Práctica 9: DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD DE FOSFATASA ALCALINA.

Integrantes: Quirarte Sainz Maryan Lizetth, Ruelas Verduzco Valeria, Tarín Sosa
Yajaira, Vázquez Corona Diego Iván.
Asignatura: Procesos Metabólicos.
Licenciatura QFBT
Periodo: 2022-2

Resumen
La fosfatasa alcalina es una enzima que cataliza la hidrólisis del enlace éster
fosfórico entre un grupo orgánico y un grupo fosforilo a pH alcalino, lo que libera
fosfato al medio.(Rodríguez, S. J ,s.f), en esta práctica se colocaron 3 distintas
muestras de sangre para la poder conocer y comprender la finalidad de la actividad
fosfatasa alcalina así también los daños que ésta puede causar en altas y bajas
concentraciones, esta enzima se analiza por medio de la sangre pero para esto se
midió en el fotómetro sacando su nivel de absorbancia cada 1 min repitiendo 4
veces, asimismo conociendo también la concentración de p-nitrofenilfosfato que se
llegara a degradar, al conocer sí esta aumenta o disminuye nos ayudó a identificar
cada concentración por la coloración que llega a tener al ponerla con el sustrato de
p-nitrofenilfosfato sí hay presencia de la actividad fosfatasa alcalina, logrando
conocer las cantidades normales de esta enzima en la sangre y cuales llegan a ser
perjudiciales para la salud.
Palabras clave. Proteínas, fosfatasa alcalina, metabolismo, enzimas, sangre.

Introducción Las fosfatasas alcalinas (FA) son un

Una enzima es una proteína que grupo de enzimas situadas en la
acelera la velocidad de una reacción membrana celular que intervienen a
química específica en la célula. La diferentes niveles en situación
enzima no se destruye durante la fisiológica:
reacción y se utiliza una y otra vez.
Una célula contiene miles de ● Precipitación del fosfato cálcico
diferentes tipos de moléculas de en los huesos
enzimas específicas para cada ● Absorción de fosfatos por el
reacción química intestino.
particular.(NHGRI,2020) ● Síntesis de proteínas hísticas e
hidrólisis de los ésteres
fosfóricos del riñón y el hígado.
 ● Déficit de vitamina D.
La fosfatasa alcalina es una enzima Enfermedades hepáticas
que cataliza la hidrólisis del enlace (cirrosis, hepatitis, hígado
éster fosfórico entre un grupo orgánico graso) o de la vesícula biliar, o
y un grupo fosforilo a pH alcalino, lo una obstrucción de las vías
que libera fosfato al medio.(Rodríguez, biliares.
S. J ,s.f) ● Otras patologías como la colitis
ulcerosa, el linfoma de Hodgkin,
la sarcoidosis, el
hiperparatiroidismo, la
mononucleosis, algunas
infecciones bacterianas o la
insuficiencia cardíaca
congestiva.(Salabert, E, 2022)

