DEMANDA 

BIOQUÍMICA DE OXÍGENO

DBO 5­días
CÓDIGO 007 Código  
GENERAL
1. SUMARIO Y APLICACIONES
1. La demanda bioquímica de oxígeno (DBO) es una prueba usada para la
determinación de los requerimientos de oxígeno para la degradación bioquímica de
la materia orgánica en las aguas municipales, industriales y en general residuales; su
aplicación permite calcular los efectos de las descargas de los efluentes domésticos e
industriales sobre la calidad de las aguas de los cuerpos receptores. Los datos de la
prueba de la DBO se utilizan en ingeniería para diseñar las plantas de tratamiento de
aguas residuales.
2. La prueba de la DBO es un procedimiento experimental, tipo bioensayo, que mide el
oxígeno requerido por los organismos en sus procesos metabólicos al consumir la
materia orgánica presente en las aguas residuales o naturales. Las condiciones
estándar del ensayo incluyen incubación en la oscuridad a 20ºC por un tiempo
determinado, generalmente cinco días. Las condiciones naturales de temperatura,
población biológica, movimiento del agua, luz solar y la concentración de oxígeno
no pueden ser reproducidas en el laboratorio. Los resultados obtenidos deben tomar
en cuenta los factores anteriores para lograr una adecuada interpretación.
3. Las muestras de agua residual o una dilución conveniente de las mismas, se incuban
por cinco días a 20ºC en la oscuridad. La disminución de la concentración de
oxígeno disuelto (OD), medida por el método Winkler o una modificación del
mismo, durante el periodo de incubación, produce una medida de la DBO.

2. LIMITACIONES E INTERFERENCIAS
1. Existen numerosos factores que afectan la prueba de la DBO, entre ellos la relación
de la materia orgánica soluble a la materia orgánica suspendida, los sólidos
sedimentables, los flotables, la presencia de hierro en su forma oxidada o reducida,
la presencia de compuestos azufrados y las aguas no bien mezcladas. Al momento
no existe una forma de corregir o ajustar los efectos de estos factores.
2. DBO carbonácea contra nitrogenácea. La oxidación de las formas reducidas del
nitrógeno como amoniaco y nitrógeno orgánico, mediada por los microorganismos,
ejercen una demanda nitrogenácea, que ha sido considerada como una interferencia
en la prueba; sin embargo, esta puede ser eliminada con la adición de inhibidores
químicos. Cuando se inhiba la demanda nitrogenácea de oxígeno, reportar los
resultados como demanda bioquímica de oxígeno carbonácea (DBOC5); cuando no
se inhiba, reportar los resultados como DBO5.
1. Requerimientos de dilución. Si el agua de dilución es de baja calidad, su DBO
aparecerá como DBO de la muestra, efecto que será amplificado por el factor de
dilución, y el resultado tendrá una desviación positiva. El método de análisis debe
incluir agua de dilución de verificación y agua de dilución como blanco para
establecer su calidad, mediante la medición del consumo de oxígeno con una mezcla
orgánica conocida, generalmente glucosa y ácido glutámico. La fuente del agua de
dilución puede ser: destilada a partir del agua de grifo, o agua libre de sustancias
orgánicas biodegradables o bioinhibitorias tales como cloro o metales pesados. El
agua destilada puede contener amoniaco o compuestos orgánicos volátiles; el agua
desionizada también puede estar contaminada con compuestos orgánicos solubles
lixiviados del lecho de la resina; el uso de destiladores con conductos o accesorios
 de cobre en las líneas de agua destilada pueden producir agua con cantidades
excesivas de cobre, que actúa como biocida.

