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EDITORIAL CSIRO

Reproducción, Fertilidad y Desarrollo https://

doi.org/10.1071/RD17473

Efectos de extender la duración del proestro en un

programa de sincronización de celo basado en
estradiol y progesterona sobre la función ovárica, el
ambiente uterino y el establecimiento de la preñez en novillas de carne

JJ de la MataA, , R. Nu´n˜ez-OliveraC, F. CuadroC, D. BosolascoC, V. de BrunD,

B A. MeikleD, GA Bo´ E, F and A. MenchacaC, G

AReproduccio´n y Biotecnologÿ´a Bovina, de la Mata-Veterinarios, Av. S. Marzo 245, PC 6300,

Santa Rosa, La Pampa, Argentina.
B
Facultad de Agronomÿ´a, Universidad Nacional de La Pampa, Ruta 35 Km 334, PC 6300, Santa Rosa, La Pampa,
Argentina.
CInstituto de Reproducción Animal Uruguay, Fundación IRAUy, Cno. Cruz del Sur 2250, PC 12200, Montevideo,
Uruguay.
DFacultad de Veterinaria, Lasplaces 1550, PC 11600, Montevideo, Uruguay.
Y
Instituto de Reproduccio´n Animal Co´rdoba, Pozo del Tigre, PC 5145, Co´rdoba, Argentina.
F
Instituto A. P. de Ciencias Basicas y Aplicadas, Universidad Nacional de Villa Marÿ´a, O. Ferreyra 411, PC 5963, Villa
del Rosario, Co´rdoba, Argentina.
Autor de correspondencia. Correo electrónico: [email protected]

Resumen. El objetivo del presente estudio fue investigar los efectos de una estrategia para extender el proestro (el intervalo entre la luteólisis y la ovulación)
en un protocolo de sincronización del estro (llamado J-Synch) en novillas de carne sobre el crecimiento folicular, las concentraciones de esteroides sexuales,
la receptor de estrógeno ERa y receptores de progesterona (PR) en el útero, factor de crecimiento similar a la insulina (IGF) 1 y tasas de embarazo. En el
Experimento 1, las novillas tratadas con el nuevo protocolo J-Synch tuvieron un período de proestro más prolongado que las tratadas con el protocolo
convencional (media (sem) 93,7 ± 12,9 vs 65,0 ± 13,7 h respectivamente; P < 0,05). La tasa de crecimiento del folículo dominante desde el momento de la
extracción del dispositivo de progesterona hasta la ovulación fue mayor en las novillas del grupo J-Synch que en el grupo convencional (P < 0,05). El área
luteínica y las concentraciones de progesterona sérica fueron mayores en el grupo J-Synch (P < 0,05) durante los 12 días posteriores a la ovulación. La tinción
del receptor de progesterona (PGR) el día 6 después de la ovulación en el estroma uterino fue menor en el grupo J-Synch que en el grupo convencional (P <
0,05), y la expresión del gen PR (PGR) y del gen IGF1 tendió a ser menor en las novillas tratadas con J-Synch (P , 0,1). En el Experimento 2 (n = 2349), la
tasa de preñez 30–35 días después de la IA de tiempo fijo (FTAI) fue mayor para las novillas en el grupo J-Synch que en el grupo convencional (56,1 % frente
a 50,7 % respectivamente) . En conclusión, nuestra estrategia para extender el proestro (es decir, el protocolo J-Synch) mejora significativamente el
establecimiento de la preñez en novillas de carne. Esta mejora se relacionó con una mayor tasa de crecimiento del folículo ovulatorio dominante, mayores
concentraciones de progesterona durante la fase lútea subsiguiente y diferentes patrones uterinos de PGR e IGF1, que pueden haber favorecido el desarrollo
embrionario y el establecimiento del embarazo.

Palabras clave adicionales: inseminación artificial, cuerpo lúteo, endometrio, folículo.

Recibido el 4 de noviembre de 2017, aceptado el 25 de abril de 2018, publicado en línea el 21 de mayo de 2018

Introducción
la función lútea, la señalización del embrión y el entorno uterino, y
En bovinos de carne, aunque la tasa de fecundación se sitúa estos factores se ven afectados, al menos en parte, por las condiciones
generalmente entre el 90% y el 100% (Diskin et al. 2016), la tasa de preovulatorias hormonales. La evidencia reciente indica que la
preñez a los 30 días tras la IA a tiempo fijo (FTAI) suele rondar el 50% duración del proestro es decisiva para el resultado de la fertilidad,
(Bo´ et al. 2016) . Esta brecha es mayor en el ganado lechero (Santos et al.porque el estradiol preovulatorio 'programa' el útero en preparación
2010; Bisinotto y Santos 2012), con la mayor proporción de pérdidas para el concepto modificando la morfología celular, las secreciones y
de embriones ocurriendo en los primeros 16 días después de la regulando los receptores de esteroides (Bridges et al. 2013).
Modulación compleja de la expresión del receptor de estrógenos
fertilización (Diskin et al. 2016). El establecimiento del embarazo depende de

Recopilación de revistas CSIRO 2018 www.publish.csiro.au/journals/rfd

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B Reproducción, Fertilidad y Desarrollo JJ de la Mata et al.

