PAPEL DE LOS LABORATORIOS EN EL CONTROL DE LA MASTITIS

“USO DE LOS LABORATORIOS PARA CONTROLAR LA MASTITIS Y MEJORAR

LA CALIDAD DE LECHE”

MAE MVZ Juan Francisco Sepúlveda Aceves

Universidad De La Salle Bajío
León Guanajuato, México
[email protected]

Introducción

Como especialistas en programas de salud de ubre, nuestros objetivos

principales son mejorar la calidad de leche y controlar la mastitis clínica y subclínica. Es
muy importante tener metas realistas y adecuadas, para lograrlas debemos
implementar programas de control con el fin de:

A. Realizar una rutina de ordeño adecuada

B. Asegurar el buen funcionamiento y uso del equipo de ordeño
C. Proveer un medio ambiente limpio, seco y confortable
D. Implementar un programa de manejo de vacas secas adecuado
E. Implementar protocolos que nos permitan generar información
relacionada con la calidad de leche y de salud de ubre monitoreando:
• El trabajo de los ordeñadores al preparar la ubre para la ordeña
• El estado de limpieza de los corrales
• El lavado del equipo de ordeño
• El enfriamiento de la leche
• El estado de salud de la ubre (CCS y patógenos)
• Mastitis clínica y erradicación de patógenos contagiosos
• Grado de avance para llegar a nuestras metas

En este punto se debe enfatizar que para lograr que la información

generada en sea confiable para tomar decisiones se deben implementar dos
acciones:

Examen cualitativo.- Inspección personal y física de los puntos mencionados

generando registros para su análisis.
Examen cuantitativo.- Auxiliarse con El uso de los laboratorios para controlar
la mastitis y mejorar la calidad de leche. Esta última herramienta es muy
necesaria ya que ayuda a medir con más precisión los avances o retrocesos de
los programas para controlar mastitis y mejorar la calidad de leche.

PROTOCOLOS DE LABORATORIO

Para mejorar la calidad de leche y controlar la mastitis se pueden usar

“laboratorios certificados y laboratorios montados en el rancho”. El hecho de
 entrenar a personal para que realicen pruebas de laboratorio en el rancho,
agiliza los resultados y permite tomar decisiones inmediatas; sin embargo se
requiere capacitación de un profesional para asegurar que los protocolos y
resultados sean confiables. Una “mala información es peor que no tener
información”. Las pruebas utilizadas con más frecuencia son:

1. CULTIVO DE TANQUE (Conteo Estándar en Placa (CEP)

Conteo de leche pasteurizada (CLP), Conteo de leche
Preincubada (PI), conteo de Coliformes (COLI)
2. CULTIVO DE TANQUE (PATÓGENOS)
3. CULTIVO DE CASOS CLINICOS, Vacas secas y recién paridas en el
rancho
4. DIAGNOSTICO DE MASTITIS CON EL EXAMEN MICROSCOPICO
DE LA LECHE, EN EL RANCHO
5. CONTEO DE CÉLULAS SOMÁTICAS (CCS)
- CCS de tanque
- CCS vaca individual
-Prueba de california (CMT)
6. CONTEO DIFERENCIAL DE CELULAS SOMATICAS EN EL
RANCHO
7. MUESTREO ESTRATEGICO (CCS Y BACTERIOLOGIA)

1. CULTIVO DE TANQUE (CEP, CLP, PI, COLI)

Es recomendable realizar cultivos del tanque de leche cuando menos tres veces por
semana con el fin de supervisar el desempeño de los ordeñadores, limpieza de
corrales y el lavado del equipo de ordeño. Esta herramienta es de gran valor ya que
permite detectar cambios diarios en la rutina de trabajo. Algunos factores que pueden
alterar este monitoreo son el mal enfriamiento de la leche después del ordeño y la
contaminación de muestras; sin embargo si el personal está bien capacitado para
tomar muestras y mantener el equipo en correcto funcionamiento, los resultados
reflejan las labores diarias del personal y el estado de los corrales. Se recomienda que
los análisis mencionados a continuación sean realizados por laboratorios certificados:

Monitoreo del lavado y limpieza del equipo de ordeño

Conteo Estándar en Placa (CEP): Éste tipo de cultivo indica el número total de
bacterias aeróbicas presentes en la muestra de leche. El CEP es muy importante para
vigilar la limpieza de los procedimientos de ordeño, el lavado del equipo de ordeño y el
enfriamiento. Las muestras se cultivan a 32°C durante 48 horas. La meta principal es
tener menos de 5,000 UFC por ml.

