Agentes Colorantes: Composición Química y Fundamentos

Objetivo general
-Reconocer el debido uso de los agentes colorantes así como su composición química y
fundamentos.
Objetivos específicos
-Investigar sobre los compuestos de los colorantes, las categorías en las que se encuentran y los
diferentes tipos de tinciones empleadas en los laboratorios.
Introducción

Desde hace varios años la microbiología se ha ido desarrollando meticulosamente de tal

manera que se pueda identificar con mayor facilidad que tipo de microorganismo está afectando a
un paciente. Esto ayuda a la detección de causantes de enfermedades o también a prevenir una
mayor afectación. El proceso de tinción en un laboratorio es un proceso primordial para la
identificación de agentes patógenos. En la microbiología es fundamental saber identificar
detalladamente que tipo de microorganismo se está observando en el microscopio, es por ello que
las tinciones histológicas son de suma importancia, así como saber sus compuestos y en qué
casos se utiliza cada una. En un análisis es muy difícil poder observar bacterias, hongos o
parásitos sin las tinciones debido a que son microorganismos incoloros, el uso de estos colorantes
se funcionan entre sí para poder estudiar sus tejidos y saber a qué genero pertenece. Según
menciona Corrales, et al. (2019) “Los colorantes son sustancias que tienen la capacidad de teñir
células, estructuras o tejidos; y de acuerdo con su origen, permiten hacer visibles los objetos
microscópicos y transparentes, conocer su forma y tamaño, así como sus estructuras internas y
externas.” A su misma vez, también existen diferentes técnicas de tinción dependiendo del tipo
de colorante ya sea este básico o ácido y esto a su vez para facilitar la identificación de
microorganismos. Dentro de los diferentes tipos de tinción se logra apreciar a simple vista si la
bacteria u hongo es Gram positiva o Gram negativa. A su misma vez, los diferentes tipos de
tinciones se utilizan dependiendo de qué tipo de microorganismo es. Tal y como lo indica
Corrales et al. (2019) “La tinción de Gram se considera básica en la valoración inicial de
muestras para análisis bacteriológico, mientras que tinciones como las de Wright son utilizadas
para el diagnóstico de enfermedades relacionadas con parásitos”.

Compuestos de los colorantes

La mayoría de los colorantes tienen normalmente dos compuestos, estos son el

cromógeno y el auxocromo. El cromógeno es el que da el color y según su naturaleza hay varios
tipos, por ejemplo: derivados del xanteno, derivados de iminas, derivados de antroquinona,
nitrosos, ozoicos, derivados de las talocianinas.

Por otra parte, el auxocromo es un compuesto que se encarga de teñir áreas específicas en
un microrganismo. Dentro de la clasificación por auxocromo se encuentran: básicos, ácidos,
colorantes mordientes, indiferentes o hidrofóbicos y neutros.
Cromógenos:

Un cromógeno es la parte o conjunto de átomos de una molécula responsable de su color.

También se pude definir como una sustancia que tiene muchos electrones capaces de absorber
energía o luz visible. Y excitarse para así emitir diversos colores dependiendo de las longitudes
de onda de la energía emitida por el cambio de nivel energético de los electrones, de estado
excitado a estado basal.

Cuando una molécula absorbe ciertas longitudes de onda de luz visible y transmite o
refleja otras, la molécula tiene un color. Un cromógeno es una región molecular donde la
diferencia de energía entre dos orbitales atómicos, cae dentro del rango del espectro visible. La
luz visible que incide en un cromógeno puede también ser absorbida excitando un electrón a
partir de su estado de reposo.

En las moléculas biológicas útiles para capturar o detectar energía lumínica, el cromógeno
es la semimolecula que causa un cambio en la conformación del conjunto de recibir luz.

Tipos de cromógenos:

Los cromógenos se presentan casi siempre en una de dos formas; Sistemas conjugados pi
o complejos metálicos.

En la primera forma, los niveles de energía que alcanzan los electrones son orbitales pi
generados a partir de series de enlaces simples y dobles alternados, como sucede en los sistemas
aromáticos. Entre los ejemplos más comunes podemos encontrar a los colorantes retinianos,
(usados en el ojo para detectar la luz), varios colorantes azoicos para tela, licopeno B-caroteno, y
antocianinas.

Los cromógenos de complejos metálicos surgen en la división de orbitales “d” al vincular

metales de transición con ligantes. Algunos ejemplos de estos cromógenos se encuentran en la
clorofila usada por los vegetales para la fotosíntesis, la hemoglobina la hemocianina y en metales
coloreados como la malaquita y amatista.

