Inmunoterapia
Inmunoterapia
Inmunoterapia
Introducción.........................................................................................................................................3
Metodología..........................................................................................................................................4
Nanopartículas y sus aplicaciones..................................................................................................4
Nanopartículas a base de polímeros...........................................................................................4
Nanopartículas sólidas: Nanopartículas de óxido de hierro, oro y plata.................................4
Nanopartículas a base de carbono..............................................................................................4
Nanopartículas a base de lípidos.................................................................................................5
Nanoemulsiones...........................................................................................................................5
Nanopartículas en aplicaciones biomédicas...............................................................................6
Dendrímeros.................................................................................................................................6
Nanopartículas y conjugados..........................................................................................................7
Nanopartículas dirigidas a células T en sangre.........................................................................7
Adhesión de fármacos mediada por receptores vasculares a células inmunes........................8
Las aAPC enriquecen la cantidad y la calidad de las células T. A...........................................8
Procesamiento......................................................................................................................................9
Acceso de las nanoestructuras a las células diana.........................................................................9
Rutas de administración..............................................................................................................9
Células diana y respuestas..........................................................................................................9
Diagnostico por Nanopartículas.......................................................................................................10
Nanopartículas multifuncionales para el inmunodiagnóstico del cáncer..................................10
Tratamiento en Linfoma No Hodgkin..............................................................................................16
Nanoterapía en Linfoma No Hodgkin..........................................................................................16
Liposomas...................................................................................................................................17
Nanopartículas poliméricas.......................................................................................................19
Tratamiento de Melanoma................................................................................................................19
Nanopartículas a base de lípidos..................................................................................................19
Nanopartícula de doble objetivo TAM similar a M2..................................................................21
Bibliografía........................................................................................................................................22
Introducción
Existen varios enfoques para usar la terapia génica como un componente del tratamiento del
cáncer. Algunos de estos pueden ser apropiados para neoplasias malignas hematológicas, así
como para tumores sólidos (1). A diferencia de la corrección de trastornos de un solo gen, la
terapia génica para el cáncer que intenta matar las células malignas presenta desafíos
adicionales relacionados con mutaciones adicionales o cambios inmunológicos utilizados por
las células cancerosas para sobrevivir. Uno de esos ejemplos será la Terapia de células T con
receptor de antígeno quimérico (1-2).
La inmunoterapia contra el cáncer ha cambiado el paradigma del tratamiento del cáncer.
Estas terapias tienen como objetivo mejorar las respuestas inmunitarias antitumorales con
menos efectos fuera del objetivo que las quimioterapias y otros agentes que matan
directamente las células cancerosas (1). En la inmunoterapia contra el cáncer, los agentes se
utilizan para activar o potenciar la activación del sistema inmunológico para atacar las células
cancerosas a través de mecanismos naturales, muchos de los cuales se evitan durante la
progresión de la enfermedad (2-3). Por lo tanto, la inmunoterapia se reconoce como una
estrategia prometedora para tratar, e incluso curar, ciertos tipos de cáncer (2).
Hace aproximadamente 10 años, los ensayos clínicos demostraron una eficacia significativa
del bloqueo de puntos de control y la terapia de células T del receptor de antígeno quimérico
(CAR) en ciertos cánceres, lo que llevó a la aprobación por parte de la Administración de
Drogas y Alimentos de los EE. UU. (FDA) de múltiples terapias y un cambio importante en
el papel de la inmunoterapia en la oncología en general (3). Estos tratamientos han inducido
remisiones completas prolongadas en un subconjunto de pacientes, lo que demuestra de
manera concluyente el potencial de la inmunoterapia en el cáncer. Estos éxitos han impulsado
un aumento dramático en la cantidad de agentes de inmunoterapia en pruebas en humanos y
una enorme cantidad de ensayos clínicos que exploran tratamientos combinados (3-4).
