NORMA TÉCNICA NTC

COLOMBIANA 5225

2003-11-26

GRASAS Y ACEITES ANIMALES Y VEGETALES.

DETERMINACIÓN DEL CONTENIDO DE
COMPUESTOS POLARES

E: ANIMAL AND VEGETABLE FATS AND OILS.

DETERMINATION OF CONTENT OF POLAR COMPOUNDS

CORRESPONDENCIA: esta norma es una adopción idéntica

(IDT) por traducción de la ISO
8420:2002

DESCRIPTORES: determinación de compuestos

polares; grasa; alimentación; grasa
vegetal; grasa animal; aceite vegetal;
aceite animal; grasas y aceites.

I.C.S.: 67.200.10

Editada por el Instituto Colombiano de Normas Técnicas y Certificación (ICONTEC)

Apartado 14237 Bogotá, D.C. - Tel. 6078888 - Fax 2221435

Prohibida su reproducción Editada 2003-12-11

 PRÓLOGO

El Instituto Colombiano de Normas Técnicas y Certificación, ICONTEC, es el organismo

nacional de normalización, según el Decreto 2269 de 1993.

ICONTEC es una entidad de carácter privado, sin ánimo de lucro, cuya Misión es fundamental
para brindar soporte y desarrollo al productor y protección al consumidor. Colabora con el
sector gubernamental y apoya al sector privado del país, para lograr ventajas competitivas en
los mercados interno y externo.

La representación de todos los sectores involucrados en el proceso de Normalización Técnica

está garantizada por los Comités Técnicos y el período de Consulta Pública, este último
caracterizado por la participación del público en general.

La NTC 5225 fue ratificada por el Consejo Directivo del 2003-11-26.

Esta norma está sujeta a ser actualizada permanentemente con el objeto de que responda en
todo momento a las necesidades y exigencias actuales.

A continuación se relacionan las empresas que colaboraron en el estudio de esta norma a

través de su participación en el Comité Técnico 49 Aceites y Grasas Vegetales y Animales
comestibles.

ACEGRASAS S.A. FÁBRICA DE GRASAS Y PRODUCTOS

CARULLA VIVERO S.A. QUÍMICOS S.A. -GRASCO-
COMERCIALIZADORA INTERNACIONAL FEDEPALMA
SANTANDEREANA DE ACEITES S.A. INDEPENDIENTE - NATALIA GARNICA
C.I.S. ACEITES S.A. UNIVERSIDAD JORGE TADEO LOZANO
COMESTIBLES RICOS

Además de las anteriores, en Consulta Pública el Proyecto se puso a consideración de las

siguientes empresas:

ASINAL LTDA. INDUSTRIAS ALIMENTICIAS NOEL -

ASOCIACIÓN NACIONAL DE ZENU S.A.
INDUSTRIALES INDUSTRIAS DEL MAÍZ S.A.
COLOMBINA S.A. INVIMA
COMPAÑÍA NACIONAL DE CHOCOLATES IVONNE BERNIER LABORATORIO LTDA.
S.A. LLOREDA S.A.
COMPAÑÍA NACIONAL DE LEVADURAS LUCTA GRANCOLOMBIANA LTDA.
CORP PRODUCTS INTERNATIONAL MANUELITA S.A. DIVISIÓN ACEITES Y
DISA S.A. GRASAS
FABRICA DE ACEITES Y MARGARINAS MAURICIO OTÁLORA INDEPENDIENTE
DEL MAGDALENA MERCADEO DE ALIMENTOS DE
FEDEPALMA (CENIPALMA) COLOMBIA S.A.
FEDERACIÓN NACIONAL DE MINISTERIO DE AGRICULTURA
CULTIVADORES DE PALMA DE ACEITE
FIRMENICH S.A.
MINISTERIO DE COMERCIO INDUSTRIA SOCIEDAD INDUSTRIAL DE GRASAS Y
Y TURISMO (MINISTERIO DE VEGETALES
DESARROLLO) SUPERINTENDENCIA DE INDUSTRIA Y
MINISTERIO DE PROTECCIÓN SOCIAL COMERCIO
(MINISTERIO DE SALUD) UNILEVER ANDINA COLOMBIA S.A. -
NESTLE DE COLOMBIA S.A. UNILEVER BESTFOODS-
NULAB LTDA. UNIVERSIDAD DE ANTIOQUIA
PRODUCTOS RAMO UNIVERSIDAD DEL VALLE
RENTAFRIO S.A. UNIVERSIDAD INCA
SACEITES S.A. UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA

ICONTEC cuenta con un Centro de Información que pone a disposición de los interesados
normas internacionales, regionales y nacionales.

