LABORATORIO N° 1: determinación de pH

1. FUNDAMENTO TEORICO
EXPERIMENTO No. 1
SISTEMAS BUFFER Y OTROS MECANISMOS DE REGULACIÓN DEL pH CORPORAL
OBJETIVOS.
1. Comprobar que el pH de una solución cambia cuando varía la concentración de iones
hidrógeno.
2. Comprobar la acción amortiguadora de los sistemas buffer.
3. Comprobar una de las formas en que el sistema renal participa en mantener el
equilibrio ácido-base del organismo eliminando el exceso de H +.
4. Valorar la importancia de los sistemas buffer en el mantenimiento del equilibrio ácido
base del organismo.

INTRODUCCIÓN
La molécula de agua tiene capacidad limitada para ionizarse en ión hidrógeno (H +),
llamado también protón y en ión hidroxilo (OH-)
H2O      H+   +  OH-
Agua    Protón   Ión hidroxilo
Las concentraciones de protones y de iones hidroxilo, en agua pura, son de 10 - 7 M para
cada uno de ellos, como muestra la siguiente expresión:
[H+] = [OH-] = 10-7 M
Las concentraciones de ambos iones exponen una relación recíproca; cuando la [H +]
aumenta, la [OH-] disminuye, y viceversa. El producto de sus concentraciones es una
constante conocida como producto iónico del agua (Kw), cuyo valor es de 1 x l0 -14 M
Kw = [H+] x [OH-] = 1 x l0-14 M
Con el fin de facilitar los cálculos para determinar la concentración de [H +], así como su
interpretación, en 1909 el químico danés Sörensen definió el potencial de hidrógeno (pH)
como el logaritmo negativo de la concentración de los iones hidrógeno.
pH = -log[H+]
Posteriormente, en 1923, Johannes Brönsted y Thomas Lowry, propusieron en forma
independiente, los conceptos de ácido: sustancias que ceden protones en una solución
acuosa y base como aquella sustancia que puede recibir protones en solución acuosa. Las
disoluciones acuosas se clasifican en: acidas si presentan un pH menor que 7.0; básicas si
el pH es mayor que 7.0 y neutras sí el pH es igual a 7.0.
Por otro lado, no todos los ácidos o bases se disocian con la misma facilidad. Los que se
disocian por completo en una solución acuosa se consideran como ácidos o bases fuertes,
en tanto que a los que se disocian en forma parcial se les denomina ácidos o bases
débiles. Algunos ácidos o bases débiles tienen importancia biológica, ya que evitan
cambios bruscos de pH cuando se les agrega pequeñas cantidades de ácidos o bases. A
esta propiedad de ácidos o bases débiles y su sal, que permite mantener la disolución en
un intervalo de pH estrecho se le conoce como capacidad amortiguadora.
Los líquidos biológicos de interés en clínica (suero, plasma, orina, líquido cefalorraquídeo,
etc.) son soluciones que contienen algunas sustancias en estado casi completo de
ionización. El conocimiento de la concentración de esos iones y de la fisicoquímica que
describen sus interrelaciones, es fundamental para poder entender muchos problemas
fisiológicos y patológicos en el hombre.
El pH de los líquidos corporales depende de la concentración de iones H + y es mantenido
casi constante por medio de la operación de varios mecanismos fisiológicos. Cada persona
que trabaja en áreas relacionadas con la salud debe conocer las formas por las cuales es
mantenido el balance ácido – básico de los fluidos corporales, ya que una desviación de
éste conlleva a un desbalance que puede conducir a un estado patológico e incluso
producirá la muerte.
El ion hidrógeno o protón (H +) tiene gran importancia bioquímica, ya que altera las cargas
de las biomoléculas y por ende, su comportamiento fisicoquímico. La concentración de
este ión se representa por medio del pH. Dado que el estricto control del pH es vital, el
organismo lo mantiene constante en los líquidos intracelulares y extracelulares mediante
amortiguadores, como el buffer bicarbonato HCO 3 - /H2CO3 y el buffer fosfato
HPO4= /H2PO4 - .
El buffer bicarbonato se regula por ventilación pulmonar y a nivel renal y el buffer fosfato
exclusivamente a nivel renal, conservando el pH del líquido extracelular en 7.4. Cuando lo
anterior no se logra, se producen estados patológicos conocidos como desequilibrios
acido-base, de los que existen cuatro tipos fundamentales: 1) acidosis respiratoria; 2)
alcalosis respiratoria; 3) acidosis metabólica y 4) alcalosis metabólica. Cada uno de ellos
puede acompañarse de una respuesta compensatoria cuyo objetivo es mantener el pH en
los límites normales.
 SOLUCIONES BUFFER Ó SOLUCIONES TAMPÓN:
ACCIÓN DE UN SISTEMA BUFFER.