Sin embargo, tras los sorprendentes resultados iniciales observados en los ensayos de
inhibidores de la vía de muerte celular programada 1 (PD1) y la terapia con células CAR T
para leucemias y linfomas, el progreso ha sido moderado (1-2). Las combinaciones de
inmunoterapia, como el cotratamiento con anticuerpos que se dirigen al antígeno 4 de
linfocitos T citotóxicos (CTLA4) y PD1, han mostrado aumentos moderados en la eficacia,
mientras que provocan aumentos sustanciales en la toxicidad (1). Las terapias de células T con
CAR que han sido eficaces en cánceres hematológicos no han logrado hasta ahora tener un
impacto importante en el tratamiento de cánceres epiteliales sólidos mucho más prevalentes.
Por tanto, los enfoques adicionales para impulsar de forma segura y eficaz las respuestas
inmunitarias contra el cáncer siguen siendo una importante necesidad insatisfecha (2).
Una posible solución es romper con el paradigma tradicional de desarrollo de fármacos y
diseñar la administración de inmunoterapéuticos, centrando su acción en los tejidos diana (es
decir, los tumores y los ganglios linfáticos que drenan el tumor) o los tipos de células, para
controlar el momento y la ubicación de la inmunomodulación (1). Para lograr este objetivo, los
enfoques basados en la nanomedicina (la formulación de fármacos en materiales portadores
de menos de ~ 100 nm) pueden ofrecer los medios para aumentar tanto la seguridad como la
eficacia terapéutica de muchas inmunoterapias. Los desarrollos recientes en los campos de la
nanotecnología y la bioingeniería permiten nuevos enfoques que pueden mejorar
drásticamente no solo la seguridad sino también la eficacia de la inmunoterapia contra el
cáncer (2-3). La Formulación de inmunoterapéuticos en nanopartículas compuestas de lípidos,
polímeros u otros materiales se ha utilizado para alterar la exposición sistémica, promover la
acumulación en tumores, mejorar la captación en los compartimentos inmunitarios innatos y
alterar la señalización a nivel de una sola célula (2).
Metodología:
Nanopartículas y sus aplicaciones
Nanopartículas a base de polímeros
Las nanopartículas poliméricas (PNP) se utilizan ampliamente como portadores de fármacos
para que exista una controlada y sostenida liberación (5-6). La entidad encapsulada puede
unirse a la superficie de una nanoesfera o nanocápsula, o adherirse a una matriz o capa del
polímero (2). Frecuentemente se han utilizado dos polímeros, el ácido poliláctico glicólico
(PLGA) y el quitosano, los dos han sido aprobados por la FDA como uso clínico también,
debido al hecho de que son biocompatibles y biodegradables (5).
Nanopartículas sólidas: Nanopartículas de óxido de hierro, oro y plata
Los NP sólidos comprenden el óxido de hierro, oro, plata y otros NP a base de metales. Las
NP de óxido de hierro se originan conjugando un núcleo orgánico de magnetita (Fe 3 O 4 ) o
maghemita (Fe 2 O 3 ) a un polímero biocompatible (5-7). En la ultima década, ha tenido mucho
interés las NP de óxido de hierro, por su características de supermagnetismo (5). Las NP de
óxido de hierro se utilizan en biosensores en combinación con imágenes por resonancia
magnética (IRM), administración dirigida de fármacos y genes e hipertermia por fluidos
magnéticos (7). Además, las NP de óxido de hierro se han utilizado en diversas técnicas de
diagnóstico e imagen por sus propiedades ópticas únicas que les otorgan la capacidad de
actuar como biosensores en células vivas (6).
Dependiendo de su tamaño, forma y propiedades superficiales, se ha sugerido el uso de NP
de oro en el diagnóstico, la terapia y la radioterapia del cáncer (5-8). Las NP de oro incluso se
pueden utilizar para desarrollar sistemas teranósticos en los que se pueden combinar el
diagnóstico, la imagenología y la terapéutica para mejorar la terapia (6). Se ha evidenciado que
las NP de oro poseen una baja toxicidad en comparación con otras NP sólidos; sin embargo,
aún falta mejorar la información completa de su perfil de toxicidad (6).