3. TOMA Y PRESERVACIÓN DE MUESTRAS
1. Las muestras para determinación de la DBO se deben analizar con prontitud; si no es
posible, refrigerarlas a una temperatura cercana al punto de congelación, ya que se
pueden degradar durante el almacenamiento, dando como resultado valores bajos.
Sin embargo, es necesario mantenerlas el mínimo tiempo posible en
almacenamiento, incluso si se llevan a bajas temperaturas. Antes del análisis
calentarlas a 20ºC.
1. Muestras simples. Si el análisis se emprende en el intervalo de 2 h después de la
reco­lección no es necesario refrigerarlas; de lo contrario, guardar la muestra a 4ºC o
menos; reportar junto con los resultados el tiempo y la temperatura de
almacenamiento. Bajo ningún concepto iniciar el análisis después de 24 h de haber
tomado la muestra; las muestras empleadas en la evaluación de las tasas retributivas
o en otros instrumentos normativos, deben ser analizadas antes de que transcurran 6
h a partir del momento de la toma.
2. Muestras compuestas. Mantener las muestras a 4ºC o menos durante el proceso de
composición, que se debe limitar a 24 h. Aplicar los mismos criterios que para las
muestras sencillas, contando el tiempo transcurrido desde el final del período de
composición. Especificar el tiempo y las condiciones de almacenamiento como parte
de los resultados.

4. APARATOS
1. Botellas de incubación para la DBO, de 250 a 300 mL de capacidad. Lavarlas con
detergente, enjuagarlas varias veces, y escurrirlas antes de su uso. Para evitar la
entrada de aire en la botella de dilución durante la incubación, se debe utilizar un
sello de agua, que se puede lograr satisfactoriamente invirtiendo las botellas en un
baño de agua o adicionando agua en el reborde cóncavo de la boca de las botellas
especiales para la DBO. Colocar una copa de papel o plástica o un capuchón
metálico sobre la boca de la botella para reducir la evaporación del sello de agua
durante la incubación.
2. Incubadora de aire o baño de agua, controlada termostáticamente a 20 ± 1ºC; excluir
cualquier fuente luminosa para eliminar el proceso de producción fotosintética de
OD.

5. REACTIVOS
1. Solución tampón de fosfato: Disolver 8,5 g de KH2PO4, 21,75 g de K2HPO4, 33,4 g
de Na2HPO4.7H2O, y 1,7 g de NH4Cl en aproximadamente 500 mL de agua
destilada y diluir a 1 L. El pH debe ser 7,2 sin posteriores ajustes. Si se presenta
alguna señal de crecimiento biológico, descartar este o cualquiera de los otros
reactivos.
2. Solución de sulfato de magnesio: Disolver 22,5 g de MgSO4.7H2O en agua destilada
y diluir a 1 L.
3. Solución de cloruro de calcio: Disolver 27,5 g de CaCl2 en agua destilada y diluir a
1L.
4. Solución de cloruro férrico: Disolver 0,25g de FeCl3.6H2O en agua destilada, diluir
a 1L
5. Soluciones ácida y alcalina, 1 N, para neutralización de muestras cáusticas o ácidas.
 1)  Acido.  A  un  volumen  apropiado  de  agua  destilada  agregar  muy  lentamente  y
mientras se agita, 28 mL de ácido sulfúrico concentrado; diluir a 1 L.

2) Alcali. Disolver 40 g de hidróxido de sodio en agua destilada y diluir a 1 L.

6. Solución de sulfito de sodio: Disolver 1,575 g de Na2SO3 en 1000 mL de agua
destilada. Esta solución no es estable y se debe preparar diariamente.
7. Inhibidor de nitrificación: 2­cloro­6­(triclorometil)piridina.
8. Solución de glucosa­ácido glutámico: Secar a 103ºC por 1 h glucosa y ácido
glutámico grado reactivo. Disolver 150 mg de glucosa y 150 mg de ácido glutámico
en agua destilada y diluir a 1 L. Preparar inmediatamente antes de su uso.
9. Solución de cloruro de amonio: Disolver 1,15 g de NH4Cl en 500 mL de agua
destilada, ajustar el pH a 7,2 con solución de NaOH, y diluir a 1 L. La solución
contiene 0,3 mg de N/mL.

