UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ESTE

ESCUELA DE MEDICINA
LABORATORIO DE BIOQUÍMICA 1
MED-091-P

PRÁCTICA No. 3
IDENTIFICACIÓN Y DIFERENCIACIÓN DE BIOMOLÉCULAS

Objetivos
 Identificar en muestras problemas la presencia de biomoléculas
 Diferenciar mediante sus propiedades químicas las biomoléculas

Conocimientos teóricos previos

1. Concepto de biomolécula, macromolécula y precursor.
2. ¿Qué son los glúcidos? ¿Cómo se clasifican?
3. Indique las principales características y funciones de los glúcidos.
4. Escriba 10 ejemplos y su importancia clínica.
5. ¿Cuál reacción puede ser usada para detectar los glúcidos? Describa su fundamento.
6. ¿Qué son los aminoácidos?
7. Realice un cuadro sobre los 20 aminoácidos proteicos indicando a que categoría pertenecen.
8. ¿Qué son las proteínas? ¿Cómo se clasifican?
9. Indique las principales características y funciones de las proteínas.
10. ¿Cuál reacción puede ser utilizada para determinar la presencia de todos los aminoácidos?
Describa su fundamento.
11. ¿Cuál reacción puede ser utilizada para determinar la presencia de proteínas? Describa su
fundamento.
12. ¿Qué son los lípidos?
13. ¿Cómo se clasifican?
14. Indique las principales características y funciones de los lípidos.
15. ¿Cuál reacción puede ser utilizada para determinar la presencia de lípidos? Describa su
fundamento.
16. Señale alguna aplicación que pudieran tener los métodos descritos en el estudio de
determinadas patologías.
17. ¿Qué es una marcha analítica?

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 Parte Experimental

Usted recibirá una muestra problema que contiene una de las biomoléculas de las que se ha estado
estudiando en el laboratorio. Utilice la siguiente marcha analítica para identificar la biomolécula
contenida en su muestra problema, realizando de forma ordenada y lógica las reacciones propuestas.
Al realizar cada experimento utilizará 2 tubos de ensayo, uno para analizar su muestra problema, y
otro para la estándar de cada reacción (La muestra estándar contiene la sustancia que identifica el
reactivo que está utilizando. El estándar siempre dará positiva).

Marcha Analítica

Solubilidad
en H2O

Liebermann
Molisch
Burchard

Colesterol TAG Biuret Yodo

Verde de
Ninhidrina Almidón Seliwanoff
Bromocresol

Tirosina Globulina Albúmina Glucosa Fructosa

Prueba de solubilidad

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 Identificación de Lípidos

De las biomoléculas estudiadas 2 de ellas son soluble en agua, carbohidratos y proteínas,

mientras que una de ellas es insoluble en agua, los lípidos. Al realizar esta prueba podremos
diferenciar entre las biomoléculas, en base a su solubilidad.

Agregar en un tubo de ensayo 20 gotas de agua y 20 gotas de su muestra problema. Observe

si es soluble o no.

Reacción de Liebermann Burchard

Identificación de Colesterol

Los esteroides como colesterol, presentes en muestras de origen animal, reaccionan con el
ácido sulfúrico y anhídrido acético, formándose un complejo coloreado verde.

Procedimiento
Reactivos Tubo Estándar Tubo Problema
Estándar de monosacárido 20 gotas --
Muestra Problema -- 20 gotas
Anhídrido acético 10 gotas 10 gotas
Ácido sulfúrico
2 gota 2 gota
concentrado
Dejar reposar 5 minutos

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 Reacción de Molisch
Identificación de Carbohidratos

Todos los carbohidratos reaccionan con el reactivo de Molisch experimentando una serie de
reacciones de deshidratación sucesivas catalizadas por el ácido sulfúrico concentrado y dando
lugar a furfural. La positividad de la reacción se aprecia por un anillo violáceo en la interfaz de
los componentes líquidos de la reacción.

Procedimiento
Reactivos Tubo Estándar Tubo Problema
Estándar de monosacárido 6 gotas --
Muestra Problema -- 6 gotas
Alfa Naftol 3 gotas 3 gotas
Ácido sulfúrico
1 mL lentamente por las 1 mL lentamente por las
concentrado
paredes del tubo inclinado paredes del tubo inclinado
¡¡CUIDADO!!
No agitar. Deben quedar formadas dos fases, entre una y otra se observará si la reacción es
positiva.

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 Reacción de Yodo o Lugol
Identificación de Almidón

Cuando se le añade el reactivo de Lugol a las soluciones acuosas donde están presente
polisacáridos, las mismas adquieren una coloración que va desde el azul intenso, en el caso del
Almidón, hasta el marrón rojizo o caoba en el caso del Glucógeno. El reactivo de Lugol contiene
una mezcla de Yodo y Yoduro de Potasio en solución acuosa.

Procedimiento
Reactivos Tubo Estándar Tubo Problema
Estándar de Almidón o glucógeno 6 gotas --
Muestra Problema -- 6 gotas
Solución de Yodo 2 gotas 2 gotas

Agite suavemente

Reacción de Seliwanoff
Identificación de cetosas

Cuando se adiciona ácido clorhídrico concentrado en presencia de resorcinol a una solución

que contiene alguna cetosa, esta reacciona dando una coloración rojiza.

Procedimiento
Reactivos Tubo Estándar Tubo Problema
Estándar de Cetosas 6 gotas --
Muestra Problema -- 6 gotas
Solución de Seliwanoff 1 mL 1 mL
Agite y caliente en baño de agua hirviente durante 5 minutos

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 Reacción de Biuret
Identificación de proteínas

Las proteínas pueden ser determinadas cualitativa y cuantitativamente mediante el reactivo de

Biuret. La reacción provoca la formación de un complejo coloreado azul-violeta con el ion
cúprico en medio alcalino.