Las NP de plata son otra clase han recibido cierta atención. Involucrándolas para el uso de
NP de plata como biosensores debido a sus propiedades ópticas y su disposición para
absorber y dispersar la luz (6). Las NP de plata se implementan mucho en dispositivos
electrónicos, textiles, apósitos para heridas, revestimientos antimicrobianos y dispositivos
biomédicos (8).
Nanopartículas a base de carbono
Las NP a base de carbono se emplean cada vez más en diversas aplicaciones biomédicas,
como la administración de fármacos, la terapia génica y las imágenes (5). Los nanotubos de
carbono (NTC), una clase importante de estas NP, incluyen los tipos de pared simple
(SWCNT) y de pared múltiple (MWCNT) (8). Las propiedades fisicoquímicas únicas de los
nantotubulos de carbono es que los convierten en óptimos candidatos para diversas
aplicaciones en campos biomédicos, como la administración de fármacos y genes,
biosensores y aplicaciones de ingeniería de tejidos (6-7). También muestran una alta estabilidad
y tienen una química de superficie específica que permite una mayor capacidad de carga de
fármacos. Sin embargo, la seguridad de los NTC sigue siendo cuestionable, ya que se ha
demostrado que son tóxicos para los tejidos sanos después de una exposición crónica (8).
Nanopartículas a base de lípidos
Los liposomas son el clásico ejemplo de NP basadas en lípidos vesiculares. Los liposomas
poseen una bicapa de fosfolípidos y colesterol que atrapa un núcleo acuoso, como se
describió por primera vez en 1965 (5). Los liposomas son uno de los sistemas de
administración de fármacos más utilizados, con varias formulaciones actualmente aprobadas
por la FDA en uso y muchas más en ensayos clínicos o preclínicos (6-8). Los liposomas se han
utilizado para la administración de fármacos, nutracéuticos y biológicos y pueden exhibir una
alta eficiencia de encapsulación y un tiempo de circulación prolongado (6-8). Estas propiedades
permiten que los liposomas se acumulen en sitios específicos de enfermedad, como tumores,
donde la capa endotelial es discontinua, falta un sistema linfático funcional y los liposomas se
acumulan pasivamente a través del efecto de retención y permeabilidad mejorada (EPR)
(6)
. Los primeros liposomas convencionales tenían limitaciones como una vida media corta y
un aclaramiento sistémico rápido después de su opsonización y aclaramiento por el sistema
reticuloendotelial (SRE) (6-7). Sin embargo, la conjugación de polímeros como el
polietilenglicol (PEG) o la PEGilación de liposomas, y el uso de lípidos de transición de fase
alta saturados, dio como resultado la generación de liposomas estabilizados estéricamente o
“ liposomas Stealth TM ” (SL), con medio prolongado -vida y mayor estabilidad (6-7). El largo
tiempo de circulación sistémica de los liposomas Stealth TM permite una biodistribución
alterada y una mayor acumulación en tumores sólidos, en comparación con las formulaciones
convencionales (5-6). Entre sus ventajas, se ha demostrado que los liposomas y otras NP
basadas en lípidos tienen los efectos menos tóxicos para aplicaciones in vivo (6).
Nanoemulsiones
Las nanoemulsiones (NE) se han implementado comúnmente en la administración de vacunas
y agentes anticancerígenos (5). Las NE son dispersiones coloidales que pueden utilizarse como
portadores de moléculas con una solubilidad en agua limitada (6). Suelen estar compuestos por
nanogotas de aceite dispersas en agua o nanogotas de agua dispersas en aceite (6). Los
tensioactivos se incluyen típicamente para mejorar su estabilidad. Sin embargo, una
limitación clave de estos portadores es que son termodinámicamente inestables si su tamaño
supera los 500 nm. Por el contrario, las NE en el rango de 20 a 200 nm son más estables
termodinámicamente (8).
