................................................................... 8

Conclusiones ............................................................................................................................... 9

Cuestionario .............................................................................................................................. 10

Referencias bibliográficas ............................................................................................................. 14

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Microscopio y su observación

Objetivos

Objetivo general

Explicar las partes del microscopio óptico y las implicancias de su manejo y los métodos de

preparación de muestras para el análisis en el microscopio óptico.

Objetivos específicos

- Explicar el procedimiento de preparación de muestras biológicas.

- Explicar las partes el mantenimiento y las precauciones para el uso del microscopio.

- Identificar las imágenes obtenidas de un microscopio óptico de muestras biológicas.

- Explicar el principio de funcionamiento de un microscopio electrónico.

Fundamento teórico

El microscopio óptico compuesto tiene más de una lente. Las partes de un microscopio

compuesto moderno se muestran en la figura 1. Un microscopio compuesto con un solo ocular es

llamado monocular; y si tiene dos monoculares se llama binocular.

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Figura 1. El microscopio óptico compuesto.

La luz entra al microscopio desde una fuente en la base y pasa a través de un filtro azul,

el cual filtra la luz de grandes longitudes de onda, dejando las longitudes de onda corta y

mejorando la resolución. Luego, va a un condensador, el cual converge los haces de luz para que

pasen a través de la muestra. El diafragma de iris controla la cantidad de luz que pasa a través de

la muestra y a los lentes objetivo. A mayor magnificación, mayor es la cantidad de luz necesaria

para ver la muestra claramente. Los lentes objetivo magnifican la imagen antes de que pase a

través del tubo hacia los lentes oculares en el ocular. La lente ocular magnifica aun más la

imagen. El sistema mecánico permite el control preciso del movimiento del portaobjetos, el cual

es especialmente útil en el estudio de microbios.

El mecanismo de enfoque consta de una perilla de ajuste macrométrico que regula la

distancia entre el lente objetivo y la muestra con bastante rapidez, y una perilla de ajuste
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micrométrico que regula la distancia muy lentamente. La perilla de ajuste macrométrico es usada

para localizar la muestra. La perilla de ajuste micrométrico se usa para enfocar la muestra

nítidamente.

Los microscopios compuestos tienen hasta seis lentes objetivo intercambiable que tienen

diferentes poderes de magnificación.

El aumento total de un microscopio óptico se calcula multiplicando el aumento del lente

objetivo (los lentes usados para ver la muestra) por el aumento del lente ocular (los lentes cerca

del ojo del observador).

Aumento microscopio = Aumento objetivo × Aumento ocular

La mayoría de los microscopios están diseñados para que cuando el manipulador aumente

o disminuya la magnificación (o aumento) del microscopio de un lente objetivo a otro, la muestra

permanezca muy enfocada. Tales microscopios son llamados parafocales. El desarrollo de

microscopios parafocales ha mejorado significativamente la eficiencia de los microscopios y

reducido el daño al portaobjetos y los lentes objetivo.

Algunos microscopios están equipados con un micrómetro ocular para medir los objetos

que se ven. Este es un disco de vidrio con escala marcada con unidades métricas y se ubica

dentro del ocular entre las lentes. Cuando las unidades métricas se ven a través del microscopio a

varios aumentos, el analista puede determinar los valores métricos correspondientes de las

divisiones en el micrómetro ocular para cada lente objetivo. Después de eso, el analista solo

necesita contar el número de divisiones cubiertos por el objeto observado y multiplicar ese valor

por el factor de calibración de ese lente, y así se determina el tamaño real del objeto.
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Parte experimental

Diagrama de flujo

Preparación de muestras

- Líquidas

- Alimento contaminado con hongos

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- Cebolla
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- Elodea

- Mucosa bucal
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Muestras vistas en el microscopio

• Yogur

Figura 2. Comunidades de bacterias productoras de yogur.