Una característica común en bioquímica son los cromógenos formados por cuatro anillos de
pirrol, que pueden ser de dos tipos:

• Pirroles en cadena abierta, no metálica; fitocromo, ficobilina y bilirrubina.

• Pirroles en anillo(porfirina), con ion metálico en el medio, hemoglobina, clorofila.

Según Pavia D et al. (2001) La primera ley de la fotoquímica (Grotthus e draper, 1818)
dice que solo la radiación absorbida puede promover alteraciones fotoquímicas. La absorción de
la radio ultravioleta es visible y es la que más a menudo promueve reacciones fotobiológicas la
que cual esta se realiza por modificaciones electrónicas en los átomos constituyentes de las
moléculas.

El estado básico y fundamental de una molécula alterado por la absorción de la energía de un

fotón, circunstancia en que el fotón se extingue, integrando su energía con la de molécula.

Cada molécula es apenas capaz de absorber energía en una franja de radiación más o menos
larga, pero siempre limitada que se llama espectro de absorción de la sustancia.

Auxocromo:

Un auxocromo es un grupo de átomos unidos por cromógenos que modifica la capacidad

de ese cromógeno para absorber la luz. Ellos mismos no logran producir el color; pero cuando
está presente junto con los cromógenos en un compuesto orgánico intensifica el color del
cromógeno. los ejemplos incluyen el grupo hidroxilo(-OH) el grupo amino (-NH2), el grupo
aldeino (-CHO) y el grupo metilmercaptano(-SCH3).

Un auxocromo es un grupo funcional de átomos con uno o Más pares de electrones

solitarios cuando se unen aun cromógeno, pueden aumentar la luz, como resultado, intensificar la
absorción. Una característica de estos auxocromos es la presencia de al menos un par solitario de
electrones que puede verse como una extensión del sistema conjugado por resonancia.

La presencia de un auxocromo en la molécula de cromógeno es esencial para hacer un

tinte. Sin embargo, si un auxocromo está presente en la posición meta del cromógeno, no afecta
el color. Un auxocromo se conoce como su compuesto que produce un cambio bathocromico
también conocido como desplazamiento al rojo porque aumenta longitud de onda de absorción
por que se acerca a la luz infrarroja. Las reglas de Woodward-fieser. Estiman el cambio en la
longitud de onda de absorción máxima para varios auxocromo unidos a un sistema conjugado en
una molécula orgánica.
 Un auxocromo ayuda a que un tinte se adhiera al objeto que se va a colorear. La
disociación electrolítica del grupo auxocromo ayuda en la unión y es por esta razón que una
sustancia básica toma un tinte acido. Muchos de estos grupos radicales, son ácidos y bases que
originan colorantes ácidos y básicos, y que fijan eficazmente el colorante, un ejemplo lo podemos
encontrar en el ion diazonio que es un cromógeno fuerte generado por una base.

Agentes colorantes: Tipos y composición química.

Los agentes colorantes están ampliamente clasificados en diferentes áreas según si son
naturales o artificiales, según la naturaleza de sus compuestos, color, que tipo de tejidos tiñe y en
que exámenes se utilizan.

Los colorantes naturales se extraen de plantas o animales y los artificiales se extraen de

minerales por medio de procesos en el laboratorio.

Básicos: Son colorantes catiónicos, la base que es amina y la parte acida es incolora. Según
indica (Megías M, 2020) “Tienen apetencia por sustancias ácidas del tejido como el ADN o
ciertos componentes de la matriz extracelular como los glicosaminoglicanos. La unión es por
atracción eléctrica. Así, ponen de manifiesto el núcleo y el ARN, sobre todo el ARNr presente en
los ribosomas…”. Ejemplo: Verde de metilo

Ácidos: están compuestos por sales con anión coloreado y la base incolora. Estos trabajan en
estructuras proteicas en el citoplasma y colágeno de la matriz extracelular. Ejemplo: Fucsina
acida, verde rápido, naranja G.

Colorantes mordientes: Estos utilizan sales metálicas y tiñe los núcleos de las células, ejemplo:
Lugol.

Hidrofóbicos: estos se disuelven en los lípidos y por ello los tiñen pero no se unen a elementos
de los tejidos, por ejemplo: colorante Sudán.

Neutro: este tipo de colorante tiñe partes básicas y acidas, por ejemplo: el eosinato de azul de
metileno.
 El proceso de tinción se puede dividir en dos fases que son la regresiva y la progresiva.
La tinción regresiva se refriere a la eliminación de tintura en una tinción cuando esta fue excesiva
y es un proceso lento, para ello se utiliza el alcohol. La tinción progresiva se da para obtener los
mejores resultados llevando un control con el tiempo.

