Universidad Autónoma de Baja California

Escuela de Ciencias de la Salud

Campus Ensenada, unidad Valle Dorado

Unidad de aprendizaje: Biología molecular y celular

Práctica 8: Electroforesis en gel

Grupo: 103-2

Equipo: 1

Integrantes:
Delgado Ayoub Ximena
Piñuelas Guerra Camila Alejandra
Valenzuela González Monserrat
Zaldívar Sandoval Maria Elena Miroslava

Docente:
Dr. Barocio León Óscar Alcides

Fecha de ejecución: 29/10/24

Fecha de entrega: 5/11/24

TABLA DE CONTENIDOS

FUNDAMENTO TEÓRICO...................................................................................................... 2
OBJETIVOS.............................................................................................................................4
EQUIPO Y MATERIALES........................................................................................................4
PROCEDIMIENTO................................................................................................................... 4
RESULTADOS......................................................................................................................... 6
DISCUSIONES........................................................................................................................ 8
CONCLUSIÓN......................................................................................................................... 8
REFERENCIAS..................................................................................................................... 10

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FUNDAMENTO TEÓRICO
La electroforesis es una técnica de laboratorio que se usa para separar moléculas
de ADN, ARN o proteínas en función de su tamaño y carga eléctrica. Se usa una
corriente eléctrica para mover las moléculas a través de un gel o de otra matriz. Los
poros del gel o la matriz actúan como un tamiz, lo cual permite que las moléculas
más pequeñas se muevan más rápido que las moléculas más grandes. Para
determinar el tamaño de las moléculas de una muestra, se usan estándares de
tamaños conocidos que se separan en el mismo gel y luego se comparan con la
muestra.
Se utiliza en una gran variedad de aplicaciones, como en medicina forense para
determinar la identidad de las personas que puedan haber participado en un delito,
mediante la vinculación de su patrón de ADN a uno que esté en una base de datos.
Es una técnica muy utilizada en la investigación básica, muy importante para la
comprensión de la función de genes y proteínas, pero ahora ha irrumpido en el área
de diagnóstico clínico y forense. Una electroforesis se realiza generalmente en una
especie de caja que tiene una carga positiva en un extremo y una carga negativa en
el otro. Al analizar las proteínas en un gel, en una de estas cajas, por lo general se
toma la proteína completa para ver lo grande que es. Cuanto más corta, más migran
en el gel, de modo que las proteínas pequeñas terminarán en la parte inferior del
gel, y las más grandes terminarán quedándose en la parte superior.

Tipos de electroforesis
● Gel de agarosa: La electroforesis en geles de agarosa es unos de los
métodos más empleados para separar ácidos nucleicos, como por ejemplo,
fragmentos de ADN. Está técnica se basa en el hecho de que los ácidos
nucleicos se encuentran cargados negativamente debido a los grupos fosfato.
Como consecuencia, cuando se aplica un campo eléctrico se desplazan
desde el polo negativo hacia el polo positivo. Esta separación se llevará a
cabo en una matriz sólida, el gel de agarosa.
● Gel de poliacrilamida (PAGE): La electroforesis en geles de poliacrilamida es
uno de los métodos más utilizados para la purificación, análisis y
caracterización de proteínas. La técnica permite separar moléculas cargadas
y explota diferencias en movilidad cuando se les somete a la acción de un

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 campo eléctrico. La electroforesis se lleva a cabo sobre un soporte inerte,
generalmente sobre geles de poliacrilamida (PAGE).
● Electroforesis capilar: se realiza en un tubo capilar estrecho, esta técnica
permite una separación rápida y precisa de moléculas en soluciones, como
aminoácidos, péptidos, ADN, ARN y pequeñas moléculas.
● Electroforesis en gel bidimensional: Combina dos tipos de PAGE para una
mayor resolución, separando proteínas en dos etapas:
- Primera dimensión: Separación por punto isoeléctrico mediante
enfoque isoeléctrico.
- Segunda dimensión: Separación por tamaño mediante SDS-PAGE.
● Enfoque isoeléctrico: Separa proteínas basadas en su punto isoeléctrico (pI),
que es el pH en el que una molécula no tiene carga neta.
Cada tipo de electroforesis ofrece ventajas y especificidades para aplicaciones
particulares, ya sea en el análisis de ácidos nucleicos, proteínas u otras moléculas.
La elección de la técnica depende de las características de la muestra y el objetivo
del estudio.

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OBJETIVOS

1. Entender como la electroforesis separa y acomoda los fragmentos de ADN.

2. Demostrar el efecto de las enzimas de restricción o endonucleasas sobre el
ADN.
3. Comparar el patrón de bandas en el gel debido a los fragmentos de ADN
resultantes de la digestión de ADN lambda con dos enzimas.
4. Utilizar una escalera molecular estándar para determinar el tamaño de los
fragmentos de ADN.
5. Comprender los principios en los que se basa la electroforesis.
6. Demostrar la utilidad del gel de agarosa en la electroforesis.

