Cuantificación en espectrometría: Ley de lambert y beer:

Lo que vamos a estar buscando es tratar de

hallar una relación que tenga que ver con la
señal del instrumental ya sea (absorción o
emisión atómica o molecular) es indistinto a
(fines prácticos en el teórico se habla de
absorción en el eje de las ordenadas y esta
absorbancia o emitancia va a estar en
función de la variable concentración)

Se construye con esa relación una curva de

calibración que puede tomar distintas
formas dependiendo del comportamiento del analito en solución y a partir construir esas
curvas tratar de hallar un rango lineal que nos permita poder hacer interferencia y
determinar concentraciones de analitos (de determinada sustancia) en una muestra
incógnita. (Curva de calibración o recta de ajuste)

Nosotros en cualquier instrumental siempre vamos a estar trabajando con fuentes que
sean continuas o lineales dependiendo el caso)

En un espectro continuo tenemos disponibles todas las longitudes de onda que están
presentes en ese espectro por ejemplo tenemos graficada la región del espectro
electromagnetico correspondiente al visible (longitudes de onda que van del color rojo al
azul, que puede percibir nuestro detector biológico) además se vio que en función a los
procesos de absorción y de emisión de las distintas especies obteníamos un espectro de
absorción (pensando en la radiación que sale de la fuente , llega a la muestra y es
absorbida por los analitos presentes en la muestra , entonces las líneas negras estarán
representando aquellas longitudes de onda en las cuales hay analitos presentes que
absorben en esta región. El espectro complementario que es cuando apagamos la fuente
de excitación (la que va a estar irradiando la muestra, que pasa con esos saltos
electrónicos cuando pasan de ese nivel electrónico excitado a uno de menor energía o uno
basal, esos saltos fotónicos los podríamos observar en un espectro de emisión porque se
está emitiendo radiación fotónica) Si combinábamos el espectro de absorción y emisión
obteníamos el espectro continuo .
Cuando hablamos de absorción tenemos en una celda una cubeta cualquiera, un recipiente que
contiene una solución que va a ser futuramente de los analitos en solución

Donde solamente está el solvente (todo lo que contiene el extracto menos muestra) este sería el
blanco. El esquema muestra que tenemos en una celda una cubeta cualquiera, un recipiente que
contiene (por ejemplo si un solvente “x” no analitos que absorben radiación) entonces cuando
incide la potencia de la fuente, Ps (source) cuando incide la radiación sobre el solvente, si hay solo
solvente y este es transparente a esa radiación es esperable que como es transparente la radiación
siga su viaje sin tener ningún tipo de interacción (no hay analitos presentes que interactúen con este
tipo de radiación) atraviesa todo el espacio de la cubeta, sale de esta sigue su recorrido y llegaría al
detector (como todos los recipientes que van a contener a la muestras que quiero determinar tienen
que ser transparentes) , en la región en la que estoy trabajando claramente el material de la cubeta
no absorbe ni refleja radiación (en la región en la que está operativa la fuente, puede ser que un
mismo material en distintas regiones del espectro electromagnético se comporte de distinta
manera) entonces tanto el solvente como el material con el que está fabricado la cubeta no
absorben radiación entonces la potencia que sale de la fuente y toma contacto con la cubeta es
igual a la potencia que sale de esa cubeta y llega al detector

Ahora si en el interior de esa cubeta sacamos el solvente solo y agregamos una solución con una
concentración “C” de un analito cualquiera sea un átomo o molecula lo que ocurre es que de la
radiación que sale de la fuente (Ps), cuando esa radiación alcance la cubeta (alcanzara el seno de de
la solución que tiene una concentración “x” , (el analito lo puedo conocer o no) una vez que recorre
todo ese recorrido de la cubeta (recorrido óptico) es decir “b”, esa radiación sale y llega a nuestro
detector (pensando por ejemplo en un tubo fotomultiplicador en espectrometría) y ese detector va
a observar la potencia pero no la que salió de la fuente si no la que
resulta de que la potencia de la fuente atraviesa una solución que
tiene la capacidad de absorber parte de esa potencia de la fuente y
saldrá una potencia P que es menor que la potencia de la fuente , eso
quiere decir que lo que esta presente en la cubeta esta absorviendo
parte de esa radiación y esa absorción se refleja en una disminución
de la potencia de salida en relación a la potencia de entrada , es decir
P<Ps