Disminución de los niveles de FA

(fosfatasa alcalina baja), se puede
producir por diversas causas como:
(Figura.1.Enzima fosfatasa alcalina) ● Déficit de zinc, magnesio o
proteínas.
La función principal de esta enzima es ● Malnutrición.
eliminar grupos de fosfatos que se ● Retraso en el crecimiento si el
encuentran en ciertos tipos de El afectado es un niño.
moléculas, como los nucleótidos o las ● Patologías como la
proteínas. También resulta hipofosfatasia
indispensable para la síntesis de (un problema del metabolismo óseo de
proteínas en las células y la origen genético y muy poco frecuente)
calcificación de los huesos y el o la enfermedad de Wilson.(Salabert,
cartílago.(Salabert, E, 2022) E, 2022)
Valores de la fosfatasa alcalina.
Las principales causas o condiciones Normal
que pueden hacer que se eleven los El rango normal es de 44 a 147
niveles normales de FA en la sangre unidades internacionales por litro
(fosfatasa alcalina alta) son: (UI/L) o 0.73 a 2.45 microkatal por litro
(μkat/L). Los valores normales pueden
● El desarrollo de los huesos o un variar ligeramente de un laboratorio a
incremento de la actividad de otro, al igual con la edad y el sexo.
las células óseas. Elevado
● Problemas de salud de los Niveles excesivamente elevados (600
huesos como cáncer óseo, – 1200 U/l en adultos): Si los niveles
enfermedad de Paget, de fosfatasa alcalina (ALP) son muy
osteomalacia,etc. elevados puede indicar un problema
en el hígado como cirrosis o una ● Establecer asociaciones con las
obstrucción de las vías biliares. diferentes patologías que se
Espectrofotómetro presentan cuando la actividad
Los espectrofotómetros son de la fosfatasa alcalina se
instrumentos que apoyan a la encuentra alterada. Xs
espectrofotometría para medir la
cantidad de intensidad de luz Hipótesis
absorbida después de pasar a través Con la ayuda de un kit buscamos
de una solución muestra. generar actividad enzimática con la
El espectrofotómetro tiene la cual veremos y calcularemos su
capacidad de proyectar un haz de luz absorbancia y mediante una serie de
monocromático a través de una cálculos veremos la reacción y
muestra y medir la cantidad de luz que velocidad de esta.
es absorbida por dicha muestra. Métodos
Esto le permite al operador realizar En 3 tubos de ensayo se colocaron 3
dos funciones: muestras de sangre de distintas
● Dar información sobre la naturaleza personas de las cuales se añaden los
de la sustancia en la muestra. reactivos R1. FAL tampón. Cloruro de
● Indicar indirectamente qué cantidad magnesio y R2. FAL sustrato el cual es
de la sustancia que nos interesa está p-nitrofenilfosfato. 4-NFF, Preparando los
presente en la muestra.(ABATEG, Reactivos de Trabajo mezclando: 4 ml de
2019) R1 y 1 ml de R2
Después Pre Incubamos el reactivo de
Planteamiento del problema.
trabajo, muestras y controles a la
Identificar y conocer la actividad de la
temperatura de reacción, Ajustamos en 0
fosfatasa alcalina dentro de nuestro el fotómetro con agua destilada. una vez
organismo listos los colocamos en una cubeta:
Justificación.
Con el fin de comprender la finalidad
Desconocido
de la actividad fosfatasa alcalina y
comprender los daños que ésta puede Reactivo de 1ml
causar en altas y bajas trabajo
concentraciones.
Objetivos. Muestra 20ul
General.
Analizar las funciones biológicas de la Mezclamos suavemente por inversión e
fosfatasa alcalina. Insertamos la cubeta en el
compartimiento a 405 nm y colocamos el
Específicos. cronómetro en marcha, Incubamos
durante 1 minuto y anotamos la
● Determinar la actividad
absorbancia inicial una vez obtenida lo
enzimática de la fosfatasa
Repetimos exactamente a los 1,2 y 3
alcalina. minutos.
● Determinar el efecto de la Resultados
concentración de enzima sobre
la velocidad de reacción.
 gráfica.1. progreso de reacción
muestras 2 y 3 persona 1

muestra 4 persona 2

Fig.1 muestras de sangre con los tiempo absorbancia

reactivos indicados para la
identificación de actividad fosfatasa 1ero tiempo 2.974 nm
alcalina en la sangre. después de 1 2.969 nm
min
Se utiliza dinitrofenol para la lectura
para la fosfatasa alcalina en la sangre después de 1 2.974 nm
se vera un cambio de color, notandose min
en el espectrofotometro después de 1 2.979 nm
min
Cada minuto se tomó la absorbancia Tab.2. Resultados de la observancia
de la muestra con la que se incluye la obtenida en muestra de sangre
curva de progreso de la reacción. medida cada minuto.

muestras de persona 1
Muestra 2 Muestra 3

Serie 1 Serie 2

1.593 nm 1.594 nm

1.596 nm 1.596 nm

1.601 nm 1.599 nm Gráfica.2. progreso de la reacción

muestra 4
1.603 nm 1.604 nm

Promedio total 1.598 nm 1

Tab.1. resultados de la observancia 1era 2.986
obtenida en muestra de sangre 2da no lo leyó es decir + 3
medida cada minuto. 3era 2.978