6. PROCEDIMIENTO
1. Preparación del agua de dilución. Colocar la cantidad de agua necesaria en una
botella y agregar por cada litro, 1 mL de cada una de las siguientes soluciones:
tampón fosfato, MgSO4, CaCl2, y FeCl3. El agua de dilución se puede inocular
como se describe en 6.4; chequear y guardar como se describe en 6.2 y 6.3, de tal
manera que siempre se tenga disponible.

Llevar el agua de dilución a una temperatura de 20ºC antes de su uso; saturarla con
OD  por  agitación  en  una  botella  parcialmente  llena,  por  burbujeo  de  aire  filtrado
libre  de  materia  orgánica,  o  guardarla  en  botellas  lo  suficientemente  grandes  con
tapón  de  algodón,  para  permitir  su  saturación.  Emplear  material  de  vidrio  bien
limpio para proteger la calidad del agua.

Verificación  del  agua  de  dilución.  Aplicar  este  procedimiento  como  una  forma  de
verificación básica de la calidad del agua de dilución.

Si el agua consume más de 0,2 mg de oxígeno/L se debe mejorar su purificación  o
emplear  agua  de  otra  fuente;  si  se  usa  el  procedimiento  de  inhibición  de  la
nitrificación,  el  agua  de  dilución  inolculada,  se  debe  guardar  en  un  sitio  oscuro  a
temperatura ambiente hasta que el consumo de oxígeno se reduzca lo suficiente para
cumplir  el  criterio  de  verificación.  Confirmar  la  calidad  del  agua  de  dilución
almacenada  que  está  en  uso,  pero  no  agregar  semilla  para  mejorar  su  calidad.  El
almacenamiento  no  es  recomendable  cuando  se  va  a  determinar  la  DBO  sin
inhibición de nitrificación, ya que los organismos nitrificantes se pueden desarrollar
en  este  período.  Revisar  el  agua  de  dilución  para  determinar  la  concentración  de
amonio,  y  si  es  suficiente  después  del  almacenamiento;  de  lo  contrario,  agregar
solución de cloruro de  amonio  para  asegurar  un  total  de  0,45  mg  de  amonio  como
nitrógeno/L. Si el agua de dilución no ha sido almacenada para mejorar su calidad,
agregar la cantidad suficiente de semilla para producir un consumo de OD de 0,05 a
0,1  mg/L  en  cinco  días  a  20ºC.  Llenar  una  botella  de  DBO  con  agua  de  dilución,
determinar el OD inicial, incubar a 20ºC por 5 días y determinar el OD final como se
describe  en  6.8  y  6.10.  El  OD  consumido  en  este  lapso  no  debe  ser  mayor  de  0,2
mg/L y preferiblemente menor de 0,1 mg/L.

Chequeo  con  glucosa­ácido  glutámico.  Debido  a  que  la  prueba  de  la  DBO  es  un
bioensayo,  sus  resultados  pueden  estar  muy  influenciados  por  la  presencia  de
sustancias  tóxicas  o  por  el  uso  de  semillas  de  mala  calidad.  Muchas  veces  el  agua
destilada puede estar contaminada con cobre, o algunos inóculos de aguas residuales
 pueden ser relativamente inactivos, y si se emplean tales aguas o inóculos siempre se
van  a  obtener  bajos  resultados.  Controlar  periódicamente  la  calidad  del  agua  de
dilución, la efectividad  de  las  semillas  y  la  técnica  analítica,  por  mediciones  de  la
DBO  para  compuestos  orgánicos  puros  y  muestras  con  adiciones  conocidas.  En
general,  para  determinaciones  de  la  DBO  que  no  requieran  una  semilla  adaptada,
usar como solución estándar de chequeo una mezcla de 150 mg de glucosa/L y 150
mg  de  ácido  glutámico/L.  La  glucosa  tiene  una  velocidad  de  oxidación
excepcionalmente alta y variable, pero cuando es empleada con ácido glutámico se
estabiliza,  y  es  similar  a  la  obtenida  con  aguas  residuales  municipales.  Si  un  agua
residual  contiene  un  constituyente  mayoritario  identificable,  que  contribuye  a  la
DBO, usar este compuesto en remplazo de la mezcla de glucosa­ácido glutámico.