ERa y el receptor de progesterona (PR) por el estradiol preovulatorio y Se evaluó la función luteínica posovulatoria, la expresión uterina de
la progesterona (P4) secretada por el cuerpo lúteo en desarrollo (CL) ERa, PR e IGF1 y las tasas de preñez en novillas tratadas con el
en el período de diestro temprano pueden ajustar la expresión posterior protocolo J-Synch y se compararon con el tratamiento a base de
de los genes diana en el endometrio para regular la receptividad uterina estradiol más utilizado en Sudamérica ("Convencional") para IATF en
para el desarrollo. embrión (Binelli et al. ganado de carne .
2014). Por esta razón, la duración del proestro y las concentraciones
preovulatorias de 17b-estradiol (E2) pueden ser determinantes del materiales y métodos
establecimiento y mantenimiento de la gestación en rumiantes. Experimento 1
Durante el ciclo estral de la vaca, el endometrio sufre cambios animales y tratamientos
dinámicos que son necesarios para la recepción sincrónica del embrión
4 a 6 días después de la ovulación. Estos receptores incluyen Este experimento se realizó durante la temporada de cría de
receptores de esteroides sexuales (Meikle et al. 2001) y otros factores primavera en el hemisferio sur (es decir, noviembre en Uruguay)
de crecimiento, como el factor de crecimiento similar a la insulina (IGF) utilizando 48 novillas Hereford Angus de 24 meses de edad en ciclo,
1 (Sosa et al. 2010). Estos procesos dinámicos se han relacionado con con un peso vivo medio (sem) de 348 kg y un índice de condición
las concentraciones circulantes de P4 y la secreción de histótrofos, que corporal (BCS) de 68 kg. de 6 (en una escala de 1 a 9; Herd y Sprott
son necesarios para la supervivencia embrionaria, la elongación y el 1986). Para tener todas las vaquillas en la misma fase lútea al inicio
reconocimiento materno del embarazo (Spencer et al. 2017). Además, del experimento, las vaquillas fueron presincronizadas con dos dosis
las concentraciones preovulatorias de E2 afectan la función luteínica de análogo de prostaglandina (PG) F2a (500 mg de cloprostenol
posterior y la producción de P4, porque las bajas concentraciones de sódico; Ciclasa DL; Zoetis) con 14 días de diferencia, con la segunda
E2 antes de la ovulación podrían tener un efecto negativo en el entorno dosis dada 11 días antes del comienzo (Día 0) del experimento. La
uterino posovulatorio y la supervivencia del embrión (Binelli et al. 2014). presencia de un cuerpo lúteo (CL) fue confirmada por ultrasonografía
Se desarrollaron protocolos novedosos para IATF para prolongar el al comienzo del experimento.
período desde la extracción del dispositivo P4 hasta la ovulación Las vaquillas se asignaron al azar a un grupo J-Synch (n = 24) oa un
(denominado "proestro") con el objetivo de aumentar el período de grupo convencional (n = 24). El día 0, todas las novillas recibieron un
exposición preovulatoria a E2 y mejorar la función uterina y el desarrollo dispositivo intravaginal (0,5 g P4; DIB 0,5; Zoetis) más 2 mg, im, EB
embrionario temprano (Bridges et al. 2008) . El protocolo 'Co Synch þ (gonadiol; Zoetis). A las novillas del grupo J-Synch se les retiraron los
de liberación interna controlada de fármacos (CIDR)' de 5 días se dispositivos y se les inyectó PGF2a por vía intramuscular el día 6, y
desarrolló con tasas de embarazo reportadas más altas por AI (P/AI) luego recibieron una inyección por vía im de un análogo de GnRH (100
que las obtenidas con el protocolo Co-Synch más tradicional de 7 días mg de diacetato de gonadorelina; Gonasyn GDR; Zoetis) 72 h después
(Bridges et al. 2008, 2014). Los principales cambios en el protocolo de la extracción del dispositivo (día 9). ). A las novillas del grupo
anterior fueron una reducción en el período de inserción de un convencional se les quitaron los dispositivos y se les inyectó por vía
dispositivo liberador de P4 de 7 a 5 días para evitar los efectos intramuscular PGF2a y 0,5 mg de ECP (Cipiosyn; Zoetis) el día 7 (Fig. 1).
adversos de los folículos persistentes sobre la fertilidad de las vacas Todos los procedimientos, incluyendo inyecciones, inserción de
que no ovulan a la primera hormona liberadora de gonadotropina dispositivos intravaginales, extracción de sangre y ultrasonografía
(GnRH ) y para prolongar el período desde la extracción del dispositivo ovárica, fueron aprobados por el Comité de Cuidado Animal de la
P4 hasta el segundo tratamiento con GnRH de 54–60 a 72 h para Fundación IRAUy (Uruguay) y la Universidad de Villa María (Argen
aumentar las concentraciones circulantes de E2 antes de la ovulación tina), y certificados por el Consejo Nacional de Cuidado de animales de
(Day 2015). Por el contrario, los protocolos basados en estradiol son Uruguay.
altamente efectivos para inducir la atresia folicular y la aparición de una
nueva onda folicular en más del 90% de las vacas y novillas (Moreno Ultrasonografía Los
et al. 2001; Bo´ et al. 2012) y son económicamente convenientes en folículos ováricos y CL se examinaron mediante ultrasonografía
comparación con Protocolos basados en GnRH. Por estas razones, transrectal en modo B en tiempo real utilizando un transductor de
estos tratamientos hormonales son los más utilizados en América del matriz lineal de 7,5 MHz (Well D/we 9618v; Shenzhen WELLD Medical
Sur para el IATF de bovinos de carne (Bo´ et al. 2013). Recientemente, Electronics Co.). Todos los exámenes fueron realizados por un solo
se ha desarrollado un nuevo protocolo, denominado 'J-Synch', para operador experimentado, dos veces al día desde la extracción del
incorporar modificaciones similares a los tratamientos Co-Synch (de la dispositivo hasta la ovulación para evaluar el desarrollo folicular de
Mata y Bo´ 2012; Bo´ et al. 2016). En el protocolo J-Synch, se folículos identificados individualmente de 0,4 mm de diámetro (Knopf
administran 2 mg de benzoato de estradiol (EB) en el momento de la et al. 1989), y luego una vez al día durante 12 días después de la
inserción del dispositivo P4; el período de inserción del dispositivo P4 ovulación para evaluar el desarrollo del CL de la fase lútea subsiguiente.
se acortó de 7 u 8 a 6 días, y en lugar de usar EB o cipionato de El diámetro del folículo ovárico (mm) se determinó promediando el
estradiol (ECP) en el momento de retirar el dispositivo para inducir la diámetro en el punto más ancho con otra medida que se tomó
ovulación, se administra GnRH en el momento de la IATF, que es se perpendicular a la primera. La ovulación se definió como el momento
realizó 72 h después de retirar el dispositivo en lugar de 48 a 54 h en que se detectó por primera vez la desaparición del folículo dominante
como se hace actualmente en el protocolo convencional (Bo´ et al. 2016). (FD) (Knopf et al. 1989) y se confirmó 12 h después. En aquellas
El objetivo del presente estudio fue investigar una nueva estrategia vaquillas en las que no se presentó ovulación, se realizaron exámenes
para extender el proestro en un protocolo de sincronización del estro ultrasonográficos dos veces al día hasta 144 h desde el retiro del
basado en estradiol y P4, llamado J-Synch, en novillas de carne Bos dispositivo. El área del CL (mm2 ) se calculó midiendo el ancho y la
taurus . Crecimiento folicular preovulatorio, concentraciones de E2, altura del área transversal máxima del CL
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Prolongar el proestro mejora la fertilidad en el ganado Reproducción, Fertilidad y Desarrollo C

EB PGF2ÿ GnRH

72 horas

dispositivo de progesterona

Biopsia uterina VO

EB PAE de PGF2ÿ

dispositivo de progesterona

0 69 VO Biopsia uterina 7 12 días después de VO

A NOSOTROS
Dos veces al día EE. UU. hasta VO diario BS Una vez al día EE. UU. BS

Fig. 1. Diseño del Experimento 1. Se asignaron novillas cíclicas a dos grupos de tratamiento diferentes. en el extendido
grupo de tratamiento proestro (J-Synch; n = 24), las vaquillas recibieron un dispositivo de progesterona intravaginal y 2 mg
benzoato de estradiol (EB) el día 0, seguido de 500 mg de cloprostenol (prostaglandina (PG) F2a) el día 6 (en el dispositivo
eliminación) y 100 mg de gonadorelina (hormona liberadora de gonadotropina (GnRH)) el día 9. En el grupo de control
(Protocolo convencional; n = 24), las vaquillas recibieron un dispositivo de progesterona y 2 mg de EB el día 0, seguido de 500 mg
PGF2a y 0,5 mg de cipionato de estradiol (ECP; para inducir la ovulación) el día 7 (al retirar el dispositivo). ultrasonográfico
(US) se realizaron dos veces al día para caracterizar el crecimiento folicular y la ovulación (OV), y una vez al día
para determinar el desarrollo del cuerpo lúteo hasta 12 días después de la ovulación. Se tomaron muestras de sangre (BS) diariamente de los
tiempo de retiro del dispositivo a 12 días después de VO (grupo J-Synch, n = 10; grupo convencional, n = 12); en el resto
novillas, se tomaron biopsias uterinas 6 días después de OV (grupo J-Synch, n = 11; grupo convencional, n = 12).