Cualquier instrumental va a conocer cuál es la potencia de la fuente , y

va a medir cual es la potencia que llega, si esa potencia es igual a la de
la fuente claramente lo que está presente en la cubeta no absorbió
ningún tipo de radiación , ahora si la potencia que sale de la cubeta es
menor que la potencia de la fuente parte de la energía fue retenida en
el camino (absorbida por los analitos) que van a estar presentes en esa
solución o en esa muestra incógnita (eso es lo que
Es importante que el aQW, es decir, una solución del analito, en caso que el extracto sea liquida.
Esto sería por ejemplo filtrar la muestra que tomas del rio para que no queden interferentes que
puedan absorber y esto no sea debido al analito.

Retomando el grafico teníamos una relación de potencia de la fuente o potencia de entrada y

potencia de salida, vamos a definir entonces como…

Transmitancia a ese cociente (cuanto

transmite en términos de potencia esta cubeta
con ese recorrido óptico, “b” esa transmitancia
también la podemos expresar como % si a este
cociente de potencias lo x por 100

Los casos que pueden ocurrir como extremo: si

la Psalida = Pentrada, significa que ese cociente de dos números iguales, nos da 1 … si toda la
potencia de la fuente es transmitida y llega al detector la transmitancia es máxima (toma un valor
de 1, se transmite la totalidad de esa potencia)

Ahora si esa potencia comienza a disminuir y esa disminución tiene que ver con un aumento de
concentración de analitos que tienen la capacidad de absorber radiación quiere decir que el
termino P comenzara a disminuir (porque parte de esa energía está siendo absorbida por los
analitos), la potencia de la fuente siempre va a permanecer constante, entonces la transmitancia
va a disminuir (se transmite menos potencia en esa solución)

Si la potencia de salida (P) disminuye hasta valores muy bajos (no sale nada, por ejemplo, un medio
completamente opaco que absorba toda la radiación) quiere decir que la transmitancia es 0, se
absorbe toda esa potencia, si a esa transmitancia 0, la x 100 obtenemos 0% de transmitancia

Ahora si el 1 lo x 100 hay 100% de % de transmitancia de esa solución

Cuanto mas concentrado este en función del analito que va a absorber menor será la potencia de
radiación que va a salir, ósea Ps es contante y P se va modificando, si P de salida es chiquita,
entonces le cociente se vuelve chico, y la transmitancia es menor.

Entonces si hablamos en términos de transmitancia trabajaremos en rangos que van de 0 a 1 y en

rango de 0 a 100 si trabajamos como % de transmitancia

Algunos equipos operan y nos brindan espectros no de absorción y emisión si no espectros de

transmitancia (como nos pasa en espectrometría en el infrarrojo en una técnica molecular)
Pero para la mayoría de los casos no vamos a trabajar con transmitancia si no que con el concepto
de Absorbancia. LA absorbancia es función de la
transmitancia, y está definida como –log de la
transmitancia. ¿Por que? Porque es lo que usaron Lambert
y Beer para dar la siguiente ecuación.

Es una relación a partir de aplicar el logaritmo del valor de transmitancia. La transmitancia era un
cociente de potencia.

LEY DE LAMBERT Y BEER:

La ley de Lambert asocia la absorción en función al recorrido óptico, y la de Beer la ajusta en función
a la cantidad o concentración de analito. La ley de Lambert y Beer es la combinación de ambas leyes.

La absorbancia está en relación al recorrido óptico por el que yo estoy haciendo incidir la radiación
(la distancia que hay entre que la radiación ingresa a la muestra y sale)

Por otro lado la ley de beer nos dice que esa absorbancia va a estar en función de la concentración,
es decir (que concentración de analitos hay en la solución que coloco adentro de una cubeta y que
luego irradio con radiación dentro de cualquiera de los rangos o regiones del espectro
electromagnético que vayamos a analizar).

