INSTITUTO TECNOLOGICO DE ORIZABA

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MATERIA:

PROFESOR: JOSE ULISES ROA ROSAS

PRESENTAN:
ESTUDIANTE No. DE CONTROL

GRUPO:
SALÓN:
HORARIO:

PRÁCTICA 2.
NOMBRE DE LA PRÁCTICA:

FECHA DE REALIZACIÓN:

FECHA DE ENTREGA:
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PRÁCTICA No. 2

“CURVAS DE CALIBRACIÓN POR ESPECTROFOTOMETRÍA”

OBJETIVO.

Obtener la curva de calibración Absorbancia-Fracción molar para sistemas binarios.

COMPETENCIAS:
1. Obtener la curva de calibración Índice Absorbancia-Fracción molar para
sistemas binarios.
2. Manejar el espectrofotómetro
3. Calcular la fracción molar de cada muestra.

FUNDAMENTOS.
 ¿QUÉ ES UNA CURVA DE CALIBRACIÓN?

Una curva de calibración es la representación gráfica de una señal que se mide en

función de la concentración de un analito. La calibración incluye la selección de un
modelo para estimar los parámetros que permitan determinar la linealidad de esa
curva y en consecuencia, la capacidad de un método analítico para obtener
resultados que sean directamente proporcionales a la concentración de un
compuesto en una muestra, dentro de un determinado intervalo de trabajo. En el
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procedimiento se compara una propiedad del analito con la de estándares de

concentración conocida del mismo analito (o de algún otro con propiedades muy
similares a éste). Para realizar la comparación se requiere utilizar métodos y
equipos apropiados para la resolución del problema de acuerdo al analito que se
desee determinar.
La etapa de calibración analítica se realiza mediante un modelo de línea recta que
consiste en encontrar la recta de calibrado que mejor ajuste a una serie de
“𝑛” puntos experimentales, donde cada punto se encuentra definido por una variable
“𝑥” (variable independiente, generalmente concentración del analito de interés) y
una variable “𝑦” (variable dependiente, generalmente respuesta instrumental). La
recta de calibrado se encuentra definida por una ordenada al origen (𝑏) y una
pendiente (𝑚), mediante la ecuación 𝑦 = 𝑚𝑥 + 𝑏.

 ¿QUÉ ES LA ESPECTROFOTOMETRIA?
La espectrofotometría UV-visible es una técnica analítica que permite determinar la
concentración de un compuesto en solución. Se basa en que las moléculas
absorben las radiaciones electromagnéticas y a su vez que la cantidad de luz
absorbida depende de forma lineal de la concentración. Para hacer este tipo de
medidas se emplea un espectrofotómetro, en el que se puede seleccionar la longitud
de onda de la luz que pasa por una solución y medir la cantidad de luz absorbida
por la misma.
En la espectrofotometría se aprovecha la absorción de radiación electromagnética
en la zona del ultravioleta y visible del espectro. La muestra absorbe parte de la
radiación incidente en este espectro y promueve la transición del analito hacia un
estado excitado, transmitiendo un haz de menor energía radiante. En esta técnica
se mide la cantidad de luz absorbida como función de la longitud de onda utilizada.
La absorción de las radiaciones ultravioletas, visibles e infrarrojas depende de la
estructura de las moléculas, y es característica de cada sustancia química.
La espectrofotometría con luz ultravioleta visible utiliza haces de radiación del
espectro electromagnético, en el rango UV de 180 a 380 nm, y en el de la luz visible
de 380 a 780 nm, por lo que es de gran utilidad para caracterizar los materiales en
la región ultravioleta y visible del espectro.
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 TIPOS DE ESPECTROFOTOMETRÍA:
Espectrofotometría de absorción: En estos casos se mide la Absorbancia (A) del
analito, esto es la luz absorbida por el analito, y esta magnitud se relaciona con la
concentración (C).
A - c (la absorbancia es directamente proporcional a la concentración)
Espectrofotometría de emisión: En este caso se mide la luz emitida por un analito
previamente excitado, la señal emitida se relaciona con la concentración de la
especie que emite luz cuando vuelve desde un estado excitado (estado de mayor
energía al que llegó absorbiendo energía) a su estado basal (estado de menor
energía posible tal como se encuentra naturalmente).
Señal emisión - C (la emisión es directamente proporcional a la
concentración)
Definición de absorbancia:
Cuando un haz de luz monocromática, es decir de una determinada longitud de
onda, atraviesa una solución que contiene una especie absorbente, la intensidad (o
la potencia) de la radiación disminuye como consecuencia de la absorción de
energía por parte de las especies absorbentes presentes en la solución.