y el área total del CL se calculó según lo informado por Facultad de Veterinaria, Universidad de La Repu´blica (Monte video,
Kastelic et al. (1990), y se dedujeron las caries no ecogénicas Uruguay).
del área lútea general en la cavidad CL. Concentraciones diarias de E2 desde la extracción del dispositivo hasta la ovulación
se determinaron en muestras de suero por duplicado tomadas de novillas
Muestras de sangre y biopsias endometriales en el grupo J-Synch (n = 16) y de aquellos en el grupo Convencional (n =
Las muestras de sangre se recolectaron diariamente desde el día del dispositivo. 13) usando un RIA comercial en fase líquida
eliminación hasta la ovulación (es decir, durante el proestro) y luego hasta los 12 kit (MP Biomédica). La sensibilidad del ensayo fue
1 1
días después de la ovulación (es decir, durante las fases temprana y media de la lútea). Se usaron . Los CV intraensayo para baja (3,0 pg mL ),
1 1
Las muestras se recogieron mediante venopunción yugular y se controles de 1,1 pg mL medio (16,1 pg mL ) y alto (28,9 pg mL )
centrifugado (2000 g, 15 min, temperatura ambiente) dentro de 1 h de 21%, 8% y 3% respectivamente. Los CV interensayo para la baja
recopilación. El suero fue extraído y almacenado en un congelador (208C) y los controles altos fueron 14% y 2% respectivamente.
hasta determinaciones hormonales. Las concentraciones diarias de P4 durante los 12 días desde la ovulación fueron

Seis días después de la ovulación, biopsias endometriales de 11 determinado utilizando un kit RIA comercial de fase sólida (DIAsource
Se obtuvieron novillas del grupo J-Synch y 12 novillas del grupo ImmunoAssays) en aquellas vaquillas que no fueron sometidas a
Convencional utilizando pinzas de biopsia (10366 LL; biopsia uterina (grupo J-Synch, n = 10; grupo convencional,
Karl Storz) de la tercera porción craneal del cuerno uterino, norte ¼ 12). Las novillas sometidas a biopsia uterina fueron excluidas de
junto a la unión uterino-oviductal. Se tomaron dos biopsias Determinaciones de concentración de P4. La sensibilidad del ensayo
1 1
del cuerno ipsilateral al CL y otro fue tomado de fue de 0,01 ml. Los CV intraensayo para baja (0,9 ml),
1 1
el cuerno contralateral. Las muestras de endometrio fueron inmediatamente controles medio (6,1 ml) y alto (16,5 ml) se
congelado en nitrógeno líquido y almacenado a 808C para tiempo real 2%, 3% y 2% respectivamente. Los CV entre ensayos para el bajo,
análisis cuantitativo de la reacción en cadena de la polimerasa (qPCR) los controles medio y alto fueron 3%, 4% y 4% respectivamente.
(muestras ipsi laterales y contralaterales), o se mantuvieron en 4%
paraformaldehído para estudios de inmunohistoquímica (solo muestras inmunohistoquímica
ipsilaterales). La reactividad inmune de los receptores P4 y E2 se visualizó en
secciones transversales de 5 mm de tejido uterino de muestras tomadas
Análisis hormonal del cuerno uterino ipsilateral al CL con avidina–
Las concentraciones séricas de E2 y P4 se determinaron mediante técnica inmunohistoquímica biotina-peroxidasa (Guzelo glu et al. 2004).
radioinmunoensayo (RIA), como se validó previamente para bovinos (Meikle Las secciones de tejido fueron desparafinadas y rehidratadas
et al. 2001), at the Laboratorio de Endocrinologÿ´a y Metabolismo, en concentraciones decrecientes de etanol. Las secciones eran entonces
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D Reproducción, Fertilidad y Desarrollo JJ de la Mata et al.

Tabla 1. Secuencias de cebadores, tamaños esperados de amplicón y eficiencia de la reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa para el receptor de progesterona (PGR),
ARNm del receptor de estrógeno (ESR1) y del factor de crecimiento similar a la insulina 1 (IGF1)

Gene Nº de acceso Secuencias de cebadores (50 –30 ) Longitud (pb) Eficiencia Referencia

PGR Z66555 Delantero: GACAGCACTTTCTAGGCGATAT 79 1.10 Sosa et al. (2009)

Reverso: TGTGCTGGAAGAAACGATTGC
ESR1 AYO33393 Delantero: AGGGAAGCTCCTATTTGCTCC 234 1.15 Sosa et al. (2009)
Reverso: CGGTGGATGTGGTCCTTCTCT
IGF1 NM_001009774.3 Delantero: TTGCACTTCAGAAGCAATGG 209 0.99 de Brun et al. (2015)
Inversa: ACTGGAGAGCATCCACCAAC

colocado en citrato de sodio (0,01 M, pH 6,0) y en el microondas durante Aislamiento y purificación de ARN y análisis de genes.
4,5 min para mejorar la exposición al antígeno. El resto de la expresión
El procedimiento se realizó a temperatura ambiente. Después del lavado Aislamiento del ARN total del tejido uterino y síntesis de
con solución salina tamponada con fosfato (PBS; 0,01 M, pH 7,5), se bloqueó cDNA por transcripción inversa (RT) se realizó de acuerdo a
la actividad no específica de las peroxidasas endógenas con Astessiano et al. (2012). Cebadores (Tabla 1) para amplificar específicamente
Peróxido de hidrógeno al 3% en metanol durante 10 min. Después del lavado ADNc de genes diana, a saber , gen IGF1 , gen de estrógeno
con PBS durante 10 min, las muestras se incubaron con normal (ESR1) y gen PR ( PGR), y controles endógenos, a saber
suero de caballo (NHS; Vector Laboratories) durante 60 min en un ambiente húmedo b-actina (ACTB), hipoxantina fosforribosiltransferasa
cámara. Luego, las muestras se incubaron durante 1 h con el (HPRT) y la proteína ribosomal S9 (RPS9), se obtuvieron de
anticuerpo primario, a saber, anticuerpo monoclonal anti-ERa de ratón (Santa la literatura (Sosa et al. 2009; de Brun et al. 2015) o específicamente
Cruz Biotechnology), anticuerpo monoclonal anti-PR (Zymed) o anticuerpo diseñado utilizando el sitio web de Primer3 (http://frodo.wi.mit.edu/
policlonal anti-IGF-1 de cabra (Santa primer3/, consultado el 10 de octubre de 2015) basado en nucleótido bovino
Cruz Biotechnology), diluido 1 : 25, 1 : 75 y 1 : 50 en PBS secuencias disponibles en el Centro Nacional de Biotecnología
respectivamente. Los controles negativos se generaron reemplazando Information (NCBI; http:www.ncbi.nlm.nih.gov/, consultado el 10 de
el anticuerpo primario con una IgG no inmune homóloga en octubre de 2015). Antes de usar, los tamaños del producto de imprimación (gel de agarosa al 1%
una concentración equivalente (Biotecnología Santa Cruz). Después separación) y la secuencia (Macrogen) se determinaron para asegurar
unión del anticuerpo primario, las secciones se incubaron con un que los cebadores produjeron los amplicones deseados.
anti-ratón secundario biotinilado (ERa y PR) o anti-cabra La qPCR en tiempo real se realizó en un volumen total de 15 mL
(IGF-1) anticuerpo (Vector Laboratories) diluido 1: 200 en NHS utilizando KAPA SYBR FAST Universal 2 qPCR Master Mix
o suero normal de cabra. Se utilizó el kit Vectastain ABC (Vector Laboratories) (Kapa Biosystems) según Astessiano et al. (2012) utilizando
para la detección de proteínas. La ubicación de la las siguientes condiciones estándar de amplificación: 10 min a 958C,
enzima unida fue visualizada por 3,3-diaminobencidina en seguido de 40 ciclos de 15 s a 958C, 45 s a 608C y 20 s a
H2O2 (kit DAB; Vector Laboratories) y las secciones se 728C. Se corrieron curvas de disociación en todas las muestras para detectar
contrateñidos con hematoxilina y deshidratados antes de que dímeros de cebador, contaminación o presencia de otros ampli cos. Cada
fueron montados.
disco incluía un grupo de cDNA total de bovino
muestras uterinas analizadas por triplicado para ser utilizadas como base para
Análisis de imagen los resultados de la expresión comparativa (control exógeno) y
La intensidad de la tinción del receptor se evaluó inmunohistoquímicamente tubos duplicados de agua (control sin plantilla). La expresión génica se midió
en tres compartimentos endometriales: el luminal mediante cuantificación relativa (Pfaffl 2001) a la
(LE), el epitelio glandular (el epitelio glandular superficial (SG) junto a la luz control exógeno y normalizado contra la media geométrica
uterina) y el estroma intercaruncular (S). La cantidad de proteína expresión de los genes de control endógenos (HPRT, ACTB y
inmunoreactiva RPS9). Estabilidad de expresión de tres servicios de limpieza seleccionados
en los diferentes tipos de células se estimó subjetivamente por dos los genes se evaluaron utilizando el complemento Normfinder de MS-Excel
observadores independientes que desconocían el tratamiento (MDL). Eficiencias de amplificación del objetivo y limpieza
grupo (Guzeloglu et al. 2004). Se analizaron quince campos los genes de control se estimaron mediante regresión lineal de una dilución
para cada tipo de célula con un aumento de 1000 para todas las vaquillas. Curva cDNA (n ¼ 5 diluciones, de 100 a 6,25 ng por tubo; ver
La tinción nuclear se calificó como negativa (–), débil (þ), moderada (þþ) o Tabla 1). Los CV intraensayo e interensayo fueron 1,7% y 4,6%
intensa (þþþ), y la extensión de la tinción de cada respectivamente.
tipo de célula se expresó en una escala de 0 a 10, donde 0 es el
ausencia de tinción y 10 es la máxima intensidad de tinción. Experimento 2
La intensidad media de tinción se calculó como (1 n1) þ (2 n2) Este experimento se realizó en un total de 2349 novillas cruzadas Angus
þ (3 n3), donde n es el número de celdas en cada campo Hereford durante la temporada de cría de primavera.
mostrando tinción débil (n1), moderada (n2) e intensa (n3) en Uruguay El experimento se realizó en cinco repeticiones
(Boos et al. 1996). y, en cada repetición, las vaquillas se asignaron aleatoriamente a un
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Prolongar el proestro mejora la fertilidad en el ganado Reproducción, Fertilidad y Desarrollo E