Conteo en Leche Pasteurizada (CLP): Esta es una herramienta excelente para

monitorear la limpieza del equipo de ordeño, tanque de leche y el estado de los hules
que forman parte del equipo de ordeño. La piedra de leche y el depósito de minerales
y grasa en el equipo de ordeño y en el tanque aumentan las Unidades formadoras de
colonias (UFC) por mililitro. Éste conteo mide la cantidad de bacterias termodúricas
(sobreviven la pasteurización). La meta principal es tener conteos menores a 50
UFC/ml.

Monitoreo del trabajo de los ordeñadores:

1. Conteo de coliformes (COLI). Es un indicador excelente de la limpieza del pezón,

de la unidad de ordeño, de las manos del ordeñador, del suelo en la sala de ordeño.
La principal fuente de contaminación del tanque de leche por coliformes es el estiércol.
La meta principal son conteos de menos de 100 UFC por mililitro.

2. Conteo de leche preliminar o preincubada (PI). Esta cuenta bacteriana es una forma
excelente de monitorear la limpieza de la ubre y las condiciones sanitarias del establo.
Las bacterias asociadas en este conteo pueden vivir en temperaturas frías durante el
almacenamiento de la leche y cerca de 1% pueden sobrevivir la pasteurización, por lo
tanto, tienen un papel importante en la vida de anaquel de la leche. La muestra se
mantiene a 12.8°C (55°F) durante 18 horas antes de cultivar y después se realiza el
conteo rutinario de conteo estándar en placa. La meta principal son conteos de menos
de 10,000 UFC/ml.

En un estudio realizado en Michigan aunado a una adecuada toma de

decisiones, principalmente capacitación a ordeñadores se encontraron los siguientes
resultados:

ENTREGAS DE TANQUES DE LECHE QUE CALIFICAN A PREMIOS DE CALIDAD

Junio 2001 - Junio 2002
AÑO AÑO Tanques / año Libras de leche
CFU / ML 2001 2002 DIFERENCIA con m ejor calidad
PI < 10,000 25% 74% 49% 715 32,175,000
COLIFORMES< 100 57% 67% 10% 146 6,570,000
CLP < 50 24% 51% 27% 394 17,730,000
CEP < 5,000 32% 78% 40% 584 26,280,000
Juan Sepúlveda, Paul Busman and Phil Sears, National Mastitis Council Proceedings 2003

2. CULTIVO DE LA LECHE DEL TANQUE (PATOGENOS)

Otra herramienta que puede dar información valiosa para prevenir mastitis es el
cultivo de la leche del tanque para diferenciar los patógenos en la leche. La
diferenciación de dichos microorganismos ayuda a tomar decisiones para controlar los
problemas específicos de cada establo que visitemos.

Un solo cultivo no genera suficiente información para confirmar un hato negativo a

bacterias contagiosas, la probabilidad para que Staphylococcus aureus se mantenga
sin detectar en un solo cultivo es 41% y para Streptococcus agalactiae 30%. Se
recomiendan cultivos en serie para detectar bacterias contagiosas. Sin embargo, si se
toman al menos 3 muestras de leche con intervalos de 3 a 4 días y todas son
negativas, la probabilidad de que las vacas ordeñadas sean negativas es del 97.3%
para Streptococcus agalactiae, 93.1% para Staphylococcus aureus y 70% para
Micoplasma spp. Cultivar diariamente por 7 días se aumenta el valor predictivo de
muestras negativas (González, N. and Wilson D. J. 2002)

También es indispensable conocer los valores aceptables de los diferentes

microorganismos que se encuentran en la leche, ya que al monitorear las unidades
formadoras de colonia (UFC) en el tanque permite buscar la forma de solucionar los
problemas de cada rancho (Tabla 1).

Tabla 1. Valores aceptables de microorganismos presentes en la leche.

