La Electroforesis

La electroforesis
Es una técnica que emplean los científicos en el laboratorio utilizada para separar el ADN,
el ARN, o moléculas o proteínas en base a su tamaño y carga eléctrica. Se utiliza una
corriente eléctrica para mover las moléculas y que se separen a través de un gel. Los poros
del gel actúan como un colador, permitiendo que las moléculas más pequeñas se muevan
más rápido que las grandes. Las condiciones utilizadas durante la electroforesis se pueden
ajustar para separar moléculas en el rango de tamaño que se desee.
Explicación
La electroforesis es una técnica que se utiliza de forma generalizada en la que,
fundamentalmente, se aplica corriente eléctrica a moléculas biológicas, ya sean ADN,
proteínas o ARN..., y se separan en función de si son más grandes o más pequeñas. Se
utiliza en una gran variedad de aplicaciones... como en medicina forense para determinar la
identidad de las personas que puedan haber participado en un delito, mediante la
vinculación de su patrón de ADN -su patrón de electroforesis- a uno que esté en una base
de datos. El proyecto genoma humano se llevó a cabo con algo que se llama electroforesis
capilar, mediante la separación de ADN en piezas más cortas y su separacion en geles de
electroforesis que permite a los patrones de A, C, T y G ser caracterizados. También son
muy importantes en la investigación de proteínas, y en la investigación de mutaciones
genéticas, porque cuando las proteínas o el ADN están mutados, son con frecuencia más o
menos largos, y por lo tanto, aparecen en un gel de electroforesis de manera diferente de lo
normal. Las pruebas de diagnóstico para muchos casos todavía se realizan mediante
electroforesis. Es una técnica muy utilizada en la investigación básica, muy importante para
la comprensión de la función de genes y proteínas, pero ahora ha irrumpido en el área de
diagnóstico clínico y forense. Una electroforesis se realiza generalmente en una especie de
caja que tiene una carga positiva en un extremo y una carga negativa en el otro. Y como
todos aprendimos en las clases de física, cuando se pone una molécula cargada en un
entorno así, las moléculas negativas van a la carga positiva, y viceversa. Al analizar las
proteínas en un gel, en una de estas cajas, por lo general se toma la proteína completa para
ver lo grande que es. Cuanto más corta, más migran en el gel, de modo que las proteínas
pequeñas terminará en la parte inferior del gel, porque han ido más lejos, y las más grandes
terminarán quedándose en la parte superior. En el caso del ADN, el ADN es una molécula
muy larga, así que no se puede hacer un gel de una molécula entera de ADN de una célula.
Es tan grande que nunca se metería en el gel, así que lo que hacen los científicos es cortar el
ADN con cosas como las enzimas de restricción, que cortan el ADN en pedazos más
manejables, y entonces esas piezas, dependiendo de lo grande que sean, migran más o
menos por el gel y terminan más arriba o más abajo
Tipos
 La electroforesis en gel se utiliza en biología molecular, genética y bioquímica:
 La electroforesis en gel de muestras grandes de ADN y ARN se efectúa en geles de
agarosa.
 La electroforesis de proteínas se lleva a cabo en geles de poliacrilamida-SDS (SDS-
PAGE), isoelectroenfoque, geles nativos o electroforesis bidimensional.
 Electroforesis capilar.
 Electroforesis de ADN.
 Zimografía o zimogramas
 Extracción en gel.
 Electroforesis en gel de campo pulsado.4
TIPOS DE ELECTROFORESIS:
1. Electroforesis de frente móvil o libre
2. Electroforesis de zona: (convencional)
 En papel
 En acetato de celulosa
 En gel (agarosa, poliacrilamida y almidón)
1. Electroforesis capilar
 Electroforesis de frente móvil o libre: El campo eléctrico se aplica a disoluciones o

suspensiones. Históricamente, es el origen de la electroforesis tal y como hoy la
conocemos. Actualmente está en desuso, ya que al ser un fluido el medio en el que se
desarrolla. Las diferentes proteínas se desplazan a velocidades diferentes según sus
cargas y coeficientes de fricción respectivos, formándose nubes que se van desplazando
en la disolución tampón y que puede seguirse con diversos sistemas ópticos, poniéndose
de manifiesto las sustancias que se van separando tiene poco poder de resolución.
 Electroforesis de zona: La muestra se desplaza sobre un soporte sólido. Fuente de