Se define TRANSMITANCIA de una solución a la fracción de luz que deja pasar

dicha solución:
𝑇 = 𝑃/𝑃0
Se define la ABSORBANCIA de la solución a partir de la transmitancia de la solución
como:
𝐴 = −𝑙𝑜𝑔 𝑇
 ¿QUÉ ES EL ESPECTRO ELECTROMAGNÉTICO?
Una fuente de luz, por ejemplo, el sol y las lámparas eléctricas, emiten un amplio
espectro de radiaciones electromagnéticas, es decir que emiten luz de diferentes
longitudes de onda: Espectro electromagnético:
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 LEY DE LAMBERT-BEER.
Cuando un haz de luz monocromática (de determinada longitud de onda) atraviesa
una solución, la ABSORBANCIA es directamente proporcional a la distancia
recorrida por la luz atravesando la solución absorbente y a la concentración del
analito en la solución. La distancia recorrida por la luz atravesando la solución se
denomina camino óptico y se mide generalmente en cm.
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A: absorbancia, adimensional.
ε: coeficiente de extinción molar ó absortividad molar, se define como la unidad de
absorbancia por unidad de concentración y por unidad de longitud de la trayectoria
de luz; es una constante definida que depende de la solución y la longitud de onda,
en general su unidad es la inversa de la molaridad por la inversa de cm, es decir (M
x cm)-1 ó L/mol x cm.
b:es el camino óptico, en general se mide en cm.
c: es la concentración del analito expresada en molaridad (M).
La ley de Lambert Beer es una ley límite, es decir que sólo se cumple en
determinadas condiciones: luz monocromática y soluciones diluidas.

Funciones de los Espectrofotómetros de Laboratorio

Los espectrofotómetros de laboratorio son equipos funcionales que son utilizados
para diferentes industrias debido a que cuentan con las siguientes funciones:
 Brindan información sobre la naturaleza de una sustancia en una muestra.
 Pueden detectar la cantidad de una sustancia de nuestro interés
comprendida en una muestra.
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TIPOS DE ESPECTROFOTÓMETROS:
Los espectrofotómetros de laboratorio miden la intensidad de la luz absorbida en
una sustancia después de pasar por una solución muestra. Por ello, de acuerdo con
el rango de la longitud de onda que son capaces de medir, se clasifican en:
Espectrofotómetros de Laboratorio UV-Vis
Son equipos basados en el proceso de absorción de la
radiación ultravioleta visible. Los espectrofotómetros
ultravioleta-visible pueden detectar radiación con longitud
de onda entre los 160 y 1100 nm (puede variar el rango
según el equipo).

Espectrofotómetros de Laboratorio Infrarrojos

Los espectrofotómetros de laboratorio infrarrojos son
equipos basados en la absorción de radiación de
longitudes de onda entre 800 y 2700nm. Su proceso
de absorción se debe a la presencia de sobretonos y
bandas de combinación. El uso de los
espectrofotómetros de laboratorio infrarrojos se
restringe a muestras sólidas y líquidas para análisis
medioambiental, farmacéutico, polímeros y alimentos.

Espectrofotómetros de Laboratorio de Absorción Atómica

Determinan la concentración de metales y otros
elementos en soluciones. Los espectrofotómetros de
absorción atómica se emplean para el análisis de aguas,
suelos, bioquímica, farmacéutica, petroquímica, etc.

Espectrofotómetros de Laboratorio de Plasma

Acoplados a Masas
Analizan todos los elementos de la tabla periódica.
Son ideales para analizar metales que se
encuentran en concentraciones de partes por billón.
Los espectrofotómetros de plasma acoplados a
masas se utilizan para análisis del medio ambiente,
química, electrónica, biomedicina, etc.
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INTRODUCCIÓN.
Cuando un haz de energía radiante monocromática incide sobre una capa
homogénea de una sustancia, parte de la energía es absorbida, otra parte es
transmitida y una pequeña parte reflejada, por lo que, ignorando las pérdidas
debidas a reflexiones y disipación, la fracción de la radiación absorbida es una
función de la concentración de la sustancia en la trayectoria de la luz y del espesor
de la muestra. La ley que rige la concentración y la cantidad de luz o radiación
absorbida es la Ley de Beer o Ley de Lambert – Beer.

LEY DE BEER.- Establece que la intensidad de un rayo de luz monocromática

decrece de manera exponencial al aumentar la concentración de una
disolución a través de la cual pasa.

Para la Ley de Beer son importantes los conceptos de transmitancia y

absorbancia.

TRANSMITANCIA (T). - Es la relación de las intensidades de la radiación no

absorbida, con relación a la muestra testigo, y de la radiación incidente.

I = Poder de la radiación no absorbida.

Io = Poder de la radiación incidente. I

ABSORBANCIA (A).- Es el logaritmo decimal de la recíproca de la transmitancia.

El porcentaje de Transmitancia es 100T; el porcentaje de Absorción es 100(1-T)

Al pasar un haz de fotones por un sistema de una especie absorbente, el

grado de absorción con respecto a la distancia atravesada es directamente
proporcional al poder del haz de fotones, la reducción de la intensidad (-dl), puede
enunciarse matemáticamente como:
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𝑘 = Constante de proporcionalidad característica de la especie absorbente y de la

energía de fotones.

𝑥 = Distancia en el medio absorbente o grosor de la capa del medio absorbente.

Reordenando y separando variables, el enunciado matemático de que la

fracción del poder de radiación absorbida es proporcional al espesor atravesado
queda:

Estipulando que Io es el poder de la radiación al inicio de la capa de

sustancia absorbente, es decir a una distancia cero, x = 0, y que I representa el
poder radiante de la radiación transmitida que emerge del medio absorbente a x =
b.