Entonces si combinamos la ley de beer y de amber hallamos una expresión que nos dice que la
absortividad está en función del recorrido óptico, de la concentración de analito y de una
constante (épsilon o a)

• Que es la absortividad molar, es una propiedad propia de cada sustancia. Cual es la

capacidad que tienen de absorber radiación en función l/mol cm es una constante

Cada sustancia tiene su propia absortividad molar.

• Solo varían los otros términos. El camino óptico no depende del analito, si no de la distancia
del recipiente en el que está contenida la muestra en el instrumentas, es decir la distancia
que tiene que atravesar la radiación en el receptáculo en el instrumental.

Para poder tener una relación lineal (porque el termino ebc) no deja de ser una recta. Entre
absorbancia (que es la concentración que yo voy a determinar en el instrumental) y la concentración
de analitos que es lo que me va a estar interesando medir en cada muestra.

Si yo dejo como variable recorrido óptico , siempre la absortividad va a estar en función de 2

variables , entonces no voy a poder especificar cuál es la concentración de analitos en la muestra ,
si yo no fijo cual es el recorrido óptico (una estrategia es utilizar siempre cubetas que tengan un
rango de corrido óptico b (cte) que van a estar determinados de acuerdo a las capacidades del
instrumental, de la fabricación o la elaboración de cada fabricante (de ese modo b seria cte ) y la
absorbancia pasaría a ser función de la concentración con epsiloon y recorrido óptico como
constante

ENTONCES LA ABSORBANCIA VA A ESTAR EN FUNCION DE LA CONCENTRACION. SI LA

CONCENTRACION ES MUY ALTA, SE PIERDE LA LINEALIDAD ENTRE ABSORBANCIA Y
CONCENTRACION Y NO PUEDO CUANTIFICAR.

La ley de lamber y beer como es una expresión lineal nos permite hacer inferencias en cuanto a la
concentración de analito en una muestra siempre y cuando trabajamos en zonas lineales
(comportamiento sea una recta)

CONSIDERACIONES o limitaciones

• Es una ley limite porque va a estar operando únicamente cuando la concentracion de

analitos en una muestra es baja < 0,01 M (que para análisis ambiental de un contaminante
en una muestra acuosa es elevado) (generalmente operamos con conc mg/l mic/l).

Esta restricción es porque a medida que aumenta la concentración se empieza a alejar de esta
zona lineal, se empieza a perder el comportamiento lineal, entonces deja de ser una recta la relación
absorbancia concentración y comienza a transformarse en una curva. No podemos aplicar la ley

• Otra es que la ley esta formulada para radiación que sean monocromática (no una región
completa de longitudes de onda , si no regiones muy acotadas, es decir una longitud de
onda en particular (ej 520 nm en un rango muy acotado dependiendo por ejemplo de las
capacidades del instrumental , de la rendija de entrada y salida, del sistema dispersivo) y
vamos a estar trabajando con radiaciones monocromáticas porque lo único que queremos
ver es que pasa con la diferencia de potencia que sale de la muestra en relación a la que
viene de la fuente, pero únicamente en la longitud de onda en la que hay interacción con
el analito es decir en la (long de onda que van a absorber radiación los analitos en la
muestra), si yo no considero esa monocromática el detector vera toda la radiación que
llegue a su fotocátodo y ánodo (si no acoto a que solo ingrese la radiación que va a poder
ser absorbida , nunca se va hallar el cociente de la potencia de salida /entrada
Para correlaciónar la absorbancia y la concentración vamos a estar construyendo siempre rectas ,
que lo que buscan es aplicar el método de minimos cuadrados para obtener el mejor ajuste lineal
a la dispersión de datos (imaginemos que hacemos una serie de determinaciones, de
concentraciones de un analito en particular y para determinar la concentración medimos la
absorbancia y vamos hallando distintos puntos , cada uno de estos puntos le corresponde una
absorbancia y una concentración , cada punto tiene un par x e y .