alimentación: Proporciona el campo eléctrico mediante los dos electrodos,
estableciendo una diferencia de potencial. Cubeta: Recipiente en cuyos extremos se
sitúan los electrodos. Soporte electroforético: Es el elemento fundamental. Debe ser
inerte. La pequeña cantidad necesaria de muestra permite que las moléculas migren en
discretas zonas o bandas
Detección y cuantificación de las fracciones separadas : o Para revelar las proteínas
separadas por electroforesis, el soporte se trata con colorantes. o Las bandas de proteínas
adsorben el colorante mas intensamente que el soporte, de forma que se puede eluir el
exceso de colorante del soporte mientras que las proteínas quedan teñidas con el colorante.
o Se mide densitométricamente, integrando las áreas correspondientes a cada fracción
proteíca y calculando el porcentaje de cada fracción sobre el total de proteínas. La
sensibilidad analítica alcanzada varía en función del colorante empleado. De mayor a
menor sensibilidad: violeta ácido > azul comassie > negro amido.
TIPOS DE SOPORTES:
a. Papel : En desuso
b. Acetato de celulosa: Ventajas: presenta poca adsorción, necesita cantidades pequeñas de

muestra, porosidad uniforme, transparente, sin contaminantes y resultados precisos.
Inconvenientes: débil resolución y electroosmosis. Se ha quedado obsoleta.
c. Gel de agarosa: Es un polisacarido, cuyas disoluciones poseen la propiedad de

permanecer liquidas por encima de 50º C y formar un gel, semisólido al enfriarse. Este gel
está constituido por una matriz o trama tridimensional de fibras poliméricas embebida en
gran cantidad de medio líquido. El tamaño de poro no opone impedimento al paso de las
moléculas (soporte no restrictivo tipo I). Se usa usualmente para separar moléculas grandes.
Ventajas: No presenta fenómenos de adsorción, pequeña cantidad de muestra, mejor
visualización y resolución. Inconvenientes: electroosmosis.
d. Gel de poliacrilamida (PAGE):

a. Es un soporte empleado frecuentemente en electroforesis, ya que es con el que mejor se
logra separaciones electroforéticas. o Es químicamente inerte, de propiedades uniformes,
capaz de ser preparado de forma rápida y reproducible. o Forma geles transparentes con
estabilidad mecánica, insolubles en agua, relativamente no iónicos y que permite buena
visualización de las bandas durante tiempo prolongado. o Tiene la ventaja que variando la
concentración de polímeros, se puede modificar de manera controlada el tamaño del poro. o
El tamaño de poro opone resistencia al paso de las moléculas (soportes restrictivos tipo II),
ya que el tamaño del poro es similar al de las proteínas, de tal modo que existe un efecto de
tamizado molecular y la separación electroforética depende de la densidad de carga de las
moléculas y de su tamaño. o Inconvenientes: Neurotoxicidad
e. SDS-PAGE: o Se fundamenta en eliminar las cargas de las proteínas por tratamiento con
SDS (sodiododecilsulfato) que las desnaturaliza y se fijan a el, tomando carga neta
negativa. o La migración de los derivados proteína-SDS hacia el ánodo es inversamente
proporcional al logaritmo de su PM. La relación carga/masa es aproximadamente igual para
todas las proteínas de la muestra, por lo que el tamaño de esta es un factor determinante de
la separación. o La electroforesis con SDS es un excelente método para identificar y
monitorizar las proteínas durante un proceso de purificación y para la determinación del
PM de las diferentes subunidades proteícas. La electroforesis convencional ha sido y
continua siendo de gran utilidad; sin embargo este tipo de separación electroforética es
lenta, laboriosa , poca reproducibilidad, difícil de automatizar, y además no proporciona
resultados cuantitativos precisos.
Electroforesis capilar:
• Constituye una alternativa electroforética de creciente implantación en los laboratorios
clínicos.
Ventajas:
• Técnica automatizada, ofreciendo resultados reproducibles y precisos.
• Separa cualquier tipo de tamaño: moléculas de alto y bajo PM (al contrario que la
convencional, que solo separa moléculas grandes).
• Utiliza volúmenes muy pequeños de muestra (0.1-10 nL), mientras que la convencional,
utiliza del orden de µL.
• No requiere el uso de colorantes, ya que las proteínas se detectan directamente por
espectrofotometría.
• Resolución muy elevada
• La velocidad de separación es mucho mayor que en la convencional.
Teoría de la electroforesis capilar (EC): Dos son los factores que causan la movilidad de
los solutos:
1. Movilidad electroforética:
• Específica para cada analito
• Dependiente de la relación carga/tamaño
• Los cationes migran hacia el cátodo, los aniones al ánodo y los compuestos neutros no se
ven afectados por el campo eléctrico.
2. Flujo electroendosmótico (FEO):

