AULA 01 l HISTOTECNOLOGIA

El estudio directo de células y tejidos vivos tiene aplicaciones El objetivo es reemplazar el alcohol del tejido por un líquido el cual
limitadas; en consecuencia, los tejidos muertos son de mayor utilidad, pueda disolverse en parafina. Para el efecto, las muestras deben ser
estos tejidos se mantienen mediante acciones químicas sumergidas Xilol (Xileno).
inmediatamente luego de ser extraídas, son procesadas y luego
cortadas en secciones muy delgadas, denominadas Cortes
Histológicos. Luego de la tinción con distintos colorantes, estos son
observados con el microscopio óptico. El objetivo es proporcionarle al tejido un soporte sólido para que
pueda ser cortado en forma muy fina y delicada. Para el efecto se
sumerge la muestra en Parafina líquida.
1) Fijación
2) Deshidratación
3) Aclaramiento El objetivo es proporcionarle al tejido un soporte sólido y un molde
4) Inclusión en parafina para que pueda ser cortado en forma muy fina y delicada.
5) Corte
6) Montaje sobre un portaobjeto (lámina)
7) Aclaramiento
8) Rehidratación
9) Coloración
10) Montaje con un cubreobjeto (laminilla)
El objetivo es conservar la estructura del tejido en forma

permanente Las muestras deben ser sumergidas en el fijador
inmediatamente después de extraerse del organismo.
Se realizan cortes finos del tejido de 5 a 10 micras.
El objetivo es extraer totalmente el agua del tejido fijado. Para el

efecto, las muestras deben ser sumergidas en una serie de alcoholes
de diferentes concentraciones hasta conseguirlo.
El corte fino del tejido se extiende en baño maría. El mismo se
recoge con un portaobjetos sobre el cual se monta (Lámina).
Se realiza el proceso en sentido inverso al descripto anteriormente
Se realiza la tinción con los colorantes comunes utilizados en la

práctica, por lo general son utilizados la Hematoxilina y la Eosina.
Se realiza el montaje final de la muestra con un cubreobjetos

(Laminilla). Para el efecto se usa un líquido llamado «Bálsamo de
Canadá» que funciona como un adhesivo para colocar el
cubreobjetos. ¡ES SOLUBLE EN XILOL!
El método de tinción más utilizado es la combinación de hematoxilina

y eosina (H&E), que tiñe los componentes nucleares de azul violáceo
(Coloración BASÓFILA), mientras que casi todas las estructuras
citoplasmáticas adquieren una tonalidad rosada (Coloración
ACIDÓFILA).
El elemento fundamental de los métodos histológicos es la utilización

de acciones físicas y químicas sobre preparados histológicos, para
determinar la localización de sustancias químicas en las células y los
tejidos.
Para obtener suficiente contraste de color en los cortes histológicos

comunes, por lo general se emplean combinaciones de colorantes
ácidos y básicos.
*Acidofilia: la capacidad de tinción de los colorantes ácidos.

La reacción de PAS se emplea para determinar la presencia de
*Basofilia: la capacidad de tinción de los colorantes básicos
macromoléculas ricas en hidratos de carbono como el glucógeno y
En H&E a pH neutro, el DNA y el RNA presentan una fuerte basofilia. glucoproteínas. El método de PAS se basa en que el ácido periódico
Con ese mismo pH, la mayoría de las proteínas citoplasmáticas son oxida primero los grupos hidroxilos libre de dos átomos de carbonos
acidófilas. adyacentes, por lo que se transforman en grupos aldehído. Los
grupos aldehídos neoformados reaccionan entonces con el reactivo
de Schiff, para dar lugar a la aparición de color rojo Magenta
característico.
Es la variación de cromática que sufren ciertos tejidos al ser teñidos

con colorantes especiales, llamados Colorantes Metacromáticos. Un
ejemplo es la coloración de la matriz cartilaginosa con el colorante
Azul de Toluidina, y este se modifica del color azul a púrpura o rojo
violáceo por unión al tejido. Pertenecen a este tipo de agentes
ciertos colorantes básicos como Azul de Toluidina y Tironina.
Los lípidos se disuelven en los solventes orgánicos (Alcohol, Xilol)

Ciertos colorantes básicos reaccionan con componentes hísticos que utilizados para la inclusión en parafina, dejando espacios vacíos en los
hacen cambiar su color normal del azul al rojo o a la púrpura; esta preparados histológicos. Sin embargo, pueden preservarse si se
modificación de la absorbancia se denomina Metacromasia. realizan cortes de congelación con el crióstato. Para MO los lípidos
pueden detectarse utilizando colorantes que son más solubles en los
lípidos que en las soluciones donde se disuelven para hacer el
colorante. -Microscopio de campo oscuro: Se utiliza para analizar partículas
*Colorantes: Sudan rojo o negro pequeñas que presentan muy escaso contraste. Para ello necesita
un condensador especial. Estas se observan luminosas sobre un
fondo oscuro.
* Determinación histoquímica de enzimas

* Métodos inmunohistoquímicos
* Otros
El microscopio óptico está compuesto por dos partes: Mecánica y

Óptica.
Sobre la base del microscopio óptico común se han desarrollado

varios microscopios especiales, como:

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El estudio directo de células y tejidos vivos tiene aplicaciones El objetivo es reemplazar el alcohol del tejido por un líquido el cual

El objetivo es conservar la estructura del tejido en forma

Se realizan cortes finos del tejido de 5 a 10 micras.

El objetivo es extraer totalmente el agua del tejido fijado. Para el

Se realiza el proceso en sentido inverso al descripto anteriormente

Se realiza la tinción con los colorantes comunes utilizados en la

Se realiza el montaje final de la muestra con un cubreobjetos

El método de tinción más utilizado es la combinación de hematoxilina

El elemento fundamental de los métodos histológicos es la utilización

Para obtener suficiente contraste de color en los cortes histológicos

*Acidofilia: la capacidad de tinción de los colorantes ácidos.

Es la variación de cromática que sufren ciertos tejidos al ser teñidos

Los lípidos se disuelven en los solventes orgánicos (Alcohol, Xilol)

* Determinación histoquímica de enzimas

El microscopio óptico está compuesto por dos partes: Mecánica y

Sobre la base del microscopio óptico común se han desarrollado

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