Mi objetivo es construir la recta y que esta se ajuste lo mejor posible a esa distribución de datos,
es decir que sea un ajuste lineal lo mas bondadoso o certero posible

El concepto de mínimos cuadrados hace referencia a que esa recta que ajustamos va a estar
buscando compensar las diferencias de los valores observados vs el valor teorico que está en la
recta. Cada uno de esos errores va a estar asociado a que yo estoy haciendo un ajuste teórico a
algo que empírico (que mido a campo y en el laboratorio) entonces la idea es que la sumatoria de
los errores tienda a 0 (que las diferencias sean lo menor posible y se vayan compensando punto a
punto)

Por ahí tenemos ajustes lineales que escapan del comportamiento de una recta (parabola).
Tendriamos que estar ajustando una función de este tipo (tipo parabola) pero como la ley de amber
y beert es una recta lo que necesitamos hacer es hallar una región donde le comportamiento sea
lineal y que trate de englobar la mayor cantidad de datos posibles (voy a estar probando una suerte
de rectas y buscar cual de todas esas rectas es la que mejor se ajusta a esos datos)

También me puede pasar que tengo valores anómalos, muchas veces puedo descartarlo y construir
una recta sin considerar ese dato, esto siempre dependiendo de la situación

En el último lo que se observa es un valor de

concentración super alta y valores de
concentración muy pequeñas, no hay una
distancia equidistante entre los distintos puntos
de concentración. Voy a tener que construir una
curva de calibración para hallar una recta (zona
lineal) que trabaje con concentraciones que
excluyan las mas altas y me permita ver que pasa
en esos puntos que están todos pegados en el eje
de las y
Como determino la concentración:

Voy a necesitar construir una recta con distintos puntos de concentración conocidos viendo que
valor de absorbancia le corresponde a cada caso.

Pasos para realizar la curva de calibración: (a seguir para cualquier instancia de cuantificación en
espectrometría)

Se elabora o se obtiene la curva de calibración, esto vale tanto para técnicas absortibas como
técnicas emisivas .

Por ejemplo

En absorción atómica las fuentes eran lineales y detectaba la presencia de 1 analito por vez,
tendré que pensar en construir la curva de calibración para ese analito, analizar todas las muestras
que puedan tener presencia de tal analito por ejemplo cobre (hago la curva de calibración de cobre)
determino todas las muestras de cobre, apago el instrumental, cambio la lampara de cobre coloco
la de sodio., y después repito el procedimiento para resolver las situaciones en las que quiera
determinar presencia de sodio

1) Se preparan las distintas diluciones de un Estándar (de concentraciones crecientes

conocidas) es decir una seria de concentraciones conocidas del analito que quiero
determinar (estándar ST) PARA PODER SABER a esa concentración que absorbancia le
corresponde
2) Se prepara el blanco de reacción, que es el solvente y todo lo que se utilizo a excepción de
la muestra. No tiene analito interés, si me interesa determinar cromo, el blanco tendrá 0 de
concentración de cromo, lo que si va a tener serán todos los solventes y
pretratamientos que fui agregando para obtener el extracto de la muestra.

Si agregue un buffer, en el extracto tendré los mismos mm…

Si agregue un reactivo para hacer una derivatizacion, al blanco también le agrego los mismos
mm de reactivo que le agregue a la muestra para producir reacción, si bien no va a ocurrir
reacción tendré todo lo que envuelve al analito pero no es analito.

Se realiza:

• Para saber cuál es el comportamiento de ese medio frente a esa radiación y que no me
ocurra que el blanco de reacción (el solvente ) puede llegar absorber radiación en mayor
medida que los analitos, y eso me opaque la señal del analito propiamente dicho y que en
realidad nunca mida concentración de analito , si no que este midiendo siempre cuanto
absorbe el blanco
 3) Se realiza la lectura de absorbancia de los mismos en el instrumental a utilizar y se “resta el
valor de absorbancia del blanco al obtenido en las diluciones de los estándares”

Una vez que obtuvimos los estándares de concentración conocida y el blanco que tiene
concentración de analitos 0, realizamos la lectura del blanco y de los estándares en el instrumental
obtenemos una tabla donde tenemos por ejemplo el estándar S (en concentración)
y la absorbancia,

Entonces para el blanco que tiene [],

• Vamos al instrumental colocamos un volumen de blanco en la cubeta,

medimos la absorbancia y registramos el dato
• Luego agregamos el estándar 1, colocamos un volumen en esa cubeta llevamos al
instrumental y registramos la absorbancia, luego tomamos una alícuota del estándar 2 y
repetimos (construyendo una tabla de doble entrada)

4) Se representa en una gráfica de absorbancia vs concentración todos los valores de los

estándares.