EB eCG de PGF2ÿ GnRH IATF

60 horas

72 horas
dispositivo de progesterona

1200 horas 1800 horas 0900 2100

horas horas

EB eCG de PAE de PGF2ÿ FTAI

48 horas

56 horas
dispositivo de progesterona

0000 horas 0700 0900 2100

horas horas horas

Fig. 2. Diseño experimental del Experimento 2. Las novillas del grupo J-Synch (n¼ 1125) recibieron dispositivos de progesterona
intravaginal con 0,5 g de progesterona y 2 mg de benzoato de estradiol (EB) el día 0, seguido de 500 mg de cloprostenol
(prostaglandina (PG ) F2a) y 300 UI de gonadotropina coriónica equina (eCG) el día de la extracción del dispositivo (Día 6). El
día 9, las vaquillas recibieron 100 mg de gonadorelina (hormona liberadora de gonadotrofina (GnRH)) en el momento de la IA
de tiempo fijo (FTAI) por la mañana o por la tarde (60 o 72 h desde la extracción del dispositivo, respectivamente).
Las vaquillas del grupo convencional (n¼ 1124) recibieron un dispositivo de progesterona y EB el día 0, seguido de PGF2a,
0,5 mg de cipionato de estradiol (ECP) y 300 UI de eCG el día de la extracción del dispositivo (día 7). Las vaquillonas del grupo
convencional se sometieron a IATF el día 9 por la mañana (09:00 horas; 48 h después de retirar el dispositivo) o por la tarde
(56 h después de retirar el dispositivo). El embarazo se determinó mediante ultrasonografía 30-35 días después de IATF.

Grupo de tratamiento J-Synch (n = 1125) o Convencional (n = 1224), como en La tasa de ovulación (vaquillas ovuladas/vaquillas tratadas) se comparó
el Experimento 1. Todas las vaquillas en el Día 0 recibieron un dispositivo DIB utilizando la prueba exacta de Fisher.
0.5 más 2 mg, im, EB. A las vaquillas del grupo de tratamiento con J-Synch se Para los datos de qPCR en tiempo real, todas las variables se analizaron
les quitaron los dispositivos y se les administró PGF2a y 300 UI de utilizando el procedimiento general mixto de SAS (SAS Institute). En este caso,
gonadotropina coriónica equina (eCG; Novormon 5000; Zoetis) el día 6 a última el tratamiento, el lado del cuerno uterino (ipsilateral o contralateral al CL) y su
hora de la tarde (18.00–19.00 horas) y se sometieron a IATF el día 9 de la interacción se incluyeron en el modelo como efectos fijos, y el animal y la placa
mañana o después del mediodía (es decir, 60 o 72 h después de retirar el de PCR se usaron como variables aleatorias. Para la inmunohistoquímica, la
dispositivo, respectivamente). A las vaquillas del grupo de tratamiento intensidad de tinción media de 15 campos se sometió a ANOVA utilizando el
convencional se les retiró el dispositivo y se les administró PGF2a, 0,5 mg, im, procedimiento mixto de SAS, incluyendo el tratamiento, el tipo de célula (LE,
ECP y eCG en la mañana del día 7 (09:00 a 10:00 horas). Las novillas se SG y S) y sus interacciones como efectos fijos. Se realizaron pruebas de Tukey-
sometieron a IATF el día 9 por la mañana o por la tarde (es decir, 48 o 56 h Kramer para analizar la importancia de las diferencias entre los efectos fijos y
después de retirar el dispositivo, respectivamente). Los tratamientos se sus interacciones. Coeficientes de correlación de Pearson
muestran en la Fig. 2.
Para cada réplica, el número de novillas asignadas a cada toro (dos o tres se utilizaron para describir las relaciones entre las variables.
toros por réplica) y cada técnico de IA (dos por réplica) se equilibraron para En el Experimento 2, se analizó la tasa de embarazo entre 30 y 35 días
ambos tratamientos hormonales y ambos períodos de inseminación (es decir, después de IATF utilizando un modelo general mixto para una distribución
mañana y tarde). binomial y un enlace logit utilizando el software InfoStat (Di Rienzo et al.
El embarazo se determinó mediante ultrasonografía utilizando un 2017). El grupo de tratamiento, el tiempo de IA (mañana o tarde), la réplica, el
transductor de matriz lineal de 5,0 MHz (Well D/wed 9618v; Shenzhen WELLD técnico de IA, el padre y sus interacciones se incluyeron en el modelo como
Medical Electronics Co.) realizado 30 a 35 días después de FTAI. variables fijas, mientras que el ID de la vaquilla se utilizó como variable
aleatoria.
Los datos se presentan como la media de mínimos cuadrados sem. El
Análisis estadísticos En nivel de significación se fijó en P < 0,05 y se consideró que P < 0,1 indicaba

el Experimento 1, se examinaron los perfiles del diámetro del folículo ovulatorio una tendencia.

dominante, el área de CL y las concentraciones de E2 y P4 utilizando modelos

mixtos generales para determinar el efecto del tratamiento y el tiempo, y la Resultados
interacción del tiempo de tratamiento, utilizando el software InfoStat ( Di Rienzo
Experimento 1
et al. 2017). El animal se utilizó como variable aleatoria. Las mediciones de un
solo punto, como el diámetro del DF al retirar el dispositivo y antes de la Crecimiento folicular preovulatorio y desarrollo lúteo Las mediciones de
ovulación (como se muestra en la Tabla 1), se analizaron mediante análisis de punto único de las características del folículo y CL se dan en la Tabla 2.
varianza (ANOVA). Las vaquillas en el grupo de tratamiento J-Synch tuvieron
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F Reproducción, Fertilidad y Desarrollo JJ de la Mata et al.