Determinar  la  DBO5  a  20ºC  de  una  dilución  al  2%  de  la  solución  estándar  de
chequeo  glucosa­ácido  glutámico  mediante  las  técnicas  descritas  en  los  numerales
6.4 a 6.10. Evaluar los datos como se describe en la sección de Precisión.

Inoculación.

1. Origen de las semillas o inóculo. Es necesario que en la muestra esté presente una
población de microorganismos capaces de oxidar la materia orgánica biodegradable.
Las aguas residuales domésticas no cloradas, los efluentes no desinfectados de
plantas de tratamiento biológico, y las aguas superficiales que reciben descargas
residuales contienen poblaciones satisfactorias de microorganismos. Algunas
muestras no contienen una población microbiana suficiente (por ejemplo, efluentes
industriales sin tratamiento, aguas desinfectadas, efluentes con elevada temperatura
o con valores extremos de pH), por tanto deben inocularse por adición de una
población adecuada de microorganismos. La semilla o inóculo preferible es el
efluente de un sistema de tratamiento biológico, en su defecto, el sobrenadante de
aguas residuales domésticas después de dejarlas decantar a temperatura ambiente por
lo menos 1 h pero no más de 36 h. Cuando se emplee el efluente de un proceso de
tratamiento biológico, se recomienda aplicar el procedimiento de inhibición de la
nitrificación.

Algunas muestras pueden contener materiales no degradables a las tasas normales de
trabajo  de  los  microorganismos;  inocular  tales  muestras  con  una  población
microbiana adaptada, obtenida a partir de efluentes sin desinfectar de un proceso de
tratamiento biológico de aguas residuales. También se puede obtener la semilla en el
cuerpo de agua receptor del vertimiento, preferiblemente de 3 a 8 Km después del
punto de descarga. Cuando no se disponga de ninguna de dichas fuentes del inóculo,
desarrollar en el laboratorio una semilla adaptada, por aireamiento continuo de una
muestra  clarificada  de  agua  residual  doméstica  y  adición  de  pequeños  incrementos
diarios  de  aguas  residuales.  Para  obtener  la  población  microbiana  inicial,  usar  una
suspensión  de  suelo,  un  lodo  activado,  o  una  preparación  a  partir  de  semilla
comercial. Ensayar el rendimiento de la semilla haciendo pruebas de la DBO en las
muestras  hasta  obtener  una  población  satisfactoria.  Si  los  valores  de  la  DBO
aumentan con el tiempo hasta un valor constante, se consideran como un indicio de
la adaptación sucesiva de la semilla o inóculo.

1. Control de inóculos. Determinar la DBO del material inoculante como si se tratara
de una muestra. De este valor y del conocimiento del dato del agua de dilución
determinar el OD consumido. Hacer las diluciones necesarias hasta obtener una
disminución de por lo menos el 50% del OD. La gráfica de la disminución de OD
expresada en miligramos por litro contra los mililitros de inóculo, origina una recta
cuya pendiente debe interpretarse como la disminución de OD por mililitro de
 inóculo. La intercepción de la recta con el eje de los valores de reducción del OD
representa la disminución del oxígeno provocada por el agua de dilución, valor que
debe ser inferior a 0,1 mg/L (ver 6.8). Con el objeto de corregir el valor de OD
consumido por una muestra, se debe restar a éste el consumido por el inóculo. El
consumo de OD del agua de dilución más el inóculo puede estar en el intervalo de
0,6 a 1,0 mg/L. En el numeral 6.6 se describen las técnicas para adición de material
inoculante al agua de dilución, para dos métodos de dilución de muestras.

