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    Práctica 8 Extracción de ADN

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    Elizabeth Ramírez Nieto
    Este documento describe los pasos básicos para extraer ADN de células vegetales. Primero, las paredes celulares y membranas deben romperse para acceder al ADN en el núcleo. Luego, el ADN debe aislarse y purificarse usando soluciones de detergente y sal para eliminar proteínas, y precipitar el ADN con alcohol. El objetivo es comprender las técnicas de extracción de ADN y extraer ADN de células de fresa.

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    Práctica 8 Extracción de ADN

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    Elizabeth Ramírez Nieto
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    Este documento describe los pasos básicos para extraer ADN de células vegetales. Primero, las paredes celulares y membranas deben romperse para acceder al ADN en el núcleo. Luego, el ADN debe aislarse y purificarse usando soluciones de detergente y sal para eliminar proteínas, y precipitar el ADN con alcohol. El objetivo es comprender las técnicas de extracción de ADN y extraer ADN de células de fresa.

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    Este documento describe los pasos básicos para extraer ADN de células vegetales. Primero, las paredes celulares y membranas deben romperse para acceder al ADN en el núcleo. Luego, el ADN debe aislarse y purificarse usando soluciones de detergente y sal para eliminar proteínas, y precipitar el ADN con alcohol. El objetivo es comprender las técnicas de extracción de ADN y extraer ADN de células de fresa.

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    Este documento describe los pasos básicos para extraer ADN de células vegetales. Primero, las paredes celulares y membranas deben romperse para acceder al ADN en el núcleo. Luego, el ADN debe aislarse y purificarse usando soluciones de detergente y sal para eliminar proteínas, y precipitar el ADN con alcohol. El objetivo es comprender las técnicas de extracción de ADN y extraer ADN de células de fresa.

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    de 3

    Práctica 8

    .-
    Extracc1on
    de ADN

    Obietivos
    • Comprender la base de las técnicas
    de extracción de ADN .
    • Extraer y manipular el ADN de células
    vegetales.
    p "
    Fundamento teórico
    Existen diversos procedimientos para extraer ADN de las células. Estos varían en
    la cantidad y pureza del ADN que se obtiene al finalizar el procedimiento, pero la
    base de todos ellos es muy similar.
    La extracción de ADN requiere una serie de etapas básicas. En primer lugar
    tienen que romperse la pared celular y la membrana plasmática para poder acce-
    der al núcleo de la célula. A continuación debe romperse también la membrana
    nuclear para dejar libre el ADN. Por último, hay que proteger el ADN de enzimas
    que puedan degradarlo y para aislarlo hay que hacer que precipite en alcohol.
    En una extracción de ADN en un laboratorio profesional, el primer paso es la
    utilización de un amortiguador extracción, que es capaz de romper la pared ce-
    y
    lular las membranas plasmática y nuclear. En esta práctica la función del amor-
    tiguador de extracción la cumple la solución con detergente (que destruye las
    membranas lipídicas compuestas de grasas) y sal (que ayuda a eliminar las pro-
    teínas asociadas al ADN en el núcleo). Los jugos de piña y papaya contienen un
    enzima, la papaína, que contribuye a eliminar las proteínas que puedan contami-
    nar el ADN. En una extracción profesional se utiliza para este efecto alguna pro-
    teinasa (ya que digiere proteínas), como lo es la proteinasa K. El etanol (alcohol)
    se utiliza para precipitar el ADN que es soluble en agua, al entrar en contacto con
    el alcohol el ADN se desenrrolla y precipita entre la interfase entre el alcohol y el
    agua. Entre más frío esté el etanol a la hora de aplicarlo a la muestra, menor será
    la solubilidad del ADN y se obtendrán mejores resultados. Se recomienda poner-
    lo un rato (al menos media hora) a -20 ºC (en un congelador) antes de utilizarlo.
    Cuando el ADN va a utilizarse en el laboratorio para otras aplicaciones, se
    toman estas fibras que precipitan en la interfase y se disuelven en agua o en un
    amortiguador apropiado. Esta solución de ADN se puede mantener a 4 ºC (en un
    refrigerador) por años, puesto que -a diferencia del ARN y las proteínas- es
    una molécula muy estable.
    Materiales
    • Fresas

    • Amortiguador de extracción: solución de detergente/sal (20 m1 de


    SDS al 10%, 20 g de NaCl y 180 ml de agua destilada)
    • Beakers pequeños
    • Tubos de ensayo
    • Bolsas con cierre (Ziploc)
    • Embudo
    • Gasa o filtros de café
    • Palillos de plástico para revolver el café
    • Amortiguador de extracción: solución de detergente/sal (20 rnl de
    SDS al 10%, 20g de NaCl y 180 rnl de agua destilada)
    • Etanol a 95% frío (ideal, recién salido del congelador)
    • Jugo de papaya o piña, o suavizante de carne (opcional)

    Bibliografía
    Miller, S., Dykes, D., & Polesky, H. {1988). A simple salting out procedure for extracting DNA
    from human nucleated cells. Nucleic Acids Research, 16(3), 1215.

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