Tabla 2. Crecimiento preovulatorio del folículo dominante (FD) y área lútea en novillas cíclicas sometidas a protocolo de proestro extendido (J-Synch)
o un protocolo de control (grupo Convencional): Experimento 1
A menos que se indique lo contrario, los datos se dan como la media sem

J-Synch Convencional valor p

Nº novillas 24 24 –

Duración del proestroA (h) 93,7 12,9 65,0 13,7 , 0,05

Diámetro DF (mm)
En la eliminación del dispositivo 8.3 1.2 10,0 2,4 , 0,05
en la ovulación 13,0 1,0 12,8 1,0 NS
En el momento de la administración del inductor de la ovulaciónB 12.3 1.3 10,0 2,4 , 0,05
1
Tasa de crecimiento del FDC (mm día ) 1,3 0,4 1,0 0,4 , 0,05
Tasa de ovulaciónD (%) 21/24 (87,5) 24/24 (100) NS
150 área E (mm2 ) 398,7 10,0 357,3 10,0 , 0,05
1
Progesterona séricaF (ng mL ) 4,7 0,2 3,9 0,1 , 0,05

ALa duración del proestro fue el intervalo desde la extracción del dispositivo (Día 6 y 7 en los protocolos J-Synch y Convencional respectivamente) hasta la ovulación. Ovulación
se determinó mediante ultrasonografía realizada dos veces al día durante un período de 144 h desde el momento de la extracción del dispositivo.
B
La hormona liberadora de gonadotropina se administró 72 h después de la extracción del dispositivo en el protocolo J-Synch, y el cipionato de estradiol se administró en ese momento.
de eliminación del dispositivo en el protocolo convencional.
CDesde la extracción del dispositivo hasta la ovulación.

DLos datos muestran el número de vaquillas ovulando/número total de vaquillas, con porcentajes entre paréntesis.
Y
Área media del cuerpo lúteo (CL) desde el día 4 hasta el día 12 después de la ovulación.
F
Concentraciones medias de progesterona desde la ovulación hasta 12 días después.

(a) (b) (C) 11

14 500
10
13
450 9
12
8
11 400
(mm2)
área
CL 7
10
6
Diámetro
folicular
(mm)

9 350 Progesterona
(mL1)

5
8 4
300
7 3
6 2
250
5 1
4 200 0
0 12 24 36 48 60 72 84 96 4 5 6 7 8 9 10 11 12 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12

Tiempo después de la retirada del dispositivo (h) Tiempo después de la ovulación (días) Tiempo después de la ovulación (días)

Fig. 3. (a) Desarrollo del folículo, como lo indica el diámetro del folículo, (b) desarrollo del cuerpo lúteo (CL) durante las fases temprana y media de la lútea.
(4-12 días después de la ovulación), y (c) concentraciones de progesterona en novillas sometidas al protocolo J-Synch (duración prolongada del proestro —r—;
n ¼ 21 (a, b) y 10 (c)) o el protocolo convencional (??'??; n ¼ 24 (a, b) y 12 (c)). (a) Hubo efectos significativos del tratamiento y del tiempo
(P < 0,05 para ambos), pero sin interacción del tiempo de tratamiento (P < 0,1), sobre el diámetro de los folículos ovulatorios. (b) El área de CL tendió a ser mayor en vaquillonas
tratados con el protocolo J-Synch (P , 0,1) los días 7, 9 y 12 después de la ovulación (efecto del tratamiento, P , 0,05; efecto del tiempo, P , 0,05; tiempo de tratamiento
interacción, p . 0.1). (c) Hubo efectos significativos del tratamiento, el tiempo y la interacción del tiempo de tratamiento sobre las concentraciones de progesterona (P < 0,05 para todos).
Los datos son la media sem *P , 0,05 para las comparaciones entre los dos grupos.

un período pro-estro más largo (P < 0.05) que aquellos en el eliminación de dispositivos; no se detectaron diferencias después de 36 h. los
Grupo de tratamiento convencional. El proestro fue, en promedio, folículo ovulatorio creció más rápido en las vaquillas que recibieron el
28,7 h más en el J-Synch que en el grupo convencional. tratamiento pro-estro, porque la tasa de crecimiento folicular de P4
Los diámetros medios de los folículos ovulatorios dominantes son la remoción del dispositivo hasta la ovulación fue mayor en las novillas en el J-Synch
se muestra en la Fig. 3a. Hubo un tiempo y un efecto del tratamiento. que el grupo convencional (P < 0.05; Tabla 2).
(P , 0,05), pero sin interacción tiempo-tratamiento. un sostenido La tasa de ovulación no difirió entre los grupos de tratamiento y
aumento del diámetro folicular hasta ,72 h después del dispositivo el CL posterior se detectó entre 2 y 3 días después
se observó eliminación en ambos grupos de tratamiento hasta que se ovulación en todas las vaquillas en las que se detectó ovulación.
alcanzó un valor máximo. Diferencias en perfiles de diámetro. La distribución de los tiempos de ovulación se muestra en la Fig. 4. La media
se atribuyeron a un mayor diámetro del folículo (P , 0,05) en las vaquillas Los perfiles de área del CL se muestran en la Fig. 3b. hubo un dia
en el grupo Convencional que J-Synch durante las primeras 36 h después y efecto del tratamiento (P < 0.05) que se atribuyó a una mayor
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Prolongar el proestro mejora la fertilidad en el ganado Reproducción, Fertilidad y Desarrollo G

80 (a) (b)
70

60

50

40

30
(C) (d)
20

10

0
48 60 72 84 96 108 120
Tiempo después de la retirada del dispositivo (h)

Fig. 4. Distribución de la ovulación después de la extracción del dispositivo de

(y) (F)
progesterona en el grupo J-Synch (columnas llenas; n = 24) y el grupo convencional
(columnas abiertas; n = 24). Brevemente, las vaquillas de ambos grupos recibieron
benzoato de estradiol y un dispositivo de progesterona el día 0. Se retiró el dispositivo
intravaginal y se administró prostaglandina F2a el día 6 (grupo J-Synch) o el día 7
(grupo convencional). Las novillas del grupo J-Synch recibieron la hormona liberadora
de gonadotropina 72 h después de retirar el dispositivo, mientras que las del grupo
convencional recibieron cipionato de estradiol en el momento de retirar el dispositivo.