Se empleó microscopio de campo claro, tinción con azul de metileno, objetivo 100x, inmersión

en aceite.

• Pan contaminado con hongos

Figura 3. Esporas de Penicillium sp. sobre pan.

Se empleo microscopio de campo claro, objetivo 40x.

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• Epidermis de cebolla

Figura 4. Estructura vegetal de un epitelio de cebolla en un proceso osmótico en células de

epidermis de cebolla.
Se empleó microscopio de campo claro, objetivo 40x.

Discusión de resultados

Para el caso de las bacterias productoras de yogurt, como muestra la figura 2, se distingue la

presencia de estreptococos, agrupados como tales, en pares o en forma de cocos individuales, y

bacilos (Lactobacillus), los cuales, a diferencia de los estreptococos, se muestran como un único

filamento en lugar de estar compuestos por varias secciones. Únicamente es distinguible la pared

celular. En la figura mostrada en las diapositivas de clase se aprecia la presencia de cocos y

bacilos, pero no es posible distinguir estos últimos de las formaciones de estreptococos debido al

menor aumento (10x frente a 100x). La ventaja del empleo del aumento de 10x es que permite

notar que se trata de una muestra de yogur.

En el caso del pan contaminado con hongos, como muestra la figura 3, se distingue las

formaciones de esporas y cada espora individual de estas formaciones, así como esporas no

agrupadas y la pared celular de cada una. Por el menor aumento de la figura mostrada en las
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diapositivas de clase (10x frente a 40x), esta permite observar la presencia de formaciones de

esporas, pero no cada espora individual dentro de estas formaciones.

Para la epidermis de cebolla, como muestra la figura 4, puede identificarse la agrupación de

células vegetales en la forma de un complejo multicelular. Estas células son alargadas y

presentan una forma geométrica más o menos definida, similar a ladrillos. A diferencia de las

muestras de bacterias en el yogur y hongos en el pan, en este caso es posible distinguir un

organelo: el núcleo, además de la pared celular. Las figuras mostradas (sin tinción y con tinción)

en las diapositivas de clase, pese a tener el mismo aumento (40x), no permiten distinguir el

núcleo en la mayoría de las células enfocadas, con lo que se puede afirmar que existen tinciones

más efectivas que el azul de metileno para la observación de la epidermis de cebolla.

Conclusiones

• A diferencia de un aumento de 10x, un aumento de 100x permite distinguir con claridad a

los bacilos de las formaciones de estreptococos en una muestra de yogur.

• Un aumento de 40x en lugar de uno de 10x, junto con la tinción con azul de metileno,

permite distinguir cada espora individual en una formación de esporas en una muestra de

pan contaminado con hongos.

• El empleo de tinciones con un tono amarillo en lugar de azul de metileno, con un

aumento de 40x, permite distinguir más fácilmente el núcleo de las células de la

epidermis de las cebollas.

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Cuestionario

a) Describa el funcionamiento de un microscopio electrónico y una aplicación práctica.

Debido al limitado poder de resolución del microscopio óptico se desarrollaron

microscopios electrónicos, con ellos somos capaces de ver muestras con un poder de

resolución de hasta mil veces mayor que el que se obtiene de un microscopio óptico. El

principio de funcionamiento se basa en la difracción electrónica. Los electrones son

acelerados mediante una diferencia de potencial, así los electrones adquieren una

determinada longitud de onda y posteriormente salen del cañón y son enfocados por las

lentes condensadoras y objetiva, de manera que incida en la muestra un haz de electrones

lo más pequeño posible. Con las bobinas deflectoras se barre este haz de electrones sobre

la muestra, punto por punto y línea por línea. Cuando el haz incide en la muestra se

presenta muchas interacciones; un parte de ellos electrones es absorbida por la muestra,

en función del espesor y de la composición de la misma, otros electrones sufren

difracción en distintas direcciones dependiendo de la estructura de la muestra, otros

electrones son reflectados, otros chocan a la muestra y por este efecto salen desprendidos

electrones de las órbitas externas de sus átomos (electrones secundarios), también se

generan rayos x debido al impacto del haz de electrones. Todos los fenómenos

mencionados son aprovechados y mediante detectores se extrae al máximo la

información de la muestra.