EQUIPO Y MATERIALES

1. Micropipeta graduable 10-100 microlitros

2. Lupa
3. Masking tape
4. Reactivos; solución amortiguadora de pH (running buffer)
5. Mesa de luz (negatoscopio)
6. Gel de agarosa
7. Solución de tinción (azul de metileno)
8. Cámara de electroforesis
9. Bandeja del gel
10. Peine
11. Tapa de la cámara
12. Fuente de poder o regulador de voltaje
13. Tubos de muestra; ADN lambda sin digerir, uno digerido con HindIII y otro con
EcoRI

PROCEDIMIENTO

1. Hacer unas paredes temporales a la charola del gel usando masking tape,
con el fin de retener la agarosa líquida.
2. Colocar el peine en las muescas (hendiduras) descargado hacia un lado.
3. Esperar a que gelifique la agarosa (20 min)

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4. A los pozos del peine (hoyos) se le colocan las muestras del ADN con la
micropipeta.
5. Quitar las paredes temporales de la charola.
6. Acercar la cámara de electroforesis y colocar la charola en el centro.
7. Inundar con solución amortiguadora hasta que quede totalmente cubierto el
gel (1cm por debajo de la superficie).
8. Acercar los tubos de muestra y calibrar la micropipeta a 10.
9. Poner en cada pozo una muestra de cada tubo.
10. Primero el ADN lambda, cargarlo sumergiendo la punta de la micropipeta al
pozo y descargar lentamente.
11. Repetir con el ADN EcoR.I
12. Repetir con ADN HindIII.
13. Acercar regulador de voltaje y poner tapa a la cámara.
14. Asegurarse que el polo positivo esté del lado alejado de los pozos (lado
largo).
15. Prender el aparato, asegurarse que pase la corriente con la lupa.
16. Esperar que salgan burbujas en ambos lados, se llama electrólisis.
17. Dar el tiempo de corrida (30-1:30 horas).
18. Una vez terminado, sacar la charola del gel.
19. En la charola de tinción dejar que el gel entre ahí.
20. Agregar el colorante (azul de metileno) y dejar 20 min en tinción.
21. Enjuagar el exceso de azul de metileno del gel.
22. Se mete en agua de enjuague (agua destilada) por 15 min.
23. Poner el gel en el negatoscopio.
24. Medir las distancias recorridas del pozo hacia cada banda y tabular la
información.

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RESULTADOS

Primero, en base con las distancias tomadas en la práctica se anotan en un excel

para realizar los cálculos más fácilmente

Después se proporcionaron los datos de tamaño de los fragmentos de estas

enzimas de restricción.

Posteriormente se saca el logaritmo de la columna que nos indica el tamaño de los

fragmentos que anteriormente averiguamos:

Luego se grafican las columnas “HindIII (mm)” y “Log (pb) HindIII”

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Ajustamos la grafica correctamente y sacamos las ecuaciones de la recta y el “r” al
cuadrado

Con la ecuación de la recta se sustituyen los valores con la primera columna

denominada “EcoRI (mm)” y se logran obtener los datos de la segunda tabla
llamada “Log pb EcoRI”

Finalmente los datos de la segunda tabla van a ser tomadas para realizar la
operación “10^(dato de la segunda tabla)” para obtener los datos de la columna
restante

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DISCUSIONES

Los resultados obtenidos fueron los esperados con base a los datos proporcionados
por el docente. Los demás equipos obtuvieron los mismos resultados. Para esta
práctica se cumplieron los objetivos, pero se debe de manejar con demasiada
precaución, ya que el más mínimo error puede echar a perder las preparaciones y
ocasionar el desecho completo para iniciar desde el comienzo la práctica.
El manejo del equipo es poco pero el tiempo de preparación de cada elemento es
largo y complicado de realizar de nuevo, ya que requiere instrucciones específicas.

CONCLUSIÓN

En esta práctica pudimos cumplir con todos los objetivos planteados, entendimos
cómo los fragmentos de ADN pueden separarse y analizarse con esta técnica. Con
el uso del gel de agarosa, logramos ver cómo, al poner un campo eléctrico, los
fragmentos de ADN se desplazan a lo largo del gel según su tamaño, los
fragmentos más pequeños se mueven más rápido y llegan más lejos que los más
grandes. Esto nos permitió ver cómo la electroforesis organiza y clasifica el ADN
según sus características físicas, facilitando el análisis de su composición y
estructura.

El uso de enzimas de restricción no ayudó a demostrar su capacidad de actuar

como “tijeras moleculares”, ya que estas cortaron el ADN en lugares específicos,
haciendo patrones de bandas que representaban los fragmentos resultantes. En
particular, al digerir el ADN lambda con dos enzimas de restricción, vimos cómo se
generaban fragmentos de distintos tamaños, los cuales formaron un patrón
característico en el gel. Este proceso demostró la precisión de las enzimas de
restricción y su utilidad en estudios genéticos y en la manipulación del ADN.

Empleamos una escalera molecular como referencia, lo que nos dejó comparar e
intuir el tamaño de cada fragmento de ADN. Esta herramienta estándar nos ayudo a
la interpretación de los resultados, ya que nos dio una base cuantitativa para medir
el tamaño de los fragmentos según las posiciones en el gel.

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En conclusión, esta práctica no solo nos ayudó a entender los principios de la
electroforesis, sino también a descubrir su valor práctico y lo versátil que este es
para estudiar el ADN. Al trabajar con el gel de agarosa, vimos cómo se pueden
separar y analizar fragmentos de ADN, algo esencial en biología molecular. Este nos
dejó claro lo importante que es la electroforesis en investigaciones genéticas y
biotecnológicas, ya que nos ayuda observar y manipular el ADN de manera precisa
y correcta.

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REFERENCIAS
Electroforesis. (2024). Genome.gov.

https://www.genome.gov/es/genetics-glossary/Electroforesis

Inteligente, K. (2022, 25 marzo). Qué es la electroforesis y tipos de electroforesis.

Kapital Inteligente. https://www.kapitalinteligente.es/que-es-la-electroforesis/

Bishop, M. L., Duben-Engelkirk, J. L., & Fody, E. P. (2018). Química clínica:

Principios, técnicas y correlaciones (8.a ed.). Wolters Kluwer.

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