DIRECCIÓN DE NORMALIZACIÓN
NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 5225

GRASAS Y ACEITES ANIMALES Y VEGETALES.

DETERMINACIÓN DEL CONTENIDO DE COMPUESTOS POLARES

1. OBJETO

Esta norma describe un método para la determinación del contenido de compuestos polares en
aceites y grasas animales y vegetales, de ahora en adelante denominadas grasas.

Los compuestos polares, se forman durante el calentamiento de las grasas por lo tanto este
método sirve para determinar el deterioro de las grasas con su uso.

2. REFERENCIA NORMATIVA

La siguiente norma contiene disposiciones que, mediante su referencia en este texto, constituyen
disposiciones de esta norma. En el momento de la publicación era válida la edición indicada.
Todas las normas están sujetas a actualización. Se recomienda a las partes que realizan
acuerdos con base en esta norma, a que investiguen la posibilidad de aplicar las versiones más
recientes de las siguientes normas. Los miembros de ISO e IEC mantienen registros de las
normas internacionales válidas actualmente.

NTC 5033:2002, Grasas y aceites animales y vegetales. Preparación de la muestra para

ensayo. (ISO 661:1989).

3. DEFINICIÓN

Para los propósitos de esta norma, se aplica la siguiente definición:

3.1
compuestos polares
componentes de grasas que se determinan mediante cromatografía de columna, bajo las
condiciones especificadas en esta norma.

NOTA 1 El contenido de compuestos polares se expresa como una fracción de masa en porcentaje.

NOTA 2 Los compuestos polares incluyen sustancias polares presentes en grasas sin utilizar, tales como
monoglicéridos, diglicéridos y ácidos grasos libres, al igual que productos de la transformación polar formados durante
el calentamiento, como ocurre cuando se fríen alimentos. Los compuestos no polares son principalmente triglicéridos
inalterados.

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4. PRINCIPIO

Una porción de ensayo es separada en compuestos no polares y polares, mediante el método

de cromatografía de columna. Los compuestos no polares se eluyen y se pesan, los
compuestos polares se determinan por diferencia.

5. REACTIVOS Y MATERIALES

Se usan solamente reactivos de grado analítico reconocido, y agua destilada o

desmineralizada, o de pureza equivalente.

5.1 Sílica gel de 0,063 mm a 0,200 mm de tamaño de partícula (malla 70 a 230), tal como la
Merck No. 77341, ajustada a un contenido de agua de 5 % (fracción de masa), como sigue:

Se colocan aproximadamente 180 g de sílica gel en un plato de porcelana. Se seca en un

horno a 160 °C ± 5 °C durante mínimo 4 h revolviendo ocasionalmente; luego, se deja enfriar
en un desecador a temperatura ambiente. Se ajusta el contenido de agua de la sílica gel a 5 %
(fracción de masa) colocando 152 g de sílica gel y 8 g de agua en un matraz de 500 ml. Se
tapona el matraz y se agita en un agitador durante 60 min.

Se almacena la sílica gel en un recipiente hermético. Las partes restantes de la sílica gel
acondicionada tienen que usarse en 24 h, ya que no se pueden reactivar ni reacondicionar.

5.2 Solvente de elución, preparado a partir de la mezcla de 87 volúmenes de petróleo

liviano de calidad cromatográfica (intervalo de ebullición 40 °C a 60 °C) y 13 volúmenes de éter
dietílico estabilizado (véase la advertencia en el numeral 9.4.6).

5.3 Arena lavada con ácido y calcinada.

5.4 Algodón en rama, calidad quirúrgica, no absorbente.

5.5 Nitrógeno 99,0 % al 99,8 % pureza.

6. EQUIPO

El equipo usual de laboratorio, y, en particular, el siguiente:

6.1 Matraces de vidrio de fondo plano o redondo, con cuello de vidrio esmerilado, con
capacidad de 250 ml.

6.2 Columna cromatográfica, en vidrio, de 21 mm de diámetro interno y 450 mm de longitud,

equipada con una llave de cierre (preferiblemente en politetrafluoroetileno) y con una junta
interna en vidrio esmerilado, en la parte superior.