perfil de área en novillas en el grupo J-Synch que Convencional. Sin Fig. 5. Localización inmunohistoquímica de los receptores de progesterona (PR) en
embargo, no se detectó una interacción de tratamiento de día. epitelio glandular (SG), estroma (S) y epitelio luminal (LE) en controles negativos (a,
El área media de tejido lúteo desde los días 4 a 12 después de la ovulación b) y en el cuerno uterino ipsilateral al cuerpo lúteo en (c , d) una vaquilla del grupo
fue mayor en las novillas del grupo J-Synch que en el grupo convencional convencional el día 6 después de la ovulación y (e, f) una vaquilla del grupo J-Synch.
(a, b) El control negativo no muestra tinción para PR porque los anticuerpos se
(P < 0,05; Tabla 2).
sustituyeron por una IgG no inmune. ( c – f ) Aunque las muestras de ambos grupos
Concentraciones séricas de hormonas muestran una tinción similar en SG y LE, la tinción de PR fue mayor en S en vaquillas
en el grupo convencional en comparación con las del grupo J-Synch. Brevemente,
Hubo un efecto del día (P < 0,05) en las concentraciones de E2 en
las vaquillas de ambos grupos recibieron benzoato de estradiol y un dispositivo de
suero durante el período preovulatorio, pero no hubo efecto del tratamiento progesterona el día 0. Se retiró el dispositivo intravaginal y se administró
ni interacción entre el día y el tratamiento (P < 0,1). Cuatro días antes de prostaglandina F2a el día 6 (grupo J-Synch; n = 11) o el día 7 (grupo convencional ;
la ovulación, las concentraciones séricas de E2 no fueron diferentes (P ÿ n = 14). 12). Las novillas del grupo J-Synch recibieron hormona liberadora de
1
0,1) entre los grupos de tratamiento (5,5 0,7 y 5,0 0,4 pg mL en los grupos gonadotrofina 72 h después de retirar el dispositivo, mientras que las del grupo
Convencional y J-Synch respectivamente). Las concentraciones máximas convencional recibieron cipionato de estradiol en el momento de retirar el dispositivo.
de E2 (pico de E2) se alcanzaron 48 h antes de la ovulación en ambos
grupos de tratamiento, concentraciones de 8,0 ± 0,9 y 7,5 ± 0,6 pg mL para
1
vaquillas en los grupos Finalmente,
Convencionallasyconcentraciones
J-Synch respectivamente
séricas de(PE2
ÿ 0,1).
disminuyeron en ambos grupos a concentraciones más bajas el día de la significativa en el estroma (7,5 ± 0,7 frente a 6,6 ± 0,7 respectivamente; P
ovulación (4.6 0.7 y 5.7 0.6 pg mL en los grupos Convencional y J-Synch < 0,05; Fig. 5). No hubo una diferencia significativa en el área positiva de
1
respectivamente; P . 0.1). PR entre los grupos Convencional y J-Synch en el epitelio luminal (9,6 0,7
frente a 9,4 0,6 respectivamente) o glandular (9,4 0,7 frente a 9,1 0,7
Las concentraciones séricas de P4 se vieron afectadas por el respectivamente; P < 0,1).
tratamiento y el día (P < 0,05), y hubo una interacción entre el día del Se observaron diferencias significativas en la intensidad de tinción
tratamiento (P < 0,05). Las concentraciones medias de P4 fueron mayores media entre los tipos de células (P , 0,05). El epitelio (luminal y glandular)
en las vaquillas en el grupo de tratamiento J-Synch que en el convencional tuvo mayor intensidad de tinción PR que el estroma en ambos grupos (P <
el día 5 y los días 7 a 12 después de la ovulación (P < 0,05; Fig. 3c). 0,05). Sin embargo, la intensidad de tinción media de los tres tipos de
células no se vio afectada por el tratamiento (P ÿ 0,1), con una intensidad
Inmunohistoquímica Receptor de tinción respectiva en los grupos Convencional y J-Synch de 1,9 0,1 y
de progesterona. El área PR-positiva total dependía del tipo de célula 1,9 0,1 en el epitelio luminal, 1,9 0,1 y 1,8 0,1 en el epitelio glandular y 1,5
(P < 0,05). En general, el epitelio (luminal y glandular) en las vaquillas de 0,1 y 1,3 0,1 en el estroma.
ambos grupos tenía un mayor porcentaje de células PR positivas que el
estroma (P < 0,05). Receptor de estrógeno. El área positiva para ERa total se vio afectada
El tratamiento como un efecto fijo tendió a ser significativo (P < 0.1), y el por el tipo de célula (P < 0,05), porque el área teñida positivamente en las
área manchada tendió a ser mayor en las vaquillas en el grupo vaquillas de ambos grupos fue mayor en el epitelio (luminal y glandular) en
Convencional que en el grupo J-Synch, pero la diferencia fue solo general que en las células del estroma (Fig. 6).
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H Reproducción, Fertilidad y Desarrollo JJ de la Mata et al.

(a) (b) Sin embargo, ni el área positiva ni la intensidad de tinción media difirieron
entre los dos grupos (P . 0,1). El área ERa-positiva respectiva en el
Convencional y J-Synch fue 8.9 0.2 y 8.9 0.2 en el epitelio luminal, 8.7
0.2 y 8.8 0.2 en el epitelio glandular y 6.4 0.2 y 6.8 0.2 en el estroma (P
¼ NS). La intensidad de tinción correspondiente en los grupos
Convencional y J-Synch fue 1,6 0,3 y 1,6 0,2 en el epitelio luminal, 1,4
0,2 y 1,3 0,2 en el epitelio glandular y 1,2 0,2 y 1,2 0,2 en el estroma (P
¼ NS).
(C) (d)

Expresión del gen endometrial

ARNm de PGR . Como lo indicó la qPCR en tiempo real, hubo una
tendencia a niveles más bajos de ARNm de PGR en vaquillas en el
grupo J-Synch que en el grupo convencional (P ¼ 0.08; Fig. 7a). No
hubo efecto del lado del cuerno en relación con el CL (es decir, ipsilateral
o contralateral; P < 0,1) o la interacción del tratamiento lateral sobre la
(y) (F) expresión del ARNm de PGR (P < 0,1; Fig. 8a).
ARNm de ESR1 . Los niveles de ARNm de ESR1 endometrial no
difirieron entre las novillas en los grupos J-Synch y Convencional (2,7 ±
0,5 y 2,8 ± 0,5 respectivamente; P < 0,1; Fig. 7b). Al considerar el lado
de la ovulación, hubo un efecto del lado del cuerno (P < 0.05) que se
atribuyó a niveles más altos de ARNm en el cuerno uterino contralateral
al CL (3.1 0.5 y 3.0 0.5 para novillas en los grupos J-Synch y Convencional
respectivamente). ) que en el cuerno uterino ipsilateral (2.3 0.5 y 2.6 0.5
para novillas en los grupos J-Synch y Convencional respectivamente).
Fig. 6. Localización inmunohistoquímica del receptor de estrógenos ERa en el epitelio
glandular (SG), estroma (S) y epitelio luminal (LE) en controles negativos (a, b) y en
Sin embargo, no hubo interacción del lado del tratamiento (P ÿ 0,1).
el cuerno uterino ipsilateral al cuerpo lúteo en (c , d) una vaquilla del grupo
convencional el día 6 después de la ovulación y (e, f) una vaquilla del grupo J-Synch. ARNm de IGF1 . Hubo una tendencia hacia una menor expresión de
(a, b) El control negativo no muestra tinción para ERa porque los anticuerpos se ARNm de IGF1 en vaquillas en el grupo J-Synch que en el grupo
sustituyeron por una IgG no inmune. ( c – f ) No se encontraron diferencias en la convencional (0,6 ± 0,3 frente a 0,8 ± 0,3; P = 0,07; Fig. 7c). No hubo
intensidad de tinción media o el área positiva para ERa entre los dos grupos. efectos secundarios ni interacciones secundarias al tratamiento (P 0,1; Fig. 8b).
Brevemente, las vaquillas de ambos grupos recibieron benzoato de estradiol y un
dispositivo de progesterona el día 0. Se retiró el dispositivo intravaginal y se administró Experimento 2
prostaglandina F2a el día 6 (grupo J-Synch; n = 11) o el día 7 (grupo convencional ; n
Tasa de preñez El
= 14). 12).
Las novillas del grupo J-Synch recibieron hormona liberadora de gonadotrofina 72 h P/IA general fue mayor (P < 0,05) en las novillas del grupo J-Synch
después de retirar el dispositivo, mientras que las del grupo convencional recibieron que en el grupo convencional. En cuanto al tiempo de IA, el P/AI global
cipionato de estradiol en el momento de retirar el dispositivo. no difirió entre la mañana y la tarde