Dentro de los microscopios más importantes tenemos al microscopio electrónico

de barrido (MEB) o microscopio de exploración electrónica (SEM) y al microscopio

electrónico de transmisión (TEM) y pueden ser utilizados en una infinidad de campos de

aplicación, como la investigación científica, industria, agricultura, minería, medicina,

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ciencias forenses, etc. Uno de los grandes aportes de los microscopios electrónicos fue en

virología, los virus pueden ser observados en un microscopio electrónico con una alta

resolución de detalles usando un método simple y rápido, permitiendo realizar una

identificación morfológica rápida y un diagnóstico diferencial de los distintos virus

contenidos en la muestra.

b) ¿Qué es un objetivo de inmersión? Dé un ejemplo.

Un objetivo de inmersión es un objetivo diseñado para ser empleado con un

medio de inmersión como agua, aceite o glicerina con el fin de que, al emplear un medio

de inmersión con un índice de refracción similar al del cubreobjetos, de modo que las

variaciones en su espesor prácticamente no provoquen una degradación de la imagen y

los rayos de luz con una oblicuidad amplia no sufran difracción, con lo que pueden ser

más fácilmente captados por el objetivo.

En general, el diseño de un objetivo de inmersión consta de un lente frontal

semiesférico, seguido por un lente con menisco positivo y un doblete. Además de lo

mencionado en el párrafo anterior, los objetivos de inmersión bien diseñados corrigen los

defectos cromáticos ocasionados por los dos primeros lentes, con una cantidad mínima de

aberración esférica. El esquema de un objetivo de inmersión se muestra en la figura 5. El

espécimen está situado entre el portaobjetos y el cubreobjetos en el punto P (punto

aplanático del lente semiesférico); los rayos de luz refractados en la parte posterior del

lente semiesférico aparentan proceder del punto P(1), que es además el centro de

curvatura de la primera superficie del lente de menisco. Los rayos de luz refractados

ingresan en este lente a lo largo del radio de su primera superficie y no experimentan

ninguna refracción en dicha superficie. En la superficie posterior del lente de menisco,

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los rayos de luz son refractados de forma aplanática, de modo que aparentan divergir del

punto P(2). La refracción de los rayos de luz en las superficies de los grupos de lentes

subsecuentes en el objetivo completa la convergencia de los rayos de luz originados en el

punto P, formando la imagen.

Figura 5. Esquema de un objetivo de inmersión. Traducido de Introduction to microscope

objectives, por M. W. Davidson (2001), Nikon’s MicroscopyU.

https://www.microscopyu.com/microscopy-basics/introduction-to-microscope-objectives
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c) Explique por qué el número de aumentos de un microscopio óptico es limitado.

La limitación en los aumentos se debe a la difracción de la luz. Los lentes actúan

como un pequeño lente a través del cual pasa la luz y resulta una imagen borrosa. Si

queremos que el lente tenga una mayor amplitud, éste debe ser más pequeño; por tanto,

aumentará la difracción y la borrosidad.

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Referencias bibliográficas

Black, J. (2008). Microbiology: principles and explorations (7a ed.). Hoboken, NJ, United States

of America: John Wiley & Sons, Inc.

Davidson, M. W. (31 de enero de 2001). Introduction to microscope objectives. Nikon’s

MicroscopyU. https://www.microscopyu.com/microscopy-basics/introduction-to-

microscope-objectives

Madigan, M. T., Martinko, J. M., Bender, K. S., Buckley, D. H. y Stahl, D. A. (2015). Brock.

Biología de los microorganismos (14a ed.). Madrid: Pearson Educación, S.A.