Práctica No. 2 Microscopía

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Práctica No.

2
Microscopía de luz

Objetivo:

Que el alumno conozca las partes, el funcionamiento y los cuidados que se deben
de tener con el microscopio de luz, así como la obtención de microfotografías de
distintos tipos de células.

Introducción: El microscopio es un instrumento óptico capaz de amplificar y resolver


detalles finos de objetos (especímenes) que no pueden observarse a simple vista. La
microscopía es la ciencia que abarca el conjunto de métodos y aplicaciones que emplean
microscopios para su observación. Esta última se divide en: de luz y electrónica. La
importancia del microscopio radica en que gracias a el, se ha revolucionado el
conocimiento del mundo biológico (y médico) de nuestra era. El microscopio se
clasifica de acuerdo al número de lentes necesarias para formar una imagen en:
a) Simple, formado por una sola lente, llamada lupa.
b) Compuesto, formado por dos o mas lentes.
Los microorganismos son tan pequeños que no se supo de su existencia hasta principios
del siglo XVII por el holandés Antonio Van Leeuwenhoek gracias al microscopio
simple inventado por él.

Posteriormente en 1665, Roberto Hooke, acuñó por primera vez el nombre de célula al
examinar con su microscopio una laminilla de corcho, observó que estaba formado por
pequeñas cavidades a las que llamó células.

Posteriormente, gracias al microscopio, nace la Teoría Celular con Theodor Swann y


Matthias Schleiden en 1839. La cual menciona en sus postulados que todos los
organismos están compuestos por células y sus productos celulares, que la célula es la
unidad donde se llevan a cabo todas las funciones vitales y que toda célula procede de
otra preexistente.
En los microscopios de finales del siglo XIX se inventa e incorpora el condensador por
el físico alemán Ernest Abbe, que junto con la posterior incorporación de la lámpara
dieron un gran paso en la fabricación y operación del microscopio.

Los microscopios modernos combinan diversos accesorios para la observación de un


espécimen por diferentes técnicas: campo claro, campo oscuro, contraste de fase,
fluorescencia, polarización, etc. Dando lugar a diferentes técnicas de microscopía.

Poder de resolución. La característica más importante de un microscopio es su poder de


resolución, que es la capacidad de un instrumento óptico de distinguir dos objetos
cercanos como entidades diferentes (separados) en la imagen.

El límite de resolución es la distancia mínima que nos permite percibir dos objetos
separados. Depende de la longitud de onda de la luz usada (λ) y de la apertura numérica
(AN), que es la capacidad de una lente para absorber luz. Está dada por la expresión;

0.61 λ
Límite de resolución = -----------------
AN

El valor de AN se expresa según la relación: AN= nsenα

En donde “n” es el índice de refracción del medio a través del cual pasa la luz después
de dejar un objeto y antes de entrar al lente objetivo y sen de α, expresa la apertura
angular del objetivo (semi-cono de luz que entra al objetivo). De estas ecuaciones puede
deducirse que: a) A mayor AN o menor λ, mayor poder de resolución de un instrumento
(límite de resolución numéricamente menor); b) Debido a que el aceite de inmersión
tiene un índice de refracción mayor que el aire e igual al vidrio, mejora (aumenta) el
valor de AN.
El aumento total (AT) que se puede alcanzar con un microscopio compuesto se obtiene
multiplicando el aumento del objetivo por el del ocular.
AT=aumento obj. X aumento ocular
La iluminación Köhler. Es una técnica que permite iluminar solo la zona del espécimen,
eliminando los rayos secundarios y se obtiene el beneficio total de las lentes utilizadas
dando mayor nitidez y contraste a lo observado. Los pasos para obtenerla son.
1.- Colocar espécimen y enfocar con objetivo 10X. Iluminar con luz tenue.
2.- Abrir diafragma de campo e iris
3.- Subir el condensador
4.- Cerrar diafragma de campo
5.- Bajar condensador hasta ver los bordes nítidos del diafragma de campo (hexágono)
6.- En caso de ser necesario centrar el condensador (hexágono).
7.- Abrir el diafragma de campo (hexágono) en cuanto no se observe en el campo
8.- Cerrar el diafragma iris. Contrastar.