Se sugiere que las Nanoemulsiones son indicadas para diversas vías de administración,
incluidas la parenteral, transdérmica y ocular, principalmente debido a su capacidad para
proteger a los fármacos encapsulados de la degradación enzimática y la hidrólisis (6). Las NE,
como muchos de los NP discutidos anteriormente, pueden modificarse conjugándolos con
diferentes ligandos para apuntar a macromoléculas expresadas selectivamente en
enfermedades específicas como el cáncer. Por ejemplo, se ha demostrado que los NE
conjugados con ligando, que pueden dirigirse a receptores cuya expresión aumenta en ciertos
cánceres, tienen una captación mejorada en las células cancerosas, lo que facilita la reducción
del crecimiento tumoral (6-8).
Nanopartículas en aplicaciones biomédicas
Varias Nanoparticulas, incluidos liposomas, NP de óxido de hierro y NP poliméricos, se están
probando en estudios clínicos y preclínicos para la administración de fármacos y genes con el
objetivo de mejorar su administración en sitios específicos (6). Muchos fármacos con eficacia
terapéutica tienen, lamentablemente, una escasa solubilidad en agua y su encapsulación en
NP puede mejorar su estabilidad minimizando la precipitación y reduciendo la necesidad de
codisolventes tóxicos (5-6). Los NP también pueden alterar las tasas de metabolismo y
aclaramiento del fármaco y, por tanto, mejorar la eficacia del fármaco. Por ejemplo, la FDA
aprobó los liposomas de doxorrubicina Doxil ®(Centocor Ortho Biotech, Horsham, PA, EE.
UU.) (6). Para el tratamiento del cáncer de mama metastásico y el sarcoma de Kaposi. Estas
nanopartículas tienen una eficacia significativamente mayor en comparación con el fármaco
libre (6-7).
Las NP convencionales o de primera generación no muestran el direccionamiento celular
específico, sin embargo, los restos de direccionamiento se pueden conjugar con los NP para
mejorar el suministro a células específicas (6). Como se mencionó anteriormente, los NP
pueden dirigirse activamente a diferentes sitios de la enfermedad conjugándolos con ligandos
específicos capaces de reconocer y unirse a proteínas de membrana que se sabe que se
sobreexpresan en diversas patologías, como en el cáncer (6).
Las NP también se utilizan como sistemas de administración de genes y han demostrado su
eficacia para reemplazar genes diana específicos afectados por el cáncer, ciertas infecciones
virales y otros trastornos genéticos (5). Desafortunadamente, las Nanoparticulas catiónicos
pueden causar respuestas inmunológicas que limitan su uso (5-7). Además, las NP se han
utilizado en imágenes celulares para detectar cambios celulares in vitro e in vivo. Las NP
pueden conjugarse con restos como anticuerpos y otros ligandos para aumentar su eficacia de
focalización (5).
A pesar de su prometedora eficacia como portadores de fármacos o genes, hay menos NP en
uso clínico de lo que uno podría predecir basándose en los amplios estudios preclínicos
(6)
. Esto se debe principalmente a la posible toxicidad por mecanismos que no se comprenden
completamente, lo que es especialmente cierto para los NP que se administran de forma
crónica (5-7).
Dendrímeros
Los dendrímeros son moléculas con un núcleo central y ramificaciones repetidas (7). Se
clasifican en función de su forma como polímeros, polímeros hiperramificados o polímeros
en cepillo y también se pueden clasificar por su peso molecular como de bajo o alto peso
molecular. Existen diversas aplicaciones de estas moléculas en los campos biomédico y
farmacéutico, en particular las nanopartículas de dendrímero se pueden funcionalizar con
ligandos variados para llegar al tejido tumoral a través de diferentes barreras en el cuerpo con
una mínima pérdida de actividad en el torrente sanguíneo. Por tanto, estas moléculas tienen la
capacidad de destruir selectivamente las células tumorales sin afectar a las sanas (7).
Fig. 1 | Paradigmas en nanomedicina del cáncer. a, b |Durante décadas, la nanomedicina del cáncer se ha
centrado en la administración de agentes terapéuticos a los tumores a través de mecanismos de selección
pasivos mediante la explotación del efecto de permeación y retención mejoradas (EPR) mediado a través de
vasos tumorales con fugas (parte a) o mecanismos de focalización activos en los que las nanopartículas se
funcionalizan con ligandos de focalización que se unen específicamente a los receptores en las superficies de
las células tumorales (parte B). c |Están surgiendo nuevos paradigmas que utilizan la nanomedicina para
activar las células inmunitarias. Estas nanomedicinas inducen citotóxicas respuestas antitumorales de las
células T en lugar de administrar fármacos al tumor. Las estrategias que utilizan estos nuevos enfoques
incluyen vacunas de ácido nucleico y el direccionamiento directo de las células T en la circulación o ex vivo.