5 muestra de persona 2
tiempo absorbancia

1er tiempo 2.861 nm

después de 1 2.868 nm
min

después de 1 2.880 nm
min
después de 1 2.888 nm teniendo en cuenta que I = 1
min cm y ε = 18,5 mM-1 cm-1, se
obtiene la concentración
Tab.3. Resultados de la observancia
producto formado en cada
obtenida en muestra de sangre
uno de ellos (caso 2)
medida cada minuto.
se midió a 450 nm
A = ε·c·l
c = A/ ε * l
Persona 1
c= 1.598 /(18,5 mM-1 cm-1* 1) =
0.08637 M
Persona 2
c= 2.969 /(18,5 mM-1 cm-1* 1) =
0.16048 M
Gráfica.3. progreso de la reacción Persona 3
muestra 5 c= 2.851 /(18,5 mM-1 cm-1* 1) =
0.15410 M
1. El cálculo de la
concentración de producto Análisis de resultados
(p-nitrofenol) se basa en la La fosfatasa alcalina (FA) proteína
ley de Lambert-Beer elaborada, en su mayoría, en el
La ley de Beer–Lambert relaciona la hígado, huesos y un poco en los
absorción de la luz de una solución intestinos y riñones, puede causar
con las propiedades de la solución diferentes patologías como artrosis,
según la siguiente ecuación: A = εbc, raquitismo, etc. Esta evaluación de
donde ε es la absortividad molar de las determinación de fosfatasa alcalina es
especies absorbentes, b es la longitud para evaluar el funcionamiento
del recorrido y c es la concentración hepático principalmente. Se evaluaron
de las especies absorbentes. (“Khan a 3 personas distintas logramos
Academy,” 2022) observar un incremento en
absorbancia lo cual es bueno dentro
A lo cual se requiere sacar la de lo normal en la concentración de
concentración de producto y esta fosfatasa alcalina ya que nos puede
fórmula nos ayudará a obtener la indicar que no hay algun riesgo de
concentración de producto presentar patología y que ninguna
(p-nitrofenol) muestra nos presenta, también se
diferencia a simple vista las distintas
ε = 18,5 mM-1 cm-1 tonalidad que llega a obtener cada una
b ó l = 1cm de las muestras, esa tonalidad es
c=? gracias a la cantidad de que se le
colocó de p-nitrofenilo la cual esta
2. Aplicando esta ecuación a las enzima actúa sobre este sustrato
absorbancias obtenidas para generando color a una sustancia
cada uno de los tubos, incolora ayudando a identificar la
cantidad de fosfatasa alcalina (FA) alcalina es de gran importancia desde
presente en el cuerpo por eso bueno el punto de vista médico, pues permite
que haya un aumento de absorbancia el diagnóstico de enfermedades
y puede ser normal ya que dependen Ivan.
de edad y género El rango normal es Es interesante esta práctica ya qué
de 44 a 147 unidades internacionales identificamos y conocemos la ruta que
por litro (UI/L) o 0.73 a 2.45 microkatal esta actividad lleva dado que puede
por litro (µkat/L) del cual entran en lo causar ciertas patologías dentro de
normal cada uno de los analizadas en nuestro organismo así mismo, Y en los
caso de que sobrepasar ya sabemos tres tubos ya que se llenaron de
que en muy altas cantidades se sangré vimos diferentes resultados así
desarrollan patologías. mismo comparamos la sangre de
Conclusiones. nuestros compañeros, es decir; el
Maryan resultado que obtenemos de cada uno
La fosfatasa alcalina enzima que de la sangre diferente.
interviene en diferentes niveles en Yajaira.
situación fisiológica como en la Se conoce que la fosfatasa alcalina es
precipitación del fosfato cálcico en los una enzima que se encuentra en la
huesos, esta es producida por los membrana celular, la cual interviene
osteoblastos los cuales están en distintas funciones fisiológicas.
implicados en la formación del hueso, Mediante la práctica, se logró
en esta práctica se logran identificar determinar la actividad de la enzima
de una manera en la cual salen a fosfatasa alcalina, la cual fue a
actuar con el sustrato velocidades altas, que esta fue
p-nitrofenilfosfato, asimismo determinada mediante el equipo
determinar de manera espectrofotómetro, en el cual se midió
cualitativamente forma visual la luz qué tanta absorbancia tenía nuestra
que se llega a pasar por la muestra enzima. La absorbancia se pudo
con ayuda del espectrofotómetro y de determinar tanto cuantitativamente
manera cuantitativa sacando la mediante los cálculos previos y
concentración de p-nitrofenol que hay cualitativamente mediante lo visual,
en la muestra por medio de la ley de que tanta luz o no deja pasar la
de Beer–Lambert, se logró comprobar muestra.
la hipótesis de crear acción enzimática Referencias
y conocer las cantidades buenas y ABATEC S.A de Espectrofotómetros
malas de la enzima fosfatasa alcalina. Distribuidora de Equipos. Equipos de
Valeria. Laboratorios, Farmacéuticos, Clínicos,
La fosfatasa alcalina es útil para Hispatológicos, Microscopía e
detectar las enfermedades óseas o Industria en General.
hepáticas. Cuando existe daño https://www.abatec.com.mx/espectrofo
hepático, las células lesionadas tometros/
liberan cantidades importantes de
fosfatasa alcalina hacia la sangre. El NHGRI. (2020). Enzima | NHGRI.
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0q u%C3%ADmica%20particular. %20ley%20de%20Beer%E2%80%93L
ambert%20relaciona%20la%20absorci
Rodríguez, S. J. (s.f). ¿Por qué %C3%B3n%20de%20la,concentraci%
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