Son mezclas de un ácido débil y una sal de ese ácido, o de una base débil y su sal. Este
tipo de mezclas reaccionan tanto con ácidos como con bases, por lo que la adición de
ácidos o bases fuertes a dichas mezclas casi no produce variaciones en el valor de pH. Un
ejemplo de solución buffer es la solución acuosa de fosfato monoácido y fosfato diácido.
 Esta solución contiene gran cantidad de moléculas de ácido débil (H 2PO4-) y de su base
conjugada (HPO4=) que proviene de la segunda disociación del ácido fosfórico. Si se añaden
pequeñas cantidades de un ácido fuerte a esta solución buffer, su mecanismo de acción es
que los iones H+ provenientes del ácido reaccionan con la base conjugada del sistema
buffer, como se indica en la siguiente reacción:
H+ + HPO4=    H2PO4–
Por lo tanto, la mayoría de protones agregados al medio no permanecen como tales, sino
que forman el ácido débil (H2PO4 -) y el pH varía ligeramente. Si se agregan iones (OH -) al
sistema buffer, su mecanismo de acción es reaccionar con moléculas de fosfato diácido
para formar iones fosfato monoácido y agua, como se indica en la siguiente reacción
OH- + H2PO4-    HPO4= + H2O
El equilibrio estará desplazado a la derecha y en consecuencia la mayoría de iones
hidroxilo no se encuentran libres en la solución y el valor de pH casi no cambia. En
resumen, la adición de pequeñas cantidades de ácido fuerte o de base fuerte a una
solución buffer casi no ocasiona cambios en el valor del pH de la solución. Por el contrario,
las mismas adiciones hechas al agua producen una notable variación en el pH, de modo
que la adición de pequeñas cantidades de un ácido fuerte, por ejemplo a soluciones que
no son un buffer, produce alteraciones importantes en el valor de pH de dichas
soluciones.
Como tendrá la oportunidad de discutir posteriormente, la capacidad de una solución
buffer para reaccionar con ácidos o bases sin variar el pH es sin embargo, limitada.
2. PROCEDIMIENTO
PARTE EXPEIMENTAL:
A.   CAPACIDAD AMORTIGUADORA DE LAS SOLUCIONES BUFERS. VIDEO 1 y 2
a) Iniciaremos agregando 50 microlitros de HCl 1M a ambos vasos de precipitados:
Podemos ver que el vaso que contiene agua ha disminuido su pH en mayor medida que el
vaso que contiene buffer fosfato.
Anote el pH inicial de ambas soluciones, así como el pH obtenido después de agregar los
50 microlitros de HCl 1M.
Repetimos este procedimiento una vez más para comprobar lo observado.
PREGUNTAS:
Escriba la reacción que ocurre en el vaso de precipitado donde se  agregó  HCl 1M
b) A continuación agregamos 50 microlitros de NaOH 2M:
Podemos ver que el vaso que contiene agua ha aumentado su pH notablemente mientras
que el vaso que contiene buffer fosfato se ha mantenido alrededor del mismo valor de pH.
Anote el pH inicial de ambas soluciones, así como el pH obtenido después de agregar los
50 microlitros de NaOH 2M.
Repetimos este procedimiento una vez más para comprobar lo observado.
PREGUNTAS:
¿Cuál es la explicación bioquímica de los resultados obtenidos al agregar a los dos vasos
de precipitados o beaker una misma cantidad de NaOH 2M?
Escriba la reacción que ocurre en el vaso de precipitado donde se  agregó  NaOH 2M
c) Por último agregaremos una sal neutra: cloruro de sodio (NaCl)
Como esta sal no aporta ni protones ni oxidrilos no debería modificarse el pH en ninguna
de las dos soluciones.
Agregamos 50 microlitros de sal a cada vaso y observamos:
Podemos notar que en ambos casos el valor de pH se mantiene tal como estaba.
Anote el valor de pH inicial y final en cada solución.
Escriba sus conclusiones.
Hemos observado así la capacidad buffer de una mezcla de sales de ácidos polipróticos.
 B.    ACCIÓN AMORTIGUADORA EN LOS LÍQUIDOS CORPORALES
Los ácidos o las bases producto del catabolismo de carbohidratos, lípidos y aminoácidos
dan lugar a la producción de una gran cantidad de compuestos que potencialmente
podrían modificar el pH fisiológico. Sin embargo, existen sistemas amortiguadores que
evitan cambios bruscos del pH. Ejemplo de éstos es el sistema bicarbonato/ácido
carbónico, que mantiene el pH del líquido extracelular en valores próximos a 7.4.
La combustión completa de carbohidratos y lípidos genera bióxido de carbono y agua, los
cuales se combinan para producir ácido carbónico a nivel tisular. El ácido carbónico en
solución acuosa se disocia para formar su base conjugada, el bicarbonato, lo que genera
un sistema amortiguador, como se muestra en la siguiente reacción:
                                    Anhidrasa                         Reacción       
                                    carbónica                         espontánea 
     