Partesa yB están adaptados con permiso deárbitro.
Nanopartículas y conjugados
Procesamiento
Acceso de las nanoestructuras a las células diana
Rutas de administración
Las células clave involucradas en la inmunidad se concentran en los tejidos linfoides. Por
tanto, dirigirse a estos tejidos facilita el acceso a las células inmunes y, en consecuencia,
aumenta la eficacia de las nanovacunas. Una forma de administración es a través de las
mucosas. Los tejidos linfoides están asociados al entorno de las mucosas (MALT) a través de
las células M, especializadas en la transcitosis de cuerpos extraños para que sean reconocidos
por las células inmunes residentes en MALT (10). Para que tenga lugar el transporte de forma
eficaz, es necesario un equilibrio preciso entre las propiedades muchoadhesivas y de
mucodifusión de las nanopartículas. Además, la fisiología de la mucosa varía a lo largo del
cuerpo. Estas propiedades se definen por el tamaño y la composición de los nanovehículos,
en especial la composición de la superficie. Aunque las propiedades de las nanopartículas
dependerán de la zona del cuerpo en la que se administren, de forma general, el tamaño de la
nanopartícula debe ser inferior al tamaño de la mucosa, y la presencia de un revestimiento de
ácido poliláctico pegilado (PEG-PLA) favorece el transporte a través de las superficies
mucales (10).
La administración parenteral, que incluye las administraciones intramuscular, subcutánea e
intradérmica, es la principal vía de vacunación. A través de esta vía, según sus propiedades
fisicoquímicas y composición, las nanopartículas pueden viajar directamente al nódulo
linfático más cercano, o permanecer en el sitio de inyección y atraer a células dendríticas
migratorias y macrófagos. El drenaje al ganglio linfático es, generalmente, inversamente
proporcional al tamaño de las nanopartículas, siendo los 100 nm el tamaño óptimo (10). Por
otra parte, también es de gran importancia la carga superficial, de forma que el drenaje se ve
facilitado cuando las nanopartículas presentan carga negativa, debido a la repulsión que se
genera con la matriz extracelular, cargada negativamente, y que actúa como una la fuerza
motriz del desplazamiento. Aun así, también se ha observado que la presencia de PEG en la
superficie de los nanovehículos hace que su carga superficial se acerque a la neutralidad, con
un efecto positivo en el drenaje hacia el nódulo linfático (10).
Células diana y respuestas
Las principales células diana en la modulación del sistema inmune son las células inmunes
circulantes, que incluyen monocitos, macrófagos y células dendríticas. Una de las estrategias
para generar una respuesta inmune eficaz es diseñar nanovehículos que puedan alcanzar un
subconjunto de células inmunes. Aunque no existe una conclusión clara, el enfoque más
eficaz para dirigir a los nanovehículos hasta sus células diana parece ser proporcionarles
ligandos específicos de direccionamiento. En el caso de los macrófagos, este ligando puede
ser inmunoglobulina G, mientras que para las células dendríticas presenta buenos resultados
la funcionalización de las nanopartículas de ácido poli láctico-glicólico pegilado (PEG-
PLGA) con anticuerpos dirigidos a CD40, CD11c o DEC-205 (10).
Otra estrategia consiste en usar adyuvantes que modifican la respuesta de un conjunto de
células inmunes. Estas moléculas pueden imitar patrones moleculares asociados a patógenos
(PAMP), para activar a diferentes receptores que conducirán a la respuesta inmune (10).