• Mueve el disolvente desde el polo positivo al negativo actuando como una bomba.
• Su causa es la doble capa eléctrica que se produce en el interfaz entre sílice y disolución.
• El capilar esta cargado negativamente en su superficie, atrayendo a los iones positivos del
disolvente.
•La EC se realiza en capilares hechos de sílice fundido.
•Los grupos silanol (SiO-) cargados negativamente presentes en este material dan origen a
una carga negativa en la superficie del capilar y es responsable del FEO.
•Esta carga negativa atrae las especies catiónicas del tampón y la capa iónica que se va
formando tiene una densidad de carga positiva que va decreciendo al aumentar la distancia
a la pared del capilar.
•La aplicación de un campo eléctrico produce un potencial zeta que tiene como resultado el
movimiento de estos cationes unidos mas debilmente hacia el cátodo, y como están
hidratados se llevan el agua tras de sí.
 La existencia de este flujo electroendosmótico actúa como un mecanismo bomba

que impulsa todas las moléculas (catiónicas, neutras y aniónicas) hacia el detector
con una separación que depende finalmente de las diferencias de migración
electroforética de los analitos.
 Suponiendo que el FEO sea adecuado y no excesivo, las respectivas movilidades
electroforéticas de los analitos llevan a la formción de zonas discretas en el
momento que pasan por delante del detector.
 Si el FEO es demasiado lento, el fenómeno de difusión se encarga de que las zonas
de los analitos se ensanchen y de que algunos analitos no alcancen el detector en un
intervalo de tiempo razonable (pH bajos).
 Si el FEO es muy rápido, la separación sera inadecuada (pH altos)
Modalidades de EC :
1. Electroforesis capilar de zona (CZE)
2. Cromatografía capilar micelar electrocinética (MEKC)
3. Isoelectroenfoque capilar
4. Electroforesis capilar en gel (CGE)
5. Isotacoforesis capilar (CITP)
Electroforesis capilar de zona (CZE)

•Es una de las técnicas mas importantes y mas utilizada debido probablemente a su
simplicidad y elevado poder de separación.
•Esta basada en la separación de los analitos según su relación carga/tamaño.
•Los componentes básicos incluyen:
•Fuente de alimentación (alto voltaje)
•Capilar recubierto de poliimida (10-50 cm) •2 recipientes para el tampon donde se acopla
el capilar
•Los dos electrodos conectados a la fuente
•Detector (espectrofotómetro)
https://es.slideshare.net/kaiser1118/electroforesis-62275014
https://bvs.ins.gob.pe/insprint/SALUD_PUBLICA/NOR_TEC/38.pdf
APLICACIÓN DE LA ELECTROFORESIS EN EL CAMPO DE LA SALUD
APLICACIÓN DE LA ELECTROFORESIS
• Fraccionamiento de las hemoglobinas
• Diferenciación de la hemoglobina fetal
• Diagnóstico de talasemias, anemias falciformes, etc
• Proteínas séricas Proteínas urinarias Lipoproteínas Ácidos nucleicos Enzimas

Inmunoelectroforesis Etc.

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 Electroforesis de frente móvil o libre: El campo eléctrico se aplica a disoluciones o

 Electroforesis de zona: La muestra se desplaza sobre un soporte sólido. Fuente de

b. Acetato de celulosa: Ventajas: presenta poca adsorción, necesita cantidades pequeñas de

c. Gel de agarosa: Es un polisacarido, cuyas disoluciones poseen la propiedad de

d. Gel de poliacrilamida (PAGE):

2. Flujo electroendosmótico (FEO):

 La existencia de este flujo electroendosmótico actúa como un mecanismo bomba

Electroforesis capilar de zona (CZE)

• Fraccionamiento de las hemoglobinas

• Diferenciación de la hemoglobina fetal

• Diagnóstico de talasemias, anemias falciformes, etc

• Proteínas séricas Proteínas urinarias Lipoproteínas Ácidos nucleicos Enzimas

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