Blanco de agua de dilución. Con el objeto de verificar la calidad del agua de dilución
sin inóculo y la limpieza de los materiales, usar una porción de la misma y llevarla
junto con las muestras a través de todo el procedimiento. El OD consumido por el
agua  de  dilución  debe  ser  menor  de  0,2  mg/L  y  preferiblemente  no  mayor  de  0,1
mg/L.

Pretratamiento de la muestra.

1. Muestras con alcalinidad cáustica o acidez. Neutralizar las muestras a pH entre 6,5 y
7,5 con una solución de ácido sulfúrico (H2SO4) o hidróxido de sodio (NaOH) de
concentración tal que la cantidad de reactivo no diluya la muestra en más de 0,5%.
La menor dilución de muestra no debe afectar el pH dado por el agua de dilución
inoculada.
2. Muestras con compuestos residuales de cloro. Evitar las muestras que contengan
cloro residual; tomarlas antes del proceso de cloración; si la muestra ha sido clorada
pero no presenta cloro residual detectable, inocular el agua de dilución; si hay cloro
residual, declorar la muestra e inocular el agua de dilución (ver 6.7). No ensayar las
muestras que han sido decloradas, sin inocular el agua de dilución. En algunas
muestras, el cloro se elimina si se dejan 1 o 2 h a la luz, lo cual puede suceder
durante el transporte y manejo de la muestra. Para muestras en las cuales el cloro
residual no se disipa en un tiempo razonablemente corto, eliminar el cloro residual
por adición de solución de Na2SO3. El volumen de Na2SO3 requerido se determina
en una porción de 100 a 1 000 mL de la muestra, previamente neutralizada, por la
adición de 10 mL de ácido acético 1 + 1 o H2SO4 1 + 50, 10 mL de solución de
yoduro de potasio (10 g KI/100 mL), por cada 1000 mL de muestra; el volumen
resultante se titula con solución de Na2SO3 hasta su punto final, determinado por el
indicador almidón­yodo. Se agrega a la muestra neutralizada, el volumen relativo de
solución de Na2SO3 determinado, se mezcla bien y se deja en reposo cerca de 10 a
20 minutos. Ensayar la muestra para determinar el cloro residual. (NOTA: Un
exceso de Na2SO3 en la muestra, consume oxígeno y reacciona con ciertas
cloraminas orgánicas que pueden estar presentes en muestras tratadas).
3. Muestras contaminadas con sustancias tóxicas. Las muestras de aguas residuales
provenientes de industrias, por ejemplo electroquímicas, contienen metales tóxicos.
Estas muestras requieren de estudios especiales y deben ser tratadas antes de
medirles la DBO.
4. Muestras sobresaturadas con OD. En muestras procedentes de aguas muy frías o de
aguas en que la producción primaria es alta, los valores de OD a 20ºC suelen ser
mayores de 9 mg de OD/L. Para prevenir pérdidas de oxígeno durante la incubación,
llevar la temperatura de la muestra a 20ºC en una botella parcialmente llena,
mientras se sacude fuertemente o se burbujea aire comprimido filtrado y limpio.
5. Ajuste de temperatura de la muestra. Llevar las muestras a 20 ± 1ºC antes de hacer
las diluciones.
6. Inhibición de la nitrificación. A las muestras contenidas en botellas de 300 mL se
agregan 3 mg de 2­cloro­6­(triclorometil)­piridina (TCMP) o se puede agregar
directamente al agua de dilución para lograr una concentración final de
 aproximadamente 10 mg de TCMP/L. (NOTA: Es posible que la TCMP se disuelva
lentamente y permanezca flotando en la superficie de la muestra; algunas
formulaciones comerciales se disuelven más fácilmente pero no son 100% puras, por
lo que se debe ajustar la dosificación). Las muestras que requieren el procedimiento
de inhibición de la nitrificación incluyen: efluentes tratados biológicamente,
muestras inoculadas con efluentes tratados biológicamente, y aguas de río, pero no
se limitan necesariamente a estas. En el reporte de los resultados registrar el uso del
procedimiento de inhibición de la nitrificación.