Io I

0 b
Fig. 3.1.- Intensidad del haz de fotones que pasa a través de una capa de
solución.
La ecuación puede integrarse con respecto al total del trayecto de la
radiación, quedando:

Obteniendo:

Beer también relacionó la intensidad de la luz transmitida con la

concentración de las soluciones, para ello determinó que, al aumentar la
concentración del absorbente se produce el mismo efecto que un aumento
proporcional en la longitud del trayecto de absorción de la radiación. Así la constante
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de proporcionalidad k, es a su vez, proporcional a la concentración de la solución

absorbente, esto es:

usando logaritmos de base 10 en vez de naturales queda:

donde a incorpora el factor de conversión de base diez, es decir, 2.303

Si la longitud del trayecto en la muestra se expresa en centímetros y la

concentración en gramos de absorbente por litro de solución, la constante a,
llamada absorbencia relativa específica o coeficiente de absorción, tiene por
unidades litro/ gr. Cm

Si se desea especificar C en términos de concentraciones molares,

manteniendo b en centímetros, entonces la ecuación anterior se escribe:

donde , en unidades de lt / mol cm, se llama absorbencia molar o coeficiente molar

de absorción.

Para comprobar lo anterior se puede utilizar un espectrofotómetro. Las

escalas de lectura y de medición de los espectrofotómetros están calibradas para
leer Absorbencias y Transmitancias.

Una gráfica de la TRANSMITANCIA en función de la concentración será

una curva como lo muestra la Fig.3.2

Una gráfica de la ABSORBANCIA en función de la concentración será

una línea recta que pase por el origen, como lo muestra la Fig. 3.3.

Fig. 3.2.- Gráfica Transmitancia – Fig. 3.3.- Gráfica Absorbancia –

Concentración Concentración
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La Fig.3.4 muestra la comparación de las escalas de Absorbancia y

Transmitancia.

Fig. 3.4.- Comparación de las escalas de ABSORBANCIA Y

TRANSMITANCIA.

SEGURIDAD EN EL LABORATORIO.
Los reactivos utilizados son solventes altamente inflamables por lo que se debe
tener cuidado al manejarlos.
MATERIAL Y EQUIPO REACTIVOS

1 Espectrofotómetro UV Génesis 50 ml. Metanol

2 Foto-celdas 50 ml. Agua destilada
24 Frasquitos con tapón. 50 ml. Acetona.
2 Soportes. 50 ml. Cloroformo.
4 Buretas
2 Pinzas dobles para bureta.
4 Vasos de p.p. de 100 ml.
Etiquetas.

PROCEDIMIENTO.

1. CONECTE EL ESPECTROFOTÓMETRO DE LA FIG.3.5.

2. ENCENDERLO MEDIA HORA ANTES DE UTILIZARLO.
3. DIRIGIRSE A TEST.
4. POSECIONARSE EN: A - %T-C AVANZADA
5. DESPLAZAR FLECHAS HACIA ARRIBA O HACIA ABAJO. (ENTER)
6. MODO DE MEDICIÓN FLECHAS HACIA ARRIBA O HACIA ABAJO. (ENTER).
7. ABSORBANCIA FLECHAS HACIA ARRIBA O HACIA ABAJO. (ENTER).
8. LONGITUD DE ONDA (ENTER).
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9. TECLEAR NÚMERO DE LONGITUD DE ONDA (ENTER).

10. NÚMERO DE MUESTRAS, TECLEAR EL NÚMERO DE MUESTRAS (ENTER).
11. CORRER ANÁLISIS PRESIONANDO LA FLECHA HACIA ARRIBA.
12. SISTEMA METANOL – AGUA: 260 NM.
13. SISTEMA CLOROFORMO – ACETONA: 320 NM.
14. DETERMINE Y ANOTE LA ABSORBANCIA PARA CADA UNA EN LA TABLA
DE DATOS EXPERIMENTALES.

TABLA DE DATOS EXPERIMENTALES. SISTEMA AGUA – METANOL.

VH2O VCH3-OH
MUESTR Ml Ml ABSORBANCIA FRACC. MOLAR X
A
1 5 0 (0𝑚𝑙)(. 79)
𝑀𝐴𝑙𝑐𝑜ℎ𝑜𝑙 = =0
32
0.016
(5𝑚𝑙)(. 997)
𝑀𝐴𝑔𝑢𝑎 = = .2769
18
0
𝑋𝐴𝑙𝑐𝑜ℎ𝑜𝑙 = =0
0 + .2769
2 4.7 0.3 0.004 (0.3𝑚𝑙)(. 79)
𝑀𝐴𝑙𝑐𝑜ℎ𝑜𝑙 = = .0074
32
(4.7 𝑚𝑙)(. 997)
𝑀𝐴𝑔𝑢𝑎 = = .2603
18
. 0074
𝑋𝐴𝑙𝑐𝑜ℎ𝑜𝑙 = = .02766
. 0074 + .2603
3 4.5 0.5 0.000 (0.5𝑚𝑙)(. 79)
𝑀𝐴𝑙𝑐𝑜ℎ𝑜𝑙 = = .0172
32
(4.5𝑚𝑙)(. 997)
𝑀𝐴𝑔𝑢𝑎 = = .2492
18
. 0172
𝑋𝐴𝑙𝑐𝑜ℎ𝑜𝑙 = = .06483
. 0172 + .2492
4 4.0 1.0 0.003 (1𝑚𝑙)(. 79)
𝑀𝐴𝑙𝑐𝑜ℎ𝑜𝑙 = = .0246
32
(4𝑚𝑙)(. 997)
𝑀𝐴𝑔𝑢𝑎 = = .2215
18
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. 0246
𝑋𝐴𝑙𝑐𝑜ℎ𝑜𝑙 = = .10025
. 0246 + .2215
5 3.5 1.5 0.002 (1.5𝑚𝑙)(. 79)
𝑀𝐴𝑙𝑐𝑜ℎ𝑜𝑙 = = .0370
32
(3.5𝑚𝑙)(. 997)
𝑀𝐴𝑔𝑢𝑎 = = .1938
18
. 0370
𝑋𝐴𝑙𝑐𝑜ℎ𝑜𝑙 = = .16038
. 0370 + .1938
6 3.0 2.0 0.003 (2𝑚𝑙)(. 79)
𝑀𝐴𝑙𝑐𝑜ℎ𝑜𝑙 = = .04975
32
(3𝑚𝑙)(. 997)
𝑀𝐴𝑔𝑢𝑎 = = .1661
18
. 04975
𝑋𝐴𝑙𝑐𝑜ℎ𝑜𝑙 = = .2290
. 04975 + .1661
7 2.5 2.5 0.002 (2.5𝑚𝑙)(. 79)
𝑀𝐴𝑙𝑐𝑜ℎ𝑜𝑙 = = .0617
32
(2.5𝑚𝑙)(. 997)
𝑀𝐴𝑔𝑢𝑎 = = .1384
18
. 0617
𝑋𝐴𝑙𝑐𝑜ℎ𝑜𝑙 = = .30829
. 0617 + .1384
8 2.0 3.0 0.006 (3.0 𝑚𝑙)(0.79)
𝑀𝐴𝑙𝑐𝑜ℎ𝑜𝑙 = = 0.0740
32