6.3 Embudo de goteo con capacidad de 250 ml, con una junta de vidrio esmerilado para
acoplar a la parte superior de la columna (véase el numeral 6.2).

6.4 Varilla de vidrio de aproximadamente 600 mm de longitud.

1
Merck No.7734 es el nombre comercial de un producto suministrado por Merck. Esta información se da para
conveniencia de los usuarios de esta norma y no constituye respaldo de ICONTEC a este producto. Se
pueden usar productos equivalentes, si se puede demostrar que conducen a los mismos resultados.
2
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6.5 Rotovapor u otro equipo, para retirar el solvente mediante vacío.

6.6 Máquina de agitar

7. MUESTREO

Es importante que el laboratorio reciba una muestra que sea verdaderamente representativa y
no haya sufrido daño o cambio durante el transporte o almacenamiento.

El muestreo no es parte del método especifico en esta norma. En la NTC 217 se presenta un
método recomendado.

8. PREPARACIÓN DE LA MUESTRA DE ENSAYO

Prepare la muestra de ensayo de acuerdo con la NTC 5033.

Las muestras semisólidas y sólidas se calientan a una temperatura un poco superior a sus
puntos de fusión y se mezclan cuidadosamente. Se debe evitar el sobrecalentamiento. La
contaminación visible se elimina mediante filtración después de mezclado. Si hay agua
presente, se debe usar un filtro hidrófobo o secar la muestra con sulfato de sodio anhidro.

9. PROCEDIMIENTO

9.1 PREPARACIÓN DE LA COLUMNA

Con una varilla de vidrio (véase el numeral 6.4), se coloca un taco de algodón (véase el
numeral 5.4) en la parte inferior de la columna (véase el numeral 6.2) y se presiona hacia
abajo. Se vierten aproximadamente 30 ml del solvente de elución (véase el numeral 5.2) en la
columna y se saca el aire presionando el taco de algodón con la varilla.

En el vaso de precipitados, se prepara una lechada de 25 g de la sílica gel (véase el numeral 5.1)
en 80 ml, aproximadamente, del solvente de elución; se vierte en la columna a través de un
embudo, se completa la transferencia de la sílica gel a la columna con el enjuague del solvente
de elución adherido al vaso de precipitados.

Se abre la llave y se deja correr el solvente de elución hasta que el nivel de éste se encuentre
aproximadamente a 100 mm de la capa de silica gel.

Se agregan 4 g de arena (véase el numeral 5.3) a través del embudo. Se deja correr el
solvente de elución sobrenadante hasta dentro de 10 mm de la capa de arena.

Se descarta el solvente de elución en la preparación de la columna.

9.2 EVALUACIÓN DE LA EFICIENCIA DE LA COLUMNA

Si lo desea, evalúe la eficiencia de la columna de acuerdo con el Anexo A.

9.3 PORCIÓN DE ENSAYO

Se pesan 2,5 g ± 0,1 g de la muestra de ensayo (véase el numeral 8), con aproximación a
0,001 g, en un matraz volumétrico de 50 ml.

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9.4 DETERMINACIÓN

9.4.1 Se disuelve la porción de ensayo (véase el numeral 9.3) en 20 ml, aproximadamente,

del solvente de elución (véase el numeral 5.2) mediante calentamiento suave. Se deja enfriar a
temperatura ambiente y se diluye a 50 ml con el solvente de elución.

9.4.2 Mediante una pipeta volumétrica, se transfieren 20 ml de la solución de ensayo (véase

el numeral 9.4.1) a la columna preparada (véase el numeral 9.1). Se evita alterar la superficie
de la arena.

9.4.3 Se pesa, con aproximación a 0,001 g, un matraz de 250 ml secado previamente a

103 °C ± 2 °C, y enfriado en un desecador; se coloca bajo la salida de la columna.

9.4.4 Se abre la llave y se deja correr el solvente hasta el nivel superior de la capa de arena,
se recolecta el eluato (que contiene compuestos no polares) en el matraz de 250 ml.

9.4.5 Se continúa la elución de compuestos no polares con la adición de 150 ml del solvente
de elución (véase el numeral 5.2) a través de un embudo de goteo (véase el numeral 6.3). Se
ajusta la tasa de flujo de manera que 150 ml pasen a través de la columna en un período de
60 min a 70 min.