Técnica  de  dilución.  Los  resultados  más  acertados  se  obtienen  con  diluciones  de
muestra  en  las  que  los  valores  de  OD  residual  son  por  lo  menos  1  mg/L  y  un
consumo  de  OD  de  por  lo  menos  2  mg/L  después  de  los  5  días  de  incubación.  La
experiencia  con  muestras  de  diferente  origen  permiten  optimizar  el  número  de
diluciones  requeridas;  la  correlación  de  la  DQO  con  la  DBO  puede  constituir  una
guía efectiva para la selección de las diluciones más convenientes. Si no se dispone
de esta metodología, se pueden emplear las diluciones de 0,0 a 1,0 % para efluentes
líquidos industriales, 1 a 5 % para efluentes industriales no tratados y decantados, 5
a  25  %  para  efluentes  con  tratamiento  secundario  o  biológico,  y  25  a  100  %  para
corrientes contaminadas.

Las diluciones se efectúan en probetas y luego se transfieren a las botellas de DBO,
o  se  preparan  directamente  en  las  botellas.  Cualquiera  de  los  dos  métodos  de
dilución puede combinarse con cualquier técnica para medición de OD. El número
de botellas a ser preparadas para cada dilución depende de la técnica de análisis del
OD y del número de réplicas deseadas. Cuando sea necesaria la inoculación, agregar
la semilla directamente al agua de dilución o a cada probeta o botella de DBO antes
de  la  dilución.  La  inoculación  en  las  probetas  evita  la  disminución  de  la  relación
semilla:muestra cuando se hace un incremento en las diluciones.

1. Diluciones preparadas en probeta. Si se emplea el método modificado de la azida
para la medición de OD, transvasar cuidadosamente el agua de dilución ­inoculada si
es necesario­, hasta llenar la mitad de una probeta de 1 a 2 L de capacidad por medio
de sifón para evitar la entrada de aire. Agregar la cantidad deseada de muestra
cuidadosamente mezclada y diluir al nivel apropiado con agua de dilución; mezclar
bien con una varilla tipo émbolo y evitar la entrada de aire. Trasvasar la dilución a
dos botellas de DBO por medio de sifón. Determinar el OD inicial en una de estas
botellas. Tapar herméticamente la segunda botella, con sello de agua, e incubar por 5
d a 20ºC. Si se determina el OD por el método de electrodo de membrana, transvasar
la mezcla de dilución a una botella DBO por medio de sifón. Determinar el OD
inicial en esta botella, descartar el residuo y llenar nuevamente la botella con la
muestra diluida. Tapar herméticamente la botella, con sello de agua, e incubar por 5
d a 20ºC.
2. Diluciones preparadas directamente en botellas DBO. Con una pipeta de boca ancha
agregar el volumen de muestra deseado a diferentes botellas para DBO de volumen
conocido. Agregar, a cada botella o al agua de dilución, las cantidades apropiadas de
semilla; llenar las botellas con suficiente agua de dilución, inoculada si es necesario,
de tal manera que al insertar el tapón se desplace todo el aire, sin dejar burbujas.
Para diluciones mayores de 1:100 hacer una dilución preliminar en una probeta antes
de hacer la dilución final. Preparar dos botellas de cada dilución cuando se empleen
los métodos yodométricos de volumetría para la medición del OD; determinar el OD
inicial en una de las dos botellas, tapar herméticamente la segunda botella, con sello
de agua, e incubar por 5 d a 20ºC. Si se emplea el método de electrodo de membrana
para la medición de OD, preparar solamente una botella de DBO por cada dilución;
determinar el OD inicial en esta botella y remplazar cualquier contenido desplazado
 con agua de dilución para llenar la botella. Tapar herméticamente, con sello de agua,
e incubar por 5 d a 20ºC. Enjuagar el electrodo de OD entre determinaciones para
prevenir la contaminación cruzada de las muestras.