(2 𝑚𝑙)(0.997)
𝑀𝐴𝑔𝑢𝑎 = = 0.1107
18

0.0740
𝑋𝐴𝑙𝑐𝑜ℎ𝑜𝑙 = = 0.40068
0.0740 + 0.1107
9 1.5 3.5 0.005 (3.5 𝑚𝑙)(0.79)
𝑀𝐴𝑙𝑐𝑜ℎ𝑜𝑙 = = 0.0864
32

(1.5 𝑚𝑙)(0.997)
𝑀𝐴𝑔𝑢𝑎 = = 0.08308
18

0.0864
𝑋𝐴𝑙𝑐𝑜ℎ𝑜𝑙 = = 0.50980
0.0864 + 0.08308
10 1.0 4.0 0.007 (4 𝑚𝑙)(0.79)
𝑀𝐴𝑙𝑐𝑜ℎ𝑜𝑙 = = 0.0987
32
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(1 𝑚𝑙)(0.997)
𝑀𝐴𝑔𝑢𝑎 = = 0.0553
18

0.0987
𝑋𝐴𝑙𝑐𝑜ℎ𝑜𝑙 = = 0.6406
0.0987 + 0.0553
11 0.5 4.5 0.008 (4.5 𝑚𝑙)(0.79)
𝑀𝐴𝑙𝑐𝑜ℎ𝑜𝑙 = = 0.111
32

(0.5 𝑚𝑙)(0.997)
𝑀𝐴𝑔𝑢𝑎 = = 0.02769
18

0.111
𝑋𝐴𝑙𝑐𝑜ℎ𝑜𝑙 = = 0.8004
0.111 + 0.02769
12 0 5.0 0.011 (5 𝑚𝑙)(0.79)
𝑀𝐴𝑙𝑐𝑜ℎ𝑜𝑙 = = 0.1234
32

(0 𝑚𝑙)(0.997)
𝑀𝐴𝑔𝑢𝑎 = =0
18

0.1234
𝑋𝐴𝑙𝑐𝑜ℎ𝑜𝑙 = =1
0.1234 + 0

Sistema agua-metanol
1.2
1
1
0.8004
Fracción Molar

0.8
0.6406
0.6 0.5098
0.40068
0.4 0.2766 0.30829
0.229
0.16038
0.2 0.10025
0.06483
0.016
0 0.004 0 0.003 0.002 0.003 0.002 0.006 0.005 0.007 0.008 0.011
0
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
Absorbancia

Absorbancia X
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TABLA DE DATOS EXPERIMENTALES. SISTEMA CLOROFORMO –

ACETONA.

V VACETON
CLOROF. A
MUEST ABSORBANC FRACC. MOLAR X
RA Ml ml IA

1 5 0 0.008 (5 𝑚𝑙)(1.471)
𝑀𝐶𝑙𝑜𝑟𝑜𝑓𝑜𝑟𝑚𝑜 = = 0.0618
119

(0 𝑚𝑙)(0.7857)
𝑀𝐴𝑐𝑒𝑡𝑜𝑛𝑎 = =0
58

0
𝑋𝐴𝑐𝑒𝑡𝑜𝑛𝑎 = =𝟎
0 + 0.0618
2 4.7 0.3 1.010 (4.7 𝑚𝑙)(1.471)
𝑀𝐶𝑙𝑜𝑟𝑜𝑓𝑜𝑟𝑚𝑜 = = 0.0580
119

(0.3 𝑚𝑙)(0.7857)
𝑀𝐴𝑐𝑒𝑡𝑜𝑛𝑎 = = 0.004
58

0.004
𝑋𝐴𝑐𝑒𝑡𝑜𝑛𝑎 = =. 𝟎𝟔𝟒𝟓𝟐
0.004 + 0.0580
3 4.5 0.5 2.010 (4.5 𝑚𝑙)(1.471)
𝑀𝐶𝑙𝑜𝑟𝑜𝑓𝑜𝑟𝑚𝑜 = = 0.05562
119