(a) (b) (C)

3.0 3.5 a a 1.2
a a
3.0
2.5 1.0
b b
2.5
2.0 0.8
2.0
1.5 0.6
1.5
1.0 0.4
1.0

0.5 0.5 0.2

0 0 0
J-Synch Convencional J-Synch Convencional J-Synch Convencional

Fig. 7. Expresión endometrial relativa de (a) receptor de progesterona (PGR), (b) receptor de estrógeno (ESR1) y (c ) ARNm del factor de crecimiento similar a la
insulina 1 (IGF1) en novillas tratadas con el protocolo de proestro extendido ( grupo J-Synch; n ¼ 11) o aquellos con tratamiento Convencional (n ¼ 12).
Se tomaron muestras 6 días después de la ovulación mediante biopsia de la porción craneal del cuerno uterino (solo se muestran aquellas muestras ipsilaterales al
cuerpo lúteo). Los datos son la media sem Los diferentes superíndices indican una tendencia (P , 0,1).
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Prolongar el proestro mejora la fertilidad en el ganado Reproducción, Fertilidad y Desarrollo yo

(a) 3.0 (b) 1.4

1.2
2.5

1.0
2.0

0.8
1.5
0.6

1.0
0.4

0.5
0.2

0 0
Contralateral Ipsolateral Contralateral ipsolateral Contralateral Ipsolateral contralateral ipsolateral

Convencional J-Synch Convencional J-Synch

Fig. 8. Expresión relativa del ARNm endometrial de (a) receptor de progesterona (PGR) y (b) ARNm del factor de crecimiento similar a la insulina 1 (IGF1) en el cuerno
contralateral o ipsilateral al cuerpo lúteo en vaquillonas sometidas al proestro extendido (J-Synch; n ¼ 11) o el protocolo convencional (n ¼ 12). Se tomaron muestras 6
días después de la ovulación mediante biopsia de la porción craneal de los cuernos uterinos. Los datos son la media sem
No hubo diferencias entre los grupos (P ÿ 0,1).

Tabla 3. Tasas de gestación por IA en novillas de carne sometidas a protocolo El prolongado período de proestro informado en el presente estudio
proestro extendido (J-Synch) o protocolo control (Convencional) confirma los resultados de un estudio preliminar realizado en novillas B.
taurus de carne (de la Mata y Bo´ 2012) y son consistentes con otro estudio
Los datos muestran la tasa de embarazo por IA (%), con el número de embarazos/
en novillas B. taurus lecheras (Re´ et al. otros 2014). Extender el período
número total de hembras IATF entre paréntesis. En las vaquillas sujetas al protocolo J
proestro da como resultado un período más largo de crecimiento del folículo
Synch, los dispositivos se retiraron el día 6 (en la tarde) y a las vaquillas se les administró
ovulatorio dominante, lo que mejora la actividad esteroidogénica del folículo
hormona liberadora de gonadotropina (GnRH) y se sometieron a IATF ya sea 60 h (día
9, mañana) o 72 h (día 9). , tarde) más tarde.
y las concentraciones séricas de E2 (Bridges et al. 2008, 2010, 2012, 2014;
Las novillas sometidas al protocolo convencional recibieron 0,5 mg de cipionato de Mesquita et al. 2014). Esto debería tener un efecto positivo en el
estradiol en el momento de retirar el dispositivo (día 7, mañana) y se sometieron a IATF establecimiento del embarazo porque un mayor E2 está relacionado con
48 h (día 9, mañana) o 56 h (día 9, tarde) después una mayor calidad y viabilidad del embrión (Larimore et al. 2015; Madsen
et al. 2015).
Tasa de embarazo valor p En el presente estudio, las concentraciones séricas de E2 no difirieron
J-Synch Convencional entre las vaquillas sujetas a los protocolos Convencional o J-Synch (es
decir, con o sin ECP). Este hallazgo es interesante porque en un estudio
FTAI
previo con vacas de carne sujetas al protocolo convencional, con o sin 0,5
Día 9, mañana 57,1% (335/587) 53,4% (324/607) NS 48,0%
mg de ECP al retirar el dispositivo, las concentraciones séricas de E2
Día 9, tarde 55,0% (296/538) (296/617) 0,02 0,06
fueron mayores en las vaquillas tratadas con ECP durante aproximadamente
valor p NS
0.01 30 h (Uslenghi et al. 2016). De lo contrario, la mayor tasa de crecimiento
Total (n = 2349) 56,1% (631/1125) 50,7% (620/1224)
del folículo ovulatorio dominante bajo el protocolo J-Synch podría indicar
que un folículo más esteroidogénico resulta de este protocolo de proestro
extendido, en el que el dispositivo P4 se retira el día 6, a diferencia del
inseminaciones No se observó interacción entre tratamiento y tiempo de IA
protocolo convencional, en el que se retira el dispositivo 1 día después y
(Cuadro 3).
se administra PAE a las vaquillas. La investigación adicional debe ser

Discusión
realizado para determinar las concentraciones intrafoliculares de E2 en
El presente estudio muestra que la estrategia propuesta para inducir un para confirmar esta hipótesis. Además, las concentraciones de E2 dentro
proestro más prolongado mediante el protocolo J-Synch es efectiva, del tracto reproductivo en este tipo de tratamiento también deben tenerse
resultando en un intervalo desde la remoción del dispositivo P4 hasta la en cuenta porque se ha demostrado que las concentraciones de esteroides
ovulación 28 h mayor que el protocolo convencional. El proestro más y la expresión del receptor difieren según la ubicación del tracto reproductivo
prolongado en el protocolo J-Synch se asoció con mayores concentraciones (Iner-Jensen y McCracken 1981; Wijayagunawardane et al. . 1998; Arau´jo
séricas de P4 y diferentes patrones de PR e IGF1 uterinos en la fase lútea et al. 2016).
posterior en comparación con el protocolo convencional. Además, la tasa Las concentraciones séricas de P4 fueron mayores en las novillas
de crecimiento del folículo ovulatorio dominante fue mayor, al igual que P/ sometidas al protocolo J-Synch. Una mayor concentración de P4 durante
AI, en las vaquillas del grupo J-Synch que en el grupo convencional. la fase lútea temprana mejora la fertilidad, mientras que concentraciones
bajas inadecuadas de P4 se asocian con menores tasas de embarazo
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j Reproducción, Fertilidad y Desarrollo JJ de la Mata et al.

