DEMANDA BIOQUÍMICA DE OXÍGENO

DBO 5-días
CÓDIGO GENERAL 007 Código  
1. SUMARIO Y APLICACIONES
1. La demanda bioquímica de oxígeno (DBO) es una prueba usada para la
determinación de los requerimientos de oxígeno para la degradación bioquímica de
la materia orgánica en las aguas municipales, industriales y en general residuales; su
aplicación permite calcular los efectos de las descargas de los efluentes domésticos e
industriales sobre la calidad de las aguas de los cuerpos receptores. Los datos de la
prueba de la DBO se utilizan en ingeniería para diseñar las plantas de tratamiento de
aguas residuales.
2. La prueba de la DBO es un procedimiento experimental, tipo bioensayo, que mide el
oxígeno requerido por los organismos en sus procesos metabólicos al consumir la
materia orgánica presente en las aguas residuales o naturales. Las condiciones
estándar del ensayo incluyen incubación en la oscuridad a 20ºC por un tiempo
determinado, generalmente cinco días. Las condiciones naturales de temperatura,
población biológica, movimiento del agua, luz solar y la concentración de oxígeno
no pueden ser reproducidas en el laboratorio. Los resultados obtenidos deben tomar
en cuenta los factores anteriores para lograr una adecuada interpretación.
3. Las muestras de agua residual o una dilución conveniente de las mismas, se incuban
por cinco días a 20ºC en la oscuridad. La disminución de la concentración de
oxígeno disuelto (OD), medida por el método Winkler o una modificación del
mismo, durante el periodo de incubación, produce una medida de la DBO.

2. LIMITACIONES E INTERFERENCIAS
1. Existen numerosos factores que afectan la prueba de la DBO, entre ellos la relación
de la materia orgánica soluble a la materia orgánica suspendida, los sólidos
sedimentables, los flotables, la presencia de hierro en su forma oxidada o reducida,
la presencia de compuestos azufrados y las aguas no bien mezcladas. Al momento
no existe una forma de corregir o ajustar los efectos de estos factores.
2. DBO carbonácea contra nitrogenácea. La oxidación de las formas reducidas del
nitrógeno como amoniaco y nitrógeno orgánico, mediada por los microorganismos,
ejercen una demanda nitrogenácea, que ha sido considerada como una interferencia
en la prueba; sin embargo, esta puede ser eliminada con la adición de inhibidores
químicos. Cuando se inhiba la demanda nitrogenácea de oxígeno, reportar los
resultados como demanda bioquímica de oxígeno carbonácea (DBOC5); cuando no
se inhiba, reportar los resultados como DBO5.

1. Requerimientos de dilución. Si el agua de dilución es de baja calidad, su DBO

aparecerá como DBO de la muestra, efecto que será amplificado por el factor de
dilución, y el resultado tendrá una desviación positiva. El método de análisis debe
incluir agua de dilución de verificación y agua de dilución como blanco para
establecer su calidad, mediante la medición del consumo de oxígeno con una mezcla
orgánica conocida, generalmente glucosa y ácido glutámico. La fuente del agua de
dilución puede ser: destilada a partir del agua de grifo, o agua libre de sustancias
orgánicas biodegradables o bioinhibitorias tales como cloro o metales pesados. El
agua destilada puede contener amoniaco o compuestos orgánicos volátiles; el agua
 desionizada también puede estar contaminada con compuestos orgánicos solubles
lixiviados del lecho de la resina; el uso de destiladores con conductos o accesorios
de cobre en las líneas de agua destilada pueden producir agua con cantidades
excesivas de cobre, que actúa como biocida.

3. TOMA Y PRESERVACIÓN DE MUESTRAS

1. Las muestras para determinación de la DBO se deben analizar con prontitud; si no
es posible, refrigerarlas a una temperatura cercana al punto de congelación, ya que
se pueden degradar durante el almacenamiento, dando como resultado valores bajos.
Sin embargo, es necesario mantenerlas el mínimo tiempo posible en
almacenamiento, incluso si se llevan a bajas temperaturas. Antes del análisis
calentarlas a 20ºC.

1. Muestras simples. Si el análisis se emprende en el intervalo de 2 h después de la

reco-lección no es necesario refrigerarlas; de lo contrario, guardar la muestra a 4ºC o
menos; reportar junto con los resultados el tiempo y la temperatura de
almacenamiento. Bajo ningún concepto iniciar el análisis después de 24 h de haber
tomado la muestra; las muestras empleadas en la evaluación de las tasas retributivas
o en otros instrumentos normativos, deben ser analizadas antes de que transcurran 6
h a partir del momento de la toma.
2. Muestras compuestas. Mantener las muestras a 4ºC o menos durante el proceso de
composición, que se debe limitar a 24 h. Aplicar los mismos criterios que para las
muestras sencillas, contando el tiempo transcurrido desde el final del período de
composición. Especificar el tiempo y las condiciones de almacenamiento como
parte de los resultados.