(0.5 𝑚𝑙)(0.7857)
𝑀𝐴𝑐𝑒𝑡𝑜𝑛𝑎 = = 0.0094
58
0.2492
𝑋𝐴𝑙𝑐𝑜ℎ𝑜𝑙 = 0.2492 + 0.0172 = 𝟎.93544

4 4.0 1.0 3.085 (4.0 𝑚𝑙)(1.471)

𝑀𝐶𝑙𝑜𝑟𝑜𝑓𝑜𝑟𝑚𝑜 = = 0.04944
119

(1 𝑚𝑙)(0.7857)
𝑀𝐴𝑐𝑒𝑡𝑜𝑛𝑎 = = 0.0135
58

0.0135
𝑋𝐴𝑐𝑒𝑡𝑜𝑛𝑎 = =. 𝟐𝟏𝟒𝟔𝟑
0.0135 + 0.0494
5 3.5 1.5 3.966 (3.5 𝑚𝑙)(0.7857)
𝑀𝐶𝑙𝑜𝑟𝑜𝑓𝑜𝑟𝑚𝑜 = = 0.0432
119
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(1.5 𝑚𝑙)(0.7857)
𝑀𝐴𝑐𝑒𝑡𝑜𝑛𝑎 = = 0.0203
58

0.0203
𝑋𝐴𝑐𝑒𝑡𝑜𝑛𝑎 = =. 𝟑𝟏𝟗𝟔𝟗
0.0203 + 0.0432
6 3.0 2.0 3.343 (3 𝑚𝑙)(1.471)
𝑀𝐶𝑙𝑜𝑟𝑜𝑓𝑜𝑟𝑚𝑜 = = 0.03708
119

(2𝑚𝑙)(0.7857)
𝑀𝐴𝑐𝑒𝑡𝑜𝑛𝑎 = = 0.0270
58

0.0270
𝑋𝐴𝑐𝑒𝑡𝑜𝑛𝑎 = = 𝟎𝟒𝟐𝟏𝟑𝟓
0.0270 + 0.03708

7 2.5 2.5 3.204 (2.5 𝑚𝑙)(1.471)

𝑀𝐶𝑙𝑜𝑟𝑜𝑓𝑜𝑟𝑚𝑜 = = 0.0309
119

(2.5 𝑚𝑙)(0.7857)
𝑀𝐴𝑐𝑒𝑡𝑜𝑛𝑎 = = 0.0338
58

0.0338
𝑋𝐴𝑐𝑒𝑡𝑜𝑛𝑎 = = 𝟎. 𝟓𝟐𝟐𝟒𝟏
0.0338 + 0.0309
8 2.0 3.0 3.185 (2.0 𝑚𝑙)(1.471)
𝑀𝐶𝑙𝑜𝑟𝑜𝑓𝑜𝑟𝑚𝑜 = = 0.02472
119

(3.0 𝑚𝑙)(0.7857)
𝑀𝐴𝑐𝑒𝑡𝑜𝑛𝑎 = = 0.04063
58

0.04063
𝑋𝐴𝑐𝑒𝑡𝑜𝑛𝑎 = =. 𝟔𝟐𝟏𝟕𝟑
0.04063 + 0.02472
9 1.5 3.5 3.209 (1.5𝑚𝑙)(1.471)
𝑀𝐶𝑙𝑜𝑟𝑜𝑓𝑜𝑟𝑚𝑜 = = 0.0185
119

(3.5 𝑚𝑙)(0.7857)
𝑀𝐴𝑐𝑒𝑡𝑜𝑛𝑎 = = 0.04741
58

0.04741
𝑋𝐴𝑐𝑒𝑡𝑜𝑛𝑎 = =. 𝟕𝟏𝟗𝟑𝟏
0.04741 + 0.0185
10 1.0 4.0 3.222 (1 𝑚𝑙)(1.471)
𝑀𝐶𝑙𝑜𝑟𝑜𝑓𝑜𝑟𝑚𝑜 = = 0.0123
119

(4 𝑚𝑙)(0.7857)
𝑀𝐴𝑐𝑒𝑡𝑜𝑛𝑎 = = 0.054186
58
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0.054186
𝑋𝐴𝑐𝑒𝑡𝑜𝑛𝑎 = = 𝟎. 𝟖𝟏𝟓𝟎𝟎
0.054186 + 0.0123
11 0.5 4.5 3.227 (0.5)(1.471)
𝑀𝐶𝑙𝑜𝑟𝑜𝑓𝑜𝑟𝑚𝑜 = = 0.00618
119

(4.5 𝑚𝑙)(0.7857)
𝑀𝐴𝑐𝑒𝑡𝑜𝑛𝑎 = = 0.06095
58

0.06095
𝑋𝐴𝑐𝑒𝑡𝑜𝑛𝑎 = =. 𝟗𝟎𝟕𝟗𝟒
0.06095 + 0.00618
12 0 5.0 3.232 (0 𝑚𝑙)(1.471)
𝑀𝐶𝑙𝑜𝑟𝑜𝑓𝑜𝑟𝑚𝑜 = =0
119

(5 𝑚𝑙)(0.7857)
𝑀𝐴𝑐𝑒𝑡𝑜𝑛𝑎 = =0.06773
58

0.06773
𝑋𝐴𝑐𝑒𝑡𝑜𝑛𝑎 = =𝟏
0.06773 + 0

Sistema cloroformo-acetona
4.5
3.966
4
3.343 3.222 3.227 3.232
3.5 3.085 3.204 3.185 3.209