BACTERIAS CONTAGIOSAS: NIVELES ACEPTABLES UFC/ML

Estafilococos (Coagulasa Positivo) Negativo

Streptococcus agalactiae Negativo
Mycoplasma spp. Negativo

OTRAS:
Coliformes 0 - 100
Streptococcus Spp. 0 - 500
Estafilococos (Coagulasa Negativos) 0 - 500
Corynebacterium 0 - 500
Bacilos, Pseudomonas 0 - 500

Adaptado de AS-1128, April 1997 J. W. Schroeder

3. CULTIVO DE CASOS CLINICOS, SECAS Y RECIEN PARIDAS EN EL

RANCHO

De forma práctica y enfocados al tratamiento de Mastitis Clínica es muy importante

saber la incidencia de microorganismos que causan dicha enfermedad en cada rancho,
esto se puede lograr cultivando “en el rancho” las muestras de leche de animales
enfermos y de acuerdo al resultado dirigir nuestros el tratamiento con antibióticos o no
aplicar tratamiento a las vacas que no se benefician de dichos medicamentos como son
aquellas con infecciones con coliformes, entre otras. El entrenamiento al personal del
rancho que realizará cultivos es básico para generar información confiable. El realizar
estas técnicas en el rancho ayuda a tener información rápida (24 horas) para tomar
decisiones oportunas.

En el año 2000 se realizó un estudio en México en los estados de Aguascalientes,

Zacatecas, Jalisco, Querétaro, Nayarit y Baja California Norte en donde se colectó
información sobre cultivos de leche para conocer la incidencia de los diferentes tipos
de microorganismos que causan mastitis en dichas zonas, lo que se encontró fue lo
siguiente:

Sin crecimiento 27.3 %

Coliformes 44.6 %
Staphylococcus aureus 20.76 %
Streptococcus agalactiae 6.69 %
Staphylococcus spp 0.05 %
Streptococcus spp 0.57 %

Las bacterias Coliformes y los cultivos sin crecimiento constituyeron el 71.9 %,

esto es de importancia ya que a animales con cultivos de leche que tienen coliformes o
no tienen crecimiento, no es necesario administrar antibióticos a menos que el animal
muestre signos sistémicos ya que no se benefician después de la terapia. Si sólo se
tratan vacas con infecciones causadas por estreptococos o estafilococos, se ahorra
dinero en antibióticos y en leche desechada. También se recomienda cultivar vacas en
el momento del secado y 4 días después de parto para monitorear la cura o infección
durante el periodo seco y la posible entrada de microorganismos contagiosos al hato en
ordeño provenientes de vacas recién paridas.

4. DIAGNOSTICO DE MASTITIS CON EL EXAMEN MICROSCÓPICO DE LA

LECHE EN EL RANCHO

La tinción de la leche para el diagnóstico de mastitis permite saber si damos

tratamientos dos a cuatro horas después de que obtenemos la muestra de leche de
vacas con mastitis clínica. Después de que localizar a la vaca con mastitis clínica, se
toma una muestra de leche, se incuba a 35°C durante 2 a 4 horas para que si tiene
bacterias se reproduzcan y sea más sencillo encontrarlas en el microscopio. Después
de la incubación se agita la leche, se toma una muestra con un asa y se esparce en un
porta objetos, posteriormente se fija con calor y se sumerge en azul de metileno
durante 8 segundos, se enjuaga y se observa al microscopio. Aquí lo más importante
es que el técnico sepa buscar “estreptococos o estafilococos” ya que son a las
bacterias que recibirían tratamiento con antibióticos. También debe conocer la
morfología de bacilos, bacterias pleomórficas, células epiteliales, leucocitos etc.