Esa tabla la graficamos en un eje cartesiano x-y , el valor del blanco va a ser cuando la concentración
sea 0 , cuando empezamos a medir los otros estándares esperamos que tengamos concentraciones
crecientes y datos crecientes de absorbancia (porque yo los construí pensando en que la
concentración aumenta (y la absorbancia también debería)

Al final llegamos a un punto donde aumenta la concentración llegamos a una meseta aumenta la
concentración pero la absorbancia se empieza a achatar es decir encontramos una asíntota en ese
valor de absorbancia, si una vez que obtuvimos esa grafica realizamos una
recta o una curva (dependiendo los datos) en este caso una curva

5) Se prepara una dilución de la muestra incógnita y se lee la

absorbancia: pasamos a determinar tomando un volumen de esa
muestra incógnita, lo llevamos a una cubeta y esa cubeta la
llevamos al espectrómetro, medimos la absorbancia, nos dará un
valor de absorbancia

6) Se interpola el valor de absorbancia obtenido de la muestra incógnita y se determina su

concentración, el valor de absorbancia obtenido en (5) será el que utilizamos para ingresar
al gráfico y a través de ese grafico cortar la grafica descender y ver a que concentración le
corresponde ese valor de absorbancia que medimos en el instrumental (entonces ahí
obtuvimos el valor de concentración)

Ósea se interpola ese valor de absorbancia al valor de concentración de los analitos

Hay una serie de estándares, que si yo sé que estoy trabajando dentro de la región del visible por
ejemplo en los estándares observare un color y que a medida que aumente el color yo espero que
aumente la concentración porque esos estándares los prepare sabiendo que la concentración la
quería de forma creciente. Construyo
estándares y blanco tomo un volumen del
blanco lo llevo al instrumental determino su
absorbancia la registro y con los estándares
también.

Analizo el comportamiento de esa curva de

calibración y como yo se que estoy
trabajando dentro del rango o de la región lineal porque estamos trabajando con la ecuación de
lamber y beer.

Con el valor más alejado lo que ocurre es que si yo realizo un ajuste a los demás datos obtendré que
en ese punto se empieza a curvar el comportamiento si tuviera un dato más seguiría curvo , ese
dato lo puedo descartar y ajustar una ecuación y= mx+n con el primer conjunto de datos para poder
hallar una expresión que sea lineal y que corresponda a una expresión de

Absorvancia=
AbortividadxRecorrido
ópticoxAbsorción.

Matematicamente hallo
una recta

A(c ) relación con la ley de LLB , la ecuación de la recta busca explicar esa ley conde A= abc

Contruida la curva debemos hallar la expresión de la recta dentro de la zona lineal y una vez hecho
esto con una planilla de Excel y a partir de ahí calcular una ecuación de mínimos cuadrados,
automáticamente con Excel y obtener R2 (bondad de ajuste) y hallamos la expresión de la recta que
mejor se ajusta a la zona lineal de los datos que yo tenía expresado
Una vez que obtengo eso, con el dato de concentración de una muestra voy al instrumental y
obtengo un valor de absorbancia y con este valor gráficamente ingreso por las ordenadas extrapolo
y desciendo (analizando la concentración
de analito en esa muestra) si lo realizo
por esta via es un método grafico

Lo más correcto sería partir de ese valor

de absorbancia, introducirlo en esa
expresión de la recta

Y: absorbancia

X: concentración

Entonces despejo x en función de “y”

ósea concentración en función de la
absorbancia, despejo y hallo
numéricamente la concentración de ese analito en particular en la muestra

Esta método de obtener una serie de estándares de concentración de un analito en particular de

forma creciente es aplicable a absorción atómica, absorción molecular, emisión molecular