3
Fracción molar

2.5
2.01
2
1.5
1.01 0.93544 1
0.71931 0.815 0.90794
1 0.52241 0.62173
0.42135
0.5 0.21463 0.31969
0.008
0 0.06452
0
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
Absorbancia

Absorbancia X
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CÁLCULOS Y GRÁFICAS:

1. Para el sistema agua-metanol use la fracción molar de la práctica anterior y para

el de cloroformo – acetona calcule la fracción molar con respecto a la acetona:

Moles de acetona
Xacetona =

Moles de acetona + Moles de cloroformo

2. Construya una curva de calibración para cada sistema, colocando la

Absorbancia en el eje Y y la Fracción molar de cada muestra en el eje X.
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OBSERVACIONES.
A través de este video logramos comprender mejor que es un espectrofotómetro y
la ley de Lambert-Beer, además de comprender como interpretar una curva de
calibración. Por consiguiente, se muestran algunos puntos clave del video.
 El espectrofotómetro es un instrumento que
mide la absorción de radiación
electromagnética siguiendo la ley de Beer 𝐴 =
𝜀 ∙ 𝑏 ∙ 𝑐, en donde A es la absorbancia y C se
es la concentración de la especie absorbente
los parámetros épsilon y b dependen del
coeficiente de absorción y de la longitud de
celda por la que pasa las de luz, la absorbancia
se medirá en la mayor parte de los casos a la
longitud de onda de absorción máxima de la
especie o del complejo a medir para obtener la concentración de una disolución
problema se deberá realizar previamente una curva de calibrado, utilizando
varios patrones de concentración conocida.

 Para cada patrón de

concentración conocida se mide
el valor de absorbancia dado y
se representan los resultados en
una recta, antes de la primera
medida será necesario realizar
un blanco con los reactivos
utilizados que sirva de valor de
referencia asignándole el valor
cero de absorbancia en la recta.

 La concentración de cada patrón medido se

representa en el eje x y el valor de absorbancia
obtenido se representa en el eje Y, la pendiente
de la recta es igual a épsilon por b.

 La curva de calibrado es una recta cuyo

coeficiente de regresión lineal debe ser lo más
próximo a la unidad posible esta recta representa
la relación matemática entre el valor de la señal
espectrofotométrica y la concentración cuanto
mayor sea la concentración del analito mayor
será su absorbancia.
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Para medir una muestra problema debemos añadir los reactivos necesarios que
generen el complejo coloreado a la misma concentración y cantidad que se añadió
para los patrones y medir su absorbancia a través de la curva de calibrado
conociendo el valor de absorbancia podemos calcular el valor de concentración del
analito en nuestra muestra.
CUESTIONARIO
1. ¿Qué es espectrofotometría y en que se basa?
La espectrofotometría es una técnica analítica utilizada para medir cuánta luz
absorbe una sustancia química, midiendo la intensidad de la luz cuando un haz
luminoso pasa a través de la solución muestra, con base en la ley de Beer-Lambert.
2. ¿Qué es un espectrofotómetro y mencione los principales
componentes de un espectrofotómetro?
Este es un instrumento que tiene la capacidad de proyectar un haz de luz
monocromática a través de una muestra y medir la cantidad de luz que es absorbida
o transmitida por la muestra y se compone de una fuente luminosa, sistema
monocromador, celdas o cubetas, muestra y sistema lector.
3. ¿Cuál es la diferencia de transmitancia y absorbancia?
La transmitancia es la cantidad de energía que atraviesa un cuerpo en determinada
cantidad de tiempo y la absorbancia es cuando un haz de luz incide sobre un cuerpo
traslucido, una parte de esta luz es absorbida por el cuerpo y el haz de luz restante
atraviesa dicho cuerpo.
4. Defina que es una curva de calibración
Una curva de calibración es la representación gráfica de una señal que se mide en
función de la concentración de un analito. La calibración incluye la selección de un
modelo para estimar los parámetros que permitan determinar la linealidad de esa
curva. y, en consecuencia, la capacidad de un método analítico para obtener
resultados que sean directamente proporcionales a la concentración de un
compuesto en una muestra, dentro de un determinado intervalo de trabajo.
5. ¿Qué establece la ley de Lambert-Beer?
La ley establece que hay una relación entre la absorción de la luz por una sustancia
y la concentración de esta, así como también con la longitud del cuerpo que la luz
atraviesa.
𝑨= 𝜺∙𝒃∙𝒄
A: absorbancia, adimensional.
ε: coeficiente de extinción molar ó absortividad molar.
b:es el camino óptico, en general se mide en cm.
c: es la concentración del analito expresada en molaridad (M).
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NOTA: Hacer las anotaciones y agregar fotos de las observaciones pertinentes.

IDENTIFICACIÓN Y TRATAMIENTO DE RESIDUOS GENERADOS.
Los reactivos utilizados son solventes altamente inflamables, por lo que se debe
tener cuidado al manejarlos.
Sustancias Metanol (CH3OH). Los residuos de metanol deben recogerse en
contenedores seguros y precintables, los residuos de metanol no deben mezclarse
junto con otros residuos. En grandes volúmenes puede ser apto para una
redestilación. Los recipientes vacíos pueden contener residuos peligrosos, los
envases vacíos deben enjuagarse cuidadosamente con grandes cantidades de
agua limpia. El agua de lavado debe eliminarse como residuo de metanol.
Sustancia Cloroformo (CHCl₃). En pequeñas cantidades puede dejarse evaporar en
una campana extractora. En caso de grandes cantidades, debe mezclarse con
combustible, como queroseno, e incinerarse en equipo especializado para evitar la
generación de fosgeno.
Sustancia acetona (C3H6O). Elimínense el producto y su recipiente como residuos
peligrosos. Eliminar el contenido/el recipiente de conformidad con la normativa local,
regional, nacional o internacional. No tirar los residuos por el desagüe. Es un residuo
peligroso; solamente pueden usarse envases que han sido aprobado (p.ej.
conforme a ADR).