4. APARATOS
1. Botellas de incubación para la DBO, de 250 a 300 mL de capacidad. Lavarlas con
detergente, enjuagarlas varias veces, y escurrirlas antes de su uso. Para evitar la
entrada de aire en la botella de dilución durante la incubación, se debe utilizar un
sello de agua, que se puede lograr satisfactoriamente invirtiendo las botellas en un
baño de agua o adicionando agua en el reborde cóncavo de la boca de las botellas
especiales para la DBO. Colocar una copa de papel o plástica o un capuchón
metálico sobre la boca de la botella para reducir la evaporación del sello de agua
durante la incubación.
2. Incubadora de aire o baño de agua, controlada termostáticamente a 20  1ºC; excluir
cualquier fuente luminosa para eliminar el proceso de producción fotosintética de
OD.

5. REACTIVOS
1. Solución tampón de fosfato: Disolver 8,5 g de KH2PO4, 21,75 g de K2HPO4, 33,4 g
de Na2HPO4.7H2O, y 1,7 g de NH4Cl en aproximadamente 500 mL de agua destilada
y diluir a 1 L. El pH debe ser 7,2 sin posteriores ajustes. Si se presenta alguna señal
de crecimiento biológico, descartar este o cualquiera de los otros reactivos.
2. Solución de sulfato de magnesio: Disolver 22,5 g de MgSO4.7H2O en agua destilada
y diluir a 1 L.
3. Solución de cloruro de calcio: Disolver 27,5 g de CaCl2 en agua destilada y diluir a
 1L.
4. Solución de cloruro férrico: Disolver 0,25g de FeCl3.6H2O en agua destilada, diluir a
1L
5. Soluciones ácida y alcalina, 1 N, para neutralización de muestras cáusticas o ácidas.

1) Acido. A un volumen apropiado de agua destilada agregar muy lentamente y

mientras se agita, 28 mL de ácido sulfúrico concentrado; diluir a 1 L.

2) Alcali. Disolver 40 g de hidróxido de sodio en agua destilada y diluir a 1 L.

6. Solución de sulfito de sodio: Disolver 1,575 g de Na2SO3 en 1000 mL de agua

destilada. Esta solución no es estable y se debe preparar diariamente.
7. Inhibidor de nitrificación: 2-cloro-6-(triclorometil)piridina.
8. Solución de glucosa-ácido glutámico: Secar a 103ºC por 1 h glucosa y ácido
glutámico grado reactivo. Disolver 150 mg de glucosa y 150 mg de ácido glutámico
en agua destilada y diluir a 1 L. Preparar inmediatamente antes de su uso.
9. Solución de cloruro de amonio: Disolver 1,15 g de NH4Cl en 500 mL de agua
destilada, ajustar el pH a 7,2 con solución de NaOH, y diluir a 1 L. La solución
contiene 0,3 mg de N/mL.

6. PROCEDIMIENTO
1. Preparación del agua de dilución. Colocar la cantidad de agua necesaria en una
botella y agregar por cada litro, 1 mL de cada una de las siguientes soluciones:
tampón fosfato, MgSO4, CaCl2, y FeCl3. El agua de dilución se puede inocular como
se describe en 6.4; chequear y guardar como se describe en 6.2 y 6.3, de tal manera
que siempre se tenga disponible.

Llevar el agua de dilución a una temperatura de 20ºC antes de su uso; saturarla con
OD por agitación en una botella parcialmente llena, por burbujeo de aire filtrado
libre de materia orgánica, o guardarla en botellas lo suficientemente grandes con
tapón de algodón, para permitir su saturación. Emplear material de vidrio bien
limpio para proteger la calidad del agua.

Verificación del agua de dilución. Aplicar este procedimiento como una forma de
verificación básica de la calidad del agua de dilución.

Si el agua consume más de 0,2 mg de oxígeno/L se debe mejorar su purificación o

emplear agua de otra fuente; si se usa el procedimiento de inhibición de la
nitrificación, el agua de dilución inolculada, se debe guardar en un sitio oscuro a
temperatura ambiente hasta que el consumo de oxígeno se reduzca lo suficiente para
cumplir el criterio de verificación. Confirmar la calidad del agua de dilución
almacenada que está en uso, pero no agregar semilla para mejorar su calidad. El
almacenamiento no es recomendable cuando se va a determinar la DBO sin
inhibición de nitrificación, ya que los organismos nitrificantes se pueden desarrollar
en este período. Revisar el agua de dilución para determinar la concentración de
amonio, y si es suficiente después del almacenamiento; de lo contrario, agregar
solución de cloruro de amonio para asegurar un total de 0,45 mg de amonio como
nitrógeno/L. Si el agua de dilución no ha sido almacenada para mejorar su calidad,
agregar la cantidad suficiente de semilla para producir un consumo de OD de 0,05 a
 0,1 mg/L en cinco días a 20ºC. Llenar una botella de DBO con agua de dilución,
determinar el OD inicial, incubar a 20ºC por 5 días y determinar el OD final como
se describe en 6.8 y 6.10. El OD consumido en este lapso no debe ser mayor de 0,2
mg/L y preferiblemente menor de 0,1 mg/L.