Metacromasia

Durante la tinción se puede dar un fenómeno llamado metacromasia, esto ocurre cuando a
la hora de hacer la tinción, el tejido da un color diferente al color del colorante. Como menciona
(Solis, s.f.) “.La metacromasia es un fenómeno de viraje del color de un colorante célular debido
al contenido de la célula. El mecanismo básico de la metacromasia es la
presencia de polianiones en el tejido. Cuando estos tejidos se tiñen con una solución colorante
básica concentrada, como la azul de toluidina, las moléculas de la anilina están lo suficientemente
cerca como para formar aglomeraciones diméricas y poliméricas.” El cambio de color en las
tinciones permite poder estudiar e identificar diferentes tipos de tejidos, por ejemplo para ensayar
la presencia de glicosaminglicanos extraídos de cartílago y otros tejidos conectivos. También
estos diferentes colores permiten reconocer si se está ante un posible agente patógeno.

Tipos y técnicas de tinciones

Algunas de las principales técnicas de tinción empleadas en los laboratorios son las siguientes:

Tricrómico de Gomori:

Esta técnica se usa para teñir fibrina, tejido muscular y citoplasma y colorea en verde o rojo
dependiendo del tejido. Su fundamento se basa en que combina un colorante plasmático
(Cromotropo 2R) y un colorante de fibras conectivas (verde luz/azul de anilina) en una solución
Acido fosfotungstico y Acido acético glacial. El tratamiento previo de las secciones con
Solución de Bouin caliente intensifica la tinción. El ácido fosfotúngstico favorece la coloración
roja de musculo y citoplasmas. Las fibras de colágeno toman losiones de tungstato formando un
complejo al que se une el verde luz. El baño de ácido acético hace los colores más trasparentes
pero no altera el balance de color.

Tricrómica de Mallory:
 La tinción tricrómica de Mallory, también llamada tinción triple de Mallory, es una
tinción utilizada en histología para ayudar a revelar las diferentes macromoléculas que componen
la célula. Utiliza las tres manchas: azul de anilina , fucsina ácida , y naranja G . Como resultado,
esta técnica de tinción puede revelar colágeno , citoplasma ordinario y glóbulos rojos . Se utiliza
para examinar el colágeno del tejido conectivo. Para los tejidos que no son directamente ácidos o
básicos, puede ser difícil usar una sola tinción para revelar las estructuras de interés necesarias.
Una combinación de los tres tintes diferentes en cantidades precisas aplicadas en el orden
correcto revela los detalles de forma selectiva. Este es el resultado de algo más que interacciones
electrostáticas de la mancha con el tejido y la mancha no se elimina después de cada paso. En
conjunto, las manchas se complementan entre sí.

Tinción de Wright:

Esta técnica se utiliza principalmente en los frotis sanguíneos y es policromática, o que

significa que genera varios colores dependiendo de la estructura que absorbe el colorante. Gracias
a ella se puede detectar enfermedades como la leucemia, infecciones parasitarias o bacterianas.
Su fundamento se basa en que los colorantes utilizados crean una coloración violeta en los
núcleos de los leucocitos y en los gránulos neutrofílicos, mientras que los glóbulos rojos se
tornan rosados. (Gil, 2018) Explica que el azul B es fijado por estructuras acidas, citoplasma de
algunas células y proteínas nucleares, mientras que la eosina Y es fijada por la hemoglobina,
gránulos y otras estructuras.

Tinción de Ziehl-Neelsen:

Esta técnica de tinción se emplea principalmente con pacientes de tuberculosis. Es una

técnica rápida y fácil de realizar. Esta tinción permite diferenciar a las bacterias en dos grupos:
aquellos que son capaces de resistir la decoloración con alcohol-ácido y aquellos que no lo son.
Como lo indica (Briceño, 2021) esta técnica es un tipo de coloración diferencial, lo que implica el
uso de distintos colorantes con la finalidad de crear contraste entre las estructuras que se desean
observar, diferenciar y posteriormente identificar. Su fundamento se basa en que los ácidos
grasos presentes en la pared celular absorben los colorantes con facilidad. Para aplicar esta
técnica se utiliza Fenólico carbol fucsina y un colorante básico, (Briceño, 2021) además indica
que “La tinción con carbol fucsina es mejorada en presencia de calor, debido a que la cera se
derrite y las moléculas de colorante se mueven con mayor rapidez hacia el interior de la pared
celular.”