Para conseguir inmunizar contra las enfermedades infecciosas, es necesario estimular la
respuesta celular y humoral. Se ha observado que existe una correlación entre el tamaño de
las nanopartículas y su capacidad para favorecer la presentación cruzada. En general, los
tamaños más pequeños mejoran la presentación cruzada y las respuestas Th1, mientras que
los tamaños micrométricos tienen una mayor preferencia a generar respuestas Th2. Esto
puede deberse a que las partículas más pequeñas, en especial con tamaños similares a los
virus, son endocitadas por las células dendríticas, favoreciéndose posteriormente el escape
endosomal, lo que impulsa la respuesta celular, mientras que los tamaños superiores a 500 nm
conducen a una presentación más eficiente por el MHCII, generando respuestas humorales
más fuertes. Aunque la unión de los antígenos a nanopartículas aumenta la activación de
células B y con ello la respuesta humoral, las nanopartículas se pueden dirigir de forma
directa hacia las células T CD8+ a través de células presentadoras de antígenos artificiales
(aAPCs), que presentan marcadores celulares, activando la respuesta celular. La activación de
células T CD8+ a través de aAPCs es mayor cuando se usan junto a partículas
paramagnéticas y Quantum Dots (10).
En las enfermedades autoinmunes, es necesario generar una respuesta tolerogénica para
controlar la respuesta inmune que tiene lugar contra los autoantígenos. En un individuo sano,
las APCs eliminan y procesan los restos producidos durante la apoptosis, para presentarlos en
los procesos de tolerancia. Para ello es esencial que los receptores de las APCs reconozcan la
señal apoptótica y endociten los residuos. En base a ello, se han diseñado nanopartículas que
porten en su interior las moléculas para las que se quiere generar tolerancia, y que presenten
en la superficie señales de apoptosis, como la fosfatidilserina, para potenciar su captación por
las APCs. Por otra parte, también es importante, la forma de la nanopartícula. Se ha
observado que las nanopartículas nanorod son más eficientes para inducir respuestas
tolerogénicas que las esféricas. Por último, cargar moléculas inmunomoduladoras, como la
rapamicina o la vitamina D3, en los nanotransportadores, ayuda a las APC a alcanzar un
estado tolerogénico (10).
Diagnostico por Nanopartículas
Nanopartículas multifuncionales para el inmunodiagnóstico del cáncer
La ventaja de anclar diferentes moléculas en un solo NP respalda el paradigma emergente en
la nanomedicina del cáncer para desarrollar sistemas multimodales que integran en una sola
plataforma capacidades tanto terapéuticas como de diagnóstico para rastrear la entrega a un
objetivo específico y monitorear su eficacia en tiempo real y a lo largo del tiempo (9). Por lo
tanto, los NP multimodales ofrecen nuevas oportunidades interesantes para el desarrollo de
agentes que combinan el tratamiento y el diagnóstico, para abordar las necesidades clínicas
de estadificación de la enfermedad y para monitorear la respuesta en el tratamiento
inmunoterapéutico del cáncer, lo que conducirá a mejores resultados en los pacientes (9).
Se han utilizado nanoestructuras bimodales que contienen sustancias químicas fluorescentes o
puntos cuánticos y NP de óxido de hierro superparamagnético (SPIO) para marcar las CD
tanto para imágenes ópticas como para resonancia magnética, pero sus aplicaciones clínicas
están limitadas por la citotoxicidad. En este sentido, una cuestión crucial sigue siendo la
seguridad de los NP utilizados (11).
Fig 2. Detección bimodal de CD. a) Fluorescencia NIR in vitro yb) Imágenes teñidas con azul de Prusia de DC
marcadas con nanopartículas de PLGA que contienen nanopartículas de óxido de hierro e ICG. c) Imagen
macroscópica NIR in vitro yd) Imagen de RM de la misma muestra que la utilizada en (a) y (b). e) Imagen de
fluorescencia NIR in vivo yf) Imagen de RM del ganglio linfático. Se obtuvo una imagen óptica de alta
resolución del ganglio linfático poplíteo (pata trasera izquierda de un ratón) mediante la técnica de imagen
NIR (e). El ganglio linfático de la pata trasera izquierda (inyección de DC marcadas) muestra una fuerte
reducción de la señal (contraste de RM oscuro), mientras que el ganglio linfático de la pata trasera derecha
(inyección de DC sin marcar) no muestra reducción de señal. El círculo rojo (ganglio linfático en la pata
trasera izquierda) representa la posición del ganglio linfático poplíteo donde se acumularon las CD marcadas
con nanopartículas de PLGA que contienen nanopartículas de óxido de hierro e ICG. Ampliación: a) 600, b)
40.