Chequeo con glucosa-ácido glutámico. Debido a que la prueba de la DBO es un

bioensayo, sus resultados pueden estar muy influenciados por la presencia de
sustancias tóxicas o por el uso de semillas de mala calidad. Muchas veces el agua
destilada puede estar contaminada con cobre, o algunos inóculos de aguas residuales
pueden ser relativamente inactivos, y si se emplean tales aguas o inóculos siempre
se van a obtener bajos resultados. Controlar periódicamente la calidad del agua de
dilución, la efectividad de las semillas y la técnica analítica, por mediciones de la
DBO para compuestos orgánicos puros y muestras con adiciones conocidas. En
general, para determinaciones de la DBO que no requieran una semilla adaptada,
usar como solución estándar de chequeo una mezcla de 150 mg de glucosa/L y 150
mg de ácido glutámico/L. La glucosa tiene una velocidad de oxidación
excepcionalmente alta y variable, pero cuando es empleada con ácido glutámico se
estabiliza, y es similar a la obtenida con aguas residuales municipales. Si un agua
residual contiene un constituyente mayoritario identificable, que contribuye a la
DBO, usar este compuesto en remplazo de la mezcla de glucosa-ácido glutámico.

Determinar la DBO5 a 20ºC de una dilución al 2% de la solución estándar de

chequeo glucosa-ácido glutámico mediante las técnicas descritas en los numerales
6.4 a 6.10. Evaluar los datos como se describe en la sección de Precisión.

Inoculación.

1. Origen de las semillas o inóculo. Es necesario que en la muestra esté presente una
población de microorganismos capaces de oxidar la materia orgánica biodegradable.
Las aguas residuales domésticas no cloradas, los efluentes no desinfectados de
plantas de tratamiento biológico, y las aguas superficiales que reciben descargas
residuales contienen poblaciones satisfactorias de microorganismos. Algunas
muestras no contienen una población microbiana suficiente (por ejemplo, efluentes
industriales sin tratamiento, aguas desinfectadas, efluentes con elevada temperatura
o con valores extremos de pH), por tanto deben inocularse por adición de una
población adecuada de microorganismos. La semilla o inóculo preferible es el
efluente de un sistema de tratamiento biológico, en su defecto, el sobrenadante de
aguas residuales domésticas después de dejarlas decantar a temperatura ambiente
por lo menos 1 h pero no más de 36 h. Cuando se emplee el efluente de un proceso
de tratamiento biológico, se recomienda aplicar el procedimiento de inhibición de la
nitrificación.

Algunas muestras pueden contener materiales no degradables a las tasas normales

de trabajo de los microorganismos; inocular tales muestras con una población
microbiana adaptada, obtenida a partir de efluentes sin desinfectar de un proceso de
tratamiento biológico de aguas residuales. También se puede obtener la semilla en el
cuerpo de agua receptor del vertimiento, preferiblemente de 3 a 8 Km después del
punto de descarga. Cuando no se disponga de ninguna de dichas fuentes del inóculo,
desarrollar en el laboratorio una semilla adaptada, por aireamiento continuo de una
 muestra clarificada de agua residual doméstica y adición de pequeños incrementos
diarios de aguas residuales. Para obtener la población microbiana inicial, usar una
suspensión de suelo, un lodo activado, o una preparación a partir de semilla
comercial. Ensayar el rendimiento de la semilla haciendo pruebas de la DBO en las
muestras hasta obtener una población satisfactoria. Si los valores de la DBO
aumentan con el tiempo hasta un valor constante, se consideran como un indicio de
la adaptación sucesiva de la semilla o inóculo.

1. Control de inóculos. Determinar la DBO del material inoculante como si se tratara

de una muestra. De este valor y del conocimiento del dato del agua de dilución
determinar el OD consumido. Hacer las diluciones necesarias hasta obtener una
disminución de por lo menos el 50% del OD. La gráfica de la disminución de OD
expresada en miligramos por litro contra los mililitros de inóculo, origina una recta
cuya pendiente debe interpretarse como la disminución de OD por mililitro de
inóculo. La intercepción de la recta con el eje de los valores de reducción del OD
representa la disminución del oxígeno provocada por el agua de dilución, valor que
debe ser inferior a 0,1 mg/L (ver 6.8). Con el objeto de corregir el valor de OD
consumido por una muestra, se debe restar a éste el consumido por el inóculo. El
consumo de OD del agua de dilución más el inóculo puede estar en el intervalo de
0,6 a 1,0 mg/L. En el numeral 6.6 se describen las técnicas para adición de material
inoculante al agua de dilución, para dos métodos de dilución de muestras.

Blanco de agua de dilución. Con el objeto de verificar la calidad del agua de

dilución sin inóculo y la limpieza de los materiales, usar una porción de la misma y
llevarla junto con las muestras a través de todo el procedimiento. El OD consumido
por el agua de dilución debe ser menor de 0,2 mg/L y preferiblemente no mayor de
0,1 mg/L.