Pero hemos visto que la emisión atómica por como funciona es la que nos permite analizar muchos
analitos en simultaneo. Entonces cuando quiero cuantificar la cantidad de analitos que hay de cada
uno de esos que voy a determinar en simultaneo

Ejemplo en emisión atómica tengo esos elementos, como me permite a partir de una muestra ir al
instrumental y obtener la señal de Mg, Cr, Cu y K en simultaneo una experiencia para abaratar
costos, tiempos y volúmenes empleados es construir estándares múltiples

Estándares múltiples: consiste en un estándar que va a tener una concentración que tendrá solvente
y todo lo que yo le agregue a la muestra para procesar y obtener esa muestra analítica que ira al
instrumental y va a tener una concentración 1 o concentración mas baja de cada una de esas
sustancias

Especifica solo dos elementos pero analiza todos en simultaneo

Tendrá una C1 de Cu, C1 de Cr que no necesariamente tienen que ser iguales si no que va a depender
del rango de concentraciones en la que yo sospecho que este el analito en la muestra

Si yo sospecho que el Mg está en concentraciones bajas, puedo empezar a construir esa curva en
concentraciones que partan de 0,000 ppm a 0,5 ppm
Pero si yo por ejemplo sospecho que en el Cr las concentraciones irán más altas, me conviene partir
de una solución que puede ser la misma concentración inicial pero que vaya aumentando en un
rango que llegue por ejemplo hasta 1,0 ppm de Cobre, mientras yo se que en el Cromo sé que estará
en concentraciones mas bajas entonces puedo ir construyendo distintas partes de la curva
alcanzando un rango de por ejemplo 0,5 ppm de Cromo

No necesariamente van a llegar hasta

el mismo rango y van a tener los
mismos puntos intermedios, si no que
depende del rango en el que quiero
determinar y sospeche que este el
analito

Lo que va a coincidir es que voy a construir un solo blanco que tendrá todo menos Mg, Cr, Cu, K

Para cada uno de los estándares debo tener el recaudo de diseñar las concentraciones a utilizar y
agrego un volumen determinado de Cr a un matraz, al mismo le agrego otro volumen determinado
cobre, etc

Son concentraciones crecientes

Una vez que construí todos tomo una alícuota del estándar 1 , voy al equipo y
obtengo la señal en simultaneo de Mg, Cu, Cr , K

Entonces a medida que obtenga los datos voy a ir construyendo una tablita para
cada analito

Por ejemplo, Cu (señal y concentración). Con cada una de esas tablas construyo la
curva de calibración correspondiente a cada analito, no mezclo curvas de calibración

Después construyo cada una de las curvas, analizo la zona de linealidad y encuentro la expresión de
y en función de la concentración. Las rectas de la zona lineal de cada una de las graficas

Después con la muestra tomo una alícuota, la llevo al instrumental y obtengo la señal de Cu, Cr, Mg
y K. Me voy a su respectiva recta o curva de calibración interpolo y obtengo:

La CONCENTRACION de cada uno de esos analitos con su respectiva muestra e informo ese resultado

La técnica es la misma, pero en EMISION ATOMICA tengo la posibilidad de medir muchos analitos
en simultaneo construyo estándares múltiples (que son soluciones que tienen todos los analitos que
vaya a detectar en esa determinación en simultaneo)
ANALITO: proteínas

MATRIZ: biológica (tejido animal, vegetal etc.)

Yo no detecto la proteína directamente si no que detecto la reacción del azul de coomassie con la
proteína a través del cambio de color, es decir que estoy realizando una DERIVATIZACION (mido
indirectamente la concentración de proteína al medir el complejo que se forma entre la reacción
entre proteína y reactivo)

La radiación es monocromática, deberé seleccionar la correspondiente a 595 nm

Que la técnica es absortiba, y además sé que es una técnica molecular porque los analitos son
PROTEINAS y reaccionaran con un reactivo que es otra molécula y formaran otra molécula

(generalmente se suele utilizar algún patrón conocido por ejemplo la albumina)

El blanco de reacción no tiene albumina ni ningún tipo de proteína, solo tendrá el medio acido, el
azul de coomasie y todo aquello que le adicione a la muestra