En un estudio en donde se tiño leche y se compararon los resultados contra

cultivos con una sensibilidad de 98% (n=60). Al observar al microscopio, se buscaron
bacterias, los cocos se denominamos estreptococos o estafilococos de acuerdo a su
forma, a los bacilos se les denominaron coliformes. Si sólo se observaban células
somáticas (células epiteliales y leucocitos) la muestra sin crecimiento. Con fines
prácticos encontrar solamente células somáticas, pleomorfos (corynebacterium o
Actinomices pyogenes), hifas, levaduras o cualquier microorganismo que no sean
cocos el animal no se trata con antibiótico a menos que los animales muestren signos
sistémicos (Sepúlveda, 2005).
 Esta técnica tiene la ventaja es muy sencilla y cualquier persona con
entrenamiento puede llevarla a cabo, el personal del rancho no manejaría
concentraciones tan altas de bacterias como en cultivos en agar y por lo tanto no
estarían muy expuestos. Tiene la limitante de que solo se pueden dar tratamientos
(ahorrando antibióticos), no se puede saber si son cocos contagiosos a menos de que
se realice un cultivo, por lo tanto se recomienda llevar a cabo cultivos rutinarios de la
leche del tanque para monitorear y llevar un control adecuado de Streptococcus
agalactiae, Staphylococcus aureus o Micoplasmas spp.

5. CONTEO DE CELULAS SOMATICAS

CCS DE TANQUE, CCS DE VACA INDIVIDUAL Y PRUEBA DE CALIFORNIA

(CMT)

El conteo de células somáticas (CSS) es un excelente indicador del estado

inflamatorio de la ubre, puede ayudar a medir el grado de inflamación, pero no indica el
agente etiológico. En hatos pequeños puede ser uno de los primeros indicadores de
que empieza un problema en el establo, en hatos grandes (>1000 vacas en ordeña) es
más difícil ver cambios rápidos ya que la leche de vacas enfermas muchas veces se
diluye con la leche de las sanas. Para obtener una información adecuada se
recomienda que los conteos de células somáticas en tanque se realicen en laboratorios
certificados al menos 4 veces a la semana pero es mejor realizarlos diariamente.

Se debe tomar en cuenta que el conteo de células somáticas de tanque no indica la

prevalencia de vacas con conteos altos, ejemplo:
COMPARACIÓN DEL CONTEO DE CÉLULAS SOMATICAS INDIVIDUAL CONTRA TANQUE EN
DOS HATOS FICTICIOS
Managing Milk Quality, Pierre Levesque
HATO 1 HATO 1
VACA 1 50 120
VACA 2 60 270
VACA 3 80 320
VACA 4 890 370
PROMEDIO CCS 270 270
EN TANQUE
% > 200 (PREVALENCIA) 25% 75%

Debido a esto necesitamos tomar en cuenta el conteo de células somáticas

por vaca individual, es recomendable realizar el análisis al menos una vez al mes para
poder comparar entre pruebas y generar datos sobre mastitis subclínica como:

-Tasa de nuevas infecciones: Porcentaje de vacas no infectadas que se infectan en ese

mes, la meta es tener menos del 8% de nuevas infecciones. Se obtiene contando las
vacas que tienen menos de 200,000 CCS y el próximo mes están por encima de
200,000 CCS.
-Tasa de Curaciones: Porcentaje de vacas con CCS >200,000 que en la próxima
prueba muestran un CCS<200,000. Una buena meta es tener >8%.
-Tasa de Vacas Crónicas: Porcentaje de vacas con CCS >200,000 que en la próxima
prueba muestran un CCS>200,000. Una buena meta es tener 8%.
-Tasa de Vacas Limpias: Porcentaje de vacas con CCS <200,000 que en la próxima
prueba muestran un CCS<200,000. Una buena meta es tener 75%.

Se puede utilizar este monitoreo para vacas recién paridas tomando en cuenta
su CCS antes y después del secado buscando la meta es tener menos del 15% de
nuevas infecciones y un 75% de curaciones. También es importante revisar la
prevalencia de mastitis subclínica de estos mismos animales buscando tener <20% de
vacas >200,000 CCS al parto y <10% de vaquillas >200,000 CCS.
Al revisar la prevalencia de mastitis subclínica en el hato en general se busca
tener <20% del ganado >200,000 CCS.

Este tipo de análisis se puede realizar con menos exactitud con la prueba de
California, la ventaja sería que el mismo día del muestreo y de otra forma es necesario
esperar los resultados de las empresas que realizan las pruebas.