Pretratamiento de la muestra.

1. Muestras con alcalinidad cáustica o acidez. Neutralizar las muestras a pH entre 6,5 y
7,5 con una solución de ácido sulfúrico (H2SO4) o hidróxido de sodio (NaOH) de
concentración tal que la cantidad de reactivo no diluya la muestra en más de 0,5%.
La menor dilución de muestra no debe afectar el pH dado por el agua de dilución
inoculada.
2. Muestras con compuestos residuales de cloro. Evitar las muestras que contengan
cloro residual; tomarlas antes del proceso de cloración; si la muestra ha sido clorada
pero no presenta cloro residual detectable, inocular el agua de dilución; si hay cloro
residual, declorar la muestra e inocular el agua de dilución (ver 6.7). No ensayar las
muestras que han sido decloradas, sin inocular el agua de dilución. En algunas
muestras, el cloro se elimina si se dejan 1 o 2 h a la luz, lo cual puede suceder
durante el transporte y manejo de la muestra. Para muestras en las cuales el cloro
residual no se disipa en un tiempo razonablemente corto, eliminar el cloro residual
por adición de solución de Na2SO3. El volumen de Na2SO3 requerido se determina
en una porción de 100 a 1 000 mL de la muestra, previamente neutralizada, por la
adición de 10 mL de ácido acético 1 + 1 o H2SO4 1 + 50, 10 mL de solución de
yoduro de potasio (10 g KI/100 mL), por cada 1000 mL de muestra; el volumen
resultante se titula con solución de Na2SO3 hasta su punto final, determinado por el
indicador almidón-yodo. Se agrega a la muestra neutralizada, el volumen relativo de
 solución de Na2SO3 determinado, se mezcla bien y se deja en reposo cerca de 10 a
20 minutos. Ensayar la muestra para determinar el cloro residual. (NOTA: Un
exceso de Na2SO3 en la muestra, consume oxígeno y reacciona con ciertas
cloraminas orgánicas que pueden estar presentes en muestras tratadas).
3. Muestras contaminadas con sustancias tóxicas. Las muestras de aguas residuales
provenientes de industrias, por ejemplo electroquímicas, contienen metales tóxicos.
Estas muestras requieren de estudios especiales y deben ser tratadas antes de
medirles la DBO.
4. Muestras sobresaturadas con OD. En muestras procedentes de aguas muy frías o de
aguas en que la producción primaria es alta, los valores de OD a 20ºC suelen ser
mayores de 9 mg de OD/L. Para prevenir pérdidas de oxígeno durante la incubación,
llevar la temperatura de la muestra a 20ºC en una botella parcialmente llena,
mientras se sacude fuertemente o se burbujea aire comprimido filtrado y limpio.
5. Ajuste de temperatura de la muestra. Llevar las muestras a 20  1ºC antes de hacer
las diluciones.
6. Inhibición de la nitrificación. A las muestras contenidas en botellas de 300 mL se
agregan 3 mg de 2-cloro-6-(triclorometil)-piridina (TCMP) o se puede agregar
directamente al agua de dilución para lograr una concentración final de
aproximadamente 10 mg de TCMP/L. (NOTA: Es posible que la TCMP se disuelva
lentamente y permanezca flotando en la superficie de la muestra; algunas
formulaciones comerciales se disuelven más fácilmente pero no son 100% puras,
por lo que se debe ajustar la dosificación). Las muestras que requieren el
procedimiento de inhibición de la nitrificación incluyen: efluentes tratados
biológicamente, muestras inoculadas con efluentes tratados biológicamente, y aguas
de río, pero no se limitan necesariamente a estas. En el reporte de los resultados
registrar el uso del procedimiento de inhibición de la nitrificación.

Técnica de dilución. Los resultados más acertados se obtienen con diluciones de

muestra en las que los valores de OD residual son por lo menos 1 mg/L y un
consumo de OD de por lo menos 2 mg/L después de los 5 días de incubación. La
experiencia con muestras de diferente origen permiten optimizar el número de
diluciones requeridas; la correlación de la DQO con la DBO puede constituir una
guía efectiva para la selección de las diluciones más convenientes. Si no se dispone
de esta metodología, se pueden emplear las diluciones de 0,0 a 1,0 % para efluentes
líquidos industriales, 1 a 5 % para efluentes industriales no tratados y decantados, 5
a 25 % para efluentes con tratamiento secundario o biológico, y 25 a 100 % para
corrientes contaminadas.

Las diluciones se efectúan en probetas y luego se transfieren a las botellas de DBO,

o se preparan directamente en las botellas. Cualquiera de los dos métodos de
dilución puede combinarse con cualquier técnica para medición de OD. El número
de botellas a ser preparadas para cada dilución depende de la técnica de análisis del
OD y del número de réplicas deseadas. Cuando sea necesaria la inoculación, agregar
la semilla directamente al agua de dilución o a cada probeta o botella de DBO antes
de la dilución. La inoculación en las probetas evita la disminución de la relación
semilla:muestra cuando se hace un incremento en las diluciones.

