INFORME 8 Aglutinacion

UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA DE LA SELVA
FACULTAD DE INDUSTRIAS ALIMENTARIAS
PRÁCTICA N°8: AGLUTINACIÓN
Curso : Microbiología de Alimentos I
Profesor : Diaz Delgado Guadalupe
Alumnos : SEVILLANO VILLANUEVA DAIVID JHESUARY
Ciclo : I - 2019
TINGO MARÍA – PERÚ

2019
I. INTRODUCCIÓN
Se denominan aglutinación a la interacción secundaria in vitro de

un antígeno “particulado” con su anticuerpo especifico. Si el antígeno
(proteína, hidrato de carbono, etc.) se encuentra presente en la superficie
de células, bacterias u otras partículas naturales el fenómeno se le
denomina aglutinación directa. Cuando el antígeno con el que
interacciona el anticuerpo específico no forma parte de la estructura nativa
de la partícula, sino que se incluyen artificialmente en su superficie, la
aglutinación que tiene lugar se denomina genéricamente aglutinación
pasiva o indirecta. Las partículas utilizadas como, soportes pueden ser se
inertes o bien glóbulos rojos en cuyo caso método recibe el nombre de
hemoaglutinación pasiva o indirecta.
Las metodologías de aglutinación son ampliamente utilizadas en el

laboratorio clínico para la detección serología de anticuerpos en diferentes
patologías infecciosas y para la tipificación de grupos sanguíneos
Las metodologías de aglutinación son ampliamente utilizadas en el
laboratorio clínico para la detección serológica de anticuerpos en
diferentes patológicas infecciosas y para la tipificación de grupos
sanguíneos. La presencia de antígenos en la superficie de los glóbulos
rojos se puede detectar por la hemoaglutinación producida cuando se
añade un antisuero con anticuerpos frente a dichos antígenos.
Esta técnica se emplea habitualmente para la identificación de los
grupos sanguíneos y Rh, para lo cual a la sangre heparinizada se le
añaden los antisueros correspondientes: anti-A, anti-B o anti-AB (todos
ellos anti-Rh negativos). Habrá aglutinación cuando los glóbulos rojos
posean la especificidad del antisuero añadido (Tabla 4). De igual manera
se procede con antisueros anti-Rh para la determinación de los distintos
grupos Rh.
Las reacciones de aglutinación y de precipitación son la base de la
mayor parte de las técnicas inmunológicas. Su principio se basa en la
reacción antígeno-anticuerpo. Para comprender lo anterior es necesario
definir qué es un antígeno y un anticuerpo.
II. OBJETIVOS
2.1. Reconocer el concepto de aglutinación mediante las muestras de

sangre, al reaccionar con los reactivos A, B, Rh.
2.2. Evaluar la aglutinación macroscópica con antígenos (A, B) y el

factor (Rh).
III. REVISIÓN BIBLIOGRÁFICA
Significación clínica
A comienzo del siglo pasado, Landsteiner descubrió que los individuos

podían ser agrupados en A, B, AB u O de acuerdo con la presencia (grupos A,
B, o AB) o ausencia (grupo O) de antígenos fuertemente inmunogénicos en la
superficie de los glóbulos rojos. También demostró la existencia de anticuerpos
(aglutininas) dirigidos contra los antígenos A y B y que el suero de un individuo
no contiene anticuerpos para el antígeno presente en sus propios glóbulos
rojos, pero sí contra los que no posee. Actualmente se han identificado
subgrupos de los grupos A y B. Todas estas observaciones revelaron la
importancia de la compatibilidad ABO en la práctica transfusional.
Sistema AB0
Landsteiner descubrió la existencia de dos factores hereditarios en los

hematíes: los aglutinógenos o antígenos A y B, y en el plasma
aglutininas o anticuerpos específicos para antígenos del mismo sistema. Los
eritrocitos de algunos individuos poseen el antígeno A, otros individuos tienen
en sus eritrocitos el antígeno B, un tercer grupo de personas posee ambos
antígenos y, finalmente, hay un cuarto grupo cuyos hematíes no tienen en su
membrana ninguno de estos antígenos.
Existen, cuatro tipos sanguíneos de este sistema que denominamos sistema A

B 0, estos son: A, B, AB y 0 (cero), los cuales están determinados
genéticamente. Dado que este sistema de antígenos no está, exclusivamente,
distribuido en las membranas de los hematíes, sino que bien al contrario, este
tipo de antígenos se encuentra en multitud de secreciones y/o células, los
contactos interespecíficos permiten que se desarrolle actividad
inmunitaria contra los antígenos que no se poseen. Ello permite que se
produzca la situación siguiente:
• La sangre del grupo A contiene el antígeno A en sus

hematíes y el anticuerpo anti-B en el plasma.
• La sangre del grupo B tiene el aglutinógeno B en sus
hematíes y la aglutinina anti-A en su plasma.
• La sangre del grupo O no tiene antígenos en sus hematíes

y, en consecuencia, tiene aglutininas anti-A y anti-B.
• La sangre del grupo AB tiene hematíes con los dos tipos