Después de completar la elución, se lava, en el matraz, con el solvente de elución y mediante

una pipeta o gotero, cualquier material que esté adherido a la salida de la columna .

Cuando se requieren componentes polares, por ejemplo, para verificar la eficiencia de la

columna, se pueden eluir con 150 ml de éter dietílico, y mediante el procedimiento descrito en
el numeral 9.4.5 y 9.4.6.

Se descarta la sílica gel después de completar las elusiones.

9.4.6 Se retira el solvente del matraz mediante vacío con ayuda de un rotavapor (mediante
vacío con ayuda de un evaporador) (véase el numeral 6.5) y un baño de agua controlado a una
temperatura no superior a 60 °C. Se deben evitar pérdidas debidas al espumado. Se retiran los
residuos de solvente con nitrógeno.

ADVERTENCIA En el éter dietílico se pueden desarrollar peróxidos explosivos. Por tanto, es importante usar éter
dietílico estabilizado y llevar a cabo la evaporación a la menor temperatura posible, recolectando con cuidado el éter
evaporado.

Si no se dispone de un rotavapor, se evapora el solvente de elución en una corriente de

nitrógeno.

9.4.7 Se seca el matraz en un horno a 103 °C ± 2 °C durante 30 min. Se deja enfriar en un

desecador y se pesa con aproximación a 0,001 g.

Se calienta de nuevo durante 30 min en las mismas condiciones, se deja enfriar y se pesa.

La diferencia entre los dos pesajes no debe ser superior a 1 mg. Si es superior a este valor, se
repiten las operaciones de calentamiento, enfriado y pesaje hasta que la diferencia entre dos
pesajes sucesivos no exceda 1 mg. Se registra la masa final del matraz.

Si hay un incremento significativo en la masa (más de 1 mg), puede ocurrir oxidación del aceite
de secado. En este caso, se toma el menor pesaje para el cálculo.

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9.5 NÚMERO DE DETERMINACIONES

Se llevan a cabo dos determinaciones en porciones de ensayo (véase el numeral 9.3) tomadas
de la misma muestra de ensayo (véase el numeral 8).

10. EXPRESIÓN DE LOS RESULTADOS

10.1 CÁLCULO

El contenido de compuestos polares, w, como fracción de masa en porcentaje, está dado por la
fórmula:

w = 100 −
(m1 − m2 ) x 100
m

en donde

m1 = es la masa, en gramos, del matraz más la masa de los compuestos no polares (véase el
numeral 9.4.7).

m2 = es la masa, en gramos, del matraz vacío (véase el numeral 9.4.3).

m = es la masa, en gramos, de la porción de ensayo en 20 ml de la solución de muestra (véase

el 9.4.1); en este caso especial 2/5 de 2,5 g.

Se toma como resultado la media aritmética de las dos determinaciones, siempre y cuando se
cumplan los requisitos de repetibilidad (véase el numeral 11.2).

Se expresa el resultado con un decimal.

11. PRECISIÓN

11.1 RESULTADOS DEL ENSAYO INTERLABORATORIO

Los detalles del ensayo interlaboratorio se resumen en el Anexo B. Es posible que los valores
obtenidos de este ensayo interlaboratorio no sean aplicables a intervalos de concentración
diferentes de los presentados.

11.2 REPETIBILIDAD

La diferencia absoluta entre dos resultados de ensayos individuales e independientes,

obtenidos con el mismo equipo, en el mismo laboratorio, en un intervalo de tiempo corto, será,
en máximo el 5 % de los casos, superior al límite de repetibilidad (r) dado en el Anexo B.

11.3 REPRODUCIBILIDAD

La diferencia absoluta entre dos resultados de ensayos individuales, obtenidos a partir del
mismo método, sobre material de ensayo idéntico, en diferentes laboratorios, con diferentes
operadores y diferente equipo, se dará, máximo, en el 5 % de los casos, superior al límite de
reproducibilidad (R) dado en el Anexo B.

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NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 5225

12. REPORTE DE ENSAYO

El reporte de ensayo debe especificar:

- Toda la información necesaria para la identificación completa de la muestra.

- El método de muestreo usado, si se conoce.

- El método de ensayo usado, con referencia a la presente norma.

- Todos los detalles operativos no especificados en esta norma, o considerados

como opcionales, junto con algún incidente que pueda haber influido en el
resultado del ensayo.