Los estándares son SIMPLES porque hay 1 SOLO ANALITO en el blanco que no tiene proteína
esperamos un color claro y a medida que aumente la concentración de proteína aumenta el color
azul
Tabla: los datos obtenidos para distintos ug de proteínas conocidos. Yo lo prepare para que tenga
una concentración de 9,36 y así sucesivamente todos los estándares
n: es la ordenada de origen, ósea el valor del blanco (teóricamente)

También podemos hallar otra recta que será igual a esa recta, pero la extrapolo al origen es decir a
cada valor que obtuve inicialmente, le resto el blanco ese punto se traslada al origen. La pendiente
es la misma

Puedo determinar la concentración de analitos que será x con cualquiera de las dos. El único recaudo
es que si yo decido trabajar con la recta verde al valor de absorbancia que obtenga del instrumental
para la muestra le tendré que restar el blanco , porque si no es lo mismo que este trabajando con la
recta inicial y estaré teniendo un valor concentración erróneo de concentración

Ósea a los valores de absorbancia de la tabla le resto el blanco

La ecuación de la grafica la podemos hallar a partir de obtener 2 puntos y usar la ordenada de origen
de ese blanco
Esos dos puntos cualquiera deben estar dentro de la zona lineal.

Me interesa la concentración así que la despejo

blanco o n
Entonces a partir de cualquier dato que obtenga de concentración siempre que trabaje con la misma
recta, automáticamente determino la concentración de esos analitos en esa muestra en particular.

Una vez que obtuvimos la recta tengo preparada la muestra, tomo una alícuota (5), cuando leo la
absorbancia la misma tiene que caer en la zona donde se conocen los valores absorbancia
concentración. Si me caen valores que se encuentren mas a la derecha del gráfico, como cualquier
principio estadístico de inferencia no podemos inferir fuera del rango donde hice ese ajuste lineal
de datos. Si me queda fuera de la línea lo que tengo que hacer es a esa muestra diluirla. La diluyo
con cualquier factor que me asegure que caiga dentro de esa zona

Por ejemplo, si a la muestra original la diluyo ½ ósea estoy diluyendo a la mitad (2 mm de muestra+
2 mm de solvente). Ahora esa muestra no es la original, es una dilución. Mido la absorbancia y es
probable que me caiga al medio de la curva entonces tendré una concentración de la dilución, para
extrapolar al valor de la muestra a esa concentración la tengo que MULTIPLICAR por la INVERSA DEL
FACTOR DE DILUCION:

Si el factor de dilución era ½ la MULTIPLICO X 2 y me da el valor original de la muestra, si en caso

contrario, llegue muy cerca del valor del 0 y no estoy seguro de distinguir entre el valor señal y
blanco (origen), tendré que concentrar y llevarlo a hacia valores más altos de concentración tendré
una CONCENTRACION , entonces para referirlo al valor de concentración de la muestra original lo
voy a tener que DIVIDIR por el factor de dilución.

Si yo lo concentre 2 VECES, ese valor de concentración de la solución mas concentrada lo divido y

obtengo el valor original de la muestra.

Debo saber cuantas veces este concentrado o diluido pero saber cuantas veces esta concentrado o
diluido para utilizarlo en el calculo final de la concentración original en la muestra
Ese 26,364 es el valor original (esa es una réplica)

Muchas veces lo que hacemos es partir de una alícuota de una muestra analítica, obtenemos
replicas elementales
MA – M1, M2, M3 (para cada una de ellas obtenemos un valor de absorbancia A1,A2,A3) una vez
que obtuvimos esto obtenemos la C de la replica 1, de la replica 2 y de la 3 . Es de esperar que esas
concentraciones sean similares

Lo que uno normalmente se expresa la concentración promedio de esas replicas + (el desvió
estándar) expresamos el resultado como 26,364 más el desvió asociado

Con una sola determinación no podemos sacar el desvió porque tenemos 1 solo n

Muchas veces lo que se suele hacer es usar varias replicas entonces, para este caso, por ejemplo,
obtenemos que con ese R2, hallamos esa expresión de la recta