de antígenos A y B, pero su plasma no contiene aglutininas.
Frecuencia relativa de los diferentes grupos del sistema AB0:
Sistema Rh
Además de los antígenos del sistema AB0, existen otros innumerables

aglutinógenos en los eritrocitos. Los del sistema Rh tienen importancia clínica
En este sistema los individuos se clasifican como Rh positivos o Rh negativos,
perteneciendo el 85% de la población española al primer tipo. A diferencia del
sistema de grupos anterior su distribución en las células y secreciones
orgánicas está menos extendida, lo que significa que para que en el plasma de
una persona Rh negativa existan anticuerpos Rh se hace necesario un primer
contacto, que active el sistema inmunitario.
En realidad, el sistema Rh está determinado genéticamente por tres

pares de alelos (C, c, D, d, E y e), los cuales determinan la expresión en la
membrana de los hematíes de los antígenos correspondientes (C, D y E). El
más importante es, con mucho, el aglutinógeno D.
Cuando se inyectan glóbulos rojos que contienen el factor Rh, en una

persona Rh negativa, las aglutininas anti-Rh se desarrollan lentamente
alcanzando su máxima concentración de 2 a 4 meses después.
Según la respuesta inmune es mucho más potente en unas personas

que en otras. Si se producen más exposiciones al antígeno la persona puede
quedar sensibilizada al factor Rh. En una transfusión de células Rh positivo a
un individuo Rh negativo puede no observarse una reacción inmediata, sin
embargo, al cabo de unas 2-4 semanas se ha sintetizado suficiente cantidad de
aglutininas para eliminar la totalidad de las células Rh positivas que se
encontraban circulantes. Se produce, por tanto, una reacción retardada,
aunque habitualmente débil. En subsiguientes transfusiones, cuando la
persona está inmunizada, la reacción puede ser inmediata y potente, del mismo
tipo que las provocadas por el sistema AB0.
Aglutinación directa
Un antígeno celular o de partículas insolubles es aglutinado

directamente por el anticuerpo. Un ejemplo de esto es la aglutinación de los
eritrocitos del grupo A por antisueros antiA, la aglutinación de los eritrocitos RH
positivos por el antisuero anti-D o la aglutinación del antígeno brucelar por
anticuerpos anti-Brucella. Gran cantidad de partículas como pueden ser
eritrocitos, bacterias, hongos y virus pueden ser aglutinados por anticuerpos
séricos, algunas veces de manera inespecífica y otras muy específica, siendo
ésta última, respuesta a una previa inmunización del organismo productor de
los anticuerpos séricos. Las pruebas para identificar anticuerpos específicos
son llevadas a cabo titulando seriadamente antisueros en diluciones al doble en
presencia de una cantidad constante de antígeno.
Fundamentos del método
La determinación de grupos sanguíneos del sistema ABO se efectúa

enfrentando los glóbulos rojos del paciente con anticuerpos monoclonales Anti-
A, Anti-B o Anti-AB. La aglutinación o no de los hematíes ensayados frente a
cada uno de los reactivos indica la presencia o ausencia de los
correspondientes antígenos.
Reactivos provistos
Anti-A, Anti-B o Anti-AB monoclonal: reactivos preparados a partir de

anticuerpos monoclonales de clase IgM secretados por líneas celulares de
hibridoma de ratón en una solución tamponada conteniendo < 1 g/l de azida
sódica como conservante. Los clones involucrados y la coloración de cada
producto se detallan en la siguiente tabla:
Estos antisueros se caracterizan por su alta potencia, avidez y

especificidad. Al no ser de origen humano, no existen riesgos de infección por
HIV, HBV o HCV.
IV. MATERIALES Y MÉTODOS
4.1 Materiales y equipos de laboratorio
- porta objeto y cubre objeto

- lanceta
-alcohol yodado
- reactivo A, B y Rh
- microscopio electrónico
4.2 Métodos
1. Primero presionamos la parte distal del dedo medio de la mano

izquierda, luego limpiamos con algodón embebido en alcohol y
punzamos con la lanceta.
2. Recogimos la gota en un portaobjeto poniéndola en tres
diferentes sitios.
3. Limpiamos el dedo con algodón embebido en alcohol yodado.
4. Después pusimos una gota del reactivo A en la primera gota de
sangre, reactivo B en la segunda gota y el reactivo Rh en la
tercera gota.
5. Removimos cada gota de sangre con el reactivo.
6. Por último, llevamos las láminas o portaobjetos para observar la
reacción en el microscopio.
1. colocar 3 gotas de 3. Mezclamos cada gota

2. colocar los sueros
sangre en un con un palillo de
anti-A, anti-B y anti-D.
portaobjetos madera.
4. Rotamos la
placa/portaobjetos por
unos segundos para
observar la aparición de
aglutinación
V. RESULTADOS
5.1 Lectura
- Reacción positiva: grumos finos o gruesos
Los antígenos de los hematíes son estructuras que proporcionan
propiedades especificas a su superficie y que solo puede detectarse
con anticuerpos que corresponden a esos antígenos la mayoría de
estas reacciones antígeno-anticuerpo implican aglutinación o
hemolisis de los hematíes.
A. Reacción positiva de aglutinación de la sangre del Grupo A