- El resultado de ensayo obtenido.

- Si se ha verificado la repetibilidad, el resultado final citado obtenido.

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ANEXO A
(Informativo)

EVALUACIÓN DE LA EFICIENCIA DE LA COLUMNA

La eficiencia de la columna se puede verificar usando cromatografía de capa delgada, como

sigue:

Se preparan soluciones de 10 % (fracción de masa) de los compuestos polares y no polares

(separados como se indica en el numeral 9.4) en cloroformo, y se aplican dos puntos de 2 µl a
una placa recubierta con una capa de sílica gel de 0,25 mm de espesor y sin indicador de
fluorescencia.

Se forra un tanque de revelado con papel de filtro hasta obtener saturación. Se coloca la
placa en este tanque y se realiza el revelado con un solvente de revelado compuesto de una
mezcla de éter de petróleos (intervalo de ebullición 40 °C a 60 °C), éter dietílico y ácido
acético al 100 % (70 + 30 + 2 en volumen). Se deja que el frente del solvente ascienda a una
altura de aproximadamente 170 mm; esto toma, usualmente, 35 min, aproximadamente. Se retira
la placa y se deja evaporar el solvente.

Se rocía la placa con una solución de 100 g/l de 12-ácido molibdofosfórico en etanol. Se deja que
el etanol se evapore y luego se calienta la placa en el horno a una temperatura entre 120 °C y
130 °C.

La eficiencia de la separación también se puede evaluar comparando la suma de los

compuestos polares y no polares determinados con la cantidad de porción de ensayo contenida
en 20 ml de la solución de ensayo (véase el numeral 9.4.1). Para muestras que contienen
cantidades mayores de material polar, la recuperación de la porción de ensayo puede ser
incompleta, ya que pequeñas cantidades de material altamente polar (generalmente no más del
1 % al 2 %) no se eluyen bajo las condiciones especificadas en esta norma.

1 2 1 2 1 2
Convenciones
1. Compuestos no polares
2. Compuestos polares

Figura 1. Cromatograma obtenido después de separación de grasas de freír, en

compuestos polares y no polares

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ANEXO B
(Informativo)

RESULTADOS DE UN ENSAYO INTERLABORATORIO

Se realizó un ensayo internacional en colaboración, que involucró a 16 laboratorios en 6

países, y se corrieron cinco muestras de aceites de freír (usado).

El ensayo fue organizado por DIN Instituto de Normalización Alemana, en 2000, y los
resultados obtenidos se sometieron a análisis estadístico de acuerdo con la ISO 5725-2, para
obtener los datos de precisión de la Tabla B.1.

Tabla B.1. Resumen de resultados estadísticos

Muestra
Lote de Muestra
A B C D E

No. de laboratorios participantes 15 16 15 15 16

No. de laboratorios retenidos después de

13 13 11 14 10
eliminar los datos atípicos
Número de resultados de ensayos
individuales de todos los laboratorios en 26 26 22 28 20
cada muestra

Valor medio % 16,01 22,28 11,74 32,06 20,80

Promedio desviación estándar de 0,27 0,29 0,34 0,33 0,14

repetibilidad sr

Repetibilidad, coeficiente de variación, % 1,7 1,3 2,9 1,0 0,7

Límite de repetibilidad r 0,74 0,81 0,95 0,92 0,38

Desviación estándar de reproducibilidad sR 1,04 1,29 0,56 1,66 0,61

Reproducibilidad, coeficiente de variación, % 6,5 5,8 4,8 5,2 3,0

Límite de reproducibilidad R 2,5 2,3 1,7 2,2 1,2

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NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 5225

BIBLIOGRAFÍA

[1] ISO 5555:1991, Animal and Vegetable Fats and Oils. Sampling.

[2] ISO 5725-1:1994, Accuracy (Trueness and Precision) of Measurement Methods and
Results. Part 1: General Principles and Definitions.

[3] ISO 5725-2:1994, Accuracy (Trueness and Precision) of Measurement Methods and
Results. Part 2: Basic Method for the Determination of Repeatability and Reproducibility
of a Standard Measurement Method.

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NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 5225

DOCUMENTO DE REFERENCIA

INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATION. Animal and Vegetable Fats and

Oils. Determination of Content of Polar Compounds. Geneve: ISO, 2002, 8 p. (ISO 8420).

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