     CO2 + H2O H2CO3       HCO3 - +   H+
  Bióxido de Carbono    agua            ácido carbónico           ión bicarbonato protón
                              pka 6.1
Si aumenta la concentración de protones en el medio por cualquier proceso químico, el
equilibrio se desplaza a la izquierda y se elimina el exceso de CO 2 producido. Por lo
contrario, si disminuye la concentración de protones del medio, el equilibrio se desplaza a
la derecha, para lo cual se utiliza CO2 del producido constantemente por el metabolismo.
Las proteínas, y en forma específica las enzimas, son sensibles a los cambios bruscos de
pH. Así, el pH sanguíneo debe conservarse en un intervalo entre 7.35 y 7.45 con el fin de
mantener la homeostasis.
En esta parte reproduciremos una de las formas en que el sistema renal participa en
mantener el equilibrio ácido – base del organismo, analizando el papel que juega la
solución Buffer Fosfato presente en el filtrado glomerular (pH 7.4), el cual acepta los iones
hidrógeno eliminados por el riñón durante el proceso de formación de orina (pH 6).
El fosfato monosustituido (H2PO4-) y el fosfato disustituido (HPO 4=) forman una solución
buffer; o sea, un par ácido débil – base conjugada que puede actuar como un
amortiguador de pH.
El riñón durante la formación de la orina elimina H+ los cuales reaccionan así:
H+  +  HPO4 =     H2PO4 –
En esta forma, al irse formando la orina irá variando la relación: HPO 4 = / H2PO4 –
Por este mecanismo el riñón elimina H + y reabsorbe HCO3 - hacia la sangre; por cada ion
H+ eliminado por las células tubulares hacia la luz del túbulo, un ion Na + es liberado del
Na2HPO4, el cual acompaña al ión HCO3- que también es devuelto a la sangre como se
explicó antes.

PARTE EXPERIMENTAL. VIDEO 3

1. Utilizando una pipeta serológica de 5.0 mL mida 5.0 mL, de una solución buffer fosfato
pH 7.4 y transfiéralos a un tubo de ensayo (Este buffer fosfato en esta práctica  representa
el buffer del filtrado glomerular).
2. Agregue al tubo 5 gotas de indicador azul de bromotimol, agitar.
3. Titule la solución del tubo agregando gota a gota y agitando suavemente ácido
clorhídrico (HCL) 0.1N, utilizando para ello una pipeta serológica de 5.0 mL hasta obtener
un color amarillo, esto ocurre aproximadamente a pH 6.0 (ya no seguir agregando). Anote
el volumen gastado (mL) de HCL  0.1N en la titulación.
(No contar gotas).
Los H+ que se agregan por medio del HCL 0.1N para cambiar el pH del buffer fosfato desde
7.4 hasta 6, representan a los H+ que el riñón agrega al filtrado glomerular para
eliminarlos en la orina intercambiándolos con Na +;recuperando, en esta forma base
(HCO3-).
 
PREGUNTAS:
1.  ¿Cuál es el papel que desempeña la solución buffer fosfato y la solución HCl 0.1N en
este experimento? _________________________________________
_______________________________________________
2. ¿Cómo son eliminados los iones H+ por las células renales a la luz del túbulo?
_______________________________________________________________
3. La especie del buffer fosfato que amortigua los H + que se eliminan en la orina es
________________________
4. Los H+ eliminados en la orina son intercambiados por el ión _____________ y la base
restaurada es ________________
 5. Calcule cuántos mEq de base (NaHCO 3) son restaurados a la sangre (pH 7.4) por la
excreción de 1 litro de orina (pH 6.0) haciendo uso de datos obtenidos en la titulación del
buffer fosfato con la solución de HC1 0.1N, para saber los  mEq de base (NaHCO3)
restaurados debe encontrar los mEq de HCl (H +)  con el volumen gastado en la titulación
utilizando la fórmula siguiente:

Y tomar en cuenta que en el experimento se utilizan 5mL de Buffer fosfato pH 7.4