1. Diluciones preparadas en probeta. Si se emplea el método modificado de la azida

para la medición de OD, transvasar cuidadosamente el agua de dilución -inoculada
si es necesario-, hasta llenar la mitad de una probeta de 1 a 2 L de capacidad por
 medio de sifón para evitar la entrada de aire. Agregar la cantidad deseada de
muestra cuidadosamente mezclada y diluir al nivel apropiado con agua de dilución;
mezclar bien con una varilla tipo émbolo y evitar la entrada de aire. Trasvasar la
dilución a dos botellas de DBO por medio de sifón. Determinar el OD inicial en una
de estas botellas. Tapar herméticamente la segunda botella, con sello de agua, e
incubar por 5 d a 20ºC. Si se determina el OD por el método de electrodo de
membrana, transvasar la mezcla de dilución a una botella DBO por medio de sifón.
Determinar el OD inicial en esta botella, descartar el residuo y llenar nuevamente la
botella con la muestra diluida. Tapar herméticamente la botella, con sello de agua, e
incubar por 5 d a 20ºC.
2. Diluciones preparadas directamente en botellas DBO. Con una pipeta de boca ancha
agregar el volumen de muestra deseado a diferentes botellas para DBO de volumen
conocido. Agregar, a cada botella o al agua de dilución, las cantidades apropiadas de
semilla; llenar las botellas con suficiente agua de dilución, inoculada si es necesario,
de tal manera que al insertar el tapón se desplace todo el aire, sin dejar burbujas.
Para diluciones mayores de 1:100 hacer una dilución preliminar en una probeta
antes de hacer la dilución final. Preparar dos botellas de cada dilución cuando se
empleen los métodos yodométricos de volumetría para la medición del OD;
determinar el OD inicial en una de las dos botellas, tapar herméticamente la segunda
botella, con sello de agua, e incubar por 5 d a 20ºC. Si se emplea el método de
electrodo de membrana para la medición de OD, preparar solamente una botella de
DBO por cada dilución; determinar el OD inicial en esta botella y remplazar
cualquier contenido desplazado con agua de dilución para llenar la botella. Tapar
herméticamente, con sello de agua, e incubar por 5 d a 20ºC. Enjuagar el electrodo
de OD entre determinaciones para prevenir la contaminación cruzada de las
muestras.

Determinación del OD inicial. Si la muestra contiene sustancias que reaccionan

fácilmente con el OD, es necesario determinar el OD antes de llenar la botella de
DBO con la muestra diluida. Si el consumo de OD inicial es insignificante, el
período entre la preparación de la dilución y la medida del OD inicial no es crítico.
Emplear el método modificado de la azida (método yodométrico) o el método de
electrodo de membrana, para determinar el OD inicial en todas las muestras
diluidas, testigos y, si se considera necesario, en los controles de semilla.

Incubación. Incubar a 20  1ºC las botellas que contienen las diluciones, los
controles de semilla, los blancos de agua de dilución y los patrones de glucosa-ácido
glutámico. Hacer un sello de agua como se describe en 6.7.

Determinación del OD final. Determinar el OD en las muestras diluidas, los blancos

y los patrones después de 5 días de incubación como se describe en 6.8.
7. CÁLCULOS
1. Cuando el agua de dilución no ha sido inoculada:

DBO5, mg/lt = (D1-D2)/P

2. Cuando el agua de dilución ha sido inoculada:

 DB)5, mg/lt = {(D1-D2)-(B1-B2)*f }/P

donde:

D1 = OD de la muestra diluida inmediatamente después de la preparación, mg/L,

D2 = OD de la muestra diluida después de 5 d de incubación a 20ºC, mg/L,

P = fracción volumétrica decimal de la muestra empleada,

B1 = OD del control de semilla antes de la incubación, mg/L (sección 6.1.4),

B2 = OD del control de semilla después de la incubación, mg/L (sección 6.1.4), y

f= proporción de semilla en la muestra diluida a la semilla en el control de semilla

= (% de semilla en la muestra diluida)/(% de semilla en el control de

semilla).

3. Si el material inoculante se agrega directamente a la muestra o a las botellas de

control:

f=(volumen de semilla en la muestra diluida)/(volumen de semilla en el control de

semilla)

4. Si se ha inhibido la nitrificación, reportar los resultados como DBO5.

1. Los resultados obtenidos para las diferentes diluciones pueden ser promediados si se
cumple con los requisitos de valores de OD residual de mínimo 1 mg/L y un
consumo de OD de por lo menos 2 mg/L. Este promedio se puede hacer si no hay
evidencia de toxicidad en las muestras menos diluidas o de alguna alteración
detectable.
2. En estos cálculos no se hace corrección por el OD consumido por el blanco de agua
de dilución durante la incubación. Esta corrección no es necesaria si el agua de
dilución cumple el criterio de blanco estipulado en el procedimiento. Si el agua de
dilución no cumple este criterio, la corrección es difícil y los resultados serán
cuestionables.