FIG. 3.5. ESPECTROFOTÓMETRO GÉNESIS.

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CONCLUSIONES:
 Karla Osorno Mateos 18010653.
La espectrofotometría es un término con el cual estamos familiarizados desde
los primeros semestres de la carrera, ya que este término es usado para
identificar compuestos por su espectro de absorción y conocer la concentración
de un material o sustancia; en pocas palabras en una mezcla se puede saber
cuál es la concentración de cada uno de los componentes, y así se puede saber
cómo se debe de manejar o tratar para los diferentes procesos; esto último nos
permite conocer la concentración de compuestos, seguir el curso de reacciones
químicas y enzimáticas así como determinar enzima y proteínas incluso ácidos
en la mezcla o compuesto.
Si bien es cierto, las curvas de calibración son una herramienta de suma
importancia cuando hablamos de espectrofotometría, al igual que la ley de
Lambert-Beer.
• Trujillo Alvarado Arantzazu 18010684.
La espectrofotometría es un método analítico indirecto porque se basa en la
medición de la absorbancia o transmitancia de las radiaciones; es de gran
utilidad en la actualidad para la identificación de un analito en una muestra
problema.
Una curva de calibración es la representación gráfica de una señal que se mide
en función de la concentración de un analito. La calibración incluye la selección
de un modelo para estimar los parámetros que permitan determinar la linealidad
de esa curva. y, en consecuencia, la capacidad de un método analítico para
obtener resultados que sean directamente proporcionales a la concentración de
un compuesto en una muestra, dentro de un determinado intervalo de trabajo.
• Rodríguez Ortega Phoebe Sabrina 18010669
Espectrofotometría es la medición cuantitativa de la cantidad de una sustancia
química absorbe la luz al pasar un haz de luz a través de la muestra usando un
espectrofotómetro.
Las curvas de calibración se usan para entender la respuesta instrumental a un
analito y para predecir la concentración de analito en una muestra. Una curva de
calibración se crea con la primera preparación de un conjunto de soluciones
estándar con concentraciones conocidas del analito.

 Rodríguez Castro Rosario Ariday 18010667

En conclusión, la espectrofotometría UV-visible es una técnica analítica que
permite determinar la concentración de un compuesto en solución. Se basa en
que las moléculas que absorben las radiaciones electromagnéticas y a su vez
que la cantidad de luz absorbida dependen de forma lineal de la concentración.
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Además, es usada para identificar compuestos por su espectro de absorción y

conocer la concentración de un material o sustancia, esto último permite, seguir
el curso de reacciones químicas y enzimáticas así como determinar enzimas y
proteínas incluso ácidos nucleicos.
De igual manera es muy importante conocer y manipular adecuadamente un
espectrofotómetro, ya que este equipo tiene la capacidad de proyectar un haz
de luz monocromática a través de una muestra y medir la cantidad de luz que es
absorbida o transmitida por la muestra.
Ahora bien, es fundamental saber que la cantidad de luz absorbida por un medio
es proporcional a la concentración del soluto presente, es entonces así que la
concentración de un soluto colorido en solución puede ser determinada en el
laboratorio mediante la medición de su absorción de luz a una longitud de onda
específica. Las muestras en estos equipos se utilizan en estado líquido y se
colocan en el compartimiento de las muestras de celdas transparentes de
diferentes tamaños y materiales.
Por consiguiente, las curvas de calibración nos ayudan a interpretar y entender
la respuesta instrumental de un analito y predecir la concentración del analito en
una muestra. Además, de que en esta práctica es esencial saber que es la ley
de Lambert-Beer, la cual nos permite la determinación de concentraciones de
disoluciones problema, a partir de una recta de calibrado obtenida midiendo las
absorbancias de disoluciones patrón de concentraciones conocidas.
Finalmente es primordial identificar la diferencia de transmitancia y absorbancia.
La cual es que la transmitancia es la cantidad de energía que atraviesa un
cuerpo en determinada cantidad de tiempo y la absorbancia es cuando un haz
de luz incide sobre un cuerpo traslucido, una parte de esta luz es absorbida por
el cuerpo y el haz de luz restante atraviesa dicho cuerpo.