5.1 CONTEO DIFERENCIAL DE CELULAS SOMATICAS EN EL RANCHO

El conteo de células somáticas microscópico directo es una técnica que lleva

muchos años de existir, las plantas pasteurizadoras de muchos países lo han
reemplazado por equipo que permite hacer rápidamente los conteos. Esta técnica
permite que los ganaderos puedan tener en sus laboratorios una forma de contar
células somáticas. Es muy útil sobre todo para casos en los que urge separar leche de
animales enfermos para disminuir el conteo de células somáticas del tanque sobre todo
cuando están a punto de perder su licencia para entregar la leche a plantas
pasteurizadoras. Este tipo de técnica se usa para el CCS en tanque, en leche de un
corral completo o de vacas de individuales. Teniendo los CCS el mismo día de la toma
de muestra se puede calcular el aporte de células somáticas al tanque por una vaca
individual o un corral completo para separar la leche de vacas o corrales hasta poder
llegar a los niveles permisibles de células somáticas. Esto es una medida que permite
tener resultados rápidos, obviamente esto da tiempo para implementar los programas
de control de mastitis y calidad de leche.

6. MUESTREO ESTRATÉGICO (CCS Y BACTERIOLOGIA)

Esta es una excelente herramienta para poder conocer las células somáticas y
conteos bacterianos de cada corral del rancho analizando la contribución que estos en
el conteo final del tanque. Se realiza instalando un codo de acero inoxidable después
de la bomba de leche del recibidor, ese codo debe tener un niple para poder conectar
una manguera estéril, el objetivo es que cada vez que pase leche a través del codo se
pueda colectar una muestra representativa de la leche de cada corral en un frasco,
para posteriormente realizar el conteo de células somáticas y bacterias. Se recomienda
obtener una muestra de la leche de cada corral por separado y a su vez una muestra
de la leche que se va acumulando en el tanque enfriador conforme pasa cada corral.
Se puede obtener información muy interesante como se observa en la siguiente gráfica.

MUESTREO ESTRATEGICO CCS

2500

2250

2000

1750
CCS X 1000 /ML

1500

1250 MUESTREO
POR CORRAL
1000
MUESTREO
750 ACUMULADO
DE TANQUE
500

250

0
CORRAL 1

CORRAL 2

CORRAL 3

CORRAL 4

CORRAL 5

CORRAL 6

CORRAL 7

CORRAL 8

CORRAL 9

En esta gráfica se observa que las vacas del corral #9 tienen 2,295,000 CCS
que elevan el CCS de 238,000 CCS a 560,000 CCS. Esta información es muy útil
para identificar el corral problema.

Usando las mismas muestras de leche se puede hacer el conteo bacteriano

corral por corral y acumulado del tanque analizándolo de la misma forma y a su vez
realizar cultivos para la búsqueda de patógenos presentes en cada corral. Además si
el mismo día en que se realiza el muestreo estratégico de codo se hace la prueba de
california o el conteo de células somáticas vaca por vaca se tiene la información del
corral con CCS más altas, animales que contribuyen mas a ese conteo de células
somáticas y los microorganismos patógenos presentes en esos corrales.
 Este tipo de muestreos es muy recomendable sobre todo para hatos grandes en
donde la leche de vacas con CCS altas o infectadas con patógenos contagiosos se
pudiera diluir con la leche de vacas sanas.

Referencias
1. Juan Sepúlveda, Paul Busman and Phil Sears.
Training Hispanic Employees to Produce Quality Milk
National Mastitis Council Annual Meeting Proceedings Forth Worth, Texas.
2 .Rubén N. González and David J. Wilson Cornell University Ithaca, New York
118 National Mastitis Council Annual Meeting Proceedings (2002)
Realistic Milk Culture Programs for Herd Expansion
3. Buelow, K.L., C.B. Thomas, W.J. Goodger, K.V. Nordlund, and M.T. Collins. 1996. A
model to determine sampling strategies and milk inoculum volume for the detection of
intramammary Staphylococcus aureus infections in dairy cattle by bacteriological culture. Prev.
Vet. Med. 25:343.12. NAHMS Dairy '96 Part I: Reference of 1996 Dairy Management Practices.
4. Buelow, K., and K. Nordlund. 1999. Factors affecting sensitivity and specificity of
microbiological culture for Staphylococcus aureus. Proc. 38th Annual Meeting of the National
Mastitis Council, pp 68-75.
5. Pierre Lévesque, Menos Mastitis, Mejor Leche 2004
Institut de technologie agroalimentaire Quebec, Canada.