8. PRECISIÓN
1. No existe un procedimiento aceptable para establecer la precisión y exactitud de la
prueba de la DBO. El control de glucosa-ácido glutámico prescrito está proyectado
como un punto de referencia para la evaluación de la calidad del agua de dilución, la
efectividad de la semilla, y la técnica analítica.
2. Ochenta y seis analistas, pertenecientes a 58 laboratorios analizaron muestras de
aguas naturales dosificadas con incrementos exactos de compuestos orgánicos, con
valores promedios de DBO de 2,1 y 175 mg/L; su desviación estándar fué de  0,7 y
 26 mg/L, respectivamente.
3. Las pruebas realizadas en un laboratorio con una solución de glucosa-ácido
 glutámico de 300 mg/L, produjeron los siguientes resultados:

Número de meses: 14

Número de triplicados: 421

Promedio recuperado mensualmente: 204 mg/L

Desviación estándar promedio mensual: 10,4 mg/L

4. Los estudios estadísticos de precisión y exactitud de las determinaciones de la DBO,

realizados en ejercicios de intercalibración que involucraron de 2 a 112 laboratorios,
con diferentes analistas y semillas, en muestras sintéticas que contenían glucosa y
ácido glutámico en proporción 1:1 en el intervalo de concentraciones de 3,3 a 231
mg/L, proporcionaron el promedio, X, y la desviación estándar, S, a través de las
ecuaciones de regresión correspondientes:

X = 0,658 (nivel agregado, mg/l) + 0,280 mg/L

S = 0,100 (nivel agregado, mg/l) + 0,547 mg/L

 Para el estándar primario de 300 mg/L, el promedio de DBO 5-d fue de 198 mg/L
con una desviación estándar de 30,5 mg/L.

5. Valores límites de control: Debido a la gran variedad de factores que afectan las
pruebas de la DBO en los estudios multilaboratorios y la consecuente disparidad en
los resultados, se recomienda como valor límite de control para laboratorios
individuales una desviación estándar ( 1S), la determinada en las pruebas
interlaboratorios. Para cada laboratorio, establecer los valores límites de control
efectuando un mínimo de 25 análisis de glucosa-ácido glutámico (ver 6.3) en un
período de algunas semanas o meses y calcular la media y la desviación estándar.
Emplear como valor límite de control para futuros chequeos de glucosa-ácido
glutámico la media  3 desviaciones estándar; comparar los valores calculados para
los ensayos de un solo laboratorio, presentados anteriormente, con los resultados
interlaboratorios. Reevaluar los valores límites de control si estos se ubican fuera del
intervalo de 198  30,5 e investigar el origen del problema. Si la DBO medida para
un patrón de glucosa-ácido glutámico está fuera del intervalo aceptado, rechazar las
pruebas hechas con tales semilla y agua de dilución.

4. Iintervalo de trabajo: es igual a la diferencia entre el máximo OD inicial (7 a 9

mg/L) y el mínimo OD residual de 1 mg/L multiplicado por el factor de dilución. Un
límite de detección más bajo de 2 mg/L se establece para una disminución del OD
mínima de 2 mg/L.

DEMANDA QUÍMICA DE OXIGENO

 Método de reflujo abierto
CÓDIGO GENERAL 008 Código  
1. SUMARIO Y APLICACIONES
1. La demanda química de oxígeno (DQO) determina la cantidad de oxígeno requerido
para oxidar la materia orgánica en una muestra de agua residual, bajo condiciones
específicas de agente oxidante, temperatura y tiempo.
2. Las sustancias orgánicas e inorgánicas oxidables presentes en la muestra, se oxidan
mediante reflujo en solución fuertemente ácida (H2SO4) con un exceso conocido de
dicromato de potasio (K2Cr2O7) en presencia de sulfato de plata (AgSO4) que actúa
como agente catalizador, y de sulfato mercúrico (HgSO4) adicionado para remover
la interferencia de los cloruros. Después de la digestión, el remanente de K2Cr2O7
sin reducir se titula con sulfato ferroso de amonio; se usa como indicador de punto
final el complejo ferroso de ortofenantrolina (ferroina). La materia orgánica
oxidable se calcula en términos de oxígeno equivalente.
3. Para muestras de un origen específico, la DQO se puede relacionar empíricamente
con la DBO, el carbono orgánico o la materia orgánica; la prueba se usa para
controlar y monitorear después que se ha establecido la correlación.
4. El método es aplicable a muestras de aguas residuales domésticas e industriales que
tengan DBO superiores a 50 mg O2/L. Para concentraciones más bajas, tales como
muestras de aguas superficiales, se puede usar el método modificado para bajo nivel
en un intervalo entre 5 y 50 mg O2/L. Cuando la concentración de cloruro en la
muestra es mayor de 2 000 mg/L, se requiere el método modificado para las aguas
salinas.