Rh +.
A B Rh+
B. Reacción positiva de aglutinación de la sangre del Grupo B
Rh -.
B A Rh-
C. Reacción negativa de aglutinación por lo tanto es sangre del

Grupo O Rh -.
A B Rh-
D. Observación en el microscopio de la sangre sin aglutinar.
VI. DISCUSIÓN
- la sangre del grupo A contiene al antígeno A en sus hematíes y al

enfrentar con los anticuerpos monoclonales Anti-A se presenta
aglutinación que indica que es del tipo de sangre A como
podemos observar en la primera prueba.
- la sangre del grupo B contiene al antígeno B en sus hematíes y al
enfrentar con los anticuerpos monoclonales Anti-B se presenta
aglutinación que indica que es del tipo de sangre B como
podemos observar en la segunda prueba.
- la sangre que tiene factor Rh positivo contiene al antígeno D en
sus hematíes y al enfrentar con los anticuerpos monoclonales
Anti-D se presenta aglutinación que indica que el grupo
sanguíneo es +. De la práctica de laboratorio solo una prueba
salió que es del grupo sanguíneo +, el resto de las pruebas salió –
.
VII. CONCLUSIÓN
Las pruebas para saber el grupo sanguíneo cuando es positivo (A y B) hay

presencia de aglutinación cuando no aglutina es un tipo de sangre O.
El microscopio se va ver la forma de es cuando se aglutina la sangre y también

la forma como es el glóbulo rojo con el reactivo.
.
VIII. BIBLIOGRAFÍA
SHAN D..; FUDEN H. 1998.Inmunología Básica y Clínica. 9ª Edición

Technical manual 1996. The antiglobulin test. 12ª. Ed. US. cap. 11.
HAUSER SL.; AMATO AA.; GUILLAIN-BARRÉ S. 2015. Principles of Internal
Medicine. New York: McGraw-Hill Education. P. 2694-700.
IX. ANEXOS
Fig. 1. Preparamos los materiales Fig. 2. Luego de limpiar con alcohol y

(alcohol, algodón, porta objeto, lanceta) algodón el dedo, se punza con la
para la extracción de la muestra de lanceta para la extracción de la
sangre. sangre.
Fig. 3. Luego de punzar con la lanceta Fig. 4. Cuando ya tenemos el porta objeto
se puso gotas de sangre en el porta utilizaremos los reactivos de antígenos A,
objeto. B, Rh.
X.
Fig. 5. Agregamos los reactivos A, Fig. 6. Microscopio para realizar una
B,Rh a las muestras de sangre para observación macroscópica de las
ver la reacción. gotas de sangre.
Fig. 7. Se puso un cubre objeto para Fig. 8. La vista de la muestra desde

ser observados en el microscopio. la perspectiva del microscopio.

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TINGO MARÍA – PERÚ

Se denominan aglutinación a la interacción secundaria in vitro de

Las metodologías de aglutinación son ampliamente utilizadas en el

2.1. Reconocer el concepto de aglutinación mediante las muestras de

2.2. Evaluar la aglutinación macroscópica con antígenos (A, B) y el

A comienzo del siglo pasado, Landsteiner descubrió que los individuos

Landsteiner descubrió la existencia de dos factores hereditarios en los

Existen, cuatro tipos sanguíneos de este sistema que denominamos sistema A

• La sangre del grupo A contiene el antígeno A en sus

• La sangre del grupo O no tiene antígenos en sus hematíes

• La sangre del grupo AB tiene hematíes con los dos tipos

Frecuencia relativa de los diferentes grupos del sistema AB0:

Además de los antígenos del sistema AB0, existen otros innumerables

En realidad, el sistema Rh está determinado genéticamente por tres

Cuando se inyectan glóbulos rojos que contienen el factor Rh, en una

Según la respuesta inmune es mucho más potente en unas personas

Un antígeno celular o de partículas insolubles es aglutinado

La determinación de grupos sanguíneos del sistema ABO se efectúa

Anti-A, Anti-B o Anti-AB monoclonal: reactivos preparados a partir de

Estos antisueros se caracterizan por su alta potencia, avidez y

4.1 Materiales y equipos de laboratorio

- porta objeto y cubre objeto

1. Primero presionamos la parte distal del dedo medio de la mano

1. colocar 3 gotas de 3. Mezclamos cada gota

A. Reacción positiva de aglutinación de la sangre del Grupo A

C. Reacción negativa de aglutinación por lo tanto es sangre del

- la sangre del grupo A contiene al antígeno A en sus hematíes y al

Las pruebas para saber el grupo sanguíneo cuando es positivo (A y B) hay

El microscopio se va ver la forma de es cuando se aglutina la sangre y también

SHAN D..; FUDEN H. 1998.Inmunología Básica y Clínica. 9ª Edición

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