Tinción de Gram:

Es una de las más utilizadas en los laboratorios de microbiología, en ella se puede detectar
fácilmente bacterias Gram positivas y Gram negativas. Se emplea principalmente para identificar
agentes patógenos causantes de infecciones. Sus fundamentos se basan en el resultado final que
de la coloración. Si las bacterias se tiñen violetas, estas serán Gram negativas y si se tiñen rojas o
rosadas estas serán Gram negativas, todo esto depende de la estructura de las paredes celulares.
(López L, 2014) menciona que las Gram negativas poseen una pared celular construida de
peptidoglicano la cual es muy delgada y una membrana celular externa, por otra parte las Gram
positivas también poseen una pared celular de peptidoglicano pero es gruesa y no posee pared
celular externa. Es por ello que gracias a la composición química de la pared celular se puede dar
estas diferentes tinciones e identificaciones. En la tinción Gram se hace el uso de cristal violeta,
el cual es uno de los principales colorantes; como menciona Bolívar G (2018) “El cristal
violeta es un colorante orgánico, sintético y alcalino de triamino- trifenilmetano. Se encuentra
como un polvo con brillo metálico verde oscuro. Recibe varios nombres, entre los cuales se
puede mencionar cloruro de hexametil pararosanilina o violeta de metilo, violeta de anilina,
violeta de genciana, etc.” También, se hace uso del Lugol lo cual es un mordiente y se utiliza para
retener el colorante cristal violeta. Es una disolución de yodo molecular I 2 y yoduro potásico KI
en agua destilada. Como posee yodo también sirve como desinfectante y antiséptico. En la
tinción de Gram también se hace el uso de decolorante en la tinción regresiva como se menciona
anteriormente y para ello se utiliza el alcohol. Por último, el colorante de contraste que es la
safranina. (Gril, 2019) Expone que “la safranina es un colorante meriquinoide, llamado así por
poseer en su estructura química de 2 anillos bencenoides y de 2 anillos quinoides, siendo estos
últimos los que proporcionan el color rojo.” La safranina es una sustancia con carga positiva, por
ello se inclina hacia estructuras cargadas negativamente, por ello estas estructuras se tiñen de
color rojo como se menciona anteriormente.

Teoría de la coloración

Existen dos teorías que explican el procedimiento de la coloración:

Teoría Física: Las partículas de los colorantes penetran en los espacios intra e intercelulares en
los que se mantienen adheridas en razón de la cohesión molecular.

Teoría química: El colorante se une a la sustancia coloreable combinándose con ella

íntimamente debido a la presencia de agrupaciones moleculares ácidas o básicas en los
componentes celulares, formando sales insolubles. Una prueba de ello es el hecho de la casi
imposibilidad de separar completamente el colorante de los componentes en donde ejerció su
acción de tinción aún empleando sus líquidos solventes.

Fundamento general

  El fundamento de los agentes colorantes depende de la propiedad que poseen los tintes
para teñir los tejidos y fijarse, así como también los tejidos de absorber el tinte. Estos tejidos al
tener exposición con la luz reflejan color. (Mukamal, 2017) Expone que cuando la luz golpea un
objeto, este absorbe parte de esa luz y refleja el resto. La luz reflejada entra al ojo humano desde
la córnea, la parte más externa del ojo, hasta llegar al cristalino donde enfoca la luz en la retina.
La retina percibe color blanco cuando los cuerpos reflejan toda la radiación. Por otra parte,
cuando los cuerpos absorben toda la radiación, la retina lo percibe color negro. La percepción de
colores se da cuando ocurra una absorción parcial de la luz. Por esta razón, un colorante se define
como una sustancia que puesta en contacto con un soporte adecuado, se une a él y transmite
color.

Conclusión

La microbiología ha sido utilizada desde hace varias décadas y gracias a ella se ha podido
identificar y controlar enfermedades que producen microorganismos que a simple vista no son
visibles pero son capaces de afectar a la población mundial. Gracias a los agentes colorantes, que
son sustancias de origen químico y biológico, generalmente tintes y pigmentos, reactivos u otros
compuestos, empleado en la coloración de tejidos microscópicos para exámenes, estos exámenes
han podido ser examinados con mayor facilidad y asi poder obtener resultados más eficaces. Los
agentes colorantes de tener al menos un grupo cromoforo que le proporcione la propiedad de teñir
con el fin de para resaltar estructuras en tejidos biológicos que van a ser observados con la ayuda
de diferentes tipos de microscopios.
Anexos
Técnica Hematoxilina-Eosina Técnica Gram
Técnica de Gomori Técnica de Ziehl-Neelsen

Técnica de Mallory Técnica de Wright

Colorante básico (verde de metilo) Colorante ácido (naranja G)

Colorantes mordientes (lugol) Colorantes Hidrofobicos (colorante de Sudán)

 Safranina

Colorante neutro (azul de metileno) Cristal Violeta

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