Fig 3. DC
marcadas con SPIO-NIR797 que se dirigen al ensayo in vivo de drenaje de LN. (A) DC etiquetadas que se
dirigen al LN poplíteo derecho por resonancia magnética. La flecha roja indica la ubicación de la pérdida de
señal dentro del LN poplíteo. La flecha blanca no muestra cambios de señal dentro del lado de control. (B) DC
etiquetadas que se dirigen al LN poplíteo mediante imágenes NIRF. La flecha roja indica NIRF en el LN
poplíteo. (C) Imagen de pseudo-color ampliada de los países en desarrollo etiquetados dentro del LN poplíteo.
(D) El volumen de LN se midió a partir de imágenes adquiridas antes de la inyección (0 h) y 24 h, 48 h, 3 días,
4 días y 5 días después de la inyección de PBS, DC no marcadas o DC marcadas. (E) El volumen vacío de
señal y (F) la pérdida de señal fraccional se midió a partir de imágenes adquiridas antes de la inyección (0 h) y
24 h, 48 h, 3 días, 4 días y 5 días después de la inyección de las CD marcadas. * P <0,05.
Se han implementado NP SPIO encapsuladas con policatión anfifílico para marcar y controlar
el destino de la migración de las CD murinas al LN de drenaje con el escáner clínico 3T in
vivo. Esta sonda demostró ser una herramienta eficaz, con baja toxicidad, en la evaluación de
inmunoterapias basadas en DC en imágenes clínicas de resonancia magnética. Además, en
contraste con trabajos anteriores que generalmente informaron el etiquetado de países en
desarrollo inmaduros, este estudio etiquetó los países en desarrollo maduros y el proceso de
etiquetado no afectó negativamente la viabilidad celular, la morfología y la expresión de
biomarcadores de superficie (11).
Fig. 4. (A) Imagen de resonancia magnética in vivo de la localización de CD cargadas de SPIO en los nodos
poplíteos de ratones. Tanto la FFE como la TSE describieron claramente la reducción del SI intraganglionar a
lo largo del tiempo en la extremidad posterior izquierda después de la s.c. inyección de 1 106 en la planta del
pie, con la pierna derecha inyectada con el mismo número de células sin marcar que el control (flechas
amarillas). En la imagen FFE a las 0 h, la señal de oscurecimiento dentro de los nodos bilaterales representa
artefactos de susceptibilidad, que se compensan eficazmente en TSE. (B) El estudio patológico reveló que la
partícula de hierro teñida de azul contenía células dispersas en la zona de células T del nodo. Insertar es la
vista microscópica de 400 de la región dentro del cuadro blanco punteado. (C) Con el aumento de la cantidad
de CD inyectadas, la señal de RM intranodal se volvió más oscura. La mayor sensibilidad de FFE permitió
detectar una caída de señal poco visible en TSE después de s.c. inyección de 1105 CD cargados de SPIO en la
almohadilla del pie izquierda. El control es el nodo contralateral dado el mismo número de países en
desarrollo sin marcar. (Para la interpretación de las referencias al color en la leyenda de esta figura, se remite
al lector a la versión web de este artículo).
Figura 1: Proceso de seguimiento de células T: las células T se marcaron con GNP in vitro; luego, las células
se inyectaron a ratones y se rastrearon in vivo utilizando imágenes de TC.
Fig 5: Tomografía computarizada de la distribución biológica de todo el cuerpo y la migración de las células T
"doradas". A. Imagen de tomografía computarizada de procesamiento de volumen en 3D de las células T que se
acumularon en los pulmones 48 horas después de la inyección (recuadro: imagen en 3D de los pulmones. Las
áreas amarillas son células T marcadas con GNP). B. Imagen 3D del bazo; C. Imagen 3D del hígado; D.