2. LIMITACIONES E INTERFERENCIAS
1. Los compuestos alifáticos volátiles de cadena lineal no se oxidan en cantidad
apreciable, en parte debido a que están presentes en la fase de vapor y no entran en
contacto con el líquido oxidante; tales compuestos se oxidan más efectivamente
cuando se agrega Ag2SO4 como catalizador. Sin embargo, éste reacciona con los
iones cloruro, bromuro y yoduro produciendo precipitados que son oxidados
parcialmente.
2. Las dificultades causadas por la presencia de los haluros pueden superarse en buena
parte, aunque no completamente, por acomplejamiento antes del proceso de reflujo
con sulfato de mercurio (HgSO4), que forma el haluro mercúrico correspondiente,
muy poco soluble en medio acuoso. Si bien se especifica 1 g de HgSO4 para 50 mL
de muestra, se puede usar una menor cantidad cuando la concentración de cloruro
sea menor de 2 000 mg/L, mientras se mantenga una relación HgSO4:Cl– de 10:1. La
técnica no se debe usar para muestras que contengan más de 2 000 mg de Cl–/L;
existen otros procedimientos diseñados para determinar la DQO en aguas salinas.
3. El nitrito (NO2–) tiene una DQO de 1,1 mg de O2/mg de NO2–-N, y como las
concentraciones de NO2– en aguas rara vez son mayores de 1 o 2 mg NO2–-N/L, esta
interferencia es considerada insignificante y usualmente se ignora. Para evitar una
interferencia significante debida al NO2–, agregar 10 mg de ácido sulfámico por cada
mg de NO2–-N presente en el volumen de muestra usado; agregar la misma cantidad
de ácido sulfámico al blanco de agua destilada.
 4. Las especies inorgánicas reducidas, tales como iones ferroso, sulfuro, manganoso,
etc., se oxidan cuantitativamente bajo las condiciones de la prueba; para
concentraciones altas de estas especies, se pueden hacer las correcciones al valor de
DQO obtenido, según los cálculos estequiométricos en caso de conocer su
concentración inicial.

3. TOMA Y PRESERVACION DE MUESTRAS

1. Colectar las muestras en botellas de vidrio preferiblemente; el uso de envases
plásticos es permisible si se asegura la ausencia de contaminantes orgánicos.
2. Si la muestra tiene materia orgánica biológicamente activa, el análisis debe
realizarse inmediatamente, aunque preservada a pH  2 por adición de H2SO4 conc.
(generalmente 2 mL de H2SO4 conc./L de muestra) puede analizarse hasta siete días
después.
3. Las muestras que contengan sólidos sedimentables deben mezclarse con un
homogeneizador para obtener una muestra representativa.
4. En el análisis de aguas residuales con alta DQO deben hacerse diluciones
preliminares, para reducir el error inherente en la medida de pequeños volúmenes de
muestra.

4. APARATOS
4.1. Equipo de reflujo, constituido por balones o tubos de digestión de 500 o 250
mL de capacidad con boca 24/40 de vidrio esmerilado y condensador Liebig, West,
Friedrichs, Allihn o equivalente, de 300 mm, con unión 24/40 de vidrio esmerilado,
y una plancha de calentamiento con regulador de temperatura y potencia suficiente
para producir al menos 1,4 W/cm2 de superficie de calentamiento, o su equivalente.
5. REACTIVOS
1. Solución estándar de dicromato de potasio, 0,0417M. Disolver 12,259 g de K2Cr2O7,
grado estándar primario previamente secado durante 2 h a 103ºC, en agua destilada
y diluir a 1 000 mL en un balón volumétrico clase A.
2. Reactivo de ácido sulfúrico. Agregar con cuidado Ag2SO4 grado reactivo o técnico,
en cristales o en polvo, sobre H2SO4 concentrado en proporción de 5,5g de
Ag2SO4/Kg de H2SO4. Dejar en reposo 1 o 2 días para la disolución del Ag2SO4.
3. Solución indicadora de ferroina. Disolver 1,485 g de 1,10-fenantrolina
monohidratada y 695 mg de FeSO4·7H2O en agua destilada y diluir a 100 mL. Esta
solución también se puede adquirir comercialmente.
4. Sulfato ferroso de amonio (FAS), 0,25 M. Disolver 98 g de Fe(NH4)2(SO4)2·6H2O en
agua destilada; agregar 20 mL de H2SO4 concentrado, enfriar y diluir a 1000 mL.
Estandarizar esta solución diariamente con una solución estándar de K2Cr2O7 así:

Diluir 10,0 mL de la solución estándar de K2Cr2O7 a aproximadamente 100 mL;

agregar 30 mL de H2SO4 concentrado y enfriar. Titular con FAS en presencia de
0,10 a 0,15 mL (2 o 3 gotas) de indicador de ferroina.