Procedimiento

Reactivos Tubo Estándar Tubo Problema

Estándar de proteínas 6 gotas --
Muestra Problema -- 6 gotas
Reactivo de Biuret 10 gotas 10 gotas
Agite y deje los tubos en reposo durante 15 minutos.

Reacción de Ninhidrina
Identificación de aminoácidos

Los aminoácidos pueden ser determinados por medio de la reacción que ellos presentan cuando
se calientan con una solución alcohólica de Ninhidrina. La mayoría de los aminoácidos rinden
coloraciones púrpura o violáceos.

Procedimiento
Reactivos Tubo Estándar Tubo Problema
Estándar de Aminoácidos 6 gotas --
Muestra Problema -- 6 gotas
Solución Ninhidrina 3 gotas 3 gotas
Agite y caliente en baño de agua hirviente durante 1 o 2 minutos.

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 Reacción de verde de Bromocresol
Identificación de albúmina
La Albúmina puede ser determinada cualitativa y cuantitativamente mediante la reacción con el Verde
de Bromocresol La reacción provoca la formación de un complejo coloreado verde brillante en
presencia de un exceso de colorante a pH 3. Las globulinas no reaccionan con el Verde de
Bromocresol.
Procedimiento
Reactivos Tubo Estándar Tubo Problema
Estándar de Albúmina 6 gotas --
Muestra Problema -- 6 gotas
Verde de Bromocresol 10 gotas 10 gotas
Agite y deje los tubos en reposo durante 15 minutos.

OTRAS REACCIONES DE INTERÉS

Reacción de Benedit
Determinación de azucares reductores

La mayoría de los azucares simples tienen la propiedad de reducir los iones de cobre en una solución
desde cúprico hasta cuproso, verificándose la positividad de la reacción por la formación de un color
rojo ladrillo.

Procedimiento
Reactivos Tubo Estándar Tubo Problema
Estándar de mono o disacárido 6 gotas --
Muestra Problema -- 6 gotas
Reactivo de Benedit 3 gotas 3 gotas
Agite y caliente los tubos en baño de agua hirviente por 5 minutos.

Reacción de Bial
Identificación de pentosas

Las pentosas en presencia de ácido clorhídrico concentrado, orcinol y cloruro férrico forman
complejos coloreados de color verde.

Procedimiento
Reactivos Tubo Estándar Tubo Problema
Estándar de Pentosas 6 gotas --
Muestra Problema -- 6 gotas
Reactivo de Bial 10 gotas 10 gotas
Agitar y colocar los tubos en un baño de hirviendo durante 10 minutos.

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 Reacción de Adams Kiewics
Identificación de triptófano

El triptófano en presencia de un aldehído y de Ácido sulfúrico concentrado rinde un complejo coloreado

Violeta.

Procedimiento
Reactivos Tubo Estándar Tubo Problema
Estándar de Triptófano 6 gotas --
Muestra Problema -- 6 gotas
Formaldehído diluido 3 gotas 3 gotas
1 mL lentamente por las 1 mL lentamente por las
Ácido sulfúrico concentrado
paredes del tubo inclinado paredes del tubo
¡¡CUIDADO!!
45º inclinado 45º
No agite. Un anillo interfásico violeta indica la positividad de la reacción.

Reacción Xantoproteica
Identificación de triptófano y tirosina

Tanto la tirosina como el triptófano rinden compuestos coloreados (amarillo y narania) por nitración de
sus estructuras, al reaccionar con el ácido nítrico concentrado. Estos derivados nitrados intensifican su
coloración cuando se colocan en medio alcalinos.
Procedimiento
Reactivos Tubo Estándar Tubo Problema
Estándar de Triptófano o Tirosina 6 gotas --
Muestra Problema -- 6 gotas
Ácido Nítrico Concentrado 1 mL 1 mL
Agite y caliente los tubos de ensayo 2 minutos en agua hirviendo. Enfrié los tubos al chorro de agua
NaOH 5 mL 5 mL

Reacción de Tiogrupos
Identificación de cisteína

Las soluciones de cisteína en medio alcalino cuando se calientan sufren transformaciones que
producen precipitados de color gris o negro en presencia de acetato de plomo.
Procedimiento
Reactivos Tubo Estándar Tubo Problema
Estándar de Cisteína 6 gotas --
Muestra Problema -- 6 gotas
Hidróxido de Potasio (KOH) 1 mL 1 mL
Acetato de Plomo 3 gotas 3 gotas
Agitar y calentar por 5 minutos en baño de agua hirviente
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 INFORME FINAL
PRACTICA DE LABORATORIO No. 3
IDENTIFICACIÓN Y DIFERENCIACIÓN DE BIOMOLÉCULAS

Nombre________________________________________ Matrícula: __________________

Grupo: Día: Hora: Profesor: __________________________

 Clave de la muestra problema: ___ _______

1. Enumere en forma ordenada los experimentos que usted propone realizar a su muestra problema.
a) c) e)
b) d) f)

2. Para cada experimento propuesto complete el siguiente cuadro

Experimento o Reacción Utilidad de la prueba Resultados Interpretación

3. De acuerdo con los resultados de las reacciones generales realizadas a la muestra problema ¿cuál de
las siguientes biomoléculas crees se encontraba en tu muestra problema y en qué basa sus conclusiones?

a) Carbohidrato ___________ b) Proteína/AA ____________ c) Lípido _________

4. De acuerdo con las reacciones especificas realizadas a tu muestra problema, puedes decir ¿cuál es
específicamente la biomolécula identificada y en qué basa sus conclusiones?

5. Investiga que función tiene este compuesto en el organismo y si tiene alguna importancia clínica

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