 García Martínez Aldair 18010099

Esta práctica se realiza con el objetivo de que nosotros los estudiantes podamos
comprender y diferenciar los análisis o determinaciones que se realizan en la
refractometría contra las determinaciones que se llevan a cabo en la
espectrofotometría, aunque tienen funciones similares, son muy distintas .
Antes de la realización de la práctica ya debemos de conocer los fundamentos de
los conceptos que utilizaremos, como la espectrofotometría, las fracciones molares,
el manejo y cuidado de un espectrofotómetro, absorbancia, y curvas de calibración.
Para la elaboración de nuestros cálculos y conocer la fracción molar de nuestros
sistemas binarios primero hay que saber que es la fracción molar de una sustancia,
nos dice que es la Cantidad de sustancia de un componente (soluto o disolvente)
en relación con el total de moles que componen la disolución. La fracción molar no
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tiene unidades de media, lo que quiere decir que es adimensional. Además, la suma
de todas las fracciones de las sustancias debe ser igual a 1 o su aproximación.
Posteriormente que ya hemos calculado nuestra fracción molar con ayuda de las
deducciones de la Ley de Lambert y Beer procedemos a realizar nuestros
diagramas en los cuales pondremos nuestros datos obtenidos de la siguiente
manera, la absorbancia que medimos en el espectrofotómetro en el eje de las Y, y
en el eje de las X la fracción molar que calculamos, de esta manera obtenemos una
curva de calibración para nuestros sistemas binarios estudiados.
 Beristain Pulido Leslie 10810561
Respecto a la práctica un procedimiento analítico muy utilizado en análisis
cuantitativo es el llamado de calibración que implica la construcción de una “curva
de calibración”. Una curva de calibración es la representación gráfica de una señal
que se mide en función de la concentración de un analito. Una adecuada calibración
del espectrofotómetro es un factor fundamental para obtener una medición de color
precisa y fiable. Los modelos de calibración obtenidos por espectrofotometría son
resultado de una calibración indirecta, ya que la cantidad del analito presente en las
soluciones de referencia se determina en función de la señal dada por el instrumento
analítico, hay diferentes tipos de espectrofotómetros, uno de ellos se ocupó para
realizar esta práctica y sacar los resultados para poder representarlos en una gráfica
y obtener la curva de calibración para que con ello analizáramos de cómo es que
se llevó a cabo las lecturas.
 Nieto Arey Marco Antonio 18010649

Las curvas obtenidas dentro de esta práctica, nos ayudan a saber cómo se
comporta la concentración de cada uno de los analitos, con ello en la
espectrofotometría es más fácil interpretar los resultados de los sistemas
propuestos, y con ello nos damos cuenta que el sistema metanol-agua y acetona-
cloroformo se comportan de manera muy diferente y no se refleja una curva como
tal ya que se puede observar que con los datos experimentales obtenidos varían las
cantidades de concentración de cada uno de los analitos.

CONCLUSIÓN GENERAL:
Se ha llegado a la conclusión de que la espectrofotometría es un método analítico
que se basa en la medición de la absorbancia o transmitancia de las radiaciones.
La espectrometría es de gran utilidad en la actualidad para la identificación de un
analito en una muestra problema. Además, permite determinar la concentración de
un compuesto en solución. Se basa en que las moléculas absorben las radiaciones
electromagnéticas y a su vez que la cantidad de luz absorbida depende de forma
lineal de la concentración.
De igual manera es fundamental conocer cómo funciona un espectrofotómetro ya
que este es un instrumento tiene la capacidad de proyectar un haz de luz
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monocromática a través de una muestra y medir la cantidad de luz que es absorbida

por dicha muestra. Esto permite realizar dos funciones: dar información sobre la
naturaleza de la sustancia en la muestra e indicar indirectamente qué cantidad de
la sustancia que nos interesa está presente en la muestra.
Ahora bien, las curvas de calibración son de gran importancia en esta práctica
porque nos ayudan a interpretar la respuesta instrumental a un analito y para
predecir la concentración de analito en una muestra. Así mismo en esta práctica es
indispensable saber que es la ley de Lambert-Beer, la cual permite la determinación
de concentraciones de disoluciones problema, a partir de una recta de calibrado
obtenida midiendo las absorbancias de disoluciones patrón de concentraciones
conocidas.
Finalmente debemos saber diferenciar que la absorbancia es la cantidad de
radiación que absorbe un material y la transmitancia es la fracción o porcentaje de
radiación incidente que atraviesa una muestra.

BIBLIOGRAFÍA:
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Espectrofotómetros de Laboratorio. https://espectrofotometros-de-
laboratorio.com/
 La espectrofotometría, Benedette Kuria Rosa, 7° Edición, pag 13
 https://www.news-medical.net/health/Spectroscopy-Types-(Spanish).aspx
 https://aulavirtual.agro.unlp.edu.ar/pluginfile.php/43546/mod_resource/conte
nt/3/Espectrofotometr%C3%ADa%202019%20versi%C3%B3n%20final.pdf
 «Espectrofotometría». El Espectrofotómetro. 24 de diciembre de 2016.
Consultado el 23 de septiembre de 2021.
 Métodos modernos de análisis químicos, por, Robert L. Pecsok y L. Donal
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 Brunatti, C; Martín, A. «1 Introducción a la Espectroscopía de Absorción
Molecular Ultravioleta, Visible e Infrarrojo Cercano»
 Universidad Rabanales. (s. f.). Espectrofometría: Espectros de absorción y
cuantificación colorimétrica de biomoléculas. https://www.uco.es.
Recuperado 23 de septiembre de 2021, de
https://www.uco.es/dptos/bioquimica-biol-
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 Britolw, A. (2016, 2 agosto). Ecuación de Antoine. Luis E Brito Rodríguez.
https://misapuntesyacimientos.wordpress.com/2016/07/12/ecuacin-de-
antoine/
 Video: Daura Vega Moreno. (2019, 29 octubre). Espectrofotometría Curva
de Calibrado. YouTube.
https://www.youtube.com/watch?v=7PZJGGfbU7U&t=7s