Determinación  del  OD  inicial.  Si  la  muestra  contiene  sustancias  que  reaccionan
fácilmente  con  el  OD,  es  necesario  determinar  el  OD  antes  de  llenar  la  botella  de
DBO  con  la  muestra  diluida.  Si  el  consumo  de  OD  inicial  es  insignificante,  el
período entre la preparación de la dilución y la medida del OD inicial no es crítico.
Emplear  el  método  modificado  de  la  azida  (método  yodométrico)  o  el  método  de
electrodo de membrana, para determinar el OD inicial en todas las muestras diluidas,
testigos y, si se considera necesario, en los controles de semilla.

Incubación.  Incubar  a  20  ±  1ºC  las  botellas  que  contienen  las  diluciones,  los
controles de semilla, los blancos de agua de dilución y los patrones de glucosa­ácido
glutámico. Hacer un sello de agua como se describe en 6.7.

Determinación del OD final. Determinar el OD en las muestras diluidas, los blancos
y los patrones después de 5 días de incubación como se describe en 6.8.

7. CÁLCULOS
1. Cuando el agua de dilución no ha sido inoculada:

DBO5, mg/lt = (D1­D2)/P

2. Cuando el agua de dilución ha sido inoculada:

DB)5, mg/lt = {(D1­D2)­(B1­B2)*f }/P

donde:

D1 = OD de la muestra diluida inmediatamente después de la preparación, mg/L,

D2 = OD de la muestra diluida después de 5 d de incubación a 20ºC, mg/L,

P = fracción volumétrica decimal de la muestra empleada,

B1 = OD del control de semilla antes de la incubación, mg/L (sección 6.1.4),

B2 = OD del control de semilla después de la incubación, mg/L (sección 6.1.4), y

f= proporción de semilla en la muestra diluida a la semilla en el control de semilla

= (% de semilla en la muestra diluida)/(% de semilla en el control de semilla).

3. Si el material inoculante se agrega directamente a la muestra o a las botellas de
control:

f=(volumen de semilla en la muestra diluida)/(volumen de semilla en el control de
semilla)

4. Si se ha inhibido la nitrificación, reportar los resultados como DBO5.
1. Los resultados obtenidos para las diferentes diluciones pueden ser promediados si se
cumple con los requisitos de valores de OD residual de mínimo 1 mg/L y un
consumo de OD de por lo menos 2 mg/L. Este promedio se puede hacer si no hay
 evidencia de toxicidad en las muestras menos diluidas o de alguna alteración
detectable.
2. En estos cálculos no se hace corrección por el OD consumido por el blanco de agua
de dilución durante la incubación. Esta corrección no es necesaria si el agua de
dilución cumple el criterio de blanco estipulado en el procedimiento. Si el agua de
dilución no cumple este criterio, la corrección es difícil y los resultados serán
cuestionables.

8. PRECISIÓN
1. No existe un procedimiento aceptable para establecer la precisión y exactitud de la
prueba de la DBO. El control de glucosa­ácido glutámico prescrito está proyectado
como un punto de referencia para la evaluación de la calidad del agua de dilución, la
efectividad de la semilla, y la técnica analítica.
2. Ochenta y seis analistas, pertenecientes a 58 laboratorios analizaron muestras de
aguas naturales dosificadas con incrementos exactos de compuestos orgánicos, con
valores promedios de DBO de 2,1 y 175 mg/L; su desviación estándar fué de ± 0,7 y
± 26 mg/L, respectivamente.
3. Las pruebas realizadas en un laboratorio con una solución de glucosa­ácido
glutámico de 300 mg/L, produjeron los siguientes resultados:

Número de meses: 14

Número de triplicados: 421

Promedio recuperado mensualmente: 204 mg/L

Desviación estándar promedio mensual: 10,4 mg/L

4. Los estudios estadísticos de precisión y exactitud de las determinaciones de la DBO,
realizados en ejercicios de intercalibración que involucraron de 2 a 112 laboratorios,
con diferentes analistas y semillas, en muestras sintéticas que contenían glucosa y
ácido glutámico en proporción 1:1 en el intervalo de concentraciones de 3,3 a 231
mg/L, proporcionaron el promedio, X, y la desviación estándar, S, a través de las
ecuaciones de regresión correspondientes:

X = 0,658 (nivel agregado, mg/l) + 0,280 mg/L

S = 0,100 (nivel agregado, mg/l) + 0,547 mg/L

Para el estándar primario de 300 mg/L, el promedio de DBO 5­d fue de 198 mg/L
con una desviación estándar de 30,5 mg/L.

5. Valores límites de control: Debido a la gran variedad de factores que afectan las
pruebas de la DBO en los estudios multilaboratorios y la consecuente disparidad en
los resultados, se recomienda como valor límite de control para laboratorios
individuales una desviación estándar (± 1S), la determinada en las pruebas
interlaboratorios. Para cada laboratorio, establecer los valores límites de control
efectuando un mínimo de 25 análisis de glucosa­ácido glutámico (ver 6.3) en un
período de algunas semanas o meses y calcular la media y la desviación estándar.
Emplear como valor límite de control para futuros chequeos de glucosa­ácido
glutámico la media ± 3 desviaciones estándar; comparar los valores calculados para
los ensayos de un solo laboratorio, presentados anteriormente, con los resultados
interlaboratorios. Reevaluar los valores límites de control si estos se ubican fuera del
intervalo de 198 ± 30,5 e investigar el origen del problema. Si la DBO medida para
 un patrón de glucosa­ácido glutámico está fuera del intervalo aceptado, rechazar las
pruebas hechas con tales semilla y agua de dilución.
4. Iintervalo de trabajo: es igual a la diferencia entre el máximo OD inicial (7 a 9
mg/L) y el mínimo OD residual de 1 mg/L multiplicado por el factor de dilución. Un
límite de detección más bajo de 2 mg/L se establece para una disminución del OD
mínima de 2 mg/L.

9. QUÍMICO RESPONSABLE
Elaboración del Protocolo: Laboratorio de Química Ambiental

Estandarización de la Técnica: Laboratorio de Química Ambiental
10. FECHAS
Elaboración del Protocolo: julio 1997

Montaje de la Técnica:

Calibración:

Revisión:julio de 1997
11. REFERENCIAS
Standard Methods for  the  Examination of  Water  and  Wastewater.  American Public
Health  Association,  American  Water  Works  Association,  Water  Pollution  Control
Federation. 19 ed., New York, 1995. pp 5­2 a 5­12.

Methods for Chemical Analysis of Water and Wastes. United States Environmental
Protection Agency. Cincinnati, 1983.

12. BIBLIOGRAFÍA
RODIER,  J.  Análisis  de  Aguas:  aguas  naturales,  aguas  residuales,  agua  de  mar.
Omega, Barcelona, 1981.

SAWYER,  C.;  McCARTY,  P.  Chemistry  for  Environmental  Engineering.  McGraw  Hill,
New York, 1996

GARAY,  J.,  PANIZZO,  L.,  LESMES,  L.,  RAMIREZ,  G.,  SANCHEZ,  J.  Manual  de
Técnicas  Analíticas  de  Parámetros  Físico­químicos  y  Contaminantes  Marinos.  Tercera
edición. Centro de Investigaciones Oceanográficas e Hidrográficas. Cartagena, 1993