Material:
Microscopio compuesto. Campo claro
Portaobjetos y cubreobjetos
Muestras de células: levaduras, epitelio bucal, etc.
Muestra de agua encharcada.
Colorantes: azul de algodón, azul de metileno, safranina, etc.
Pipetas Pasteur
Bulbos o pipetas de plástico

Métodos
A. Cuidados del microscopio.
1.- El microscopio debe estar en una mesa apagado, tapado y con el objetivo 10X en
posición de uso. Así, en estas condiciones se debe de dejar al final de la sesión.
2.- Evitar arrastrar, golpear o inclinar el microscopio.
3.- No forzar los tornillos macro y micrométrico, ni el diafragma iris.
4.- Impedir tocar las lentes con los dedos.
5.- No ingerir alimentos ni bebidas mientras use el microscopio, para evitar ensuciarlo.
6.- Tener cuidado de que el cordón de corriente no salga de la mesa, para evitar
arrastrarlo y tumbarlo.
7.- No utilizar rimel al observar al microscopio para evitar ensuciar los oculares
8.- Limpiar con papel para lentes (seda) después de usar el objetivo de inmersión
(100X).
9.- Siempre tener cuidado de no golpear la preparación con los lentes objetivos.

B. Uso del microscopio.


1.- Destapar, conectar y prender el microscopio.
2.- Colocar el objetivo 10X (seco débil) en posición de uso, girando el revolver de la
zona correcta (moleteado).
3.- Poner nuestra preparación usando correctamente las pinzas sujetadoras.
4.- Acercar la preparación hacia el objetivo subiendo cuidadosamente la platina y
viendo lateralmente. Dejar a 2-3 mm la distancia entre ellos (tope).
5.- Enfocar, viendo a través de los oculares alejando la preparación del objetivo
(bajando la platina) con tornillo macrométrico. Enfoque fino con tornillo micrométrico.
6.- Llevar al centro del campo la muestra que se quiera observar con mas detalle y girar
el revolver para colocar el objetivo 40X (seco fuerte) en posición de uso. Enfocar
cuidadosamente con tornillo micrométrico.
7. Si se quiere observar en inmersión girar revolver y dejarlo en posición intermedia
entre los objetivos 40X y 100X. En la zona iluminada del porta colocar una gota de
aceite de inmersión y bajar un poco la platina. Después girar el revolver y colocar en
posición de uso (vertical) el objetivo 100X. Acercar cuidadosamente la platina
(preparación) hacia el objetivo viendo lateralmente hasta que se forme un menisco.
Asomarse a los oculares y enfocar cuidadosamente usando solamente el tornillo
micrométrico.
8. Al terminar, alejar la platina del objetivo, girar el revolver un poco y limpiar el aceite
de inmersión de la lente frontal del objetivo.
9.- Apagar el microscopio primero bajando totalmente la intensidad de la lámpara y
después el botón de apagado. Bajar la platina, quitar la preparación y dejar el objetivo
de 10X en posición de uso. Enrollar el cable de corriente.
10.- Tapar el microscopio.

Nota: Avisar al profesor de cualquier irregularidad que note en el microscopio, o


cualquier duda.

Técnica para la realización de la práctica


1.- En portaobjetos perfectamente limpios, colocar una gota de suspensión de células de
S. cereviseae y agregar una gota (pequeña) de safranina. Colocar el cubreobjeto y
observar y fotografiar.
2.- Con otro portaobjeto raspar ligeramente la lengua y en el porta con células y saliva,
colocar una gota (pequeña) de azul de metileno. Colocar el cubreobjeto, observar y
fotografiar.
3.- En un portaobjeto colocar una muestra a elegir de: agua encharcada, grano de polen,
cabello, insecto, hilo, letra en un papel, etc. Y colocar cuidadosamente la preparación en
el microscopio. Enfocar, observar y fotografiar.
Nota: todas las observaciones se harán con objetivos 10 y 40X.

Resultados y Cuestionario
1.- Pegue las fotografías de todas las preparaciones observadas, indicando en el pie de
figura que es cada una de ellas y el objetivo utilizado.
2.- Mencione las diferencias más importantes, entre las células observadas.
3.- Haga un esquema de un microscopio, a mano, e indique sus partes agrupándolas en
los tres sistemas.
4.- Comparte tu experiencia (de cada miembro del equipo), de la primera vez que
observaste al microscopio. ¿Cuándo fue? ¿Que viste? ¿Qué pensaste?
5.- Calcule el límite de resolución de un microscopio considerando una longitud de onda
de 490 nm, un índice de refracción de 1.4 y un ángulo del cono de luz en el lente
objetivo de 155º (ojo, no semi-cono).

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