establecimiento y mayores pérdidas de preñez en el ganado (Diskin et al. desarrollo del embrión. De hecho, en el endometrio de vacas con ciclos
2016; Lonergan et al. 2016). En general, las concentraciones séricas de P4 anormalmente cortos (tanto ciclos cortos como con bajas concentraciones de
están relacionadas con el tamaño del CL (Vasconcelos et al. 2001), P4), la expresión de ARNm de ESR1 y PGR no disminuye como en ciclos
principalmente durante la fase lútea temprana pero no después del día 8 del normales durante la fase lútea temprana (Meikle et al. 2001). Además, en
ciclo estral (Mann 2009). Las mayores concentraciones de P4 encontradas ese estudio, la expresión del gen IGF1 aumentó el día 5 en novillas con ciclos
en vaquillonas sometidas al protocolo J-Synch en el Experimento 1 se anormalmente cortos (Meikle et al. 2001).
asociaron con la mayor tasa de preñez obtenida en el Experimento 2.
Las mayores tasas de embarazo obtenidas con el J-Synch que con el
El presente estudio muestra una asociación entre las concentraciones protocolo Convencional en el Experimento 2 confirman los resultados de un
séricas de P4 y el ambiente uterino. Las mayores concentraciones de P4 estudio reciente con receptoras de embriones que fueron sometidas a los
inducidas con el protocolo J-Synch se asociaron con una menor expresión mismos dos tratamientos (Menchaca et al. 2016). En comparación con el
de ARNm de IGF1 y PGR uterina. Además, la regulación a la baja de PR fue protocolo convencional, las tasas de preñez fueron un 9 % mayores en las
evidente por primera vez 6 días después de la ovulación, como lo indica la receptoras de carne (n = 945) sincronizadas con el protocolo J-Synch y que
menor intensidad de tinción en el estroma intercaruncular, en novillas recibieron embriones Holstein sexados producidos in vitro 7 días después del
sometidas al protocolo J-Synch. P4 afecta la función del endometrio y la momento esperado del celo (es decir, en días 16 o 17 de tratamiento). Debido
supervivencia del embrión, determinando el establecimiento del embarazo a que los embriones transferidos producidos in vitro se distribuyeron al azar
por el transcriptoma endometrial (Forde et al. 2009, 2011). Se ha demostrado entre los dos grupos de tratamiento, estos resultados refuerzan aún más la
que las altas concentraciones de P4 aceleran los cambios temporales en el noción de que un proestro prolongado da como resultado un ambiente uterino
transcriptoma endometrial (Forde et al. 2009) y regulan a la baja la PR en el más apropiado para el desarrollo del embrión que el creado usando el
epitelio luminal (Okumu et al. 2010). En consecuencia, una receptividad protocolo convencional, en el cual pro-estro. el celo se acorta mediante la
uterina adecuada promovería el alargamiento del concepto (Carter et al. administración de PAE en el momento de retirar el dispositivo P4.
2008) y esto se asocia con una mayor supervivencia embrionaria y
reconocimiento del embarazo (Spencer et al. 2007). Por el contrario, una Los tratamientos a base de estradiol no están disponibles en los EE. UU.,
reducción en las concentraciones de P4 al principio de la fase lútea da como Canadá y la Unión Europea. Sin embargo, son ampliamente utilizados por la
resultado modificaciones negativas del transcriptoma endometrial y un retraso mayoría de los profesionales en América del Sur y Australia para IATF de
en el desarrollo del embrión (Forde y Lonergan 2012). Además , se ha ganado de carne (Bo´ et al. 2016). En el presente estudio, el nuevo protocolo
informado una correlación positiva entre las concentraciones maternas de P4 J-Synch basado en EB y P4 ha demostrado una mayor eficacia en términos
y la producción de interferón-t por parte del embrión (Kerbler et al. 1997; de fertilidad que los protocolos convencionales cuando se aplica a novillas
Inskeep 2004; McNeill et al. de carne. Como alternativa para aquellos países en los que no se dispone de
estradiol, se ha logrado prolongar la duración del proestro en protocolos
basados en GnRH acortando el tratamiento con P4 (de 7 a 5 días) y
2006). Mayores concentraciones de P4, como se encontró después del retrasando la administración de GnRH de 54 a 60 días. 72 h después de
protocolo de proestro extendido en el presente estudio, están asociadas con retirar el dispositivo (es decir, protocolo Co Synch þ CIDR de 5 días; Bridges
patrones más bajos de PR, PGR e IGF1 uterinos determinados el día 6 et al. 2008, 2014). Se ha informado una mayor tasa de embarazo para el
después de la ovulación, lo que sugiere un entorno uterino más favorable protocolo Co-Synch þ CIDR en comparación con el protocolo convencional
que puede acelerar el crecimiento y la elongación del concepto. , con un basado en GnRH (Bridges et al. 2008). En conjunto, estos datos agregan
consecuente mayor reconocimiento del embarazo (Bridges et al. 2013). Por evidencia sobre la conveniencia de prolongar la duración del proestro en los
lo tanto, la mayor tasa de embarazo obtenida con el protocolo J-Synch en el programas IATF en bovinos de carne.
presente estudio probablemente estuvo asociada con un mejor ambiente
uterino, mayor desarrollo embrionario y menores pérdidas embrionarias. Sin En conclusión, la nueva estrategia para prolongar el proestro usando un
embargo, no se pueden descartar diferencias en la competencia de los tratamiento con estradiol y P4, denominado 'protocolo J-Synch', mejoró la
ovocitos en este momento. fertilidad a IATF en novillas B. taurus . Esta mejora se relacionó con una
La funcionalidad uterina diferencial entre los dos grupos experimentales mayor tasa de crecimiento del folículo ovulatorio dominante, mayores
puede ser una consecuencia directa de la diferente duración del proestro. concentraciones de P4 durante la fase lútea subsiguiente y diferentes
Las vaquillas tratadas con el protocolo J-Synch tienen un número menor de patrones uterinos de expresión de PGR e IGF1 que pueden haber favorecido
células PR positivas 6 días después de la ovulación dentro de la capa el desarrollo embrionario y el establecimiento del embarazo.
estromal, como lo demuestra la reactividad inmune para los receptores P4
en el Experimento 1. Además, la expresión de los genes PGR e IGF1 fue
menor en el grupo J-Synch. Durante el metaestro, las concentraciones Conflictos de interés
circulantes de P4 aumentan, lo que resulta en una regulación a la baja de
Los autores declaran no tener conflictos de intereses.
sus propios receptores (Kimmin y MacLaren 2001; Meikle et al. 2001). En
condiciones normales durante el ciclo estral, se han observado niveles más
altos de ARNm de ESR1, PGR e IGF1 durante el estro, con niveles que Agradecimientos Los
disminuyen el día 5 y disminuyen aún más al final de la fase lútea (Meikle et
autores agradecen a Camila Brochado, Romina Artagaveytia, Guido Kuffo,
al. 2001; Sosa et al. 2010 ). ). Estos datos respaldan nuestra hipótesis de Fernando Fabini y Manuel de la Mata por la asistencia técnica durante los
que la expresión génica en el entorno uterino se ve afectada en las novillas experimentos; Reynaldo Bonino y Andre´s Pen˜agaricano por el manejo de
del grupo J-Synch, promoviendo un entorno más saludable para los animales; ya Federico Rubio y Diego Rubio (Syntex Uruguaya SA) por
proporcionar los animales y las instalaciones. Este estudio fue apoyado financieramente
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Prolongar el proestro mejora la fertilidad en el ganado Reproducción, Fertilidad y Desarrollo K

by Agencia Nacional de Investigacio´n e Innovacio´n (Grant no. aumentar la progesterona desde el día 3 de preñez sobre la subsiguiente
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