Molaridad del FAS =

Volumen de K2Cr2O7 0.0417 M titulado, mL /Volumen del FAS empleado, mL*
0.25

5. Sulfato mercúrico, HgSO4, en cristales o en polvo.

 6. Acido sulfámico. Requerido solamente para eliminar la interferencia de nitritos.
7. Ftalato de potasio e hidrógeno estándar (biftalato de potasio, KHP). Triturar
ligeramente y secar el biftalato de potasio (HOOCC6H4COOK) hasta peso constante
a 120ºC; disolver 425 mg en agua destilada y diluir a 1 000 mL. La solución es
estable por más de tres meses si se conserva refrigerada; se debe verificar la
presencia o ausencia de crecimiento biológico, y en caso afirmativo descartarla. El
biftalato tiene una DQO teórica de 1,176 mg O2/mg y la solución tiene una DQO
teórica de 500  g O2/mL.

6. PROCEDIMIENTO
1. Tratamiento de muestras con DQO > 50 mg O2/L: Colocar 50,0 mL de muestra en
un balón de reflujo de 500-mL (para muestras con DQO > 900 mg O2/L, usar una
porción más pequeña de muestra y diluirla a 50,0 mL); agregar 1 g de HgSO4, en
presencia de perlas de vidrio para controlar la ebullición, y muy lentamente agregar
5,0 mL del reactivo de ácido sulfúrico, mientras se agita para disolver el HgSO4.
Enfriar y agitar para evitar la posible pérdida de materiales volátiles; agregar 25 mL
de solución de K2Cr2O7 0,0417 M y mezclar. Acoplar el balón al condensador y
abrir el flujo de agua refrigerante; agregar el remanente del reactivo de ácido
sulfúrico (70 mL) a través del extremo superior del condensador. Continuar la
agitación mientras se agrega el reactivo de ácido sulfúrico. PRECAUCIÓN: Agitar
muy bien la mezcla de reflujo antes de suministrar calor para prevenir el
sobrecalentamiento en el fondo del balón y la formación de espuma.
2. Cubrir el extremo superior del condensador con un vaso pequeño para prevenir la
entrada de materiales extraños a la mezcla y dejar en reflujo durante 2 h. Enfriar y
enjuagar el condensador desde la parte superior con agua destilada; desconectar el
condensador y diluir la muestra al doble de su volumen con agua destilada. Enfriar
hasta temperatura ambiente y valorar el exceso de K2Cr2O7 con FAS en presencia de
0,10 a 0,15 mL (2 o 3 gotas) de indicador de ferroina; aunque la cantidad de ferroina
no es crítica, usar el mismo volumen para todas las titulaciones. Tomar como punto
final de la titulación el primer cambio nítido de color azul-verdoso a café-rojizo; el
color azul-verdoso puede reaparecer. El cambio de color no es tan marcado como en
la titulación del blanco de reactivos debido a la mayor concentración de ácido en la
muestra. De la misma manera, someter a reflujo y titular un blanco que contenga los
reactivos y un volumen de agua destilada igual al volumen de muestra.
3. Procedimiento alternativo para muestras con DQO-bajo: Seguir el procedimiento
anterior, con dos excepciones: (i) usar K2Cr2O7 estándar 0,00417 M, y (ii) titular con
FAS 0,025 M. Tener cuidado extremo, ya que cualquier traza de materia orgánica en
la vidriería o deposiciones desde la atmósfera pueden causar errores. Si se requiere
un mayor aumento de la sensibilidad, concentrar un mayor volumen de muestra
antes de la digestión por reflujo, de la siguiente manera: Agregar todos los reactivos
a la muestra y reducir el volumen total a 150 mL mediante ebullición en el balón de
reflujo abierto a la atmósfera (sin acoplar el condensador). Calcular la cantidad de
HgSO4 a ser adicionada (antes de la concentración por ebullición), basada en una
relación de peso HgSO4:Cl– de 10:1, según la cantidad de Cl– presente en el volumen
de muestra original. Hacer un blanco de reactivos mediante el mismo
procedimiento. Esta técnica tiene la ventaja de concentrar la muestra sin pérdidas
significativas de materiales volátiles fácilmente digestibles; los materiales volátiles
difíciles de digerir, tales como ácidos volátiles, se pierden pero se consigue una
mejoría frente a métodos de concentración por evaporación ordinarios.
 4. Determinación de la solución estándar. Evaluar la técnica y la calidad de reactivos
realizando la prueba con una solución estándar de ftalato ácido de potasio.

7. CÁLCULOS
DQO como mg de O2/lt = (A-B) x M x 8000/mL de Muestra

donde:

A = mL FAS usados para el blanco

B = mL FAS usados para la muestra, y

M = molaridad del FAS

8. PRECISIÓN
8.1. Un grupo de muestras sintéticas preparadas con ftalato ácido de potasio y NaCl
se analizaron en 74 laboratorios. Para los valores de la DQO de 200 mg O2/L en
ausencia de Cl–, la desviación estándar obtenida fue ±13 mg/L (coef. de variación
6,5 %); para los valores de la DQO de 160 mg O2/L y 100 mg Cl–/L, la desviación
estándar obtenida fue de ±14 mg/L (coef. variación, 10,8%).