Imagen de CT 2D representativa de los pulmones; flecha que indica las celdas marcadas con oro.
Fig 6 | Resonancia magnética in vitro e in vivo de países en desarrollo marcados con nanopartículas. a,
Imagen de resonancia magnética in vitro (arriba) de países en desarrollo etiquetados con diferentes cantidades
de nanopartículas de Fe3O4-ZnO durante 1 hy gráfico de tiempo de relajación T2 (abajo). b, Imágenes de
resonancia magnética in vitro (arriba) y gráfico de tiempo de relajación T2 (abajo) de las CD incubadas con
40 mg ml21 de nanopartículas de Fe3O4-ZnO o Fe3O4 durante el tiempo indicado. c, Imágenes de resonancia
magnética in vivo de los ganglios linfáticos de drenaje de un ratón (izquierda) inyectado con CD marcadas con
Fe3O4-ZnO (flecha roja) o nanopartículas de ZnO (flecha amarilla) en las almohadillas de las patas
ipsilaterales. A la derecha se muestra un ganglio linfático de drenaje (flecha verde) de un ratón inyectado con
nanopartículas de Fe3O4-ZnO sin células. d, Inmunohistoquímica representativa del drenaje de los ganglios
linfáticos después de la inyección con CD marcadas con nanopartículas de Fe3O4-ZnO (puntos de color
marrón oscuro). T, zona de células T (Thy1.2þ), B, folículo de células B (B220þ).
Tratamiento de Melanoma
Nanopartículas a base de lípidos
Las nanopartículas lipídicas que poseen la capacidad de entregar ARNm es un tratamiento
potente en la inmunoterapia para el cáncer. La inducción de una fuerte respuesta de células T
citotóxicas es un prerrequisito importante para una inmunoterapia exitosa contra muchas
enfermedades virales y tumores. Se ha demostrado que las vacunas de nucleótidos, incluidas
las vacunas de ARNm con su síntesis de antígeno intracelular, son potentes activadores de
una respuesta inmune citotóxica (15). La entrega intracelular de vacunas de ARNm al citosol
de las células inmunes presentadoras de antígeno aún no es satisfactoria. Existe el caso de una
Nanopartícula Lipídica que se la llamo B-11, la cual funciona bien para administrar vacunas
de ARNm. En experimentos realizados en ratones reporteros Ai14D y la formulación B-11
LNP, mostraron transfección en diferentes poblaciones de células inmunitarias, incluidas
células dendríticas, macrófagos, neutrófilos y células B. La síntesis y degradación del
antígeno citosólico por parte del proteasoma permite la presentación del antígeno en MHC-I
y, en consecuencia, activación de una potente respuesta de células T CD 8 (15,17) . No solo
inducimos la proliferación de células T CD 8, sino que las células asesinas también fueron
funcionales, como se muestra al extender la supervivencia general en un modelo de
melanoma de ratón transgénico (15).
Aparte de esto llamo la atención de este nuevo método el efecto en el modelo de tumor
agresivo B16F10, donde el ARNm que codifica los autoantígenos asociados al tumor, TRP2
y gp100, fue capaz de superar la auto-tolerancia y significarfiextender significativamente la
supervivencia global de los ratones. El hecho de que la adición de LPS a la formulación de
LNP aumente aún más la supervivencia es una indicación de que tales adiciones pueden
aumentar la potencia de las vacunas de ARNm administradas por las LNP. La prueba de
concepto presentada aquí justifica una mayor investigación de los LNP como vectores de
vacunas de ARNm potencialmente útiles (15,17).
Figura 1. Diseño del M2NP para especificaciones TAM tipo M2fic Inmunoterapia dirigida a moléculas. (A)
Enfoque híbrido del péptido de fusión αM2pep. (B) Estructura y componentes de M2NP. (C) Doble focalización
sinérgica basada en M2NP de TAM similares a M2 en vivo
Bibliografía
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